专利名称：一种可促口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及药物制剂技术领域，尤其涉及一种能够增加肠道药物吸收，提高口服生物利用度的积雪草酸脂质纳米粒及其制备方法。
背景技术：
积雪草为伞形科植物积雪草Centella asiatica (L. ) Urban.的干燥全草或带根全草，具有清热利湿、解毒消肿之功效(张蕾磊，等.积雪草化学成分研究[J]·中草药，2005,36 (12) :1761-1763.)。积雪草酸(Asiatic Acid)是积雪草有效成分之一，属五环三萜酸，具有治疗皮肤创伤以及抗肝、肾纤维化等作用，常用于与美化皮肤相关的疤痕治疗(陈军，等.积雪草酸及其衍生物的生物活性研究概况[J].中草药，2006，37 (3) :458-460.)。积雪草酸的胃肠道吸收差，口服生物利用度低。文献报道，大鼠口服积雪草酸(1. 25mg)，血药峰浓度(Cmax)远远低于静脉注射(约为1/60)，人口服积雪草酸(12mg)后，Cmax仅为0.0981^.11^,0-1211曲线下面积(AUC0_12h)为 O. 61 ±0. 25 μ g · h · mL 1 (Chasseaud L. F. , et al. The metabolismof Asiatic Acid, Madecassic Acid and Asiaticoside in the Rat[J]. DrugRes. , 1971, 21:1379-1384 ；Rush ff. R.,et al.The comparative steady-statebioavailability of the active ingredients of madecassol[J]. Eur. J. Drug Metab.Pharmacokinet. , 1993, 18(4):323-326.)。积雪草酸尽管具有良好的生物活性，但在水中溶解度极小，肠道吸收较差，这给口服给药带来一定困难。人们一直致力于改善积雪草酸的肠道吸收，如刘英等通过将积雪草酸经化学结构修饰制成水溶性积雪草酸氨基丁三醇盐，再制成微乳、微乳软胶囊、气雾剂、硬胶囊及片剂等制剂，虽然积雪草酸的口服生物利用度有所增加(专利申请号CN102755333 A ；CN 102755328 A ；CN 102755329 A ；CN 102755331 A ；CN 102755332 A)，但由于积雪草酸的化学结 构已经改变，安全性和疗效是否变化有待进一步确证。现代制剂技术可以改善药物的口服吸收，张大平等采用自乳化技术，得到积雪草酸乳滴，灌胃给药后，血药浓度较原料组明显提高(专利申请号CN 102784096 A)，但处方中需加入大量的乳化剂、助乳化剂及抗氧化剂等辅料，可能存在安全隐患，而且自乳化所形成的乳滴大小易受胃肠道条件的影响，从而影响吸收。脂质纳米粒是以脂质材料为载体经一定的制剂工艺构建而成,如固体脂质纳米粒(Solid Lipid Nanoparticles, SLN)以及改变脂质材料中液态脂质的比例所制成的纳米结构脂质载体(Nanostructured Lipid Carriers, NLC)。该类脂质纳米粒主要具有以下特点1) 口服后，在胃肠道可经淋巴通道吸收进入体循环，该吸收旁路途径可避免肝脏的首过效应，减少药物损失(Hussain N. , et al. Recent advances in the understanding ofuptake of microparticulates across the gastrointestinal lymphatics[J]. Adv.Drug Deliv. Rev.，2001，50 :107-142.)。2)由于脂质纳米粒的结构与细胞膜结构的相似性，具有增强细胞膜通透的能力。3)带负电荷的纳米粒，具有良好的生物粘附特性(Jung T. , et al. Biodegradable nanoparticles for oral delivery of peptides:1sthere a role for polymers to affect mucosal uptake [J]. Eur. J. Pharm.Biopharm.，2000, 50 (I) : 147-160.)，可延长载药粒子在吸收部位的停留时间，增加吸收，提高生物利用度。经检索，目前尚无积雪草酸脂质纳米粒改善肠道吸收的专利申请或文献报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种积雪草酸脂质纳米粒及其制备方法。为达到上述目的，本发明采用如下技术方案一种可促进口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒，所述纳米粒包裹的药物为积雪草酸，载体为脂质材料，所述脂质材料包括固态脂质和液态脂质，固态脂质和液态脂质的质量配比为80 100:0 20 ;固态脂质选用单硬脂酸甘油酯或硬脂酸，液态脂质选用油酸或三油酸甘油酯；所获得的脂质纳米粒粒径小于700nm，包封率为40 90%，载药量为7 11%。所述的积雪草酸脂质纳米粒通过以下过程制备得到
(1)以无水乙醇为溶剂，加入脂质材料和色谱纯度大于90%积雪草酸，在(70±2)°〇下水浴加热溶解，并作为有机相，其中积雪草酸与脂质材料质量比为1:7 11，脂质材料的溶液浓度为7 llmg/mL ；
(2)以水为分散相，加热至(70±2)V ；
(3)在400r/min机械搅拌下，将有机相注入至分散相中，无水乙醇与水的体积比为I 10 ;继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为0. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。本发明的有益效果是简单、易行、安全有效，是本发明的特点。“简单”指处方组成简单；“易行”指制备工艺非常简单，将有机相(无水乙醇)加到水相即可，无需高速搅拌或高压处理，工艺的重现性好；“安全有效”:指处方组成安全，不添加乳化剂和有毒溶剂，纳米粒的载体与肠道上皮细胞同为脂质成分，因此容易透过肠道而被吸收。本发明所得积雪草酸脂质纳米粒粒径小于700nm，包封率为40 90%，载药量为7 11%，而且可有效增加肠道药物吸收，提高口服生物利用度。
图1为实施例2中积雪草酸脂质纳米粒透射电镜照片；
图2为实施例5中积雪草酸脂质纳米粒透射电镜照片；
图3为积雪草酸脂质纳米粒大鼠在体肠灌流模型中药物吸收百分率曲线；
图4为积雪草酸脂质纳米粒大鼠灌胃后胆汁积雪草酸排泄量-时间曲线。
具体实施方式
本发明可促进口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒包裹的药物为积雪草酸，载体为脂质材料，积雪草酸与脂质材料质量比为1:7 11，所述脂质材料包括固态脂质和液态脂质，固态脂质和液态脂质的质量配比为80 100:0 20 ;固态脂质选用单硬脂酸甘油酯或硬脂酸，液态脂质选用油酸或三油酸甘油酯；所获得的脂质纳米粒粒径小于700nm，包封率为40 90%，载药量为7 11%。上述积雪草酸脂质纳米粒制备方法，包括以下过程1.以无水乙醇为溶剂，加入脂质材料和积雪草酸(色谱纯度大于90%)，在(70±2)°C下水浴加热溶解，作为有机相，其中积雪草酸与脂质材料质量比为1:7 11，脂质材料的溶液浓度为7 llmg/mL。2.以水为分散相，加热至(70±2) °C。3.在400r/min机械搅拌下，将有机相注入至分散相中，无水乙醇与水的体积比为I 10 ;继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。下面根据附图和实施例详细描述本发明，本发明的目的和效果将变得更加明显。实施例1 :积雪草酸单硬脂酸甘油酯脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为 1:7)
精密称取积雪草酸5mg和单硬脂酸甘油酯(市售，纯度> 90%)35mg，(70±2) °C水浴加热下使溶于5mL无水乙醇，并作为有机相，脂质材料的溶液浓度为7mg/mL。以水为分散相，加热至(70±2)°C。400rpm机械搅拌下,将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min,得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节PH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. OOlg/mL的泊洛沙姆188的水溶液 中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为214±35nm (马尔文Zetaszier Nano-S900)； 药物包封率为44.1 ±4. 8% (包封率=纳米粒中的药物量(mg) /投药量(mg) X 100%)； 载药量为9. 8±0. 5% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末，
mg) X 100%)ο实施例2 :积雪草酸单硬脂酸甘油酯脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为 19)
精密称取积雪草酸5mg和单硬脂酸甘油酯(市售，纯度> 90%) 45mg，(70±2) °C水浴加热下使溶于5mL无水乙醇，并作为有机相，脂质材料的溶液浓度为9mg/mL。以水为分散相,加热至(70±2) °C,400rpm机械搅拌下,将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为208±24nm (马尔文Zetaszier Nano-S900)； 药物包封率为67. 6±5. 5% (包封率=纳米粒中的药物量(mg) /投药量(mg) X 100%)； 载药量为8. 6±0. 5% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末，
mg) X 100%)ο实施例3 :积雪草酸单硬脂酸甘油酯脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为 1:11)精密称取积雪草酸5mg和单硬脂酸甘油酯(市售，纯度> 90%) 55mg, (70±2) °C水浴加热下使溶于5mL无水乙醇，并作为有机相，脂质材料的溶液浓度为llmg/mL。以水为分散相，加热至(70±2) °C。400rpm机械搅拌下，将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为217±26nm (马尔文Zetaszier Nano-S900)；药物包封率为53.1 ±3. 9% (包封率=纳米粒中的药物量(mg) /投药量(mg) X 100%)；载药量为7. 1±0. 9% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末，
mg) X 100%)ο实施例4 :积雪草酸硬脂酸脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为1:9)精密称取积雪草酸5mg和硬脂酸(市售，纯度> 90%) 45mg, (70±2) °C水浴加热下使
溶于5mL无水乙醇,并作为有机相,脂质材料的溶液浓度为9mg/mL。以水为分散相,加热至(70±2) °C。400rpm机械搅拌下，将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节PH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为624±29nm (马尔文Zetaszier Nano_S900);药物包封率为53. 6±7. 9% (包封率=纳米粒中的药物量(mg) /投药量(mg) X 100%)；载药量为7. 5±0. 5% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末，
mg) X 100%)ο实施例5 :积雪草酸单硬脂酸甘油酯-油酸脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为1:9)
精密称取积雪草酸5mg、单硬脂酸甘油酯(市售，纯度> 90%) 36mg和液态脂质油酸9mg(市售，纯度> 95% ;油酸占脂质材料的质量比为20%)，(70±2) °C水浴加热下使溶于5mL无水乙醇，并作为有机相，脂质材料的溶液浓度为9mg/mL。以水为分散相，加热至(70±2)°C。400rpm机械搅拌下,将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min,得带乳光的池液。该池液放冷至室温后，用盐酸调节PH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为310± Ilnm (马尔文Zetaszier Nano-S900)；药物包封率为77. 9±4. 8% (包封率=纳米粒中的药物量(mg)/投药量(mg) X 100%)；载药量为8. 8±0. 7% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末,
mg) X 100%)ο实施例6 :积雪草酸单硬脂酸甘油酯-三油酸甘油酯脂质纳米粒的制备(主药与脂质材料质量比为1:9)
精密称取积雪草酸5mg、单硬脂酸甘油酯(市售，纯度> 90%) 36mg和液态脂质三油酸甘油酯9mg (市售，纯度> 95%;三油酸甘油酯占脂质材料的质量比为20%)，(70±2) °〇水浴加热下使溶于5mL无水乙醇，并作为有机相，脂质材料的溶液浓度为9mg/mL。以水为分散相，加热至(70±2) °C。400rpm机械搅拌下，将有机相注入至50mL分散相中，继续搅拌5min，得带乳光的浊液。该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心，沉淀用少量去离子水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒。该纳米粒可分散于质量体积比为
O.OOlg/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。经测定,该脂质纳米粒粒径为293±9nm (马尔文Zetaszier Nano_S900);
药物包封率为63. 3±5. 7% (包封率=纳米粒中的药物量(mg) /投药量(mg) X 100%)； 载药量为8. 2±0. 4% (载药量=纳米粒中的药物量(mg) /纳米粒总重(冻干粉末，
mg) X 100%)ο实施例7 :脂质纳米粒的大鼠在体肠灌流模型中药物吸收考察
按文献方法配制浓度为20 μ g/ml的酚红溶液(吴佩盛，等.大鼠肠道对左旋延胡索乙素及其消旋体的吸收差异研究[J].药学学报，2007，42 (5) :534-537.)。精密移取实施例2和实施例5的脂质纳米粒分散液适量，再分散于酚红溶液中，分别配制积雪草酸浓度为30 μ g/mL的纳米粒肠灌流液，同时以积雪草酸原料作为对照组(药液浓度30μ g/mL，酚红溶液配制)，37°C下放置备用。采用大鼠在体单向灌流吸收模型，考察大鼠小肠段的吸收情况。即取自然饮水条件下禁食过夜的SD大鼠，体重(200 ± 20 )g，随机分成3组，每组5只。腹腔注射戊巴比妥钠麻醉，背部固定。沿腹中线打开腹腔，小心分离出小肠段。于小肠段两端切口后，用预热至37 1生理盐水将肠内容物冲洗干净，再用空气将生理盐水排空，插管并结扎，接恒流泵。用已配制的肠灌流液(预热至37 °0以1.0 mL/min的流速冲洗50 min后，将流速调整为O. 2mL/min，开始计时，分别 于15 30、30 45、45 60、60 75、75 90、90 105、105 120,120 135分钟收集灌流液，分别测定各时间点的积雪草酸和酚红的浓度，并计算积雪草酸原料及其脂质纳米粒在各时间点的药物吸收百分率(吸收百分率=吸收量
/起始量X 100%)。通过肠腔有效吸收系数0°e//)、吸收速率常数Gf3)和药物吸收剂量分数(/；)评价药物的吸收特性(表I)。结果显示，两种脂质纳米粒的和均与原料存在显著差异(P < O. 05)，所制备的脂质纳米粒能明显提高肠道中药物的透过率。表1:不同脂质纳米粒大鼠小肠的和(n=5)
权利要求
1.一种可促进口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒，其特征在于，所述纳米粒包裹的药物为积雪草酸，载体为脂质材料，所述脂质材料包括固态脂质和液态脂质，固态脂质和液态脂质的质量配比为80 100:0 20 ;固态脂质选用单硬脂酸甘油酯或硬脂酸，液态脂质选用油酸或三油酸甘油酯；所获得的脂质纳米粒粒径小于700nm,包封率为40 90%,载药量为 7 11%。
2.—种权利要求1所述的积雪草酸脂质纳米粒的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)以无水乙醇为溶剂，加入脂质材料和色谱纯度大于90%积雪草酸，在(70±2)°〇下水浴加热溶解，并作为有机相，其中积雪草酸与脂质材料质量比为1:7 11，脂质材料的溶液浓度为7 llmg/mL ；(2)以水为分散相，加热至(70±2)V ；(3)在400r/min机械搅拌下，将有机相注入至分散相中，无水乙醇与水的体积比为 1:10 ;继续搅拌5min，得带乳光的浊液；该浊液放冷至室温后，用盐酸调节pH至1. 2，离心， 沉淀用少量水洗涤，再离心，倾弃上层液体得积雪草酸脂质纳米粒；该纳米粒可分散于质量体积比为O. 001g/mL的泊洛沙姆188的水溶液中，得积雪草酸的脂质纳米粒分散液。
全文摘要
本发明公开了一种可促口服吸收的积雪草酸脂质纳米粒及其制备方法，本发明以脂质材料为载体，积雪草酸为主药，通过溶剂扩散法制备得到。所获得的脂质纳米粒粒径小于700nm，包封率为40～90%，载药量为7～11%。该纳米粒可增加肠道药物吸收，提高口服生物利用度。
文档编号A61P13/12GK103040791SQ20131002061
公开日2013年4月17日 申请日期2013年1月18日 优先权日2013年1月18日
发明者王胜浩, 张雅雯, 尹丽娜, 梁泽华, 冯霞 申请人:浙江省医学科学院