专利名称：一种氯膦酸二钠脂质体注射剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种氯膦酸二钠的新制剂，具体涉及一种氯膦酸二钠脂质体注射剂及其制法，属于医药技术领域。
背景技术：
恶性肿瘤骨转移是晚期肿瘤常见并发症之一，患者一旦出现骨转移常常产生难以忍受的骨痛，严重影响患者的生存质量。双膦酸盐类是目前治疗骨转移公认的有效药物，第一、二代双膦酸盐类药物在近十余年来陆续上市后，成为有效缓解骨痛、防止骨骼病变进展、改善生活质量，防止骨相关事件发生等骨转移姑息治疗的重要角色。双膦酸盐是一组结构与焦膦酸盐类似的药物，后者系内源性化合物，能调节骨矿物质的沉积和吸收。与焦膦酸盐相同，双膦酸盐与羟基磷灰石晶体结合，但较焦膦酸盐更不易被体内的焦膦酸酶降解，与骨组织亲合力更强且稳定，影响破骨细胞与骨表面的结合过程，阻止骨组织的生长和分解。通过抑制骨重吸收，这些药物对癌症患者的骨代谢可产生有利的效果。因此，双膦酸盐类药物成为肿瘤患者治疗的重要选择，可以使恶性肿瘤相关高钙血症患者的血钙恢复正常，减少骨相关事件，缓解骨痛，改善骨质疏松。氯膦酸二钠是是芬兰罗拉斯公司开发的第二代双膦酸盐类药物，具有口服和静脉使用两种剂型，已在全球多数国家获得批准用于骨转移癌骨相关事件的治疗，有些还批准了预防性使用减少乳腺癌骨转移发生的适应症。氯膦酸二钠中含有双膦酸盐特征性P-C-P结构，这一结构非常稳定，耐高温，对许多化学物质稳定，以原形方式在体内吸收、贮存和排泄。已吸收的氯膦酸二钠约20%吸附于骨，多分布于骨形成活跃部位， 吸附于骨上的氯膦酸二钠半衰期较血中明显延长。肾脏对该药的清除率高，主要以超滤方式清除，口服或静脉使用具有相似的血浆清除半衰期(2.44h和2. 31h)，用药48h时有80%的药物已由尿液排出。氯膦酸二钠亲脂性低，不能跨细胞转运，口服生物利用度2%，吸收部位主要在小肠。P-C-P结构与骨质中的羟膦灰石呈高度亲和力，并能与钙、铁等金属离子结合，形成不可溶性复合物。目前上市销售的氯膦酸二钠剂型是采用普通的制剂制备技术制备而成的胶囊剂、注射液和粉针剂三种剂型，然而普通剂型存在长期放置稳定性较差，含量下降，生物利用度低等问题。脂质体(liposomes)最早是1965年被英国Banghan等作为研究生物膜的模型提出的。是指将药物包封于类脂质双分子形成的薄膜中间所制成的超微型球状定向药物载体制剂，属于靶向给药系统的一种新剂型。脂质体作为药物载体，具有诸多优点如脂质体既能包封脂溶性药物，又能包封水溶性药物；减轻变态反应和免疫反应；延缓释放，降低体内消除速度；能有效地保护被包裹药物，提高生物利用度；改变药物在体内的分布，并能靶向性释药，能降低药物的毒副作用；适合多途径给药等。
人们通过研究发现，脂质体作为药物的载体能够控制药物的释放，提高药物靶向性，减少药物毒性和副作用，提高药物疗效。为了提高氯膦酸二钠的生物利用度，本发明人对氯膦酸二钠的脂质体注射剂进行研究，取得了预料不到的效果，克服现有的氯膦酸二钠制剂存在的一系列问题，提高药物的溶解性和稳定性，延长药物在体内的保留时间，长久发挥药效，提高生物利用度，降低毒副作用，降低不良反应的发生率，改进治疗速度和治疗效果。制备脂质体的挑战在于选择适当的脂质体组成成分和制法。由于脂质体的性质如稳定性、包封率、起效时间、在体内的循环时间、生物利用度和毒副作用等与脂质体的组成直接地密切相关，而脂质体的组成与所要包封的药物性质直接地密切相关，因此，选择什么样的成分形成具有良好品质的氯膦酸二钠脂质体是首要解决的问题
发明内容
·为了形成品质优良的氯膦酸二钠脂质体注射剂，重要的是寻找能与氯膦酸二钠良好相容从而将其良好包封且不渗漏的成膜材料，以及寻找能使脂质体形成稳定注射剂的赋形剂成分。为了实现上述目的，本发明人进行的大量研究和试验，发现特定重量配比的氯膦酸二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚氧乙烯40氢化蓖麻油能制成品质优异的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其中，作为药物活性成分的氯膦酸二钠的包封率高，脂质体粒径小且分布均匀，与现有技术中的氯膦酸二钠注射剂相比，本发明制剂的药物活性成分在体循环中的保留时间显著延长，药物的生物相容性高，生物利用度明显提高，疗效明显提高。本发明中所述的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其单位剂量的氯膦酸二钠的规格为5ml: O. 3g (注射液体积无水氯膦酸二钠重量)和O. 3g(以无水氯膦酸二钠计)。本发明提供的氯膦酸二钠脂质体注射剂，主要由以下重量份数比的成分制成
氯鱗酸二钠I修
二硬脂醜磷ΛΛ甘油0.5-2份
胆固醇0.2-1份
聚氧乙烯4O氢化蓖麻油O. 1-0. 5份优选地，根据本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂主要由包括以下重量配比的成分制成
氯膦酸二钠I份
二硬脂酸磷《酰甘油0.5-1.5翁
胆固醇0.3-0.8份
聚氣乙烯4O氢化蓖麻油0.2-0.4份作为用于形成脂质体的磷脂，可以使用天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括磷脂酰乙醇胺、蛋黄卵磷脂、氢化蛋黄磷脂、蛋黄磷脂酰甘油、蛋黄磷脂酰丝氨酸、蛋黄磷脂酰肌醇、大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、大豆磷脂酰甘油、大豆磷脂酰丝氨酸、和大豆磷脂酰肌醇等。合成磷脂为二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酸磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二豆蘧酰磷脂酰胆碱、二月桂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油、二月桂酰磷脂酰甘油等。本发明中，根据氯膦酸二钠的特点，发现二硬脂酰磷脂酰甘油特别适于作为基础磷脂成膜材料。大豆磷脂酰丝氨作为一种天然磷脂，其含量非常高，容易获得，价格低廉。二硬脂酸磷脂酰胆碱的相变温度较高，易于形成稳定的脂质体膜。当使用其他磷脂时，难以形成品质优良的脂质体，脂质体的包封率、稳定性和渗漏
率等性质差。为了改善脂质体的稳定性，所用二硬脂酰磷脂酰甘油的纯度为98%以上，优选99%以上。在本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂中，相对于I重量份的氯膦酸二钠而言，二硬脂酰磷脂酰甘油的用量为1-2重量份。如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量低于I重量份，则无法形成稳定的脂质体；反之，如果二硬脂酰磷脂酰甘油的用量的用量高于2重量份，则作为药物活性成分的氯膦酸二钠的包封率下降，注射剂的品质以及疗效降低。在本发明的氯膦酸二钠脂 质体注射剂中，胆固醇和聚氧乙烯40氢化蓖麻油用于调节脂质体的膜稳定性。胆固醇是一种双亲性分子，与二硬脂酰磷脂酰甘油相结合，阻止其凝聚成晶体结构。胆固醇掺入二硬脂酰磷脂酰甘油双层，类似于“缓冲剂”一样起到调节膜结构“流动性”的作用。当低于相变温度时，胆固醇可以使膜减少有序排列，增加流动性；当高于相变温度时，胆固醇可以增加膜的有序排列，从而降低膜的流动性。胆固醇能使脂质体双分子层膜固化，从而减少自由基的生成，降低氧化水平，使脂质体稳定性显著增强。研究表明，脂质体的稳定性与生物利用度有密切的对应关系。稳定性越高，生物利用度越高。因此，本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂的稳定性高，是导致药物生物利用度高的因素之一。另一方面，本发明人研究发现，在本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂中，相对于I重量份的氯膦酸二钠而言，二硬脂酰磷脂酰甘油的用量为1-2重量份，胆固醇为O. 2-1重量份时，所形成的氯膦酸二钠脂质体注射剂的包封率高。在本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂中，使用聚氧乙烯40氢化蓖麻油来进一步改进脂质体膜的稳定性。当聚氧乙烯40氢化蓖麻油用于二硬脂酸磷脂酰胆碱双层膜中时，能提闻该双层I旲之间的化学能，从而提闻脂质体在水性液体中的化学稳定性，进而提闻氣膦酸二钠脂质体注射剂的稳定性。在本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂中，相对于I重量份的氯膦酸二钠而言，聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量为O. 1-0. 5重量份。如果聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量低于O.1重量份，则由于其用量过低导致对氯膦酸二钠脂质体注射剂的稳定性改进不够，反之，如果聚氧乙烯40氢化蓖麻油的用量高于O. 5重量份，则由于其用量过高而导致脂质体膜易于泄露。研究发现，当使用上述特定量的氯膦酸二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚氧乙烯40氢化蓖麻油时，可以得到品质优良的氯膦酸二钠脂质体，其包封率和稳定性都很高，毒性低，生物利用度高。
本发明的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其中单位剂量的氯膦酸二钠的规格为5ml: O. 3g (注射液体积无水氯膦酸二钠重量)和O. 3g(以无水氯膦酸二钠计)。另一方面，本发明还提供一种氯膦酸二钠脂质体注射剂的制备方法，具体包括如下制备步骤(1)将二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜；(2)将氯膦酸二钠溶于适量的缓冲盐溶液中，然后加入上述类脂膜中，振摇，搅拌20分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5_10分钟，转速10000r/min,用O. 45 μ m微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液；(3)用注射用水定容，O. 45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，熔封，灭菌；或用注射用水定容，O. 45 μ m微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，轧盖。即得氯膦酸二钠脂质体注射剂。上述所述的制备方法，其中所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、苯甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选为氯仿。上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。上述所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液为pH为6. 4的枸橼酸盐缓冲溶液。制备脂质体的挑战在于如何使脂质体膜形成适当大小、适当结构材料的包封率高的囊泡。而且这些材料在形成脂质体不漏出。本发明人通过选择适当的材料成分、采用合适的制备工艺，获得了品质优良的氯膦酸二钠脂质体注射剂，脂质体粒径小，粒径分布均匀，包封率高，稳定性高。研究发现，脂质体的大小是影响脂质体在体内分布和停留时间的主要因素，脂质体的粒径越小，体内停留时间越长。通过本发明方法制备的氯膦酸二钠脂质体颗粒小，粒径大小分布均匀，这是其在体内代谢率低、生物利用度高的因素之一。
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案。图1是氯膦酸二钠脂质体注射剂的血药浓度-时间曲线。表示实施例1-3中制备的氯膦酸二钠脂质体注射剂、对比例1-3中制备的氯膦酸二钠脂质体注射剂和市售氯膦酸二钠注射剂的血药浓度与时间的关系曲线。其中_11市例_ _实施例1 实施例2___实施例3对比例I 对比例2 对比例具体实施例方式以下实施例是对本发明的进一步说明，但绝不是对本发明范围的限制。下面参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。实施例1氯膦酸二钠脂质体冻干粉针剂
处方
氯膦酸二德300g
二硬脂跣磷脂酰甘油600g
胆固醇150g
聚氧乙烯4 O氢化蓖麻油15 Og制备工艺(I)将600g 二硬脂酰磷脂酰甘油、150g胆固醇和150g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于2000ml三氯甲烷中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去三氯甲烷，得到类脂膜；(2)将300g氯膦酸二钠溶于IOOOmlpH为6. 4的枸橼酸盐缓冲溶液中，然后加入上述类脂膜中，振摇，搅拌20分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速勻质乳化5-10分钟,转速10000r/min,用O. 45 μ m微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液；(3)用注射用水定容至2000ml, O. 45 μ m微孔滤膜过滤,分装，每瓶2ml,冷冻干燥，轧盖，即得氯膦酸二钠脂质体冻干粉针剂。实施例2氯膦酸二钠脂质体注射液处方
氯膦酸二纳300g
二硬I旨醜磷腾酿甘油〗50g
胆固醇3 OOg
聚氧乙烯40氮化霞麻油30g制备工艺(I)将150g 二硬脂酰磷脂酰甘油、300g胆固醇和30g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于2000ml三氯甲烷中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去三氯甲烷，得到类脂膜；(2)将300g氯膦酸二钠溶于IOOOmlpH为6. 4的枸橼酸盐缓冲溶液中，然后加入上述类脂膜中，振摇，搅拌20分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速勻质乳化5-10分钟,转速10000r/min,用0. 45 μ m微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液；(3)用注射用水定容至5000ml, 0. 45 μ m微孔滤膜过滤,灌装,每支5ml,熔封,灭菌，即得氯膦酸二钠脂质体注射液。实施例3氯膦酸二钠脂质体注射液处方
氯膦酸二纳300g
二硬脂酖磷脂醜甘油300g
胆固醇60g
聚氧乙烯4 O氢化蓖麻油6 Og制备工艺(I)将300g 二硬脂酰磷脂酰甘油、60g胆固醇和60g聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于2000ml三氯甲烷中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去三氯甲烷，得到类脂膜；(2)将300g氯膦酸二钠溶于IOOOmlpH为6. 4的枸橼酸盐缓冲溶液中，然后加入上述类脂膜中，振摇，搅拌20分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速勻质乳化5-10分钟,转速10000r/min,用O. 45 μ m微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液；(3)用注射用水定容至5000ml, O. 45 μ m微孔滤膜过滤,灌装,每支5ml,熔封,灭菌，即得氯膦酸二钠脂质体注射液。对比例1-3氯膦酸二钠脂质体注射剂的制备分别采用与实施例1-3相同的生产工艺，将如下表1-3中所示的对比例1-3中的成分分别制成氯膦酸二钠脂质体注射剂表I对比例1-3中所用成分
权利要求
1.一种氯膦酸二钠脂质体注射剂，其特征在于主要由氯膦酸二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚氧乙烯40氢化蓖麻油制成。
2.根据权利要求1所述的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其特征在于单位剂量的氯膦酸二钠的规格为5ml:0. 3g(注射液体积无水氯膦酸二钠重量)和O. 3g(以无水氯膦酸二钠计)。
3.根据权利要求1或2任一所述的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分制成氯膦酸二钠I份二硬脂酰磷脂Λ甘油0.5-2翁 胆固醇0.2-1僚聚氣乙缔40氢化蓖麻油O. 1-0, 5份，
4.根据权利要求1-3任一所述的氯膦酸二钠脂质体注射剂，其特征在于由下列重量份数比的成分制成氯膦酸二销I份二硬脂酰磷脂酰甘油0.5-1.5份胆固醇0.3-0.8份聚氧乙烯40氢化蓖麻油0.2-0.4份￡
5.一种制备氯膦酸二钠脂质体注射剂的方法，其特征在于包括如下步骤 (1)将二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇和聚氧乙烯40氢化蓖麻油溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，得到类脂膜； (2)将氯膦酸二钠溶于适量的缓冲盐溶液中，然后加入上述类脂膜中，振摇，搅拌20分钟，转速为500-1000r/min，使磷脂膜完全水化，用组织捣碎机高速匀质乳化5_10分钟，转速10000r/min,用O. 45 μ m微孔滤膜过滤,制得脂质体混悬液； (3)用注射用水定容,O.45 μ m微孔滤膜过滤，灌装，熔封，灭菌；或用注射用水定容，O.45 μ m微孔滤膜过滤，分装，冷冻干燥，轧盖，即得氯膦酸二钠脂质体注射剂。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙腈、苯甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、正己烷和二氯甲烷中的一种或几种，优选为氯仿。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液选自磷酸盐缓冲溶液、枸橼酸盐缓冲溶液、硼酸盐缓冲溶液中的一种。
8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于所述的缓冲盐溶液为pH为6.4的枸橼酸盐缓冲溶液。
全文摘要
本发明公开了一种氯膦酸二钠脂质体注射剂及其制法。通过选用特定重量配比的氯膦酸二钠、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、聚氧乙烯40氢化蓖麻油制成品质优异的氯膦酸二钠脂质体注射剂。与现有制剂相比，本发明的制剂大大提高了制剂的稳定性和生物利用度，释药平稳，提高了制剂产品的质量，减少了毒副作用，疗效更显著。
文档编号A61K33/42GK103040863SQ20121054784
公开日2013年4月17日 申请日期2012年12月17日 优先权日2012年12月17日
发明者王平 申请人:海南百思特医药科技有限公司