专利名称：静注人免疫球蛋白的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种免疫球蛋白的生产工艺，具体涉及一种静注人免疫球蛋白的生产工艺。
背景技术：
目前，从血浆中提取白蛋白的分离提取工艺主要采用基于Cohn6法的低温乙醇法来进行，该方法是根据血浆蛋白理化性质的差别，加入不同浓度的盐、有机溶剂和酸碱，通过改变影响蛋白质稳定性的条件而分别沉淀提取出不同的蛋白质。在低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素主要有5个，即pH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度。通过控制这些参数可以逐级沉淀血浆中的不同蛋白质成份，一般先从血浆中沉淀出组份I + II +III，然后再分离出组份II，最终从组份II中获得人免疫球蛋白。
发明内容
本发明的目的是提供一种直接从低温乙醇法组份I + II +III沉淀中提取静注人免疫球蛋白产品的生产工艺。本发明所采用的技术方案是
一种静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于 由以下步骤实现
步骤一取组份I + II +III沉淀，注入10-15倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1 5°C搅拌溶解后，调节pH值至5. 2士0. 1，加入乙醇至浓度13-15%，并控制溶液温度在-5--3°C之间；
步骤二 待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3.0士0. 2g/L，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，调节pH值至7. 1 士0. 1， 按体积加入氯化钠至3. 7士0. lg/L，继续添加乙醇至浓度19 21%，控制液体温度在-8 -6°C ；
步骤三待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3. 0士0. 2g/L，压滤分离出体系中产生的沉淀；
步骤四将步骤三得到的沉淀用5 7倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1 5°C，搅拌1. 5 2小时令其溶解；调节pH值至6. 8士0. 2，继续添加乙醇至浓度 4. 5 士 1%，同时降温至0 士 1 °C，深层过滤；
步骤五将深层过滤后的滤液，调节电导率至0. 14士0. 05ms/m, pH值至6. 8士0.2， 用Q-琼脂糖凝胶FF进行离子交换层析，流出液调节pH值至5. 2士0.2，电导率至 0. 10 士0. 05ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理；
步骤六层析后的液体调节PH值至4. 2士0. 3，进行超滤处理，用8 10倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50 90g/L之间；步骤七浓缩后的液体采用孔径0. 1 μ m的滤芯预过滤，之后再用15-20nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒；
步骤八纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102士 lg/L，调节pH值至4. 8士0.3， 按体积加入250士40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；
步骤九将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37°C下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。所述的pH值调节均采用氢氧化钠。所述的添加乙醇的质量分数为95%。本发明具有以下优点
与一般静注人免疫球蛋白产品生产工艺相比，该发明有效提高了人免疫球蛋白的总收得率，降低了生产成本，提高了企业利润；在分离过程中按各组份分步沉淀，并采用离子交换层析进行纯化，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。采用低PH孵放灭活病毒工艺和纳米膜过滤去除病毒的二次病毒灭活工艺，提高了产品的安全性。
具体实施例方式下面结合具体实施方式
对本发明进行详细的说明。本发明采用白蛋白提取过程中产生的组份I + II +III沉淀，通过调节蛋白质溶液的PH值、温度、蛋白浓度、离子强度、乙醇浓度，经分步压滤分离技术分离出不同成份的蛋白质，有效提取组份I + II +III沉淀中的人免疫球蛋白。本发明所述的静注人免疫球蛋白产品的生产工艺由以下步骤实现 实施例一
步骤一从冷库中取出组份I + II +III沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入10倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1°C，搅拌3小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸缓冲液调节pH值至4. 7，再加入pH=5. 9的醋酸缓冲液调节PH值至5. 1。缓慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量达到13%，并控制溶液温度在_5°C之间。步骤二 待沉淀产生完全后，按体积加入珍珠岩至2. 8g/L，硅藻土至2. 8g/L，继续搅拌使液体呈浆状。用加压过滤的方法分离出体系中产生的沉淀即F I +III沉淀。将滤过液即F I +III上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至 7. 0，按体积加入氯化钠至3. 6g/L，继续添加乙醇至浓度19%，控制液体温度在-8°C。步骤三待体系中沉淀产生完全后按体积加入珍珠岩至2. 8g/L，硅藻土至2. Sg/ L，继续搅拌使液体呈浆状。压滤分离出体系中产生的沉淀即F II沉淀，滤液弃做他用。步骤四将F II沉淀用5倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在 1°C搅拌1. 5小时令其溶解。用0. 2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6. 6，缓慢添加95% (ν/ ν)的乙醇至浓度4. 4%，同时降温至_1°C，深层过滤。步骤五将深层过滤后的滤液，调节电导率至0. 09ms/m，pH值至6. 6，用Q-琼脂糖凝胶FF (Q-SFF)进行离子交换层析。流出液调节pH值至5. 0，电导率至0. 05ms/m,用DEAE SFF进行离子交换层析处理。步骤六层析后的液体调节PH值至3. 9进行超滤处理，用8倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50g/L之间。步骤七浓缩后的液体采用孔径0. Iym的滤芯预过滤，之后再用15nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒。步骤八纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度101g/L，调节pH值至4. 5，按体积加入210mmol/L的甘氨酸。步骤九将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37°C下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。实施例二
步骤一从冷库中取出组份I + II +III沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入10倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在3°C，搅拌4小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸缓冲液调节pH值至4. 8，再加入pH=5. 9的醋酸缓冲液调节PH值至5. 2。缓慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量达到14%，并控制溶液温度在_4°C之间。步骤二 待沉淀产生完全后，按体积加入珍珠岩至3. Og/L，硅藻土至3. Og/L，继续搅拌使液体呈浆状。用加压过滤的方法分离出体系中产生的沉淀即F I +III沉淀。将滤过液即F I +III上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至 7. 1，按体积加入氯化钠至3. 7g/L，继续添加乙醇至浓度20%，控制液体温度在-7。C。步骤三待体系中沉淀产生完全后按体积加入珍珠岩至3. Og/L，硅藻土至3. Og/ L，继续搅拌使液体呈浆状。压滤分离出体系中产生的沉淀即F II沉淀，滤液弃做他用。步骤四将F II沉淀用6倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在 3°C搅拌1. 5小时令其溶解。用0. 2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至6. 8，缓慢添加95% (ν/ ν)的乙醇至浓度4. 5%，同时降温至0°C，深层过滤。步骤五将深层过滤后的滤液，调节电导率至0. Hms/m，pH值至6. 8，用Q-琼脂糖凝胶FF (Q-SFF)进行离子交换层析。流出液调节pH值至5. 2，电导率至0. 10ms/m,用DEAE SFF进行离子交换层析处理。步骤六层析后的液体调节pH值至4. 2进行超滤处理，用9倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在70g/L之间。步骤七浓缩后的液体采用孔径0. Ιμπι的滤芯预过滤，之后再用15nm孔径的纳米
膜进行过滤去除病毒。步骤八纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102g/L，调节pH值至4. 8，按体积加入250mmol/L的甘氨酸。步骤九将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37°C下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。实施例三
步骤一从冷库中取出组份I + II +III沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐中，向反应罐中注入15倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在5°C，搅拌5小时令其溶解。待沉淀完全溶解后，加入pH=4. 3的醋酸缓冲液调节pH值至4. 9，再加入pH=5. 9的醋酸缓冲液调节PH值至5. 3。缓慢加入95% (ν/ν)的乙醇令溶液中乙醇含量达到15%，并控制溶液温度在_3°C之间。
步骤二 待沉淀产生完全后，按体积加入珍珠岩至3. 2g/L，硅藻土至3. 2g/L，继续搅拌使液体呈浆状。用加压过滤的方法分离出体系中产生的沉淀即F I +III沉淀。将滤过液即F I +III上清液移入洁净的不锈钢反应罐中，加入0.2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至 7. 2，按体积加入氯化钠至3. 8g/L，继续添加乙醇至浓度21%，控制液体温度在-6°C。步骤三待体系中沉淀产生完全后按体积加入珍珠岩至3. 2g/L，硅藻土至3. 2g/ L，继续搅拌使液体呈浆状。压滤分离出体系中产生的沉淀即F II沉淀，滤液弃做他用。步骤四将F II沉淀用7倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在 5°C搅拌2小时令其溶解。用0. 2 mol/L的氢氧化钠调节pH值至7. 0，缓慢添加95% (ν/ν) 的乙醇至浓度4. 6%，同时降温至1°C，深层过滤。步骤五将深层过滤后的滤液，调节电导率至0. 19ms/m，pH值至7.0，用Q-琼脂糖凝胶FF (Q-SFF)进行离子交换层析。流出液调节pH值至5. 4，电导率至0. 15ms/m,用DEAE SFF进行离子交换层析处理。步骤六层析后的液体调节pH值至4. 5进行超滤处理，用10倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在90g/L之间。步骤七浓缩后的液体采用孔径0. 1 μ m的滤芯预过滤，之后再用20nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒。步骤八纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度103g/L，调节pH值至5. 1，按体积加入^Ommol/L的L-脯氨酸。步骤九将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37°C下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。
权利要求
1.一种静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于 由以下步骤实现步骤一取组份I + II +III沉淀，注入10-15倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1 5°C搅拌溶解后，调节pH值至5. 2士0. 1，加入乙醇至浓度13-15%，并控制溶液温度在-5--3°C之间；步骤二 待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3.0士0. 2g/L，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，调节pH值至7. 1 士0. 1， 按体积加入氯化钠至3. 7士0. lg/L，继续添加乙醇至浓度19 21%，控制液体温度在-8 -6°C ；步骤三待沉淀产生完全后，在混合溶液中按体积加入珍珠岩至3. 0士0. 2g/L，硅藻土至3. 0士0. 2g/L，压滤分离出体系中产生的沉淀；步骤四将步骤三得到的沉淀用5 7倍体积、5°C以下的注射用水溶解沉淀，控制溶液温度在1 5°C，搅拌1. 5 2小时令其溶解；调节pH值至6. 8士0. 2，继续添加乙醇至浓度 4. 5 士 1%，同时降温至0 士 1 °C，深层过滤；步骤五将深层过滤后的滤液，调节电导率至0. 14士0. 05ms/m, pH值至6. 8士0.2， 用Q-琼脂糖凝胶FF进行离子交换层析，流出液调节pH值至5. 2士0.2，电导率至 0. 10 士0. 05ms/m，用DEAE SFF进行离子交换层析处理；步骤六层析后的液体调节PH值至4. 2士0. 3，进行超滤处理，用8 10倍注射用水透析，最后浓缩至蛋白含量在50 90g/L之间；步骤七浓缩后的液体采用孔径0. 1 μ m的滤芯预过滤，之后再用15-20nm孔径的纳米膜进行过滤去除病毒；步骤八纳米膜过滤后的液体超滤浓缩至蛋白浓度102士 lg/L，调节pH值至4. 8士0.3， 按体积加入250士40mmol/L的甘氨酸或L-脯氨酸；步骤九将配制好的蛋白质溶液除菌分装后，37°C下放置4小时进行低pH病毒灭活，经灯检包装后获得静注人免疫球蛋白制品。
2.根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于 所述的PH值调节均采用氢氧化钠。
3.根据权利要求1或2所述的静注人免疫球蛋白的生产工艺，其特征在于 所述的添加乙醇的质量分数为95%。
全文摘要
本发明涉及一种免疫球蛋白的生产工艺，具体涉及一种静注人免疫球蛋白的生产工艺。从血浆中提取白蛋白的分离提取工艺主要采用基于Cohn6法的低温乙醇法来进行。本发明取组份Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ沉淀，溶解沉淀，调节pH值，加入乙醇至浓度13-15%；待沉淀产生完全后，加入珍珠岩和硅藻土，加压过滤分离出体系中产生的沉淀，取出滤过液，加入氯化钠和乙醇；在混合溶液中再加入珍珠岩和硅藻土，压滤分离沉淀，溶解沉淀，继续添加乙醇；深层过滤后调节电导率和pH值，离子交换层析，进行超滤处理，再用纳米膜进行过滤，加入甘氨酸或L-脯氨酸。本发明提高了人免疫球蛋白的总收得率，降低了生产成本，生产工艺更加精细，提高了制品的质量。
文档编号A61K47/16GK102552906SQ20121000687
公开日2012年7月11日 申请日期2012年1月11日 优先权日2012年1月11日
发明者张华平, 张振, 张泓喆, 赵军 申请人:西安回天血液制品有限责任公司