专利名称：一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方的制作方法
技术领域：
本发明涉及水产养殖技术领域，具体地说，是一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方。
背景技术：
鲟属于硬骨鱼纲、福鳍亚纲、硬磷总目、鲟形目(Acipenseriformes)、鲟科(Acipenseridae)。我国的鲟类有2科3属8种，长江水系的有中华鲟(Acipenser
、白鲟(Psephurus gladius)和达氏鲟 Olciponsor dabryanus);黑龙江水系的有施氏鲟0\cip6ns6r schrenckii)和达氏 (Huso dauricus);新疆地区有裸腹鲟(Acipenser nudi ventris) > ^ (Acipenser ruthenus)和西伯利亚鲟(Acipenserbaerii)。鲟鱼是地球上最古老的鱼种之一，素有“活化石”之称，是我国的名特优珍品，肉味鲜美、骨软、营养价值高，鲟鱼肉和卵的蛋白含量高达18%和29%。鲟鱼全身都是宝，利用率极高。另外名贵的鲟鱼籽酱特别值得一提的是具有“黑色黄金”之称的鲟鱼子酱，是由鲟鱼卵加工而成，更是驰名中外的高档食品，在国际市场十分走俏。我国第一个鲟鱼养殖场1992年在大连瓦房店成立，现今我国已开展人工养殖的品种有施氏鲟、达氏鳇、鳇鲟以及从国外引进的俄罗斯鲟、西伯利亚鲟等。另外鲟鱼具有食性广、生长速度快、成本低、价值高、个体大、易捕捞，以及抗病力强、容易饲养等特点，水产业者普遍看好鲟鱼的养殖前景，投入大量资金进行人工养殖。但是近年来随着养殖量的迅速增大，养殖集约化程度不断提高，造成鲟养殖环境不断恶化，使得鲟体质普遍下降，发病率大增。鲟鱼多发细菌性疾病，爆发性强，死亡率高，主要病原菌包括链球菌等革兰氏阳性菌和气单胞菌属几种，其中由嗜水气单胞菌弓I起鲟疾病表型种类多，发病率及死亡率高，流行于5-10月份，水温20°C及以上，主要症状特点为败血。嗜水气单胞菌是在自然界中广泛存在的，是一种典型的人-畜-鱼共患病病原菌。嗜水气单胞菌(Aoromoims. hydrophica),属弧菌科(Yirbhonaceae),气单胞菌属(Aeromonas)，为革兰阴性短杆菌，极端单鞭毛，无芽孢和荚膜，散在排列。对环境要求不高，普遍存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人类粪便中，专性需氧，生长温度5 40°C，最适温度28°C，pH6 11，最适为pH7，分为致病性和非致病性菌株。致病性菌株可感染鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类等动物,主要症状为急性出血性败血症,慢性感染症状一般为皮肤溃烂。嗜水气单胞菌具有较高的溶血素及蛋白酶活性，毒力很强。随着养殖规模的扩大，养殖水域环境日益恶化，及鲟鱼产品贸易来往，为嗜水气单胞菌的传播提供了途径和场所，使得其危害不断增大，流行区域大增。因此在鲟鱼养殖过程中要重视嗜水气单胞菌的感染，对其感染产生的新症状加以分析，及时找到防治方法减少养殖生产损失。对于疾病防治，由于中草药对环境影响小，无残留，而且具有资源保有量大、价格低廉、不易产生耐药性、毒副作用小、安全性高等优点，无疑是鲟细菌性疾病防治药物的首选措施之一。化学药物则容易产生残留，对环境危害大，不利于鲟养殖健康的发展。关于一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方。本发明的再一的目的是，提供一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方的应用。为实现上述目的，本·发明采取的技术方案是一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆75-85份,乌梅55-65份，杞子35-45份,石槽皮15-25份。所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆80份，乌梅60份，杞子40份，石榴皮20份。为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是所述的中草药复方在制备防治鲟感染嗜水气单胞菌疾病药物中的应用。本发明优点在于
1、本发明的中药复方能有效预防嗜水气单胞菌感染鲟发病，使鲟发病几率下降40%以上，起到很好的养殖生产实践效果，保证了鲟养殖安全高产；
2、中草药对环境影响小，无残留，而且具有资源保有量大、价格低廉、不易产生耐药性、毒副作用小、安全性高的特点，有利于鲟养殖健康的发展。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式
作详细说明。一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。优选的，地榆75-85份，乌梅55-65份，杞子35-45份，石榴皮15-25份。实施例1中草药复方
地榆70份，乌梅70份，杞子30份，石榴皮30份。实施例2中草药复方
地榆71份，乌梅69份，杞子31份，石榴皮29份。实施例3中草药复方
地榆72份，乌梅68份，杞子32份，石榴皮28份。实施例4中草药复方
地榆73份，乌梅67份，杞子33份，石榴皮27份。实施例5中草药复方
地榆74份，乌梅66份，杞子34份，石榴皮26份。实施例6中草药复方
地榆75份，乌梅65份，杞子35份，石榴皮25份。实施例7中草药复方地榆76份，乌梅64份，杞子36份，石榴皮24份。实施例8中草药复方
地榆77份，乌梅63份，杞子37份，石榴皮23份。实施例9中草药复方
地榆78份，乌梅62份，杞子38份，石榴皮22份。实施例10中草药复方
地榆79份，乌梅61份，杞子39份，石榴皮21份。实施例11中草药复方
地榆80份，乌梅60份，杞子40份，石榴皮20份。实施例12中草药复方
地榆81份，乌梅59份，杞子41份，石榴皮19份。实施例13中草药复方
地榆82份，乌梅58份，杞子42份，石榴皮18份。实施例14中草药复方` 地榆83份，乌梅57份，杞子43份，石榴皮17份。实施例15中草药复方
地榆84份,乌梅56份,杞子44份,石槽皮16份。实施例16中草药复方
地榆85份，乌梅55份，杞子45份，石榴皮15份。实施例17中草药复方
地榆86份,乌梅54份,杞子46份,石槽皮14份。实施例18中草药复方
地榆87份，乌梅53份，杞子47份，石榴皮13份。实施例19中草药复方
地榆88份，乌梅52份，杞子48份，石榴皮12份。实施例20中草药复方
地榆89份，乌梅51份，杞子49份，石榴皮11份。实施例21中草药复方
地榆90份，乌梅50份，杞子50份，石榴皮10份。实施例22中草药复方药液的制备
按照地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份的配比称取原料药，四种原料药均粉碎成粉末状，全部通过120目筛。取四种药物分别各加1:10-12份水浸泡30 min，然后加热至沸腾，微沸煎煮50-60min，共煎煮3次，每次加水量相同。合并3次药液过滤，将滤液用旋转蒸发器浓缩，使药液浓度为1000 mg/mL左右，滤膜过滤除菌后，置于4°C冰箱保存备用。实施例23中草药复方的制备和使用方法
按照地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份的配比称取原料药，按照上述实施例22所述方法提取中草药药液后，混合加入粉碎的饲料中，用制粒机制成含此中药复方的饲料用于投喂，5-7天为一个疗程，治疗一般需连用两个疗程，特别是发病早期及高温季节即将来临或者结束之前使用本复方预防效果更为明显。此中药复方能有效预防嗜水气单胞菌感染鲟发病，使鲟发病几率下降40%以上，起到很好的养殖生产实践效果，保证了鲟养殖安全高产。实施例24抑菌试验1.材料
中药乌梅，地榆，杞子，石榴皮购自同仁堂大药房。营养琼脂及营养肉汤培养基购自杭州微生物试剂有限公司，嗜水气单胞菌弧菌科(KirMoflaceaeO ,气单胞菌属,嗜水气单胞菌ATCC7966 ,购自于美国典型培养物保藏中心，4°C冰箱购于青岛海尔，摇床购自日本三洋公司，实验时，营养琼脂及营养肉汤都是在 lX105Pa，121°C 灭菌 20min。2.实验方法
(I)菌液制备
从固体斜面上挑取菌苔划线接种营养琼脂平板，置于28°C恒温培养箱，培养24h ;挑取单个菌落营养肉汤液体培养基中，28°C摇床(200 r/min)培养18h后，用无菌生理盐水将菌液浓度调整至IO7 CFU / mL，即可作为药敏实验接种的菌悬液。(2)药液制备
将购买来的供试中草药置于50°C恒温干燥箱中烘至恒重，然后各取25g，分别加水250mL浸泡30min后煎煮，沸后文火煮20min，滤出煎液，共煎3次，合并滤液，浓缩至生药含量1000mg/mL，121°C，lX105Pa湿热高温灭菌，20 min后，置4°C冰箱中保存待用。( 3 )琼脂扩散抑菌试验
采用90mm平板打孔法，具体为在每个涂有100 u L病原菌平板上使用直径为6mm打孔器打4个孔，其中3孔加入50uL药液，另一孔灭菌生理盐水作为对照，每种药液均设置3个重复。将加好药液的平板正面朝上放置置于28°C培养箱中培养24 h后，测量抑菌圈直径，并计算平均值得出各药液平均抑菌圈直径结果以X土SD表示。(4)最小抑菌浓度(MIC)及最小杀菌浓度(MBC)的测定
采用二倍稀释法测定中草药提取液对三种病原菌的MIC和MBC。即将中草药提取液分别加入含有2mL无菌营养肉汤的试管中，至终质量浓度分别为1000，500，250，125，62. 5，31. 25，15. 625,7. 81，3. 91，1. 95，0. 97，0. 49，0. 24，0. 12，0 mg/mL，并设 I 个阴性对照组，即空白无菌营养肉汤组，然后分别接种鲁氏耶尔森氏菌、弗氏柠檬酸杆菌、嗜水气单胞菌至终浓度5. OXlO5 CFU / mL，于28°C、200 r/min摇床振荡恒温培养24h后观察结果。把无病原菌生长、稀释度最大的中草药提取液质量浓度作为各实验菌株的最小抑菌浓度(MIC)。从所有无细菌生长的各管中分别取0. lmL，涂布于相应的无菌琼脂平板上，置于28°C的恒温培养箱培养24h，观察结果。平板上无细菌生长的最低药物质量浓度为最小杀菌质量浓度(MBC)。中药复方按照实施例11所述的比例，抑菌效果最好，抑菌圈达22±0. 23mm，MIC为1.95mg/ml, MBC 为 3. 91mg/ml。实施例25应用实例
浙江衢州市鲟鱼养殖基地养殖鲟鱼出现死亡，发病后死亡率高达80%，发病水温在22°C及以上，发病个体在5-30kg。发病初期病鱼精神不振，或静止不动，或狂游不止，有时也贴紧池壁游动，严重者身体失去平衡形成腹部露出水面的现象，几乎不进食。出现症状多数一周内死亡，病鱼受到刺激后可能数小时内死亡。发病鲟鱼主要集中在西伯利亚鲟，症状表现为两种类型，一种是鲟鱼肛门一侧出现细线红肿，有开始溃烂症状，解剖后看到肝脏充血肿大而且出血，脾脏严重充血发黑，肾脏充血，腹腔有大量积血导致倒提鲟鱼从生殖孔流出体外，体壁严重充血，也有体壁未充血的，性腺有大量出血点，产生溃烂，更严重的是生殖孔与腹腔相连的膈膜烂穿，肛门一侧溃烂开口，性腺掉出，直至鲟鱼死亡。另一种是肛门处一侧溃烂开口，生殖孔与腹腔相连的膈膜烂穿，性腺直接掉出发生溃烂，未发现出血现象，解剖也未发现实质器官病变。有些鲟鱼也因急性感染，性腺并未掉出就已经死亡。此病流行于水温在22°C及以上，水温低于22°C亦可能发病，但较少。发病鲟鱼集中在西伯利亚鲟，其余鲟鱼发病较少，雌雄鲟鱼都可能发病。发病鲟鱼个体目前发现最小3龄，据调查其他养殖基地也有类似疾病，经病原分离鉴定及人工感染，确定病原菌为嗜水气单胞菌。针对此种情况，通过在初夏使用本发明的中草药复方，经过连续3个疗程的，症状明显减轻，死亡基本停止，肛门逐渐愈合，吃食恢复正常。其后每隔两个星期左右，投喂一个疗程，使得鲟此疾病发病率降低40%以上。以上所述仅是本发明的优选实施方式 ，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
权利要求
1.一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方，其特征在于，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。
2.根据权利要求1所述的中草药复方，其特征在于，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆75-85份，乌梅55-65份，杞子35-45份，石榴皮15-25份。
3.根据权利要求1所述的中草药复方，其特征在于，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆80份，乌梅60份，杞子40份，石榴皮20份。
4.根据权利要求1-3任一所述的中草药复方在制备防治鲟感染嗜水气单胞菌疾病药物中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种用于防治鲟因感染嗜水气单胞菌发病的中草药复方及其应用，所述的中草药复方主要由以下重量份的原料药制成地榆70-90份，乌梅50-70份，杞子30-50份，石榴皮10-30份。本发明优点在于本发明的中药复方能有效预防嗜水气单胞菌感染鲟发病，使鲟发病几率下降40%以上，起到很好的养殖生产实践效果，保证了鲟养殖安全高产；中草药对环境影响小，无残留，而且具有资源保有量大、价格低廉、不易产生耐药性、毒副作用小、安全性高的特点，有利于鲟养殖健康的发展。
文档编号A61K36/815GK103027997SQ201210563788
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月24日 优先权日2012年12月24日
发明者杨先乐, 杨移斌, 曹海鹏, 邱军强, 胡鲲, 李怡, 夏永涛, 高晓华 申请人:上海海洋大学