专利名称：少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和应用，属于生物医学技术领域。
背景技术：
电压门控钠通道广泛分布于肌肉、神经元、腺体、心肌的可兴奋性组织中，是一种重要的跨膜结构蛋白，其活动与细胞的兴奋、收缩、分泌和突触传递等特异性功能密切相关。钠通道亚型一个引人注目的重要功能就是与伤害性感受传递、神经性疼痛的过程有关。 除河豚毒素不敏感型钠通道Navl. 8和I. 9是这一过程重要参与者外，Navl. 7也是其中关键因素之一。在小直径外周感觉神经元上，Navl. 7能设定Navl. 8和Navl. 9激活开放的阈值。在致炎疼痛模式动物中，发现Navl. 7表达水平被明显上调。与红斑狼疮相关的Navl. 7 突变体激活被易化，与阵发性极端疼痛障碍相关的Navl. 7突变体的失活时间被延长。特别是,当Navl. 7不能产生功能时,患者会失去感受痛觉的能力，但对温觉、压觉等其它功能表现正常。因此，针对钠通道的特异阻断剂具有十分重要的镇痛药物的应用前景。
蜈蚣是一种传统中药，性温，味辛，有毒。具有息风镇痉、攻毒散结、通络止痛之功能。蜈蚣毒腺中含有丰富的多肽成分，目前已经证实了这些多肽成分多为神经毒素。多肽能够选择性的抑制钠通道，钾通道或是钙离子通道，因此蜈蚣毒液中的成分具有广泛的应用前途，如开发成为镇痛药物、及治疗自身免疫疾病药物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a及其基因和应用。
本发明提供的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a，是从少棘蜈蚣粗毒中通过分子筛和反向高效液相色谱分离纯化得到，其氨基酸序列(SEQ ID NO: I)为ADNKCENSLRREIACG QCRDKVKTDGYFYECCTSDSTFKKCQDLLH,该多肽包括46个氨基酸残基分子量为5318. 97，等电点为6. 76，分子内含有三对二硫键排列方式为C1-C5、C2-C6和C3-C4。
少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX_Ssm6a的基因克隆包括
少棘蜈蚣毒腺总RNA提取，mRNA纯化，mRNA反转录及cDNA文库构建，设计引物，利用PCR方法筛选少棘蜈蚣钙离子通道激活剂多肽基因。扩增引物长度为17个核苷酸，其序列为5 ’ -GCGAAAAATGGAAATCT-3 ’，PCR另一扩增引物为CL0NTECH公司 SMART TM cDNA Library Construction Kit 中的 3’ PCR Primer 引物，其序列为 5 ' ATTCTACAGGCCGAGGCGGCCGACATG 3丨。所获阳性单克隆进行基因核苷酸序列测定。
基因测序结果表明编码少棘蜈蚣钙离子通道激活剂的基因(SEQ ID N0:2)由426 个核苷酸组成，自5’端至3’端序列基因序列包括了信号肽、前体肽和成熟肽，其中下划线部分为成熟肽。
权利要求
1.少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，其特征在于由SEQID NO: I所示的氨基酸序列组成。
2.编码少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a的基因，其特征在于由SEQID NO: I所示的核苷酸序列组成。
3.权利要求I所说的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a是一种钠通道抑制剂，在制备镇痛药物中应用。
全文摘要
本发明涉及一种少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a及其基因和应用，属于生物医学技术领域。少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列组成。编码少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a的基因，由SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列组成。少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a是一种钠通道抑制剂，在制备镇痛药物中的应用。本发明的少棘蜈蚣多肽毒素mu-SLPTX-Ssm6a，对大鼠背根神经节上的钠离子通道电流有非常显著的抑制作用，是一种钠通道抑制剂；该毒素能够选择性的作用钠离子通道亚型Nav1.7，小鼠的镇痛模型表明该多肽具有良好的镇痛效果，能够在制备镇痛药物中应用。
文档编号A61P29/00GK102977201SQ20121045353
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月13日 优先权日2012年11月13日
发明者赖仞, 容明强, 杨仕隆, 肖瑶, 康迪 申请人:中国科学院昆明动物研究所