一种核酸与化学药物的复合制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及的是一种药物技术领域的药物输送方法，特别是一种核酸与化学药物 复合制剂及其制备方法，尤其为一种可用于炎症的生物大分子核酸药物制剂与现有的小分 子化学药物联合治疗的复合制剂。
【背景技术】
[0002] 炎症，特别是关节炎，在中老年人群中普遍存在，给患者的日常工作生活带来很大 不便与痛苦，关节是药物治疗较难达到的靶器官，无论是静脉注射、肌肉注射还是口服用 药，关节内达到的药物浓度总是有限，并且这些治疗方法存在一定的副作用。而关节穿刺给 药的途径虽然一定程度克服了上述存在的问题，但由于局部注射治疗后药物的半衰期短、 反复穿刺关节较容易带来更多的感染机会，使得关节穿刺治疗在广泛使用上存在一定局限 性。而新近开展的基因治疗方法，则能克服以上治疗方法的弊端，其主要优势表现在将编码 某一抗炎物质的基因通过载体转化到关节滑膜中，达到高效、长期、稳定地表达这一抗炎物 质来治疗类风湿关节炎的目的，期望由此而改变目前治疗类风湿关节炎的现状。例如生物 大分子核酸药物白介素1受体诘抗剂（interleukin I receptor antagonist, IL-IRa)可 以在基因水平上调节白细胞介素-I (IL-I)的表达，从而抑制炎症。
[0003] 但单独注射带负电荷的核酸药物难以进入细胞，所以需要合适的输送载体来协 助核酸药物进入细胞核，从而达到治病的位点。目前非病毒载体由于没有免疫原性等安 全隐患而成为研究的热点（Yin H等人，基于基因治疗的非病毒载体，自然-综述-遗传 学.2014 ;15:541-55.)，但由于难以克服的化学毒性和低转染活性却很难能够成为药用载 体。因此，目前治疗的主要手段还是采用小分子化学药物通过皮下或肌肉注射完成。而绝 大多数化学药物为激素类药物（肖征宇，类风湿性关节炎的药物治疗方法，中国医师进修 杂志，第九期，1993年）。大剂量长期注射容易对患者造成比如感染、股骨头坏死、消化道出 血、高血压、肥胖等等毒副作用。
[0004] 为了突破这一技术瓶颈，本发明利用阳离子多肽、经典的无毒脂质体包裹白介素1 受体拮抗剂的纳米颗粒与现有的化学药物注射液混合形成混合制剂然后进行关节腔注射。 [0005] 到目前为止，单纯利用生物材料包裹核酸药物进行治疗的方法仍处于实验阶段。 为了能够将该技术运用于实际应用，我们打算结合已经上市的醋酸氢化可的松混悬液注射 技术，将优化的包裹IL-Ra pcDNA形成的纳米颗粒与醋酸曲安奈德注射液形成混悬注射液， 进行关节腔注射治疗关节炎。由于关节腔注射属于局部给药，相对于系统给药简单的多，如 果利用安全高效的多肽与脂质体一起输送核酸药物来尝试采用化学药与生物药一起进行 联合治疗的方案治疗关节炎，希望该方法会有更好的应用前景。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的在于克服现有关节炎症技术中的不足，提供一种核酸与化学药物复 合制剂及其制备方法。本发明通过核酸、阳离子多肽（如图1)、阳离子脂质体组装的三元 纳米颗粒，以及在此基础上包裹透明质酸的四元纳米颗粒分别与市售的醋酸曲安奈德注射 液形成混悬注射液：（1)利用已经申请专利的三元纳米颗粒和四元纳米颗粒；（2)利用市售 的醋酸曲安奈德注射液；(3)将（1)和（2)进行混合制备复合制剂。因此，我们与现有的 lipopolyplexes (脂质体）相比，不仅避免了聚阳离子的毒性（多肽是人体内源性分子）， 而且有效突破了通过PEG化实现体内长效循环的弊端。兼顾到达靶细胞之前的稳定性和进 入靶细胞之后的生物响应性。
[0007] 本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
[0008] 本发明涉及用核酸、阳离子多肽、阳离子脂质体组装的三元纳米颗粒，以及在此基 础上包裹透明质酸的四元纳米颗粒分别与市售的醋酸曲安奈德注射液形成的混悬注射液 (见图10)。具体涉及一类由阳离子多肽与阳离子脂质体包裹核酸形成的三元纳米颗粒、在 该三元纳米颗粒表面覆盖透明质酸形成的表面带负电荷的四元纳米颗粒与市售的醋酸曲 安奈德注射液。
[0009] 第一方面，本发明涉及一种复合制剂，所述复合制剂为生物大分子药物与小分子 化学药物制剂的混合物。
[0010] 优选地，所述小分子化学药物制剂为用于炎症治疗的化学药物制剂；所述生物大 分子药物为非病毒载体包裹生物大分子药物。
[0011] 优选地，所述化学药物制剂具体为市售的醋酸曲安奈德注射液。
[0012] 优选地，所述非病毒载体包裹生物大分子药物包括三元纳米颗粒或四元纳米颗 粒；所述三元纳米颗粒包括阳离子脂质体、多肽、生物大分子药物组分；所述四元纳米颗粒 包括阳离子脂质体、多肽、生物大分子药物组分、透明质酸。
[0013] 优选地，所述三元纳米颗粒的制备具体为：混合所述阳离子脂质体与多肽，将所得 混合物转移至所述生物大分子药物组分溶液中，常温下孵育15~35分钟得表面带正电荷 的纳米颗粒，即为三元纳米颗粒；
[0014] 更优选地，所述混合物中阳离子脂质体与多肽的质量比为（0. 5~2) : (2~10); 所述多肽与生物大分子药物组分的质量比为（2~10) : (0. 5~2);
[0015] 进一步优选地，所述混合物中阳离子脂质体与多肽的质量比为0.75:4或1:4;所 述多肽与生物大分子药物组分的质量比为4:1。
[0016] 优选地，所述四元纳米颗粒的制备具体为：向所述三元纳米颗粒中加入透明质酸 钠，混合均匀，放置，即得四元纳米颗粒；
[0017] 更优选地，所述放置的时间为5~20分钟；所述透明质酸钠的加入质量与所述多 肽的质量比为（5~35) : (2~10);
[0018] 进一步优选地，所述放置的时间为5分钟；所述透明质酸钠的加入质量与所述多 肽的质量比为14. 2 :4 ;
[0019] 优选地，所述生物大分子药物组分为核酸，具体包括DNA、siRNA、shRNA、 microRNA ；
[0020] 优选地，所述生物大分子药物组分为DNA ;
[0021] 进一步地，所述DNA具体为IL-IRa pcDNA。
[0022] 优选地，所述多肽包括如SEQ ID No. 1或SEQ ID No. 2所示的序列，聚阳离子多肽， 以及连接靶向基团的阳离子多肽。
[0023] 更优选地，所述多肽包括如SEQIDNo. 1或SEQIDNo. 2所示的序列。
[0024] 优选地，所述阳离子脂质体是通过以下步骤制得的：将质量比为（3~1) :1的 (2, 3-二油氧基丙基）三甲基氯化铵（DOTAP)与1，2-二油酰-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺 (DOPE)的氯仿溶液旋转蒸、去除溶剂，然后水合过夜，超声30~60分钟。
[0025] 更优选地，所述（2, 3-二油氧基丙基）三甲基氯化铵与1，2-二油酰-sn-甘 油-3-磷酸乙醇胺的质量比1:1。
[0026] 第二方面，本发明还提供一种所述复合制剂的制备方法，所述制备方法具体为：将 生物大分子药物与小分子化学药物制剂物理共混即可。
[0027] 优选地，所述共混后生物大分子药物与小分子化学药物制剂中有效成分的浓度比 为 40:1。
[0028] 与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
[0029] 1、利用化学药物与基因药物联合制剂，减弱了单独利用化学药物带来的毒性以 及病情反弹的弊端，并延长了药物作用时间，克服了单纯利用基因药物带来的效率低的缺 陷；
[0030] 2、由于本申请所用的脂质与多肽均为内源性的生物安全的医用材料，而且该纳米 输送体系通过关节腔注射后通过正负电荷作用迅速被腔内的滑膜细胞内吞，而纳米体系中 的脂质组分通过融膜作用实现内吞逃逸，从而有效地将生物大分子药物组分释放到细胞浆 中，在化学