专利名称：生血丸在制备预防低剂量电离辐射致细胞损伤药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制剂技术领域，涉及中药的新用途，更具体的说是生血丸在制备预防或修复低剂量电离辐射致骨髓细胞损伤药物中的应用。
背景技术：
达仁堂生血丸源于中医研究院广安门医院名老中医谢海洲教授数十年临床之验方。善于补肾阳和肾精，精足则血旺。现代研究，生血丸有保肝利胆、抗肿瘤、抗氧化、镇静、 降血糖等多种作用，治疗放、化疗后的全血细胞减少、再生障碍性贫血有确切疗效。方中有鹿茸、黄柏、山药、炒白术、桑枝、白扁豆、稻芽、紫河车。具有补肾健脾，填精补髓之功效。主药鹿茸温肾壮阳、强筋健骨、生精益血，是峻补元阳之要药，用于治疗精血两亏，活血又补血，具有促进造血之功能；紫河车益气、养血、补精，有强壮作用；白术、山药为健脾开胃之品，于大补之中防滋腻，有益气生血之作用黄柏为泻火滋阴、清解清泻之品，取其缓解滋补过峻之作用而有利于体内吸收，该方组方严谨，临床应用功效确切。众所周知，各种各样的污染威胁着我们赖以生存的环境。例如无处不在的辐射家用电器电视、电冰箱、空调、微波炉、吸尘器等；办公设备手机、电脑、复印机、电子仪器、医疗设备等；家庭装饰大理石、复合地板、墙壁纸、涂料等；周边环境中的高压线、 变电站、电视(广播)信号发射塔等；自然环境中的太阳黑子等。在辐射源集中的环境中工作、学习、生活的人，容易失眠多梦、记忆力减退、体虚乏力、免疫力低下等，其癌细胞的生长速度比正常人快二十四倍。为临床寻求一种能保护细胞，修复损伤，防止DNA突变的中成药是当务之急。前期的实验(生血丸对骨髓抑制小鼠造血调控的实验研究)表明生血丸能显著提高骨髓抑制小鼠外周血血像和骨髓有核细胞计数；提高骨髓抑制小鼠外周血网织红细胞的计数；可促进骨髓抑制小鼠骨髓细胞从(^/G1期进入增殖周期；提高骨髓抑制小鼠体外培养造血干祖细胞集落的产率；能有效调节骨髓微环境中ΤΡ0、ΕΡ0和G-CSF的表达，从而促进外周血像的提升。
发明内容
本发明公开了生血丸在制备预防或修复低剂量电离辐射致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。本发明进一步公开了生血丸在制备提前预防低剂量电离辐射致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。本发明进一步还公开了生血丸在制备早期修复低剂量电离辐射致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。本发明所述的预防和修复指的是对低剂量辐照带来的染色体断裂加以修复。本发明所述的低剂量电离辐射指的是自然界存在的天然辐射；家用电器和办公设备产生的辐射；放射医学中，应用于诊断和治疗的医用X射线、 射线等。根据UNSCEAR1988年报告，低剂量是指低于0.2Gy (Gy是吸收剂量单位)的剂量。在实际应用中，一般将低于0. 5Gy的剂量称为低剂量。长期接触低剂量辐射，射线会导致机体造血系统、神经系统、性腺、视神经、眼晶体及免疫系统的损伤，外周血淋巴细胞染色体、微核尤为敏感，常出现异常现象。本发明的实验结果提示生血丸能很好地预防和治疗低剂量辐照带来的染色体断裂；生血丸能预防性降低和清除羟自由基和超氧阴离子；生血丸能有效产生0DC，抑制多胺的合成，抑制变异细胞的增殖。本发明以达仁堂生血丸为实验用药，从血液淋巴细胞、骨髓微核率的变化；自由基的清除能力；癌前细胞增殖的抑制等方面，检验生血丸抗环境污染致畸的功效，为生血丸的临床应用开辟更广阔的前景。
具体实施例方式为了更充分的解释本发明的实施，下面通过典型的实施例对本发明做进一步的说明这些实施实例仅仅是解释、而不是限制本发明的范围。实施例1
第一部分生血丸修复低剂量辐照致骨髓细胞损伤的病理研究 1材料和方法 1.1动物
中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供雄性BalB/C小鼠150只，体重 20 士 2g，8-12 周龄，许可证号 SCXK —(军)2007— 004。1.2主要材料和试剂
快速姬姆萨染液南京建成科技，批号20101109
类标准胎牛血清100ml，中美合资兰州民海生工程有限公司，批号20100921肝素钠注射液2ml，1.25万单位，批号20100502
羟自由基检测试剂盒南京建成科技，批号20110224 超氧阴离子检测试剂盒南京建成科技，批号20110303
鸟氨酸脱羧酶ELISA试剂盒华北制药金坦生物技术股份有限公司，批号E0300007
生血丸干粉达仁堂制药厂提供
1. 3主要仪器和设备
OLYMPUS显微镜日本，BX51型
酶标仪上海科华实验系统有限公司，ST-360型
高速低温离心机美国sigma公司，3k-30型
电子分析天平Sartorius德国，BP61型
137Cs γ 身寸线源Nordion, Ottawa, Canada , Gamma cell 40 Exactor 1.4动物模型制备、分组和给药
BalB/C小鼠150只，雄性，体重20士2g，8-12周龄。分为五组正常组30只，普食，正常饮水，16天；模型组1，30只，0. 4GyX射线辐照4天后，普食，正常饮水12天；模型组2，30 只，普食，正常饮水12天后，0. 4GyX射线辐照4天；预防组30只，生血丸2. 5g/kg饲胃，正常饮水12天后，0. 4GyX射线辐照4天；治疗组30只，0. 4GyX射线辐照4天后，生血丸2. 5g/kg，正常饮水12天。1.5外周血淋巴细胞微核率的检测方法
小鼠目内眦眶静脉取血0. 1ml，肝素抗凝，与1/2量的3%明胶放入离心管中，加盖混勻，垂直至于37°C水浴箱中自然沉降40分钟左右。吸取上清液，注入离心管中，1000rpm/5 分钟，弃上清，取沉淀物推片，干后，甲醇固定1分钟，瑞-姬氏染色1 0分钟。微核计数标准在油镜下观察1000个淋巴细胞，按Country-man的标准确定微核， 即微核大小为主核的1/20 1/3，与主核核膜完全分离，形态较规正，圆形或椭圆形，染色性与主核相似或稍淡，无明显折光性。观察5000个淋
巴细胞中所含微核的淋巴细胞数。1.6骨髓细胞微核率的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用小牛血清冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清，然后用约0. 5mL的小牛血清将沉淀悬浮起来。每个载玻片滴一滴，涂开后于空气中自然干燥，甲醇固定15min， 晾干，瑞姬染色15min，细水流冲洗晾干，即可观察。统计1000个骨髓细胞中所含微核的细胞。1. 7骨髓细胞抑制羟自由基能力的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，按羟自由基检测试剂盒说明书操作，各样本以吸光值表示(OD )。1.8骨髓细胞抗超氧阴离子能力的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，采用比色法测定抗超氧阴离子活性，操作步骤按试剂盒说明书进行。蛋白测定采用考马斯亮蓝法。各样本以吸光值表示(OD)。1. 9骨髓细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)表达的检测方法
小鼠颈椎脱白法处死以后，取双侧的小鼠股骨，剪去骨的两端，用生理盐水冲洗骨髓， 直至骨髓腔发白为止。将骨髓冲洗液1500r/min离心8min，弃上清。细胞勻浆，按ELISA试剂盒说明书操作，在酶标仪以波长450nm检测。各样本以吸光值表示(OD )。2 结果
2. 1生血丸对低剂量辐照小鼠外周血淋巴细胞及骨髓细胞微核率的影响表1生血丸对低剂量辐照小鼠外周血淋巴细胞及骨髓微核率的影响( X±S，n=10)
权利要求
1.生血丸在制备预防或修复低剂量电离辐射致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。
2.生血丸在制备提前预防低剂量电离辐射致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。
3.生血丸在制备早期修复低剂量电离辐射致白血病、多脏器肿瘤发生药物中的应用。
4.权利要求1所述的应用，其中所述的预防和修复指的是对低剂量辐照带来的染色体断裂加以修复。
全文摘要
本发明公开了生血丸在制备预防或修复低剂量电离辐射致骨髓细胞损伤药物中的应用；其中所述的预防或修复骨髓细胞损伤指的是抑制癌前细胞的增殖。所述的预防和修复指的是对低剂量辐照带来的染色体断裂加以修复。本发明从血液淋巴细胞、骨髓微核率的变化；自由基的清除能力；癌前细胞增殖的抑制等方面，检验生血丸抗环境污染致畸的功效，为生血丸的临床应用开辟更广阔的前景。
文档编号A61P39/00GK102349978SQ20111033131
公开日2012年2月15日 申请日期2011年10月27日 优先权日2011年10月27日
发明者严苏纯, 张晓乐, 王光普 申请人:天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂