专利名称：一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂及其制备方法
技术领域：
本发明属于防治仔猪大肠杆菌病类药物技术领域，具体地说是一种用于防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂及其制备方法。
背景技术：
仔猪黄痢、白痢是由致病性大肠杆菌引起的仔猪肠道传染病。仔猪黄痢是出生后几小时到I周龄仔猪的一种急性高度致死性肠道传染病，以剧烈腹泻，排出黄色或黄白色水样粪便以及迅速脱水死亡为特征，是集约化猪场的主要肠道疾病之一；仔猪白痢是10-30日龄仔猪多发的一种急性肠道传染病，以排出灰白色粘稠稀粪为特征，普遍发生于世界各国，常弓丨起大批仔猪发育不良或死亡。仔猪黄白痢潜伏期短、发病率高，尤其黄痢的死亡率高，给畜牧业造成重大损失。目前，对于该病主要有菌苗的免疫，抗生素、化学药物、中药等方式进行预防和治疗。其中菌苗免疫，因肠道微生物抗原和抗原决定簇复杂，免疫机制略有差异，免疫效果不确切。抗生素和化学药物的治疗仍是防治该病的主要手段，且大多数为抗生素类。但随着抗菌药物在临床上的滥用，导致大肠杆菌等细菌的耐药性十分普遍，如临床上常用的庆大霉素、土霉素、氟哌酸、诺氟沙星等药物疗效降低。与其它预防、治疗方法比较，中草药具有非特异性抗菌作用.残留毒性较低，并且动物一般对它不易产生耐药性。再者，中药治疗仔猪黄白痢的种类较多，成本低，治愈率较高，用中药防治仔猪黄白痢也成为科研、临床防治的主要方法。但目前临床应用纯中药制剂尤其是中药散剂存在疗效慢，剂量大等弊端。
发明内容
本发明的目的在于针对目前兽医临床上抗生素的不合理使用，提供一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂及其制备方法，该复方制剂选择中药有效成份提取物，与西药进行科学配伍，通过联合用药以减少细菌耐药性和药物用量，其临床防治仔猪大肠杆菌病效果优于单纯用中药或西药，具有良好的市场前景。本发明的技术方案是一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂，分为大袋药物和小袋药物部分；其中，小袋药物的组分及其重量份为黄藤素提取物5 12份、穿心莲提取物5 12份、痢菌净2 5份，淀粉加至100份；大袋药物的组分及其重量份为八面体蒙脱石900份，2袋合计总量1000份。优选配比为小袋药物黄藤素提取物Sg、穿心莲提取物Sg、痢菌净2g、淀粉82g ；大袋药物八面体蒙脱石900g，2袋合计总量1000g。所述黄藤素提取物系采用黄藤经提取、纯化、浓缩、干燥制得中药提取物，主要有效成分为黄藤素，含黄藤素(盐酸巴马汀C21H21NO4)不少于90.0%(w/w);所述穿心莲提取物系采用穿心莲经提取、纯化、浓缩、干燥制得中药提取物，主要有效成份为穿心莲内酯，本品含穿心莲内酯(C2tlH3tlO5)不低于95%(w/w) ο本发明的另一个目的是提供一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂的制备方法。
小袋药物的制备方法是按上述配比称取原料药、辅料淀粉，采用等量递加稀释法，先称取与原料药等量的淀粉放入混合机的混料罐中，然后将已称量好的各种原料药加到以上已放有淀粉的混料罐中，开机搅拌3 20分钟形成一混物；再加入与一混物等量的淀粉后再搅拌3 20分钟形成二混物；打开混合机的混料罐进料口，将处方量淀粉的剩余部分加到混料罐中，关闭进料口，与二混物搅拌10 30分钟，从混合机出料口放出已搅匀的均一性的物料，分装，封口，即得。大袋药物制备方法取八面体蒙脱石样品，用九号筛试筛，应全部通过九号筛，如不符合要求，则按生产工艺要求，粉碎至规定细度，并用振荡筛进行过筛。如符合要求，则可不粉碎；取蒙脱石样品检测水分，水分应不大于10% (w/w)，若水分超标，将处方量八面体蒙脱石平铺在不锈钢烘干盘中，一般I. 5 2cm厚，然后将烘干盘架推到热风循环烘干箱中，开机进行干燥，控制温度80 110°C需I 2h时间，取样检测水分，如水分不超过10%，则合格，可进行分装，封口。将大袋药物与上述小袋药物合装在一个大包装中，即得。用法与用量 治疗混饲，每Ikg体重猪每日服用2. 5 5mg (小袋，以痢菌净计)，连用3天；停用小袋药品24小时后，饲料中开始添加蒙脱石，按每Ikg体重猪每日服用O. 5 Ig(大袋，以八面蒙脱石计)，连用2 3天。重症者可将小袋药品加适量牛奶、白糖，调成膏剂直接喂养仔猪，隔24小时后将蒙脱石粉倒入温水中，混匀，直接灌服仔猪。各原料药来源及药理作用黄藤防已科植物黄藤Fibraurea recisa Pierre.的干燥藤莖。清热解毒，湾火通便。用于热毒内盛，便秘，泻痢，咽喉肿痛，目赤红肿，痈肿疮毒。黄藤素提取物具有广谱抑菌抗病毒作用、明显增加白细胞吞噬细菌的多重药理作用、良好的抗炎和增强机体免疫力作用。穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andrographispaniculata (Burm. f.) Nees)的全草或叶，清热解毒，凉血消肿，燥湿。主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。穿心莲提取物，具有祛热解毒，消炎止痛之功效，对细菌性与病毒性上呼吸道感染及痢疾有特殊疗效，被誉为天然抗生素药物。痢菌净(C11HltlO3N2),又名乙酰甲喹、甲喹甲酮，化学名称3-甲基-2-乙酰基喹恶啉-1，4-二氧化物，由中国农业科学院中兽医研究所于二十世纪八十年代研制，是国内首创的兽用抗菌新药。曾获国家科技进步二等奖，是目前唯一获得国家级奖的畜禽专用新兽药。痢菌净能抑制细菌的脱氧核糖核酸(DNA)的合成，对多数细菌有较强的抑制作用，对革兰氏阴性菌作用更强，对密螺旋体也有效。对猪痢疾、仔猪下痢、犊牛腹泻、犊牛伤寒及禽霍舌L、雏鸡白痢等均有独特疗效。由于该药抗菌谱广，抑菌活性强，且价格低廉，临床证明是目前治疗猪下痢(包括黄痢、白痢和不明病因引起的猪腹泻)的较好药物，但其治疗剂量接近中毒剂量，临床应用易中毒，而且由于该药在兽医临床上的长期滥用，临床上发现已经产生一定程度的耐药性。蒙脱石具有层纹状结构及非均匀性电荷分布，对消化道内的病毒、病菌及其产生的毒素有固定、抑制作用；对消化道粘膜有覆盖能力，并通过与粘液糖蛋白相互结合，从质和量两方面修复、提高粘膜屏障对攻击因子的防御功能。可维护消化道的正常生理功能，同时还具有降低结肠过分敏感性的作用。促进损伤的消化道粘膜上皮再生，修复损伤的细胞间桥，促使细胞紧密连接，平衡正常菌群，提高消化道的免疫功能，对消化道局部有止血作用。蒙脱石不进入血液循环，连同所固定的攻击因子随消化道自身蠕动排出体外，无残留，是一种绿色兽药饲料添加剂。本发明的有益效果是本发明根据中兽医基础理论，结合仔猪大肠杆菌病的发病机理，针对大肠杆菌血清型复杂易产生耐药性的特点，通过体外药敏试验结合临床应用进行组方筛选，将中药提取物与痢菌净联合应用，体外抗菌效果显示，具有良好的协同作用；本发明根据仔猪黄白痢的发病特点，在治疗方案上，采取在发病急性期，先用抗菌药物发挥它的强效快速杀菌效果，治疗中后期，配合应用八面蒙脱石，不仅进一步彻底清除致病因子，而且修复、提高消化道粘膜屏障对攻击因子的防御功能，促进损伤的消化道粘膜上皮再生，维护消化道的正常生理功能。对仔猪大肠杆菌病的临床防治效果表明，该发明有效率达100%以上，治愈率达90%以上，明显优于单用西药或中药。总之，本研究将中西药物联合应用，不但可以减少痢菌净用药量，并且可以降低细菌耐药性的产生，从而降低用药成本、减少药物残留。
具体实施例方式实施例I配比小袋黄藤素提取物(含盐酸巴马汀91%) 8g、穿心莲提取物(含穿心莲内酯95%) 8g、痢菌净2g、淀粉82g ;大袋八面体蒙脱石900g，两袋总量1000g。制备方法小袋采用等量递加稀释法，先称取与原料药等量的淀粉18g放入混合机的混料罐中，然后将已称量好的原料药(黄藤素提取物Sg、穿心莲提取物Sg、痢菌净2g)加到以上已放有淀粉的混料罐中，开机搅拌5分钟形成一混物；再加入与一混物等量的淀粉36g后再搅拌5分钟形成二混物；打开混合机的混料罐进料口，将处方量淀粉的剩余部分28g加到混料罐中，关闭进料口，与二混物搅拌15分钟，从混合机出料口放出已搅匀的均一性的物料，分装，封口，即得。大袋取八面体蒙脱石样品，用九号筛(200目)试筛，应全部通过九号筛，如不符合要求，则按生产工艺要求，粉碎至规定细度，并用振荡筛进行过筛。如符合要求，则可不粉碎；取蒙脱石样品检测水分，水分应不大于10% (w/w)，若水分超标，将处方量八面体蒙脱石平铺在不锈钢烘干盘中，一般I. 5 2cm厚，然后将烘干盘架推到热风循环烘干箱中，开机进行干燥，控制温度105°C约需Ih时间，取样检测水分，如水分不超过10%，则合格，可进行分装，封口，将大袋与上述小袋合装在一个大包装中，即得。以下结合实验数据说明其治疗效果。—、联合应用对大肠杆菌抗菌效果实验I材料及方法I. I 材料I. I. I试验药物痢菌净(含量98. 5%，批号060509)，成都华康动物药业有限公司；黄藤素提取物(含盐酸巴马汀91%)，批号20110911，山东潍坊永和药业公司；穿心莲提取物(含穿心莲内酯95%)，批号20110310，山东潍坊永和药业公司。
I. I. 2试验菌株猪大肠杆菌O81株，中国兽医药品监察所。质控标准参考菌为大肠杆菌ATCC25922，中国药品生物制品检定所。I. I. 3 培养基Muller — Hinton(MH)肉汤和 Muller — Hinton(MH)琼脂培养基，浙江杭州天和微生物试剂有限公司。I. 2 方法1.2. I药物储备液的配制无菌精确称取痢菌净、黄藤素提取物(以盐酸巴马汀计)、穿心莲提取物(以穿心莲内酯计)，用无菌蒸馏水溶解并稀释成2048μ g/mL的溶液，均于-20°C保存备用。I. 2. 2菌悬液的制备从过夜培养的琼脂培养基平板上挑取3个菌落，接种于MH肉汤中35°C增菌16h。以平板计数法进行细菌计数后，用MH肉汤稀释I. 5X 105CFU/mL。I. 2. 3最小抑菌浓度的测定(MIC)参照微量肉汤稀释法测定各药物单用的最小 抑菌浓度(MIC)。将痢菌净等3种抗菌药物以灭菌MH肉汤倍比稀释成23个浓度，分别为
2048、1024......O. 0005 μ g/mL,分别取 100 μ L 依次加入 96 孔板，再将 I. 5 X 105CFU/mL 菌液
100 μ L加入孔中，37°C过夜培养，观察结果，以无菌生长的最低浓度为该药单用最小抑菌浓度MIC，同时以标准菌ATCC25922做质量控制。I. 2. 4痢菌净与黄藤素提取物联合应用对猪大肠杆菌O81株的FIC指数测定将痢菌净和黄藤素提取物分别用灭菌MH肉汤倍比稀释，按棋盘法设计两两组合加入一次性96孔板至第11列、第7行(第12列和第8行为空白对照)。根据最小抑菌浓度的测定，使最高浓度为单药MIC的2倍。抗菌药物按浓度梯度各取50 μ L，再加入I. 5 X IO5CFU/mL菌液100 μ L，37°C过夜培养，观察结果，选择两药联合应用FIC指数最小时作为两种药物的最佳组合，并且以该FIC指数判定两种药物联合应用时的效果。痢菌净与穿心莲提取物FIC指数测定试验方法同上。I. 2. 5判断标准FIC指数=(MIC甲药联用/MIC甲药单用)+(MIC乙药联用/MIC乙药单用)。FIC指数< O. 5，为协同作用；FIC指数在O. 5 I范围，为相加作用；FIC指数在I 2范围，为无关作用；FIC指数> 2，为拮抗作用。2结果与分析2. 13种抗菌药物单用的最小抑菌浓度痢菌净等3种抗菌药物对大肠杆菌O81体外最小抑菌浓度如表I所示，可以看到痢菌净对大肠杆菌O81株MIC值为32 μ g/mL，与标准质控菌ATCC25922对照可知，猪致病性大肠埃希菌对其已经产生较高的抗药性。穿心莲提取物没有测得MIC，说明它的MIC >2048 μ g/mL。表I三种药物对大肠杆菌O81的MIC结果(μ g/mL)
权利要求
1.一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂，其特征是，分为大袋药物和小袋药物两部分；其中，小袋药物的组分及其重量份为黄藤素提取物5 12份、穿心莲提取物5 12份、痢菌净2 5份，淀粉加至100份；大袋药物的组分及其重量份为八面体蒙脱石900份，2袋合计总量1000份。
2.如权利要求I所述的一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂，其特征是，所述黄藤素提取物含黄藤素不少于90. 0%(w/w);所述穿心莲提取物含穿心莲内酯不低于95%(w/w)。
3.如权利要求I或2所述的一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂，其特征是，所述八面体蒙脱石过九号筛，水分彡10% (w/w)0
4.如权利要求I或2所述的一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂，其特征是，所述小袋药物的组分及其重量为黄藤素提取物8g、穿心莲提取物8g、痢菌净2g、淀粉82g ;大袋药物的组分及其重量为八面体蒙脱石900g，2袋合计总量1000g。
5.一种制备权利要求I或2所述的复方制剂的方法，其特征是， 小袋药物采用等量递加稀释法，先称取与原料药等量的淀粉放入混合机的混料罐中，然后将已称量好的原料药加到以上已放有淀粉的混料罐中，开机搅拌3 20分钟形成一混物；再加入与一混物等量的淀粉后再搅拌3 20分钟形成二混物；打开混合机的混料罐进料口，将剩余淀粉加到混料罐中，关闭进料口，与二混物搅拌10 30分钟，从混合机出料口放出已搅匀的均一性的物料，分装，封口 ；得到小袋药物；所述原料药为黄藤素提取物、穿心莲提取物和痢菌净； 大袋药物将过九号筛且水分不超过10% (w/w)的八面体蒙脱石分装，封口 ； 将上述大袋药物与小袋药物合装在一个大包装中，即得。
6.权利要求I或2所述的复方制剂的应用方法，其特征是，混饲，每Ikg体重猪每日服用2. 5 5mg小袋药物，连用3天；停用小袋药品24小时后，按每Ikg体重猪每日服用O. 5 Ig大袋药物，连用2 3天；所述小袋药物以痢菌净计，所述大袋药物以八面蒙脱石计。
全文摘要
本发明公开了一种防治仔猪大肠杆菌病的复方制剂及其制备方法。该复方制剂分为大袋药物和小袋药物两部分；小袋药物由黄藤素提取物、穿心莲提取物、痢菌净和淀粉采用等量递加稀释法制备而成，大袋药物为八面体蒙脱石。本发明根据仔猪黄白痢的发病特点，采取在发病急性期，先用小袋的抗菌药物发挥它的强效快速杀菌效果，治疗中后期，配合应用大袋的八面蒙脱石，不仅进一步彻底清除致病因子，而且修复、提高消化道粘膜屏障对攻击因子的防御功能，促进损伤的消化道粘膜上皮再生，维护消化道的正常生理功能。对仔猪大肠杆菌病的临床防治效果表明，该发明有效率达100%以上，治愈率达90%以上，明显优于单用西药或中药。
文档编号A61P31/04GK102872170SQ201210377610
公开日2013年1月16日 申请日期2012年10月8日 优先权日2012年10月8日
发明者张传津 申请人:张传津