专利名称：一种卡介菌多糖核酸吸入气雾剂、制备方法及用途的制作方法
技术领域：
本发明属于药物制剂技术领域，更具体的说，涉及一种卡介苗多糖核酸的定量吸入气雾剂、制备方法及用途。
背景技术：
气雾剂系指含药溶液、乳浊液或混悬液与适宜的抛射剂共同装于具有特制阀门系统的耐压容器中，使用时借助抛射剂的压力将内容物呈雾状物喷出，用于肺部吸入或直接喷至腔道粘膜、皮肤及空间消毒的制剂。按用药途径可分为吸入气雾剂、非吸入气雾剂和外用气雾剂；按处方组成可分为二相气雾剂(气相与液相)和三相气雾剂(气相、液相、固相或液相)；按给药定量与否，可分为定量气雾剂与非定量气雾剂，参见中国药典2010版第二部附录I L。吸入气雾剂制剂是一种通过呼吸道给药途径的制剂，使药物能渗透到肺部并沉积在呼吸道等区域，具有速效、靶点给药、避免胃肠道和肝脏首过效应、副作用小、给药剂量小等优点，已得到国际承认。卡介菌多糖核酸(BCG-polysaccharidenucleic acid, BCG-PSN)系将卡介菌菌体破碎、热酚处理、经精制而成的多糖和核酸的混合物，为卡介菌中的免疫活性物质，具有免疫调节及抗炎作用。目前认为Thl/Th2失衡是引起细胞免疫异常的关键，也是造成免疫功能低下、自身免疫性疾病及变态反应的主要原因，Thl/Th2细胞在数目、活化程度和功能方面的比例失衡是支气管哮喘的重要免疫学发病机制之一。近10年来的研究表明，BCG-PSN可以特异性增强机体的Thl型细胞免疫反应，抑制Th2型细胞免疫反应，进而维持两者之间的平衡；可直接调节外周血、外周免疫器官(脾脏)和中枢免疫器官(胸腺)CD4+T、CD4+CD8+T细胞的成熟与分化，进而维持CD4+T、CD8+T细胞两亚群间的平衡，使低下的免疫功能得以恢复正常；可增加T细胞及脾细胞膜上IL-2的表达，促进T细胞克隆增殖及T细胞集落形成，还能增加活化T细胞IFN-Y的分泌，增强巨噬细胞功能，进而调节机体免疫水平，治疗。此外，BCG-PSN的抗炎作用与NF-B途径有关，BCG-PSN对NF_kB的影响表现为双向调节作用，一方面如同IL-2P —样激活人单核细胞NF-kB，后者与其特异的启动子序列相结合，而另一方面，又可拮抗IL-I P对NF-B的激活作用，参见宁云山，姜德建，刘珊珊.卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物的免疫调节作用及临床应用.中国生物制品学杂志，2008，21 (1) :74-77。也有研究发现，BCG-PSN能稳定肥大细胞，封闭IgE功能，减少脱颗粒细胞释放活性物质，以及具有抗乙酰胆碱所致的支气管痉挛作用，达到抗过敏及平喘作用。因此，BCG-PSN在改善免疫功能、抗过敏、抗炎方面具有良好的疗效，临床上已用于多种免疫失调或免疫水平下降及过敏性疾病的治疗。目前，已有卡介菌多糖核酸注射液在临床上用于调节机体免疫水平，增强机体的抗感染和抗过敏能力，治疗慢性支气管炎、哮喘、过敏类疾病(如过敏性鼻炎、过敏性哮喘、过敏性皮炎、荨麻疹)、慢性阻塞性肺病(COPD)等疾病。然而注射液也有其局限性，卡介菌多糖核酸需要长期用药，患者需要到医院注射，用药不便；长时间用药，注射部位易溃疡、硬结、感染等，给病人造成痛苦。CN1669557A (200410016932. I)提供了卡介苗多糖核酸喷雾剂及其制备方法，由卡介苗多糖核酸、生物粘合剂、糜蛋白酶、调味剂及生理盐水组成，喷雾剂直接作用于口腔及鼻粘膜免疫系统。CNlO 1623304A (200910006080. 0)提供了一种用于鼻腔给药的药物组合物，包括固体制剂粉剂和干粉剂，液体制剂喷雾剂、乳剂、混悬剂和滴鼻剂，以及半固体制剂凝胶剂、软膏剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，更具体地说是一种通过口腔或鼻腔给药、可定量吸入卡介菌多糖核酸的气雾剂，直接将卡介菌多糖核酸分布于鼻腔、气管、支气管、肺部，作用于患处，起到治疗鼻炎和平喘作用。本发明还提供卡介菌多糖核酸气雾剂的制备方法及用途。本发明的技术方案如下一种卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，是由卡介菌多糖核酸、抛射剂、共溶剂、表面活性剂和防腐剂组成，其中，卡介菌多糖核酸含量为0. 02 0. 90wt% ;抛射剂含量为60 99wt% ;共溶剂含量为0 30wt% ;表面活性剂含量为I IOwt % ;防腐剂含量为0. 01 0. 25wt% ;各组分含量重量百分比之和为100*%。所述卡介菌多糖核酸，首先进行冷冻干燥或真空低温干燥处理，使其含水量小于I %，再采用高能球磨机或者气流粉碎机粉碎技术进行微粉化处理，使其微粉粒度分布为100 %的卡介菌多糖核酸颗粒粒径在0. 05 u m-15 范围内，其中99%的卡介菌多糖核酸颗粒粒径在0. I ii m-5 ii m范围内。微粉化的卡介菌多糖核酸在制成混悬液之前一般低温保存，如在-10°C保存。所述抛射剂为I，I，I，2-四氟乙烧(HFA134a)、I，I，I，2，3，3，3_ 七氟丙烷(HFA227)之一或组合；抛射剂的用量优选为80 99wt%，更优选为90 99wt%。所述共溶剂选自丙烷、正丁烷、异丁烷、正戊烷、异戊烷、新戊烷、无水乙醇、丙二醇、甘油之一或组合；共溶剂的用量优选为5 IOwt%。所述表面活性剂为油酸、失水山梨醇三油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、失水山梨醇单油酸酯、聚乙二醇-300之一或组合；表面活性剂的用量优选为I 3wt%。所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、苯甲酸或苯甲酸钠。防腐剂的用量优选为0.02 0. 25wt%。根据本发明上述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，优选如下所述卡介菌多糖核酸，在上述配方中，含量优选为0.04 0.50Wt%，更优选为0. 04 0. 20wt%。所述抛射剂优选为1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)。所述共溶剂为丙烷、正丁烷、异丁烷、正戊烷、异戊烷、新戊烷、无水乙醇、丙二醇或甘油。进一步优选为正丁烷、异丁烷或无水乙醇。所述表面活性剂优选为油酸、失水山梨醇三油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、失水山梨醇单油酸酯或聚乙二醇-300。进一步优选为油酸、失水山梨醇三油酸酯或失水山梨醇硬脂Ife酷。所述防腐剂优选为尼泊金乙酯、尼泊金丙酯或尼泊金丁酯。进一步优选为尼泊金乙酯或尼泊金丙酯。根据本发明，所述卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的制备方法，采用以下药学上可接受的方法之一冷灌法、两步灌装法、加压罐装法或盖下灌装法。冷灌法按照处方量，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂、防腐剂冷却至-30°C以下加入同一容器中，搅拌，混悬均匀，灌装入气雾剂罐中，加盖拧紧。两步灌装法按照处方量，先将卡介菌多糖核酸、表面活性剂与共溶剂混悬，加入防腐剂，搅拌，混悬均匀，然后将所得混悬液灌装入气雾剂罐中，加盖压紧后，将抛射剂经气雾剂罐上的阀门充入气雾剂罐中。
所述的加压罐装法为下列步骤之一加压罐装法I (使用预处理溶剂):按照处方量，将表面活性剂溶于预处理溶剂，力口入卡介菌多糖核酸，搅拌，使表面活性剂充分地分散附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后减压除去预处理溶剂，所得残余物再转移至耐压容器中，加入抛射剂、防腐剂，混悬均匀，耐压容器中的药液在压力下经气雾剂罐上的阀门被充入已压好盖的气雾剂罐中。加压罐装法2 (不用预处理溶剂)按照处方量，在-30°C以下，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂在耐压容器中混悬均匀，再加入防腐剂，混悬，耐压容器中的药液在压力下经气雾剂罐上阀门被充入气雾剂罐中。所述的盖下罐装法为下列步骤之一盖下灌装法I (使用预处理溶剂):按照处方量，将表面活性剂溶解于预处理溶剂，加入卡介菌多糖核酸，搅拌，使表面活性剂充分地分散附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后减压除去预处理溶剂，所得残余物转移至耐压容器中，再加入抛射剂、防腐剂，混悬均匀，耐压容器中的药液灌装至已抽真空的气雾剂罐中，加盖压紧制成气雾剂。盖下灌装法2 (不用预处理溶剂)按照处方量，在_30°C以下，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂在耐压容器中混悬均匀，再加入防腐剂，混悬，耐压容器中的药液灌装至已抽真空的气雾剂罐中，加盖压紧而制成气雾剂。上述制备方法中，优选的是两步灌装法、加压罐装法和盖下灌装法。更优选的是加压罐装法I和盖下灌装法I。上述制备工艺中，所述预处理溶剂选用丁烷、异丁烷、正戊烷、异戊烷、新戊烷中的一种。预处理溶剂与配方中共溶剂的作用不同，预处理溶剂主要用于使表面活性剂充分地分散并附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后被除去，最后产品中不含预处理溶剂。用预处理溶剂进行预处理样品时，在压力下将表面活性剂如失水山梨醇硬脂酸酯溶解在预处理溶剂中，加入微粉化的卡介菌多糖核酸，充分搅拌，使表面活性剂充分地分散并附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后除去预处理溶剂，除去预处理溶剂的方法可采用低温真空干燥、减压蒸去溶剂再低温干燥等方法。所得残余物即为表面活性剂包裹的卡介菌多糖核酸微粒，既增加了卡介菌多糖核酸微粒的流动性，又增加了卡介菌多糖核酸微粒在抛射剂中的悬浮性。上述制备工艺中，用于灌装卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的气雾剂罐需要选择合适的气雾剂阀门，优选释药范围为25iU 250iU的定量气雾剂阀门，更优选的是50 ill、63iU和100 ill的定量气雾剂阀门，最优选的是50 ill和100 ill的定量气雾剂阀门。将卡介菌多糖核酸制成吸入气雾剂后，通过口腔或鼻腔吸入，可直接将卡介菌多糖核酸分布于鼻腔、气管、支气管、肺部，迅速吸收并发挥作用，适于治疗过敏性鼻炎、过敏性哮喘。本发明的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的医药用途，用于制备治疗过敏性哮喘和/或过敏性鼻炎的药物。以配有定量气雾剂阀门的气雾剂罐灌装。灌装方法按现有技术即可。本发明的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂治疗过敏性哮喘的药效学实验动物Wistar雄性大白鼠32只，体重220 240g，由山东大学实验动物中心提供。过敏性哮喘大鼠模型的建立参照文献方法迟磊等.过敏性哮喘大鼠模型的建立.重庆医学，2003，32 (4) :429-431。将32只大鼠分为正常组、哮喘模型组、注射给药组、吸入给药组，每组8只大鼠。后三组分别于实验第I天、第8天用新鲜配制的卵白蛋白混悬液(卵白蛋白Img+氢氧化铝200mg+生理盐水Iml)在大鼠两侧腹般沟、腹部、两侧前足跖5个部位做皮下注射(每点0. 2ml)，同时腹腔注射0. 2ml。于第15天，将大鼠置于 20cmX20cmX15cm大小的密闭容器中，用I %卵白蛋白进行雾化吸入激发，每次雾化30分钟，连续7天。正常组大鼠以等量生理盐水代替卵白蛋白，同法、同量、同期进行上述同样的操作。给药方法从进行雾化吸入卵白蛋白激发的同一天开始给药，每次于雾化吸入卵白蛋白前30分钟给药。注射给药组每日腹腔注射给予卡介菌多糖核酸注射液0.6ml/kg(含卡介菌多糖核酸500 V- g/ml,浙江万马药业有限公司生产)，相当于卡介菌多糖核酸0. 3mg/kg。吸入给药组参照文献丁立，张钧寿.硫酸沙丁胺醇/四氟乙烷气雾剂的处方筛选和大鼠呼吸道吸收研究.中国药科大学学报，2009，40 (4) :332-336的给药方法，采用鼻腔插管喷入法，直接将药物输送至咽及气管，使用实施例I制备的气雾剂给药，每天给药一次，给药量0. 288mg/kg。正常组、哮喘模型组均采用鼻腔插管喷入法，给予按照实施例I制备的组方中除不含卡介菌多糖核酸外其他成分均相同的气雾剂。实验结果(I)整体动物观察哮喘模型组大鼠，呼吸急促，节律不规则，点头呼吸，口鼻发绀，行动迟缓。正常组大鼠无明显上述表现。注射给药组、吸入给药组上述表现轻微。(2)支气管肺泡灌洗液检查支气管肺泡灌洗液(BALF)采集采用文献方法，迟磊等，过敏性哮喘大鼠模型的建立.重庆医学，2003，32 (4) :429-431。分析BALF中白细胞总数及嗜酸性粒细胞总数，结果见表I。与正常组比较，哮喘模型组较正常组白细胞总数及嗜酸性粒细胞总数有显著性升高，表明哮喘模型成立；与哮喘模型组比较，注射给药组、吸入给药组较哮喘模型组白细胞总数及嗜酸性粒细胞总数均有显著性降低，表明卡介菌多糖核酸对哮喘模型大鼠具有较好的治疗作用；而注射给药组、吸入给药组之间细胞总数及嗜酸性粒细胞总数无显著性差异，说明注射给药组与吸入给药组的治疗作用无著性差异。表I各组大鼠BALF中炎症细胞总数及嗜酸性粒细胞总数
~m\大鼠数量I炎细胞总数(xio6/l)嗜酸性细胞总数(XioVL)
正常组83.62 + 0.600.92 + 0. 14
哮喘模型组 811. 37 + 0. 79aa10. 72 + 1.31AA
权利要求
1.一种卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，是由卡介菌多糖核酸、抛射剂、共溶齐U、表面活性剂和防腐剂组成，其中，卡介菌多糖核酸含量为0. 02 0. 90wt% ;抛射剂含量为60 99wt% ;共溶剂含量为0 30Wt% ;表面活性剂含量为I IOwt^ ;防腐剂含量为0.01 0. 25wt% ;各组分含量重量百分比之和为100% ； 所述抛射剂为1，1，1，2_四氟乙烷、1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷之一或组合。
2.如权利要求I所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，所述卡介菌多糖核酸含水量小于Iwt %，微粉化处理使其微粉粒度分布为100%的卡介菌多糖核酸颗粒粒径在0. 05iim-15iim范围内，其中99 %的卡介菌多糖核酸颗粒粒径在0. I y m_5 y m范围内；卡介菌多糖核酸含量优选为0. 04 0. 50wt%，更优选为0. 04 0. 20wt%。
3.如权利要求I所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，所述抛射剂的用量为80 99wt %，优选为90 99wt %。
4.如权利要求I所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，所述共溶剂选自丙烷、正丁烷、异丁烷、正戊烷、异戊烷、新戊烷、无水乙醇、丙二醇、甘油之一或组合；共溶剂的用量优选为5 IOwt%。
5.如权利要求I所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，所述表面活性剂为油酸、失水山梨醇三油酸酯、失水山梨醇硬脂酸酯、失水山梨醇单油酸酯、聚乙二醇-300之一或组合；表面活性剂的用量优选为I 3wt%。
6.如权利要求I所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂，其特征在于，所述防腐剂为尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、苯甲酸或苯甲酸钠；防腐剂的用量优选为0.02 0. 25wt%。
7.权利要求I 6任一项所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的制备方法,采用以下药学上可接受的气雾剂制备方法之一冷灌法、两步灌装法、加压罐装法或盖下灌装法；其中， 所述的冷灌法按照处方量，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂、防腐剂冷却至-30°C以下加入同一容器中，搅拌，混悬均匀，灌装入气雾剂罐中，加盖拧紧； 所述的两步灌装法按照处方量，先将卡介菌多糖核酸、表面活性剂与共溶剂混悬，力口入防腐剂，搅拌，混悬均匀，然后将所得混悬液灌装入气雾剂罐中，加盖压紧后，将抛射剂经气雾剂罐上的阀门充入气雾剂罐中。
8.权利要求7所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的制备方法，其特征在于， 所述的加压罐装法为下列步骤之一 加压罐装法I :按照处方量，将表面活性剂溶于预处理溶剂，加入卡介菌多糖核酸微粉，搅拌，使表面活性剂充分地分散并附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后减压除去预处理溶剂，所得残余物再转移至耐压容器中，加入抛射剂、防腐剂，混悬均匀，耐压容器中的药液在压力下经气雾剂罐上的阀门被充入已压好盖的气雾剂罐中； 加压罐装法2 :按照处方量，在-30°C以下，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂在耐压容器中混悬均匀，再加入防腐剂，混悬，耐压容器中的药液在压力下经气雾剂罐上阀门被充入气雾剂罐中； 所述的盖下罐装法为下列步骤之一 盖下灌装法I :按照处方量，将表面活性剂溶解于预处理溶剂，加入卡介菌多糖核酸微粉，搅拌，使表面活性剂充分地分 散并附着于卡介菌多糖核酸微粉颗粒的表面，然后减压除去预处理溶剂，所得残余物转移至耐压容器中，再加入抛射剂、防腐剂，混悬均匀，耐压容器中的药液灌装至已抽真空的气雾剂罐中，加盖压紧制成气雾剂； 盖下灌装法2 :按照处方量，在-30°C以下，将卡介菌多糖核酸、表面活性剂、抛射剂在耐压容器中混悬均匀，再加入防腐剂，混悬，耐压容器中的药液灌装至已抽真空的气雾剂罐中，加盖压紧而制成气雾剂； 所述预处理溶剂选用丁烷、异丁烷、正戊烷、异戊烷、新戊烷中的一种。
9.如权利要求7或8所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的制备方法，其特征在于，卡介菌多糖核酸气雾剂罐选择定量气雾剂阀门，定量气雾剂阀门释药范围为25iU 250iU ;优选的是50iil、63ia和100 ill的定量气雾剂阀门，更优选的是50 ill和100 ill的定量气雾剂阀门。
10.权利要求I 6任一项所述的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂的医药用途，用于制备治疗过敏性哮喘和/或过敏性鼻炎的药物。
全文摘要
本发明提供一种卡介菌多糖核酸吸入气雾剂、制备方法及用途。该气雾剂由卡介菌多糖核酸、抛射剂、共溶剂、表面活性剂和防腐剂组成；所述抛射剂采用1，1，1，2-四氟乙烷和1，1，1，2，3，3，3-七氟丙烷。采用加压罐装法或盖下灌装法等工艺制备，气雾剂罐上有定量阀门，可定量释放药物。本发明的卡介菌多糖核酸吸入气雾剂可使卡介菌多糖核酸直接分布于鼻腔、气管、支气管和肺部，用作治疗过敏性哮喘和/或过敏性鼻炎的药物。
文档编号A61P11/02GK102626386SQ20121013268
公开日2012年8月8日 申请日期2012年4月28日 优先权日2012年4月28日
发明者刘安昌, 孙隆儒, 翟光喜, 马铭怿 申请人:山东大学