用于治疗细菌感染的成分的制作方法
【专利摘要】用于治疗细菌感染的成分，包含牛至属植物的浓缩物或提取物与至少另一种植物的一种浓缩物或提取物。
【专利说明】用于治疗细菌感染的成分
[0001] 本发明涉及一种用于治疗细菌感染的包含牛至属植物的浓缩物或提取物的成分。
[0002]许多疾病由细菌感染引起。与细菌感染作斗争代表了现代医学的至高点之一。在20世纪40年代，抗生素的发展给医生提供了对抗细菌感染的有力工具，拯救了数百万人的生命。然而，由于抗生素的广泛应用及偶尔的不恰当使用，已经开始出现耐抗生素的细菌株。这些新的、更强大的细菌对公共利益和健康造成了重大的威胁。
[0003]细菌感染可以由多种细菌引起，导致轻度疾病至需要直接干预的威胁生命的疾病(例如细菌性脑膜炎)。常见的细菌感染包括，例如肺炎、耳部感染、腹泻、尿路感染以及皮肤病。
[0004]细菌感染的治疗在大多数情况下通过使用以杀灭入侵细菌(杀菌剂作用方式)或抑制细菌生长(抑菌剂作用方式)为目的而不伤害宿主的抗生素来实现。抗生素的效果取决于作用机理、药物分布、感染部位、宿主的免疫状态以及细菌耐药性因素。抗生素通过不同的机理发挥作用；一些抗生素抑制细菌细胞壁的形成。其它抗生素阻止细菌蛋白质合成。还有一些其它的抗生素抑制新陈代谢或干扰DNA合成和/或细胞膜渗透性。
[0005]自从20世纪40年代发现抗生素之后，许多抗生素已经失去对抗常见细菌感染的效果，原因是细菌产生耐药性，导致住院治疗、健康成本和死亡率的增加。
[0006]特别是,金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus),—种兼性厌氧的革兰氏阳性球菌，由于它对所有的包括例如万古霉素在内的常见抗生素的耐药性，被认为是我们日常最危险的微生物之一。金黄色葡萄球菌可以引起一系列的疾病，从轻微的皮肤感染例如丘疫、脓疱病、市子、蜂窝织炎性毛囊炎、痈、皮肤烫伤综合征(skaled skin syndrome)以及脓肿，至威胁生命的疾病例如肺炎、脑膜炎、骨髓炎、心内膜炎、中毒性休克综合征、菌血症以及脓毒病。其影响范围从皮肤、软组织、呼吸道、骨骼、关节、血管内到伤口感染。特别是，耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)令人烦恼，因为这些微生物不仅对β -内酰胺产生了抗性，还对许多其它抗微生物剂产生了抗性。MRSA常常出现在医院和疗养院，这些场所中具有开放性创伤的、使用侵入式医疗设备的和免疫系统虚弱的病人比一般大众面临更大的感染风险。
[0007]另一种用于治疗细菌感染的方法在于抑菌物质的使用。例如，多个世纪以来，因其抗菌活性而为人熟知的牛至属植物。
[0008]在远东和中东文化中，牛至属植物精油已被使用了很长一段时间，用于治疗呼吸道感染、慢性炎症、尿路感染、痢疾以及黄疸病。大量体外研究已经表明牛至属植物油，或其最有效的组分香芹酚和麝香草酚，能抑制多种细菌的生长。
[0009]例如，Hammer和同事研究了 52种植物油对抗9种细菌的活性。牛至属植物油是能抑制引起人类伤口感染的难以杀灭的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)生长的仅有的3种植物油之一。总之，除柠檬油外，牛至属植物油在抑制细菌生长上比所有的测试过的油更好(Hammer, K.et al.J.Appl.Microbial 1999, 86, 985-990) ?
[0010]Baretta和同事测试了牛至属植物油以及鼠尾草油、迷迭香油、月桂油和香菜油对抗25种细菌的活性。他们发现牛至属植物油显示出对几乎所有的测试菌最广泛的和最强的抗性；实际上，在调查研究中，它有力地抑制了 25种细菌菌株中的19种(Baretta，Μ.T.etal.J.Essent.0il Res.1998, 10, 618-627)。
[0011]通过各种研究已经证实牛至属植物油在抑制金黄色葡萄球菌(S.aureus)的生长中提供了有效的活性。
[0012]例如，Celik和同事研究了 Origanum hypericifolium精油对包括MRSA株系在内的许多金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)株系的抗微生物活性。结果表明，0.hypericifolium因其抗菌和抗氧化剂活性,有可能被用于食物和药物中(Celik, A.；NurHerken, E.；Arslan, 1.；Zafer Ozel, M.；Mercan, N.Nat.Prod.Res.2010, 24, 1568-1577) ?
[0013]另一项研究调查了来源于牛至的精油与浸液以及煎汤相比，对属于3个属的23个不同种的111种革兰氏阳性菌分离菌的抗菌活性。尽管精油和浸液尤其表现出对腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)的抗菌活性,但发现分离菌对牛至属植物的煎汤具有抗性(Saeed, S.；Tariq, P ；Pak.J.Pharm.Sc1.2009，22，421-424)。
[0014]牛至属植物油的抗菌效果也在小鼠的体内研究中得到了证实。在金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的两个株系(ATCC#14154 和 #14775)的培养物中，0.25mg/mL 的牛至属植物油表现出杀菌性。在体外，甘油一月桂酸酯的效果与牛至属植物油相似。两者分别以0.125mg/mL的浓度组合具有杀菌性。在两个单独的体内试验中，14只注射金黄色葡萄球菌(ATCC#14775)的小鼠未经治疗在一周时间内全部死亡。在治疗的小鼠中，超过三分之一的小鼠存活了 30天，在这30天中每日给它们口服牛至属植物油(6/14)。当接受每日一次的牛至属植物油和甘油一月桂酸酯组合物治疗时，超过60%的小鼠存活下来(5/8)。这项研究表明，牛至属植物油与甘油一月桂酸酯的组合可以证明是预防和治疗金黄色葡萄球菌感染的有效的抗微生物剂。
[0015]大多数调查牛至属植物的抗菌性质的研究使用蒸馏获得的精油。研究牛至属植物提取物的抗氧化剂和抗炎活性的Yoshino和同事已描述了通过将牛至属植物叶片溶解在乙醇中获得的提取物。然而，这项研究不涉及牛至属植物的抗菌性质(Yoshino K.；Higashi, N.，Koga, K.J.0f Health Sc1.2006，52，169-173)。
[0016]进一步的研究致力于通过无溶剂微波萃取法(SFME)、超临界流体萃取法或水蒸馏法获得的牛至属植物精油。Karakaya等人进行的研究表明，通过无溶剂微波萃取法在不同的微波功率下获得的精油以及水蒸馏法获得的精油抑制了单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenases)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)及大肠杆菌 0157:H7 (Escherichia coli 0157:H7)的存活，然而金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的存活没有受到影响。
[0017]上述研究表明牛至属植物的抗微生物活性取决于活性化合物从植物中分离的过程。根据大多数完成的研究，通过蒸馏法获得的牛至属植物精油似乎在抑制细菌生长方面具有最大潜能。
[0018]增强药用植物活性谱的功效的不同策略在于不同药草的组合，以便协同增强药效。例如，W0-A-2010091415描述了一种含有低浓度的精油和植物提取物以及果酸和烷二醇，以及任意溶剂的抗菌成分 。然而，这个发明未提到关于使用牛至属植物提取物作为可选组分，并且这个发明所述的成分可以用于个人护理产品例如乳霜或肥皂产品，而非用作药物。[0019]US-A-20100092581涉及一种含有属于松杉寄生属的植物(例如美洲云杉)的提取物的成分。所述成分显示出对抗MRSA的活性并且可能用于药物组成或杀菌剂。虽然如此，在这份文件中未将牛至属植物列为可能的组分。
[0020]在Arzte Zeitung(16.12.2002)中描述了由山葵和旱金莲提取物组成的成分。所
述成分对抗MRSA的抑菌活性来自组分芥子油；然而，所述组分根本不涉及牛至属植物。
[0021]W0-A-2010049542描述了至少一种植物材料的至少一种提取物的水解产物显示出抗菌活性，特别是对MRSA的抗菌活性。在这份文件中虽然列出了多种可能的植物材料，但未列出牛至属植物的提取物。
[0022]因此，本发明的目的在于提供一种用于治疗细菌感染的新的有效的抗菌成分。所述目的通过用于治疗细菌感染的包含牛至属植物的浓缩物或提取物以及至少另一种植物的一种浓缩物或提取物的成分来实现。
[0023]本发明所述的牛至属植物的浓缩物或提取物可以来自物种Origanum acutidens、Origanum amanum、Origanum calcaratum、野马郁兰(Origanum compactum)、苦牛至(Origanum dicta mnus)、光叶牛至(Origanum laevigatum)、Origanum leptocladum、Origanum libanoticum、马郁兰(Origanum majorana)、小叶牛至(Origanummicrophyllum)、圆叶牛至(Origanum rotundifolium)、Origanum scabrum、西亚马祖林(Origanum sipyleum)、叙利亚牛至(Origanum syriacum)、牛至(Origanum vulgare)。本发明优选的牛至属植物物种为牛至(Origanum vulgare)。
[0024]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，根据本发明，所述成分为牛至属植物的提取物以及至少另一种植物的一种提取物。
[0025]在本发明进一步优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分的浓缩物或提取物来自植物的地上部分。
[0026]术语“植物”指的是植物地上的所有部分，包括叶、枝、花、果实和种子。
[0027]在优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，上述成分的植物选自伞形科(Apiaceae)、觅科(Armaranthaceae)、蔷薇科(Rosaceae)、茶薦子科(Grossulariaceae)、菊科(Astereraceae)、半日花科(Cistaceae)、唇形科(Lamiaceae)、?科(Fabaceae)和胡颓子科(Elaeagnaceae)的植物。
[0028]在本发明另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分的植物选自羊角芳:属(Aegopodium)、海蓬子属(Salicornia)、藜属(Chenopodium)、媪梓属(Cydonia)、花楸属(Sorbus)、酷栗属(Ribes)、菊苣属(Cichorium)、岩茨属(Cistus)、水杨梅属(Geum)、沙棘属(Hippophae)、西达瑞梯属(Sideritis)、鹰咀豆属(Cicer)和李属(Prunus)。
[0029]在本发明更优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，上述成分的植物选自羊角芳:(Aegopodium podagraria)、亨利藜(Chenopodium bonus-henricus)、花楸(Sorbusterminalis)、黑果茶薦(Ribes nigrum)、红茶薦子(Ribes rubrum)、百瑞木(Cistus incanus)、媪梓(Cydonia oblonga)、菊苣(Cichorium intybus)、盐角草(Salicornia europaea)、菩提香(Geum urbanum)、沙棘(Hippopha0 rhamnoides)、铁尖草(Sideritis scardica)、鹰嘴豆(Cicer arietinum)、黑刺李(Prunus spinosa)。
[0030]为准备本发明所述的浓缩物或提取物，植物地上部分的所有组成部分都可以使用。优选地，使用叶、枝和花。优选地，粗切植物材料。
[0031]根据本发明，术语“浓缩物”用于代表通过从新鲜植物中去除水分，从药草中获得的所有产物。
[0032]根据本发明，术语“提取物”用于代表通过使用溶剂的提取，例如浸溃或渗透，从药草中获得的所有产物。
[0033]关于提取，植物的地上部分以天然状态或干燥状态进行浸溃或渗透。在优选的实施例中，使用干燥的植物材料。
[0034]在提取之前，植物各部分可以用合适的方式破碎成小片，例如通过搓揉或切割它们。此外 ，植物各部分在收割后，即在天然状态下，可以直接进行压榨，以便在提取之前通过压榨产生汁液。
[0035]通常，包含叶、枝和花的植物各部分的提取使用合适的溶剂进行。合适的溶剂是水、醇类，例如甲醇、乙醇或异丙醇，或氯化溶剂例如二氯甲烷，以及丙酮、乙酰丙酮、乙酸乙酯、氨水或冰醋酸，还有超临界二氧化碳。也可以使用上述溶剂的混合物。
[0036]此外，脂肪例如猪油、蜡例如蜂腊，或油例如橄榄油和杏仁油，可以用于提取。优选地，使用杏仁油。
[0037]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分的提取物是水提取物或醇提取物。在更优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，使用了水或水与甲醇或乙醇的混合物。
[0038]提取通常在25_100°C的温度下进行，取决于所用溶剂的沸点。优选在95_100°C的温度下进行提取。
[0039]在另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，提取通常进行I分钟至8小时，更优选地进行1-3小时，特别是提取进行I小时。
[0040]为了获得最高可能的产量，植物材料可以提取多次。优选地，重复提取2-6次，更优选地重复3次。既然这样，也可以在不同的提取步骤中使用不同的溶剂，或使用溶剂提取后接着用脂肪、蜡或油提取，反之亦然。
[0041]浸溃过程通常在室温下用水和乙醇的混合物进行5-9天，优选进行7天，通过将溶剂混合物灌浇在植物组成部分上的方式进行浸溃，并在上述时间段内一直保持这种状态。
[0042]根据本发明，植物各部分的渗透通常是通过用水浸透植物各部分，在95-100°C用水处理植物各部分4-5小时来实现。
[0043]粗提产物在使用前也可以进行浓缩和/或干燥和/或进一步处理。为产生干燥提取物，溶剂可以通过例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥从液态天然提取物、浓缩提取物或净化的提取物中回收。进一步的处理可以包括，例如本领域技术人员熟知的纯化步骤，例如离心、过滤和倾析，以便从提取物中去除悬浮物。层析法，例如柱层析法、气相色谱法或高效液相色谱法(HPLC)或蒸汽蒸馏也用于提纯。在优选的实施例中，使用未经进一步提纯步骤的粗产物。
[0044]本发明所述的成分可以在进行提取之前通过混合牛至属植物(Origanum)和另一种植物的地上部分来获得；或者优选地，混合牛至属植物(Origanum)的浓缩物或提取物与另一种植物的提取物，来获得本发明所述的成分。
[0045]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，本发明所述成分包含牛至属植物(Origanum)的浓缩物或提取物与另一种植物的浓缩物或提取物以1:10至10:1的比例混合，优选地1:5至5:1，以及更优选地1:2至2:1并且特别是1:1。
[0046]牛至属植物(Origanum)与其它植物的组合包括牛至属/伞形科(Origanum/Apiaceae)、牛至属 / 觅科(Origanum/Armaranthaceae)、牛至属 / 蔷薇科(Origanum/Rosaceae)、牛至属 / 茶薦子科(Origanum/Grossulariaceae)、牛至属 / 菊科(Origanum/Astereraceae)、牛至属 / 半日花科(Origanum/Cistaceae)、牛至属 / 唇形科(Origanum/Lamiaceae)、牛至属 / 豆科(Origanum/Fabaceae)，以及牛至属 / 胡颓子科(Origanum/Elaeagnaceae)。优选的组合是牛至属/羊角序属(Origanum/Aegopodium)、牛至属/海蓬子属(Origanum/Salicornia)、牛至属植物 / 藜属(Origanum/Chenopodium)、牛至属/媪梓属(Origanum/Cydonia)、牛至属/花楸属(Origanum/Sorbus)、牛至属/酷栗属(Origanum/Ribes)、牛至属/菊苣属(Origanum/Cichorium)、牛至属/岩茨属(Origanum/Cistus)、牛至属 / 水杨梅属(Origanum/Geum)、牛至属 / 沙棘属(Origanum/Hippophae)、牛至属/西达瑞梯属(Origanum/Sideritis)、牛至属/鹰咀豆属(Origanum/Cicer)，以及牛至属/李属(Origanum/Prunus)。更优选的组合是牛至属植物/羊角序(Origanum/Aegopodium podagraria)、牛至属植物 / 亨利藜(Origanum/Chenopodiumbonus-henricus)、牛至属植物 / 花揪(Origanum/Sorbus terminalis)、牛至属植物 / 黑果荼薦(Origanum/Ribes nigrum)、牛至属植物 / 红荼薦子(Origanum/Ribes rubrum)、牛至属植物 / 百瑞木(O riganum/Cistus incanus)、牛至属植物 / 媪梓(Origanum/Cydoniaoblonga)、牛至属植物/菊苣(Origanum/Cichorium intybus)、牛至属植物/盐角草(Origanum/Salicornia eurpaea)、牛至属植物 / 菩提香(Origanum/Geum urbanum)、牛
至属植物 / 沙棘(OtiganumIHippopha^ rhamnoides)、牛至属植物 / 铁尖草(Origanum/Sideritis scardica)、牛至属植物 / 鹰嘴豆(Origanum/Cicer arietinum)、牛至属植物/黑剌李(Origanum/Prunus spinosa)。特别优选的组合是牛至/百瑞木(Origanumvulgare/Cistus incanus)、牛至 / 黑果荼薦(Origanum vulgare/Ribus nigrum)、牛至/ 媪梓(Origanum vu I gar e/Cydon i a oblonga)，以及牛至 / 羊角序(Origanum vulgare/Aegopodium podagraria)。
[0047]在优选的实施例中，结合以上和以下任何实施例，本发明所述成分此外还包括牛至属植物与两种或更多种其它植物的组合。优选的实施例是牛至属/岩茨属/酷栗属(Origanum/Cistus/Ribes)以及牛至属 / 媪梓属 / 羊角序属(Or i ganum/Cydon i a/Aegopodium)，特别是牛至 / 百瑞木/ 黑果荼薦(Origanum vulgare/Cistus incanus/Ribesnigrum)以及牛至 / 媪梓 / 羊角序(Origanum vu I gar e/Cydon i a oblonga/Aegopodiumpodagraria)0
[0048]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，本发明所述的成分为液体的、干燥的或半固体形式。
[0049]在本发明另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述细菌感染由病原菌引起。
[0050]这里使用的术语“病原菌”指的是引起细菌感染的细菌。病原菌包括形成小球杆菌；小的、圆的、卵圆形的杆状细胞；大的、钝端的杆状细胞；小的、纤细的、多型的杆状细胞；卵圆形至球形的杆状细胞；长的、纤细的、易弯曲的、盘旋的或螺旋形的杆状细胞；纤细的、短的杆状细胞；具有单极鞭毛的弧形杆状细胞，以及菜豆形的杆状细胞的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
[0051]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述细菌感染为胃肠道感染、泌尿生殖道感染、呼吸道感染，如同，例如鼻炎、扁桃体炎、咽炎、支气管炎、肺炎，内部器官感染，如同，例如肾炎、肝炎、腹膜炎、心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎，眼部、耳部感染以及皮肤和皮下感染、腹泻、皮肤病、中毒性休克综合症、菌血病、脓毒病，以及结核病。
[0052]还在本发明另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述病原菌选自葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、埃希氏菌属(Escherichia)、沙门氏菌属(Salmonella)、螺杆菌属(Helicobacter)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、梭状芽胞杆菌属(Clostridium)、弧菌属(Vibrio)、螺旋体属(Triponema)、分支杆菌属(Mycobacterium)、克雷白氏杆菌属(Klebsiella)、放线菌属(Actinomyces)、类菌体(Bacterioides)、博代氏菌属(Bordetella)、包柔螺旋体属(Borrelia)、布氏杆菌属(Brucella)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、双球菌属(Diplococcus)、肠杆菌属(Enterobacter)、梭形杆菌属(Fusobacterium)、钩端螺旋体属(Leptospira)、李斯特氏菌属(Listeria)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、变形杆菌属(Proteus)、立克次氏体属(Rickettsia)、志贺氏菌属(Shigella)、球状菌属(Sphaerophorus)、耶尔森氏菌属(Yersinia),或它们的组合。
[0053]在本发明进一步优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述细菌选自突变链球菌(Streptococcus mutans)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),以及小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)。
[0054]在本发明进一步优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述细菌是耐抗生素的细菌。这里使用的“耐抗生素的”本意是普通抗生素，如β_内酰胺类抗生素、四环素、氨基糖苷类抗生素、大环内酯类抗生素、林可酰胺类抗生素、促旋酶抑制剂(氟喹诺酮类)、磺胺类药物和三甲氧苄二氨嘧啶、糖肽类抗生素、多肽类抗生素和硝基咪唑衍生物，当上述抗生素作用于细菌时，既不能杀菌，也不能获得抑菌效果。
[0055]在另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述耐抗生素的细菌表示耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)。此处使用的术语“耐甲氧西林的”与“多重抗药性的”和“耐万古霉素的”同义。
[0056]在本发明优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分通过口服给药、鼻腔给药或局部给药。
[0057]在另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分为鼻腔药剂、吸入药混合物、喷雾剂、漱口剂、口腔喷雾剂、鼻腔喷雾剂或室内喷雾剂的形式。更优选地，所述成分为口腔喷雾剂、鼻腔喷雾剂或室内喷雾剂的形式，特别是鼻腔喷雾剂的形式。
[0058]在更优选的实施例中，所述成分为喷雾剂或室内喷雾剂的形式。优选地，本发明所述的液体或固体的成分用于此。除了提取物，喷雾剂或室内喷雾剂也可以包含药学上的无害物质、载体介质和辅助剂。喷雾剂或室内喷雾剂可以用于给细菌接触的或有可能接触的物体和房间消毒，特别是人类、动物和/或食品被传播的各种方式。例如，飞机在起飞前可以用本发明所述的喷雾剂或本发明所述的室内喷雾剂进行喷雾，以便预防病毒传播，从而将人们感染的风险降至最低。所述喷雾剂或室内喷雾剂也可以在人面前进行喷雾，例如，在等候室，因为它不会对人引起任何毒性作用。
[0059]在特别优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分作为鼻腔喷雾剂使用，特别是用于治疗细菌引起的呼吸道和鼻窦疾病。在这种情况下，所述成分优选为液体提取物的形式。
[0060]在另一个优选的实施例中，结合以上所列出的任一实施例，本发明所述的成分为片剂、包衣片剂、泡腾片剂、胶囊、粉末、颗粒、糖衣片、含片、丸剂、一次用量的针剂、滴剂、栓剂、乳剂、软膏、凝胶、酊剂、泥膏剂、乳膏、湿敷剂、漱口溶液或植物汁液的形式。
[0061]关于口服使用，结合上文和下文所列出的任一实施例，所述成分优选以片剂形式给药。在这种情况下，所述成分优选是干燥的提取物的形式。
[0062]在另一个优选的实施例中，结合上文和下文所列出的任一实施例，根据本发明，所述成分可以作为溶液特别是漱口溶液、漱口剂或酊剂使用，特别是用于治疗口腔和上咽喉的细菌感染。
[0063]结合上文和下文所列出的任一实施例，栓剂代表了本发明所述成分用于直肠和阴道给药的优选实施例。
[0064]关于局部给药，本发明所述的成分以乳剂、软膏、凝胶、酊剂、泥膏剂、乳膏或湿敷剂的形式给药。在这种情况下，所述成分优选以提取物的形式使用，其中活性成分通过使用脂肪、蜡或油提取的方法从植物中提取。此外，所述提取物优选对其进行进一步加工获得干燥的提取物，随后与脂肪、蜡或油混合或溶解于脂肪、蜡或油中。
[0065]在给药形式中，所述成分的浓度随给药类型不同而不同。通常，固体给药形式的每剂量单位中所述成分的质量为0.5至1，OOOmgo优选地，所述成分的质量为每单位I至500mgo在液体给药形式中，所述成分的浓度可以是I μ g/ml至100mg/ml,优选为25 μ g/ml至50mg/ml。在半固体给药形式的情况下，所述成分的含量共计重量的I % -90%，优选为重量的 5% -75%。
[0066]更多的元素，例如维生素和矿物质，可以加入本发明所使用的成分中。
[0067]所述成分也可以，例如，加入到动物饲料或食品中，例如饮料。以提取物的形式，所述成分本身也可以作为茶来泡。然而，也可以将热水直接浇在植物各部分如牛至属植物(origanum)的叶片上来制茶。此外，所述成分可以作为食品增补剂的成分，在冬季月份里服用所述增补剂能够有助于增强身体的抵抗力并且有助于治疗细菌感染。
[0068]通过下列实施例对本发明进行说明。
[0069]生产液体提取物和干燥提取物的一般程序:
[0070]对采集的植物材料进行肉眼观察，去除非原始状态的、损坏的或被咬掉的部分。
[0071]将净化的材料铺在温室内的桌子上并用纸盖住进行干燥。每日对植物各部分进行翻转并通过肉眼观察去除非原始状态的和损坏的部分。定期测定植物材料中的残留水分。当残留水分的含量最大为10%的时候，该材料适于进一步的处理。
[0072] 粗切植物材料并转移至烧杯；加入冷的蒸馏水(植物材料重量的10-30倍)。将产生的混合物置于电炉上加热并搅拌直至它开始沸腾。慢煮持续I小时。[0073]过滤热的液体，并压榨剩余的植物材料。产生的水提取物直接装入瓶中。
[0074]对于制备干燥提取物，将液体提取物装入金属碗并置于干燥炉中在80°C进行浓缩直到溶剂完全蒸发。将残余物从金属碗中刮净并称重。或者，按照本领域技术人员熟知的标准程序冻干液体提取物。
[0075]牛至属植物(Origanum)提取物的制备
[0076]将牛至(Origanum vulgare)的所有地上部分用于提取。
[0077]按照一般程序，将150g粗切的牛至在1500ml蒸馏水中加热I小时。产生的水提取物直接装入瓶中。
[0078]黑果茶薦(Ribes nigrum)提取物的制备
[0079]将黑果茶薦的叶片用于提取。
[0080]按照一般程序，将26.7g粗切的黑果茶薦叶片在800ml蒸馏水中加热I小时。产生的水提取物直接装入瓶中。
[0081]百瑞木(Cistus incanus)提取物的制备 [0082]将百瑞木的花和幼枝用于提取。
[0083]按照一般程序，将100g粗切的百瑞木材料在1500ml蒸馏水中加热I小时。产生的水提取物直接装入瓶中。
[0084]牛至(Origanumvulgare)、黑果茶薦(Ribes nigrum)和百瑞木(Cistus incanus)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗菌效果
[0085]牛至(测试物A)
[0086]配方:固体物质(冷冻干燥)的水中浓度为5mg/ml
[0087]测丨试体系:
[0088]测试模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0089]测试组:物质A (5mg)
[0090]程序:将干燥冷冻的提取物溶解于水中。将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞内加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0091]MRSA 细菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0092]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0093]黑果荼薦(测试物B)
[0094]配方:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为5mg/ml
[0095]测丨试体系:
[0096]测试模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0097]测试组:物质B (5mg)
[0098]程序:将干燥冷冻的提取物溶解于水中。将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞内加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0099]MRSA 细菌的使用:ΙΟ—3/!.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0100]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0101]百瑞木(测试物C)[0102]配方:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为2.5mg/ml
[0103] 测试体系:
[0104]测试模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0105]测试组:物质C (2.5mg)
[0106]程序:将干燥冷冻的提取物溶解于水中。将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞内加入100 μ I的提取物溶液。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0107]MRSA 细菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0108]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0109]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的协同抗菌效果
[0110]测试对象:
[0111]测试物:A (=牛至)+B (=黑果茶薦)
[0112]配方:物质A:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为5mg/ml ;物质B:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为5mg/ml
[0113]测试体系:
[0114]测试模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0115]测试组:物质A (5mg) +物质B (5mg)
[0116]程序:将干燥冷冻的物质溶解于水中。将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞内加入100 μ I的物质溶液。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0117]MRSA 细菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0118]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0119]结果:
[0120]从图1可见，当牛至和黑果茶薦组合使用时，获得了更好的MRSA生长抑制效果。
[0121]牛至(Origanum vulgare)和百瑞木(Cistus incanus)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的协同抗菌效果
[0122]测试物:A(=牛至)+C(=百瑞木)
[0123]配方:物质A:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为5mg/ml ;物质C:固体物质(干燥冷冻)的水中浓度为2.5mg/ml
[0124]测试体系:
[0125]测试模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0126]测试组:物质A (5mg) + 物质 C (2.5mg)
[0127]程序:将干燥冷冻的物质溶解于水中。将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞内加入100 μ I的物质溶液。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0128]MRSA 细菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0129]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0130]结果:[0131]从图2可见，当牛至和百瑞木组合使用时，获得了更好的MRSA生长抑制效果。
[0132]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)对突变链球菌(Streptococcus mutans)的抗菌效果
[0133]牛至和黑果茶薦的液体提取物的制备
[0134]将牛至的所有地上部分和黑果茶薦的叶片用于提取。
[0135]按照一般程序，将70g粗切的牛至和30g粗切的黑果茶薦叶片在1000ml蒸馏水中煮沸I小时。将产生的水提取物过滤并再煮沸5分钟。产生的提取物直接装入瓶中。液体提取物的浓度为30.5mg/ml。
[0136]牛至的干燥提取物的制备
[0137]将牛至的所有地上部分用于提取。
[0138]按照一般程序，将150g粗切的牛至在1500ml蒸馏水中加热I小时。按照本领域技术人员熟知的标准程序对产生的水提取物进行干燥。干物质的含量至少为干燥提取物的总重量的92%。
[0139]黑果茶薦的干燥提取物的制备 [0140]将黑果茶薦的叶片用于提取。
[0141]按照一般程序，将26.7g粗切的黑果茶薦叶片在800ml蒸馏水中加热I小时。按照本领域技术人员熟知的标准程序对产生的水提取物进行干燥。干物质的含量至少为干燥提取物的总重量的92%。
[0142]牛至和黑果茶薦的干燥提取物的制备
[0143]将牛至的干燥提取物和黑果茶薦的干燥提取物以1:1的质量比彻底混合。
[0144]程序:
[0145]BacLight活性检测,体外实验
[0146]LIVE/DEAD BacLight细菌活性检测试剂盒(Invitrogen,分子探针,达姆施塔特，德国)采用两种核酸染色剂-绿色荧光SYT09染色剂和红色荧光碘化丙啶染色剂。对于存活的细胞，小分子SYT09用于穿透存活的和死亡的(非存活的)细胞，然而复染剂碘化丙啶只对死亡细胞染色。
[0147]按照厂家的用法说明进行试验并在96孔板读数器上测量荧光强度。过夜培养后在盐溶液中制备突变链球菌的悬浮液；通过加热(95°C，1小时)使50%的细菌失活。
[0148]使用超声波将上述牛至和黑果茶薦的干燥提取物溶解在蒸馏水中。牛至和黑果茶薦的液体提取物不经过进一步稀释而直接使用。制备下列储备溶液并测试其对突变链球菌的抗菌活性:
[0149]l)8mg/ml的牛至和8mg/ml的黑果茶薦(来自上述干燥提取物)
[0150]2) 0.8mg/ml的牛至和0.8mg/ml黑果茶薦(来自上述干燥提取物)
[0151 ] 3) 30.5mg/ml (来自上述液体提取物)。
[0152] 将存活细菌与每一种储备溶液以1:1混合并孵育10分钟。然后，将这些悬浮液与加热失活的细菌混合(0:100 ；5:95 ；25:75 ；45:55 ；50:50)。将 0.5 μ I 体积的 BacLight 染色溶液(组分A和B 1:1)加到250 μ I的这些混合物中。在暗室中孵育染色10分钟。从每个样品中吸取100 μ I到微量滴定板中，并测量荧光。激发波长为470nm ;在530nm处记录存活细胞的发射信号强度并在620nm处记录非存活细胞的发射信号强度。所有测量都做一个重复，以均衡悬浮液的不均一性。对于记录数据的评估，存活的和死亡的(非存活的)细胞的比例按照存活细菌发射信号强度/死亡细菌发射信号强度来计算。用盐溶液做的试验作为参照/阴性对照。
[0153]结果:
[0154]从图3可见，牛至和黑果茶薦的提取物表现出抗突变链球菌的抗菌活性。
[0155]牛至(Origanum vulgare)和黑果茶薦(Ribes nigrum)的液体提取物的制备
[0156]将牛至 的所有地上部分和黑果茶薦的叶片用于提取。
[0157]按照一般程序，将70g粗切的牛至和30g粗切的黑果茶薦叶片在1000ml蒸馏水中煮沸I小时。将产生的水提取物过滤并再煮沸5分钟。产生的提取物直接装入瓶中。纯的液体提取物的浓度为30.5mg/ml。所述提取物用LB培养基按指定比例做进一步稀释。
[0158]金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑制圈试验
[0159]试骀体系:
[0160]MRSA的过夜培养:在8ml TBS培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0161]试验模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的金黄色葡萄球菌(USA300 = MRSA)
[0162]试验组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，1:2的提取物稀释液以及1:4的提取物稀释液
[0163]程序:将100 μ I的MRSA溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定浓度的液体提取物。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0164]MRSA 细菌的使用:10-3/1.63χ105/100 μ I/ 琼脂平板
[0165]结果:
[0166]观察到MRSA的生长受到抑制。当使用牛至和黑果茶薦的纯提取物时，在MH琼脂上观察到28mm的抑制圈。使用1:2(提取物:LB培养液)稀释液时，抑制圈为19mm，使用1:4(提取物:LB培养液)稀释液时，抑制圈为13mm。
[0167]鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的抑菌圈试验
[0168]试骀体系:
[0169]鼠伤寒沙门氏菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时，用LB培养液以1:100稀释
[0170]试验模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的鼠伤寒沙门氏菌
[0171]试验组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物
[0172]程序:将100 μ I的鼠伤寒沙门氏菌溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8mm的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定浓度的液体提取物。在37°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0173]结果:
[0174]观察到鼠伤寒沙门氏菌的生长受到抑制。在MH琼脂上观察到IOmm的抑菌圈。
[0175]小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)的抑菌圈试验
[0176]试骀体系:
[0177]小肠结肠炎耶尔森菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，27°C摇床培养22小时，用LB培养液以1:1000稀释[0178]试验模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的小肠结肠炎耶尔森菌
[0179]试验组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，1:2的提取物稀释液
[0180]程序:将100 μ I的小肠结肠炎耶尔森菌溶液涂布在MH琼脂上。随后，在MH琼脂上打孔产生8_的孔洞，并在孔洞中加入100 μ I指定浓度的液体提取物。在27°C放置22小时后，光学检测孔洞中的生长抑制情况。
[0181]结果:
[0182]观察到小肠结肠炎耶尔森菌的生长受到抑制。当使用纯的牛至和黑果茶薦的提取物时，在MH琼脂上观察到14mm的抑菌圈。使用1:2(提取物:LB培养液)稀释液时，抑菌圈为10mm。
[0183]液体提取物存在时鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的生长曲线
[0184]试骀体系:
[0185]鼠伤寒沙门氏菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0186]试验模型:马-欣二氏琼脂(MH-琼脂)上的鼠伤寒沙门氏菌
[0187]如下制备IOml混合物:
[0188]a) LB 培养液
[0189]b) LB培养液+50 μ I鼠伤寒沙门氏菌
[0190]c)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)
[0191]d)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)+50μ I鼠伤寒沙门氏菌
[0192]程序:将50 μ I的这些混合物在光度比色皿中用450 μ I的LB培养液稀释，在O小时、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、24小时、48小时之后于600nm处测定光密度(OD)。
[0193]结果:
[0194]牛至和黑果茶薦的液体提取物能长时间地甚至超过48小时地对鼠伤寒沙门氏菌的生长进行有力地抑制。
[0195]液体提取物存在时铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的生长曲线
[0196]试骀体系:
[0197]铜绿假单胞菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0198]如下制备IOml混合物:
[0199]a) LB 培养液
[0200]b) LB培养液+50 μ I铜绿假单胞菌
[0201]c)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(2:1)
[0202]d)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)
[0203]e)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(2:1)+50μ I铜绿假单胞菌
[0204]f)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)+50μ I铜绿假单胞菌
[0205]程序:将100 μ I的这些混合物在光度比色皿中用900 μ I的LB培养液稀释，在O小时、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、24小时、48小时之后于600nm处测定光密度。[0206]结果:
[0207]如果牛至和黑果茶薦的液体提取物按1:2稀释使用，那么它对铜绿假单胞菌的生长大约能抑制8小时。在使用1:4稀释液时，提取物在8小时之后有力地抑制细菌生长。
[0208]液体提取物存在时小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)的生长曲线
[0209]试骀体系:
[0210]小肠结肠炎耶尔森菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，27°C摇床培养22小时
[0211]如下制备IOml混合物:
[0212]a) LB 培养液
[0213]b) LB培养液+50 μ I小肠结肠炎耶尔森菌
[0214]c)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(2:1)
[0215]d)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)
[0216]e)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(2:1)+50 μ I小肠结肠炎耶尔森菌
[0217]f)LB培养液+上述牛至和黑果茶薦的液体提取物(4:1)+50μ I小肠结肠炎耶尔森菌
[0218]程序:将100 μ I的这些混合物在光度比色皿中用900 μ I的LB培养液稀释，在O小时、I小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、24小时、48小时之后于600nm处测定光密度。
[0219]结果:
[0220]两种稀释比例的牛至和黑果茶薦的液体提取物均抑制了小肠结肠炎耶尔森菌的生长约8小时。
[0221]MIC5。试验
[0222]MIC50值描述了抑制50%微生物生长所需的最低抑菌浓度。
[0223]鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)的 MIC5。试验
[0224]试骀体系:
[0225]鼠伤寒沙门氏菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22h
[0226]测试组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64以及1:128的提取物稀释液(用LB培养液稀释)
[0227]程序:在9ml LB培养液中接种Iml的过夜培养物并于37°C摇床培养，直至经光度计测量，OD600达到0.5-0.6之间为止。细菌用Neubauer Z^ihlkammer计数并稀释至每ml培养液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液体提取物，纯提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64以及1:128的提取物LB培养液稀释液中接种200 μ I (约5x10s)的鼠伤寒沙门氏菌。用不含有细菌的液体提取物的稀释液及含有细菌的2ml LB培养液或培养液作为对照。37°C摇床培养19小时。将混合物在光度比色皿中以1:10稀释并于600nm处测定光密度。
[0228]益果:
[0229] 达到MIC5tl的平均稀释度为1:9 (提取物:LB培养液)。[0230]铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)的 MIC5tl 试验
[0231]试骀体系:
[0232]铜绿假单胞菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0233]测试组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀释液(用LB培养液稀释)
[0234]程序:在9ml LB培养液中接种Iml的过夜培养物并于37°C摇床培养，直至经光度计测量，OD600达到0.5-0.6之间为止。细菌用Neubauer Z0hlkammer计数并稀释至每ml培养液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液体提取物，纯提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物LB培养液稀释液中接种200 μ I (约5x10s)的铜绿假单胞菌。用不含有细菌的液体提取物的稀释液及含有细菌的2ml LB培养液或培养液作为对照。37°C摇床培养19小时。将混合物在光度比色皿中以1:10稀释并于600nm处测定光密度。
[0235]:
[0236]达到MIC5tl的平 均稀释度为1:70 (提取物:LB培养液)。
[0237]小肠结肠炎耶尔森菌(Yersinia enterocolitica)的MIC5c!试验
[0238]试骀体系:
[0239]小肠结肠炎耶尔森菌的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，27°C摇床培养22小时
[0240]测试组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀释液(用LB培养液稀释)
[0241]程序:在9ml LB培养液中接种Iml的过夜培养物并于37°C摇床培养，直至经光度计测量，OD600达到0.5-0.6之间为止。细菌用Neubauer Zahlkammer计数并稀释至每ml培养液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液体提取物，纯提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物LB培养液稀释液中接种200 μ I (约5x10s)的小肠结肠炎耶尔森菌。用不含有细菌的液体提取物的稀释液及含有细菌的2ml LB培养液或培养液作为对照。27°C摇床培养19小时。将混合物在光度比色皿中以1:10稀释并于600nm处测定光密度。
[0242]:
[0243]达到MIC5tl的平均稀释度为1:50 (提取物:LB培养液)。
[0244]金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的 MIC5tl 试验
[0245]试骀体系:
[0246]MRSA的过夜培养:在8ml LB培养液中加入10 μ I菌液，37°C摇床培养22小时
[0247]测试组:上述牛至和黑果茶薦的液体提取物；纯提取物，I:2,1:4，1:8，1:16，1:32，I:64,1:128,1:256，1:512的提取物稀释液(用LB培养液稀释)
[0248]程序:在9ml LB培养液中接种Iml的过夜培养物并于37°C摇床培养，直至经光度计测量，OD600达到0.5-0.6之间为止。细菌用Neubauer Zjjhlkammer计数并稀释至每ml培养液25xl05。在2ml上述牛至和黑果茶薦的液体提取物，纯提取物，1:2，1:4，1:8，1:16，I:32,1:64,1:128,1:256，1:512的提取物LB培养液稀释液中接种200 μ I (约5x10s)的金黄色葡萄球菌。用不含有细菌的液体提取物的稀释液及含有细菌的2ml LB培养液或培养液作为对照。37°C摇床培养19小时。将混合物在光度比色皿中以1:10稀释并于600nm处测定光密度。
[0249]结果:
[0250]达到MIC5tl的 平均稀释度为1:73 (提取物:LB培养液)。
【权利要求】
1.用于治疗细菌感染的成分，包含牛至属植物的浓缩物或提取物与至少另一种植物的 一种浓缩物或提取物。
2.根据权利要求I所述的成分，其特征在于：所述浓缩物或提取物来自所述植物的地 上部分。
3.根据权利要求I或2所述的成分，其特征在于：所述植物选自伞形科（Apiaceae)、 觅科（Armaranthaceae)、蓄薇科（Rosaceae)、茶薦子科（Grossulariaceae)、菊科 (Asteraceae)、半日花科（Cistaceae)、唇形科（Lamiaceae)、显科（Fabaceae)和胡颜子科 (Elaeagnaceae)的植物。
4.根据权利要求3所述的成分，其特征在于：所述植物选自羊角序属（Aegopodium)、 海蓬子属（Salicornia)、藜属（Chenopodium)、媪梓属（Cydonia)、花楸属（Sorbus)、酷 栗属（Ribes)、菊苣属（Cichorium)、岩茨属（Cistus)、水杨梅属(Geum)、西达瑞梯属 (Sideritis)、鹰咀豆属（Cicer)、沙棘属(Hippophae)和李属(Prunus)。
5.根据权利要求4所述的成分，其特征在于：所述可食用的植物选自羊角芹 (Aegopodium podagraria)、亨利藜(Chenopodium bonus-henricus)、花揪(Sorbus terminalis)、黑果荼薦(Ribes nigrum)、红荼薦子(Ribes rubrum)、百瑞木(Cistus incanus)、媪梓(Cydonia oblonga)、菊苣(Cichorium intybus)、盐角草(Salicorniaeuropaea)、菩提香（Geum urbanum)、沙棘（H/ppopA?ag rhamnoides)、铁尖草（Sideritisscardica)、鹰嘴豆(Cicer arietinum)和黑剌李(Prunus spinosa) 0
6.根据权利要求1-5任一所述的成分，其特征在于：所述细菌感染由病原菌引起。
7.根据权利要求6所述的成分，其特征在于：所述病原菌选自葡萄球菌属 (Staphylococcus)、链球菌属（Streptococcus)、假单胞菌属（Pseudomonas)、埃希氏菌 属（Escherichia)、沙门氏菌属（Salmonella)、螺杆菌属（Helicobacter)、奈瑟氏菌属 (Neisseria)、弯曲杆菌属（Campylobacter)、衣原体属（Chlamydia)、梭状芽胞杆菌属 (Clostridium)、弧菌属（Vibrio)、螺旋体属（Triponema)、分支杆菌属（Mycobacterium)、 克雷白氏杆菌属（Klebsiella)、放线菌属（Actinomyces)、类菌体（Bacterioides)、博 代氏菌属（Bordetella)、包柔螺旋体属（Borrelia)、布氏杆菌属（Brucella)、棒状杆菌 属（Corynebacterium)、双球菌属（Diplococcus)、肠杆菌属（Enterobacter)、梭形杆菌 属（Fusobacterium)、钩端螺旋体属（Leptospira)、李斯特氏菌属（Listeria)、巴斯德氏 菌属（Pasteurella)、变形杆菌属（Proteus)、立克次氏体属（Rickettsia)、志贺氏菌属 (Shigella)、球状菌属（Sphaerophorus)、耶尔森氏菌属（Yersinia)，或它们的组合。
8.根据权利要求6或7所述的成分，其特征在于：所述细菌是耐抗生素的细菌。
9.根据权利要求8所述的成分，其特征在于：所述耐抗生素的细菌是耐甲氧西林的金 黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus)。
10.根据权利要求1-9任一所述的成分，其特征在于：所述成分是液体的、干燥的或半 固体的形式。
11.根据权利要求1-10任一所述的成分，其特征在于：所述提取物是水提取物或醇提 取物。
12.根据权利要求1-11任一所述的成分，其特征在于：所述成分通过口服给药、鼻腔给药或局部给药。
13.根据权利要求1-12任一所述的成分，其特征在于:所述成分为鼻腔药剂、吸入药混合物、喷雾剂、漱口剂、口腔喷雾剂、鼻腔喷雾剂或室内喷雾剂的形式。
14.根据权利要求1-12任一所述的成分，其特征在于:所述成分为片剂、包衣片剂、泡腾片剂、胶囊、粉末、颗粒、糖衣片、含片、丸剂、一次用量的针剂、滴剂、栓剂、乳剂、软膏、凝胶、酊剂、泥膏剂、乳膏、湿敷剂、漱口溶液或植物汁液的形式。
15.根据权利要求1-14任一所述的成分，其特征在于:所述细菌感染为胃肠道感染、泌尿生殖道感染、呼吸道感染，包括鼻炎、扁桃体炎、咽炎、支气管炎、肺炎，内部器官感染，包括肾炎、肝炎、腹膜炎、心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎，眼部、耳部感染以及皮肤和皮下感染、腹泻、皮肤病、中毒性休克综合症、菌血病、脓毒病，以及结核病。
16.根据权利要 求1-8或10-15任一所述的成分，其特征在于:所述细菌选自突变链球菌(Streptococcus mutans)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，以及小肠结肠炎耳尔森菌(Yersinia enterocolitica)。
【文档编号】A61K36/53GK103974708SQ201280058876
【公开日】2014年8月6日 申请日期:2012年12月14日 优先权日:2011年12月14日
【发明者】乔治斯·潘德利斯 申请人:乔治斯·潘德利斯