专利名称：生血丸在制备预防或修复环境污染致细胞损伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制剂技术领域，涉及中药的新用途，更具体的说是生血丸在制备预防或修复环境污染致细胞损伤药物中的应用。
背景技术：
达仁堂生血丸源于中医研究院广安门医院名老中医谢海洲教授数十年临床之验方。善于补肾阳和肾精，精足则血旺。现代研究，生血丸有保肝利胆、抗肿瘤、抗氧化、镇静、 降血糖等多种作用，治疗放、化疗后的全血细胞减少、再生障碍性贫血有确切疗效。方中有鹿茸、黄柏、山药、炒白术、桑枝、白扁豆、稻芽、紫河车。具有补肾健脾，填精补髓之功效。主药鹿茸温肾壮阳、强筋健骨、生精益血，是峻补元阳之要药，用于治疗精血两亏，活血又补血，具有促进造血之功能；紫河车益气、养血、补精，有强壮作用；白术、山药为健脾开胃之品，于大补之中防滋腻，有益气生血之作用黄柏为泻火滋阴、清解清泻之品，取其缓解滋补过峻之作用而有利于体内吸收，该方组方严谨，临床应用功效确切。在人们日常生活和工作环境中如办公室、居室、小汽车内存在的挥发性有机化合物中都存在苯，苯除了能引起人们神经、血液、免疫系统功能障碍外，近年来苯引起癌症，是一种致癌物的报告不断出现。有研究表明，化学物苯、二甲苯、甲醛对小鼠骨髓红细胞微核率的存在显著影响。甲醛是一种常见的化学性室内空气污染物，主要来源于保湿材料、绝缘材料、地板胶、涂料、塑料贴面、壁纸、家具的粘合树脂、家用燃料和烟叶的不完全燃烧。在所有因室内装修引起的有机类空气污染物中(例如苯系物、其他的醛、酮、酚、烷等)，甲醛单独的污染水平常可高达0. 1-0. 4mg/m3,这样的浓度水平不但远远高于其他单个污染物的水平，有时甚至高于其他挥发性有机化合物的总量。结果表明甲醛污染能造成生物染色体损伤。铅是一种严重危害人类健康的重金属元素。铅其化合物可通过消化道、呼吸道进入人体，影响身体的各器官，特别是神经系统、造血系统对铅最感，是铅作用的主要靶器官。还有研究认为铅还可以对小鼠生殖遗传细胞产生损伤。香烟烟雾中含有尼古丁、烟焦油、氢氰酸、醛等多种化学物质，成分十分复杂，估计含有3 500多种化合物，且许多物质已证明具有致癌、致畸和致突变作用。目前认为烟雾凝聚物中各种致突变物的作用具有协同效应。此外，烟雾凝聚物中某些物质虽无诱变性， 但可大大加强其它诱变剂的诱变作用。
发明内容
本发明首先公开了生血丸在制备预防或修复环境污染致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的环境污染为铅、香烟污染、苯、二甲苯、甲醛；所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。本发明进一步公开了生血丸在制备提前预防环境污染致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。本发明进一步公开了生血丸在制备早期修复环境污染致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。本发明的研究实验说明生血丸可有效降低外周血淋巴细胞微核率，降低由醋酸铅污染导致的周围血淋巴细胞DNA的损伤。本发明的研究实验说明生血丸预防组和治疗组均能很好改善外周血淋巴细胞微核率，修复细胞损伤。本发明的实验还提示生血丸能有效预防甲醛的细胞损伤，并能修复已损伤的造血细胞。本发明的实验还提示生血丸不但可以预防苯、二甲苯污染导致的骨髓细胞损伤还可以清除自由基，促进ODC的生成，抑制异形细胞的增值修复已损伤的骨髓细胞。
具体实施例方式为了更充分的解释本发明的实施，下面通过典型的实施例对本发明做进一步的说明这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。特别加以说明的是，为了更加清楚地说明本发明的应用效果，分为四个部分分别加以介绍，具体的实验方法及结果如下
实施例1
第一部分生血丸修复铅污染致骨髓细胞损伤的病理研究 1材料和方法 1.1动物
中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供雄性BalB/C小鼠150只，体重 20 士 2g，8-12 周龄，许可证号 SCXK —(军)2007— 004。2. 2主要材料和试剂
快速姬姆萨染液南京建成科技，批号20101109
类标准胎牛血清100ml，中美合资兰州民海生工程有限公司，批号20100921肝素钠注射液2ml，1.25万单位，批号20100502 敌百虫:250mg, Sigma，批号:8021X
醋酸铅500ml，天津大学科威公司，批号2008年10月9日羟自由基检测试剂盒南京建成科技，批号20110224
超氧阴离子检测试剂盒南京建成科技，批号20110303鸟氨酸脱羧酶ELISA试剂盒华北制药金坦生物技术股份有限公司，批号E0300007
玻璃点样细管北京医科大学仪器厂
生血丸干粉达仁堂制药厂提供
2. 3主要仪器和设备
OLYMPUS显微镜日本，BX51
酶标仪上海科华实验系统有限公司型号ST-360
高速低温离心机美国sigma公司，3k-30
电子分析天平Sartorius德国，BP61型
137Cs γ 身寸线源Nordion, Ottawa, Canada Gamma, cell 40 Exactor恒温恒湿环境模拟光催化反应舱南开大学环境系研制，YSSN-I型 2.4动物模型制备、分组和给药
BalB/C小鼠150只，雄性，体重20 士 2g，8-12周龄。分为五组正常组，30只，普食正常饮水40天；模型组1，30只，普食，醋酸铅溶液5 g/L饲喂20天后，改普食，正常饮水 20天；模型组2，30只，普食，正常饮水20天后，改醋酸铅溶液5 g/L饲喂20天；预防组，30 只，生血丸2. 5g/kg，正常饮水20天后，普食，醋酸铅溶液5 g/L饲喂20天；治疗组30只， 普食，醋酸铅溶液5 g/L喂养20天后，生血丸2. 5g/kg，正常饮水20天。2.5外周血淋巴细胞微核率的检测方法
小鼠目内眦眶静脉取血0. 1ml，肝素抗凝，与1/2量的3%明胶放入离心管中，加盖混勻，垂直至于37°C水浴箱中自然沉降40分钟左右。吸取上清液，注入离心管中，1000rpm/5 分钟，弃上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分钟，瑞-姬氏染色1 0分钟。微核计数标准在油镜下观察1000个淋巴细胞，按Country-man的标准确定微核， 即微核大小为主核的1/20 1/3，与主核核膜完全分离，形态较规正，圆形或椭圆形，染色性与主核相似或稍淡，无明显折光性。观察5000个淋巴细胞中所含微核的淋巴细胞数。2.6骨髓细胞微核率的检测方法
小鼠颈椎脱臼法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用小牛血清冲洗骨髓，直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清，然后用约0. 5mL的小牛血清将沉淀悬浮起来。每个载玻片滴一滴，涂开后于空气中自然干燥，甲醇固定15min，晾干，瑞姬染色15min，细水流冲洗晾干，即可观察。统计1000个骨髓细胞中所含微核的细胞。2. 7骨髓细胞抑制羟自由基能力的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，按羟自由基检测试剂盒说明书操作，各样本以吸光值表示(OD )。2.8骨髓细胞抗超氧阴离子能力的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，采用比色法测定抗超氧阴离子活性，操作步骤按试剂盒说明书进行。蛋白测定采用考马斯亮蓝法。各样本以吸光值表示(OD)。2. 9骨髓细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓，直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，按 ELISA试剂盒说明书操作，在酶标仪以波长450nm检测。各样本以吸光值表示(OD)。3 结果
3. 1生血丸对铅污染小鼠外周血淋巴细胞及骨髓细胞微核率的影响表1生血丸对铅污染小鼠外周血淋巴细胞及骨髓细胞微核率的影响( X±S，n=10)
权利要求
1.生血丸在制备预防或修复环境污染致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的环境污染为铅、香烟污染、二甲苯或甲醛；所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。
2.生血丸在制备提前预防环境污染致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。
3.生血丸在制备早期修复环境污染致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了生血丸在制备预防或修复环境污染致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的环境污染为铅、香烟污染、苯、二甲苯、甲醛；所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。本发明从血液淋巴细胞、骨髓微核率的变化；自由基的清除能力；癌前细胞增殖的抑制等方面，检验生血丸抗环境污染致畸的功效，为生血丸的临床应用开辟更广阔的前景。
文档编号A61P35/00GK102370905SQ201110331310
公开日2012年3月14日 申请日期2011年10月27日 优先权日2011年10月27日
发明者严苏纯, 张晓乐, 王光普 申请人:天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂