专利名称：低剂量Ladostigil 用于神经保护的用途的制作方法
低剂量Ladostigi I用于神经保护的用途本申请是申请日为2006年12月8日，申请号为“200680046072.3”，发明名称为“低剂量Ladostigil用于神经保护的用途”的申请的分案申请。通过本申请，引用不同的公开物、公开的专利申请和专利。这些文件的公开物作为引用其全部内容结合至本文中，以便更详细地描述本发明所属领域的现状。
背景技术：
已提出氧化应激作为阿尔茨海默病(AD)的致病机理(P.F.Good等，Am.J.Pathol.(1996) 149:21)。氧化应激也可有助于各种障碍的神经元变性和死亡，所述障碍范围从缺血性脑卒中至阿尔茨海默病和帕金森病、年龄相关的黄斑变性、肌萎缩侧索硬化(M.P.Mattson等，J.Neuroscl.Res.(1997)49:681),在所述障碍中一氧化氮经由过氧亚硝基阴离子起主要的作用。已发展一些赋予神经保护作用的策略，所述策略靶向伴随神经元故障的复杂的神经化学过程。更老的方法(由 N.G.Wahlgren 评论，于 R.Green,“ International Review ofNeurobiology:Neuroprotective Agents and Cerebral Ischemia(神经生物学的国际评论:神经保护剂和脑缺血)”,Vol.40, Academic Press, 1997)包括关闭I丐离子通道(用I丐离子拮抗剂)、抑制谷氨酸的释放、拮抗NMDA和GABA激动并未导致任何显著的治疗效果。随着最近关注活性氧自由基(ROS)和氮氧阴离子基(nitrogen oxyanion species)的作用，可能的治疗焦点现在转向抗氧化剂和自由基清除剂(K.Hensley等,在“Neuroinflammation:mechanisms and management (神经炎症:机理和管理)”(Ed:P.L.Wood), Humana PressInc.，1997)。PCT申 请公开号W098/27055 (2001年10月16日公布的Chorev的美国专利号6，303, 650)公开了 R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N1-炔丙基-1-氨基茚满，也称为(3R) _3_(丙-2-炔基氨基)-2,3, - 二氢-1H-却-5-基乙基甲基氨基甲酸酯,所述PCT全部内容通过引用结合至本文。这种化合物被给予非专利名称为Ladostigil。已显示Ladostigil可选择性的在脑中抑制乙酰胆碱酯酶(ChE)和单胺氧化酶(M.Weinstock 等，a novel neuroprotective drug with cholinesterase and monoamineoxidase inhibitory activities for the treatment of Alzheimer' s disease (一种具有胆碱酯酶和单胺氧化酶抑制活性的新型神经保护药物TV3326用于阿尔茨海默疾病的治疗)，J.Neural Transm.Supp1.(2000)60:157-69)。照此，已建议Ladostigil 用于治疗人的抑郁症、注意缺陷性障碍(ADD)、注意缺陷和多动障碍(ADHD)、妥瑞氏综合症(Tourette' sSyndrome)、阿尔茨海默病和其他痴呆、神经损伤(neurotraumatic)障碍和记忆衰退(参见，例如2003年3月25日公布的Chorev等的美国专利号6，538，025)。已公开Ladostigil的下述剂量:长期施用52mg/kg以治疗大鼠模型中的痴呆与帕金森的并发症(Y.Sagi, Theneurochemical and behavioural effects of the novel cholinesterase—monoamineoxidase inhibitor,ladostigil,in response to L-dopa and L-tryptophan,in rats(新型胆碱酯酶-单胺氧化酶抑制剂Ladostigil在大鼠中对L-多巴和L-色氨酸的反应的神经化学和行为作用)，Br.J.Pharmacol.(2005) 146 (4):553-60);长期施用 17mg/kg以治疗在大鼠模型的高度焦虑和抑郁样的行为(T.Poltyrev等，Effect of chronictreatment with ladostigil(TV-3326)on anxiogenic and depressive-like behaviourand on activity of the hypothalamic-pituitary-adrenal axis in male and femaleprenatalIy stressed rats (用Ladostigil (TV-3326)长期治疗对在雄性大鼠和产前应激的雌性大鼠中的基因焦虑和抑郁样的行为以及丘脑-垂体-肾上腺皮质轴的活性的影响)，Psychopharmacology(2005) 181 (I):118-25);和长期施用 26mg/kg 以显不脑选择性的 MAO 抑制(分别在 M.Weinstock, Limited potentiation of blood pressure responseto oral tyramine by brain-selective monoamine oxidase A-B inhibitor, TV-3326in conscious rabbits (通过脑选择性的单胺氧化酶A-B抑制剂TV-3326在清醒兔中对口服色氨酸的反应有限的血压增强作用)，Neuropharmacology (2002) 43 (6):999-1005和M.ffeinstock,Effect ofTV3326,a novel monoamme-oxidase cholinesterase inhibitor,in rat models of anxiety and depression (新型单胺氧化酶胆喊酯酶抑制剂TV-3326在大鼠的焦虑和抑郁模型中的作用)，Psychopharmacology (2002) 60 (3):318-24)。也已显示Ladostigil可在培养的多巴胺能神经母细胞肿瘤SH-SY5Y细胞中抑制通过产生过氧亚硝基阴离子的试剂N-吗啉悉尼酮亚胺(Sin-1)诱导的细胞凋亡(Maruyama等，Ant1-apoptotic action of ant1-Alzheimer drug, TV3326[(N-propargyl)-(3R)-aminoindant-5-yl]-ethyl methyl carbamate, a novel cholinesterase-monoamine oxidaseinhibitor ( —种新型的胆碱酯酶-单胺氧化酶抑制剂抗阿尔茨海默药物TV-3326[(N-炔丙基)_(3R)_氨基茚满-5-基]-乙基甲基氨基甲酸酯的抗细胞凋亡作用)，NeuroscienceLetters(2003)341:233-236)。已知MAO抑制剂(MAOI)具有很多禁忌症，且其与高血压危机的高发生率相关(Physician' s Desk Reference,第 59 版.(2005), 1583-4 页)。已知ChE抑制剂会降低体温(Gordon，1994)。通过刺激在下丘脑的视前区的毒蕈碱受体，经外周血管舒张作用促进热量损失。已显示体温的下降与脑ChE抑制的程度成比例。本文公开了 Lidostigil能在一种剂量水平上用于减少氧化硝化应激的神经退行性效应，且该剂量水平不会导致与抑制单胺氧化酶(MAO)或胆碱酯酶(ChE)相关的显著的副作用。
发明内容
本发明提供 预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现、或延缓在患病的受治疗者中早期神经退行性疾病至更晚期的神经退行性疾病的进展的方法，所述方法包含对受治疗者施用一定量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-K -炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地预防这种疾病症状的出现或延缓这种疾病的进展。在一些实施方式中，所述对受治疗者施用的有效量可以是少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐。在一些实施方式中，所述方法可包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基却满或其盐。在一些实施方式中，所述方法可包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐可以是酒石酸盐。在一些实施方式中，所述受治疗者可以是人。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基却满的量可不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 0.46mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基却满的量可不超过 受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 2.9mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量可为IOmg/天-25mg/天。在一些实施方式中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量可为受治疗者的0.14mg/kg/天-0.42mg/kg/天。在一些实施方式中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量可为受治疗者的0.15mg/kg/天。在一些实施方式中，所述方法还可包含对受治疗者施用抗氧化剂。在一些实施方式中，所述神经退行性疾病可以是阿尔茨海默病、痴呆、轻度认知障碍、帕金森病、年龄相关的黄斑变性或肌萎缩侧索硬化。在一些实施方式中，所述疾病可以是痴呆，且所述痴呆是静态痴呆、老年性痴呆、早老性痴呆、进展性痴呆、血管性痴呆或路易体痴呆。在一些实施方式中，所述方法可延缓受治疗者早期神经退行性疾病至更晚期的神经退行性疾病的进展。在一些实施方式中，所述方法可预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现。本发明也提供减少患有氧化应激的受治疗者脑的氧化应激的方法，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地减少受治疗者脑的氧化应激。在一些实施方式中，所述方法可包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在一些实施方式中，所述方法可包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。
在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐可以是酒石酸盐。在一些实施方式中，所述受治疗者可以是人。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量可不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 0.46mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量可不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 2.9mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量可为受治疗者的IOmg/天-25mg/天。在一些实施方式中，所述氧化应激可发生在脑的海马区。在一些实施方式中，所述氧化应激可发生在脑的海马区的星形胶质细胞中。本发明也提供治疗患有轻度认知障碍的受治疗者的方法，所述方法包含对受治疗者施用一定量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在一些实施方式中，所述有效量可以是少于抑制单胺氧化酶的量或少于抑制胆碱酯酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在一些实施方式中，所述对受治疗者施用少于抑制单胺氧化酶的量或少于抑制胆碱酯酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐可有效地延缓MCI至阿尔茨海默病的进展。在一些实施方式中，所述方法可包含对受治疗者施用少于抑制单胺氧化酶的量和少于抑制胆碱酯酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在一些实施方式中，所述方法可包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。在一些实 施方式中，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐可以是酒石酸盐。在一些实施方式中，所述受治疗者可以是人。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基却满的量可不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 0.46mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基却满的量可不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。在一些实施方式中，所述盐可以是酒石酸盐，且所述盐的相应量可不超过受治疗者的 2.9mg/kg/ 天。在一些实施方式中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量可为受治疗者的IOmg/天-25mg/天。本发明也提供药物组合物，其以包含最多达25mg量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其相应量的盐和药学上可接受的载体的单位剂型。在一些实施方式中，所述药物组合物可包含以10mg_25mg的量的R(+)_6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其相应量的药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。在一些实施方式中，所述的盐可以是酒石酸盐。
图1:双侧脑室内(icv)注射`STZl周后Ladostigil对在CAl区3个海马区域的星形胶质细胞的硝基酪氨酸免疫反应性的影响。*表明CSF和STZ+Ladostigil的结果显著不同(P < 0.01)。图2:a)icv STZ后7天脑切片的图显示在含有不同的小胶质细胞和星形胶质细胞激活的插管渗透部位的邻近处的三个区。b)小胶质细胞:y区i)小胶质细胞含有缺少突起的圆形胞体；ii)含有多形状的胞体和各种纤维状突起的小胶质细胞；iii)静止的小胶质细胞。c)星形胶质细胞:区i)没有星形胶质细胞；ii)含有伸长的突起但没有胞体的星形胶质细胞；iii)含有增厚突起和经填充的胞体的反应性星形胶质细胞。显示b)和c)的区域框与d)和e)比分别具有更高的放大倍数。在b)和c)中校正条=100 μ m,而在d)和e)中为20 μ m。图3:所述区的小胶质细胞和星形胶质细胞的活性的定量，如图2所示。a)区i)和ii)的小胶质细胞亚型的计数。b)跨过横截面的创面占区i)、ii)和iii)的％。区i)中没有星形胶质细胞的面积在注射STZ的大鼠中增加。与其他组显著不同，#P < 0.01，< 0.05。图4:在插管渗透部位和侧脑室边界的三个其他脑区中具有NT表达的星形胶质细胞的定量。CP =插管渗透部位；CC =胼胝体；LS =外侧隔；MS =内侧隔；HP =海马CAl区。与其他组显著不同，*P < 0.01。图5:在海马的反应性星形胶质细胞中的NT表达的共聚焦图像，包括在激活的星形胶质细胞中的NT免疫反应性的定位。图6:Ladostigil在经icv STZ诱导的Morris水迷宫中对空间记忆缺陷的影响。a)试验I ;b)试验2 ;与其他组显著不同，*P < 0.05。图7:在Morris水迷宫(MWM)中年轻和年老大鼠的空间学习的比较。通过lmg/kg的Ladostigil预防年老大鼠的学习缺陷；a)显示在两个日试验中的任一个的逃避潜伏期。显示在年老的未治疗的大鼠中逃避学习的日-日差异性更大，这通过用Ladostigil长期治疗来预防；b)两个日试验的平均逃避潜伏期。
具体实施例方式本发明提供预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现、或延缓在患病的受治疗者中早期神经退行性疾病至更晚期的神经退行性疾病的进展的方法，所述方法包含对受治疗者施用一定量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-K -炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地预防这种疾病症状的出现或延缓这种疾病的进展。在一个实施方案中，所述对受治疗者施用的有效量是R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量。在一个实施方案中，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐。在另一个实施方案中，所述方法包含施用R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。在该方法的另一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐是 酒石酸盐。在该方法的再一个实施方案中，给药是急性施用。在该方法的又一个实施方案中，所述受治疗者是人。在对人急性施用的方法的另一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基,N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量不超过受治疗者的1.7mg/kg/天,或其盐的相应量。在对人急性施用的方法的又一个实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.lmg/kg/天。在对人急性施用的方法的再一个实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基,N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天,或其盐的相应量。在对人急性施用的方法的另一个实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。在该方法的进一步实施方案中，所述施用是长期施用。在该方法的更进一步实施方案中，所述受治疗者是人。在对人的方法的又进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在对人施用的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的0.46mg/kg/天。在对人施用的方法的更进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。
在对人施用的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。在另一个实施方案中，所述施用的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满或其盐的量为受:治疗者的IOmg/天_25mg/天。IOmg/天_25mg/天是指该范围内所有百分之一、十分之一和整数单位量作为本发明的部分特异性地公开。因而，10.01,10.02...24.99 ；10.1,10.2...24.9 ;和11、12...24mg/天单位量都包括于本发明的实施方案中。在该方法的另一个实施方案中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.14mg/kg/天-0.42mg/kg/天。0.14mg/kg/天-0.42mg/kg/天是指该范围内所有百分之一和十分之一单位量作为本发明的部分特异性地公开。因而，0.15,0.16,0.17...0.41mg/kg/天单位量都包括于本发明的实施方案中。在该方法的又一个实施方案中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.15mg/天。在该方法的再一个实施方案中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.5mg/kg、受治疗者的0.784mg/kg、受治疗者的lmg/kg、受治疗者的1.5mg/kg、受治疗者的2mg/kg、受治疗者的3mg/kg或受治疗者的4mg/kg。 在另一个实施方案中，该方法进一步包含对受治疗者施用抗氧化剂。在该方法的另一个实施方案中，所述神经退行性疾病是阿尔茨海默病、痴呆、轻度认知障碍、帕金森病、年龄相关的黄斑变性或肌萎缩侧索硬化。在治疗痴呆的方法的一个实施方案中，所述痴呆包括静态痴呆、老年性痴呆、早老性痴呆、进展性痴呆、血管性痴呆或路易体痴呆(Lewy body dementia)。在一个实施方案中，该方法延缓受治疗者的早期神经退行性疾病至更晚期的神经退行性疾病的进展。在一个实施方案中，该方法预防易患神经退行性疾病的受治疗者的神经退行性疾病症状的出现。本发明也提供治疗易患神经退行性疾病的受治疗者的方法，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在一个实施方案中，该方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在另一个实施方案中，该方法包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐。所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐可以是酒石酸盐。在该方法的进一步实施方案中，所述受治疗者是人。在对人的方法的更进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在对人的方法的又进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的0.46mg/kg/天。在对人的方法的更进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。在对人的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。本文公开的其他量也可以用于所述方法中。在该方法的另一个实施方案中，所述施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满或其盐的量为受:治疗者的IOmg/天_25mg/天。10mg/天-25mg/天是指该范围内所有百分之一、十分之一和整数单位量作为本发明的部分特异性地公开。因而，10.01,10.02...24.99 ；10.1,10.2...24.9 ;和11、12...24mg/天单位量都包括于本发明的实施方案中。在该方法的再一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.5mg/kg、受治疗者的0.784mg/kg、受治疗者的lmg/kg、受治疗者的1.5mg/kg、受治疗者的2mg/kg、受治疗者的3mg/kg或受治疗者的4mg/kg。在该方法的另一个实施方案中，所述神经退行性疾病是阿尔茨海默病、痴呆、轻度认知障碍、帕金森病、年龄相关的黄斑变性或肌萎缩侧索硬化。在治疗痴呆的方法的一个实施方案中，所述痴呆包括静态痴呆、老年性痴呆、早老性痴呆、进展性痴呆、血管性痴呆或路易体痴呆。在治疗痴呆的方法的一个实施方案中，所述痴呆包括静态痴呆、老年性痴呆、早老性痴呆、进展性痴呆或血管性痴呆。本发明也提供减少患有氧化应激的受治疗者脑的氧化应激的方法，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地减少受治疗者脑的氧化应激。在一个实施方案中，该方法包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在另一个实施方案中，该方法包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。在该方法的另一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐是酒石酸盐。在该方法的再一个实施方案中，所述施用是急性施用。在该方法的又一个实施方案中，所述受治疗者是人。在对人急性施用的方法的另一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基,N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量不超过受治疗者的
1.7mg/kg/天,或其盐的相应量。
在对人急性施用的方法的又一个实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.lmg/kg/天。在对人急性施用的方法的再一个实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基,N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天,或其盐的相应量。在对人急性施用的方法的另一个实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。在该方法的进一步实施方案中，所述施用是长期施用。在该方法的更进一步实施方案中，所述受治疗者是人。在对人长期施用的方法的又进一步实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天,或其盐的相应量。在对人长期施用的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的0.46mg/kg/天。在对人长期施用的方法的更进一步实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量不超过受治疗者的
2.3mg/kg/天,或其盐的相应量。在对人长期施用的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。在另一个实施方案中，所述施用的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满或其盐的量为受:治疗者的IOmg/天_25mg/天。IOmg/天_25mg/天是指该范围内所有百分之一、十分之一和整数单位量作为本发明的部分特异性地公开。因而，10.01,10.02...24.99 ；10.1,10.2...24.9 ;和11、12...24mg/天单位量都包括于本发明的实施方案中。在该方法的再一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的有效地治疗受治疗者的量为受治疗者的0.5mg/kg、受治疗者的0.784mg/kg、受治疗者的lmg/kg、受治疗者的1.5mg/kg、受治疗者的2mg/kg、受治疗者的3mg/kg或受治疗者的4mg/kg。在另一个实施方案中，所述氧化应激发生在脑的海马区。在另一个实施方案中，所述氧化应激发生在脑的海马区的星形胶质细胞中。本发明也提供治疗患有轻度认知障碍的受治疗者的方法，所述方法包含对受治疗者施用一定量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。本发明也提供治疗患有轻度认知障碍的受治疗者的方法，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制单胺氧化酶的量或少于抑制胆碱酯酶的量的R (+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在该方法的一个实施方案中，所述少于抑制单胺氧化酶的量或少于抑制胆碱酯酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐有效地延缓MCI至阿尔茨海默病的进展。
在另一个实施方案中，所述方法包含对受治疗者施用少于抑制单胺氧化酶的量或少于抑制胆碱酯酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。在另一个实施方案中，所述方法包含施用R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。在该方法的另一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐是酒石酸盐。在该方法的又一个实施方案中，所述受治疗者是人。在对人的方法的又进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。在对人的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的0.46mg/kg/天。在对人的方法的更进一步实施方案中，所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。在对人的方法的再进一步实施方案中，所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。在另一个实施方案中，所述施用的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满或其盐的量为受:治疗者的IOmg/天_25mg/天。IOmg/天_25mg/天是指该范围内所有百分之一、十分之一和整数单位量作为本发明的部分特异性地公 开。因而，10.01,10.02...24.99 ；10.1,10.2...24.9 ;和11、12...24mg/天单位量都包括于本发明的实施方案中。在该方法的再一个实施方案中，所述R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.5mg/kg、受治疗者的0.784mg/kg、受治疗者的lmg/kg、受治疗者的1.5mg/kg、受治疗者的2mg/kg、受治疗者的3mg/kg或受治疗者的4mg/kg。 本发明也提供一种药物组合物，其以包含最多达25mg量的R (+) _6_ (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其相应量的药学上可接受的盐和药学上可接受的载体的单位剂型。在一个实施方案中，该方法包含10_25mg量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满或其相应量的药学上可接受的盐和药学上可接受的载体。在该方法的再一个实施方案中，所述药学上可接受的盐是酒石酸盐。本发明也提供一定量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐在制备一种药物中的应用，所述药物用于预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现、或延缓早期神经退行性疾病至更晚期的神经退行性疾病的进展。在该药物中R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量有效地预防所述疾病症状的出现、或延缓所述疾病的进展。R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量也可以是少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量。本文公开的其他实施方案也可以在上下文的这种应用中实现。
本发明进一步提供一定量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐在制备一种药物中的应用，所述药物用于减少患有氧化应激的受治疗者脑的氧化应激。本文公开的在该药物中包括所述量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的其他实施方案也可以在上下文的这种应用中容易地实现。本发明另外提供一定量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐在制备一种药物中的应用，所述药物用于治疗患有轻度认知障碍的受治疗者的轻度认知障碍。本文公开的在该药物中包括所述量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的其他实施方案也可以在上下文的这种应用中容易地实现。化合物R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基_1_氨基茚满可以制备为特别有用于预防或治疗神经退行性疾病或氧化应激的药物组合物。例如，该组合物也可以包含用于治疗神经退行性疾病的辅助治疗剂或其它抗氧化剂。该组合物也可以包含Lidostigil或其药学上可接受的盐，与药学上可接受的载体和/或赋形剂。单位剂型的剂量可以在例如l_25mg的范围中，优选5-20mg。在本发明的实施例中，药学上可接受的盐包括但不限于甲磺酸盐、马来酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苯甲酸盐、乙酸盐、磷酸盐和硫酸盐。所述组合物可以制备为可口服、胃肠道外、直肠或透皮施用的药物。用于口服施用合适的形式包括片剂、压制或包衣的丸剂、糖衣丸、囊剂、硬或软明胶胶囊、舌下片、糖浆和悬浮液、用于胃肠道外施用(本发明提供包括水性或非水性溶液或乳剂的安瓿和瓶)、用于直肠施用(提供具有亲水性或疏水性运载体的栓剂)、和局部应用作为软膏和透皮递送(提供如本领域已知的合适的递送系统)。例如在1975年9月2日公布的Robert的美国专利号3，903, 297中描述了可用于配制本发明口服剂型的药学 上可接受的载体和赋形剂的具体实例。用于制备在本发明中有用的剂型的技术和组合物在下述的引用中描述:7Modern Pharmaceutics,第9和10章(Banker 和 Rhodes,编者，1979) !Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets (Lieberman等，1981) ；Ansel, Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms2nd Edition(1976)；Remington' s Pharmaceutical Sciences,第 17 版(Mack Publishing Company, Easton,Pa.,1985) ；Advances in Pharmaceutical Sciences(David Ganderton, Trevor Jones 等编者，1992) ；Advances in Pharmaceutical Sciences 第 7 卷(David Ganderton, TrevorJones,James McGinity,Eds.,1995) ；Aqueous Polymeric Coatings for PharmaceuticalDosage Forms(Drugs and the Pharmaceutical Sciences, Series36(James McGinity,编者，1989) !Pharmaceutical Particulate Carriers:Therapeutic Applications:Drugsand the Pharmaceutical Sciences,第61 卷(Alain Rolland,编者，1993) ；Drug Deliveryto the Gastrointestinal Tract(Ellis Horwood Books in the Biological Sciences.Series in Pharmaceutical Technology ；J.G.Hardy, S.S.Davis, Clive G.Wilson 编者)；Modern Pharmaceutics Drugs and the Pharmaceutical Sciences,第 40 卷(GilbertS.Banker, Christopher T.Rhodes 等编者)。片剂可包含合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂、引流剂(flow-1nducing agent)和熔剂。例如，对于片剂或胶囊剂量单位形式的口服施用，该活性药物组分能与如下述的口服、非毒性的、药学上可接受的、惰性载体组合:乳糖、明胶、琼脂、淀粉、蔗糖、葡萄糖、甲基纤维素、磷酸氢钙、硫酸钙、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素等。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然鹿糖如葡萄糖或β -乳糖、玉米淀粉、天然和合成胶(如阿拉伯胶、西黄蓍胶或海藻酸钠)、聚维酮、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠、硬脂酸、硬脂富马酸钠、滑石粉等。崩解剂包括但不限于淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶、交联羧甲基纤维素钠、羟乙酸淀粉钠等。如本文所用，“药学上可接受的”载体是适用于对人或/或动物施用没有过度的不良副作用(例如毒性、刺激性和过敏反应)而相应的具有合理的利益/风险比率的载体。如本文所用，“神经退行性疾病”是指退变发生在神经系统的灰质或白质、或两者中的疾病。因而，这种疾病可以是糖尿病神经病变、老年痴呆、阿尔茨海默病、轻度认知障碍(MCI)、帕金森病、面神经(Bell)麻痹、青光眼、亨廷顿舞蹈病(Huntington' schorea)、肌萎缩侧索硬化(ALS)、癫痫持续状态、非动脉炎性视神经病变、椎间盘突出症、维生素缺乏症、朊病毒病如克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、腕管综合症、与各种疾病相关的周围神经病变(包括但不限于尿毒症、卩卜啉病、低血糖、Sjorgren Larsson综合征、急性感觉神经病变、慢性共济失调性神经病变、胆汁性肝硬化、原发性淀粉样变性、阻塞性肺疾病、肢端肥大症、吸收不良综合征、真性红细胞增多症、IgA和IgG丙种球蛋白病(gammapathies))、不同药物(如甲硝唑)和毒素(例如乙醇或有机磷)的并发症、腓骨肌萎缩症、共济失调性毛细血管扩张症、Friedreich共济失调、淀粉样多发性神经病、肾上腺脊髓神经病变、巨轴索神经病、Refsum病、Fabry病和脂蛋白血症。如本文所用，“易患”神经退行性疾病或脑的氧化应激可以是指遗传的、家族性的或化学诱导的倾向。如本文所用，“少于单胺氧化酶抑制的量”是指对受治疗者在急性施用时导致不超过25% MAO抑制、或对受治疗者长期施用期间导致不超过30% MAO抑制的量。如本文所用，“少于胆碱酯酶抑制的量”是指对受治疗者在急性施用时导致不超过30% ChE抑制、或对受治疗者长期施用期间导致不超过30% ChE抑制的量。在该描述的方法中，所述施用可以是周期性或规律的。因而，所述施用可以在指定的时期以期望量的单一单位剂量施用，例如每天一次、每周一次或每月一次等，或所述施用可以由在所述时期加入最多达期望量的多剂量组成。例如，施用可以是每天、或每5天、每周、每2周、每3周、每月、每2月、每3月、每6月或每年一次、两次、三次或四次。如本文所用，“急性”施用是指对受治疗者单次施用。如本文所用，“长期”施用是指对受治疗者超过一次施用，每次施用是在前一次施用从受治疗者中已完全清除之前发生。在一个实施方案中，长期施用可以是以规律的间隔七次连续地施用，例如每天。如本文所用，“患有”神经退行性疾病或脑的氧化应激是指已经诊断受治疗者有神经退行性疾病或脑的氧化应激。
因而，本发明提供用于延缓或预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现或发展的方法、以及用于延缓或抑制患有早期这种疾病的受治疗者中这种疾病的进展的方法。实验细节单胺氧化酶(MO)抑制检验法ΜΑ0(ΜΑ0-Α和ΜΑ0-Β)抑制的水平可以通过包括那些下面详述的常规方法来检测。体内通过皮下(s.c)或腹腔内(1.p.)注射或口服(P.0.)施用待测试的所述化合物治疗大鼠和小鼠。在药物治疗后约2小时将动物断头，并检测在脑、肠和/或肝中MAO的活性。MAO活性表示为酶活性相对于仅施用运载体的对照组的百分比。从抑制曲线计算产生50%MAO抑制有效的剂量(ED5tl值)。使用Ladostigil的重复治疗(例如每天用药，持续7天)可以用于计算通过长期施用达到的抑制。在Ladostigil酒石酸盐的情况下，这种方法用于检测最多20.4mg/kg的Ladostigil碱(急性施用)和最多4.5mg/kg的Ladostigil碱(长期施用)的量导致不超过25% MAO抑制(ΜΑ0-Α和MAO-B都抑制)。体外MAO酶从大鼠脑在0.3M蔗糖中的匀浆中获得，所述匀浆在600g离心15分钟。上清液适当地在0.05M磷酸缓冲液中稀释，并用测试化合物的连续稀释液于37°C预培养20分钟。然后加入14C-标记的底物(2-苯乙胺，以下称为PEA ;5_羟色胺，以下称为5-HT)，且该培养再持续20分钟(PEA)、或30-45分钟(5-HT)。所用的底物浓度为50 μ M (PEA)和lmM(5-HT)。在PEA的情况下，选择酶浓度以至不超过10%的底物在反应过程期间被代谢。在通过液体闪烁计数检测之前，脱氨基的产物经萃取进入含有0.6% (w/v)2，5-二苯基噁唑(ppo)的甲苯-乙酸乙酯(I: lv/v)。洗脱液的放射性表明由于MAO活性而生成中性和酸性代谢物。样品的MAO活性表示为不含抑制剂时在减去适当的空白值后对照活性的百分t匕。使用PEA作为底物检测的活性是指作为ΜΑ0-Β，而使用5-HT检测时作为ΜΑ0-Α。由抑制曲线计算产生底物代谢的50%抑制的抑制剂浓度(IC5tl)。乙酰胆碱两酯酶(ChE)抑制法ChE抑制的水平可以通过包括那些下面详述的常规方法来检测。並也ChE抑制的体内测量与MAO抑制的体内测量类似，除了食蟹猴被治疗、以及对于脑、血浆和红细胞ChE抑制、组织被检测。在Ladostigil酒石酸盐的情况下,该方法用于检测最多7.0mg/kgLadostigil碱的量(急性或长期施用)导致不超过30%抑制。体外人红细胞乙酰胆碱酯酶(类型XIII，Sigma Israel)在lU/mL含有在磷酸缓冲盐(pH8)中的Triton(l% )和牛血清蛋白(0.05% )的母液中制备。用3_5个不同浓度的测试化合物(三份)于37°C培养所述酶(0.05U)持续从15分钟至60分钟。然后加入底物硫代乙酰胆碱(0.075M)和5，5’- 二硫代双(2-硝基苯甲酸)(DTNB，0.01M)，产生黄色产物的底物的水解速率由分光光度测量法在412nm监控(Ellman等，Biochem Pharmacol.(1961)7:88-95)。通过与在不含药物时酶抑制ChE 的百分比比较，计算经每个药物的浓度抑制ChE的百分比。然后计算在峰值活性时抑制ChE达50%每个药物的浓度(IC5tl)。将用于动物的剂量转化为适用于人使用的剂量的标准方法是公开可得到的(Guidance for Industry-Estimating the Maximum Safe Starting Dose in InitialClinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers (工业指南:评价在成年健康的志愿者中治疗药物初步临床试验的最大安全起始剂量)，http://www.fda.gov/cder/guidance/5541fnl.doc, U.S.D印t.HHS/FDA/CDER (July2005))。这种剂量转化是物种依赖性的。物种间剂量转化包含为推导人使用的剂量将该动物剂量除以标准倍数。基于所述动物物种对于平均60kg的人，用于转化成所述人等效剂量的标准倍数是例如小鼠
12.3，大鼠6.2，食蟹猴3.1。或者，所述人等效剂量(HED)可以由使用下述通式获得:HED =动物剂量(mg/kg) * (动物体重kg/人体重kg) 0.33。动物测试已知链脲佐菌素(“STZ”)能导致胰腺β细胞的氧化应激，当胃肠道外注身寸(Takasu 等，Streptozotocin-and alloxan-1nduced H202generation and DNAfragmentation in pancreatic islets (在胰岛中链脲佐菌素和四氧卩密唳诱导的H2O2生成和DNA断裂)，Diabetes (1991) 40:1141-5)。通过本发明人以往的研究显示单次双侧icv注射STZ导致情景记忆的损伤，如通过2周后物体识别试验所测量，其中所述情景记忆的损伤在8周后仍存在。在3-8周特别是在3次icv注射STZ后，可见记忆衰退(Lannert和Hoyer, 1998)，且通过用抗氧化剂、褪黑素和白藜芦醇(发挥在它们的病原学中ROS的作用)长期治疗可以减少记忆衰退(Sharma和Gupta, 2001, 2002)。通过本发明人以往的研究也显示I周后STZ诱导在海马的始层中的氧化硝化应激，以及单次STZ注射减少在穹窿和胼胝体中`的低分子量抗氧化剂的浓度。大鼠侧脑室(icv)注射链脲佐菌素(STZ)后，在详细的组织学检查中发现小胶质细胞活化发生在离散区域(Shoham等，2003)。lev STZ导致在海马区中和在STZ注射部位的星形胶质细胞和小胶质细胞的激活，其导致一氧化氮(NO)以及最终活性氧物质(O2-和0H-)的产生(Simmons等，Induction of nitric oxide synthase in glial cells (在胶质细胞中引入一氧化氮合酶)，J.Neurochem.(1992) 59:897-905)。激活的星形胶质细胞表达兴奋性氨基酸受体、摄取谷氨酸，以及也处于氧化应激的危险中(Ouyang和Giffard, 2004)。因而,在海马区中的氧化应激的常见来源可以是涉及细胞内钙离子调节不良的过量的兴奋性刺激(谷氨酸-GABA失衡)，所述细胞内钙离子调节不良能导致细胞内抗氧化防御系统的破坏(Lipton等,Excitatory amino acids as afinal common pathway for neurological disorders(兴奋性氨基酸作为神经障碍的最终共同途径)，N.Engl.J.Med.(1994) 330:613-22)。激活(随后星形胶质细胞损失)能够导致胶质细胞至神经元信号引导的调节不良(Kielian 等，Effects of neuroinflamination on glia-glia gap junctionalintercellular communication:a perspective (神经炎症对胶质细胞-胶质细胞的细胞间隙连接通讯的影响:前景)，Neurochem.1nt.(2004)45:429-36)。这可通过延缓在皮质和海马的有髓神经元中的冲动传导而诱导记忆衰退，且最终导致海马的胆碱能传递的减少。因而，诱导STZ的氧化应激被选择作为测试Ladostigil的抗氧化潜力的模型。实施例1
根据大学委员会动物保护机构和基于美国国家卫生研究院的指导方针，针对体重为320_340g、年龄为4个月的雄性Sprague-Dawley大鼠(Harlan, Jerusalem),进行所述研究。手术之前于21±1°C周围温度和12小时光照周期(在0700hr光照)在动物房中，这些大鼠被关养I周。体重为320_340g的雄性Sprague-Dawley大鼠(30只)由腹腔内(1.P.)注射
0.3ml/kg Equithesin麻醉。在2μ I人工脑脊液(CSF)中的STZ(0.5mg)被注射至20只大鼠的每个侧脑室。Icv注射的立体定向坐标是:前齒水平的后0.9mm、外侧1.8mm、腹侧
3.8mm。对照大鼠(10只)接受双侧注射2 μ I人工CSF。一半注射STZ的大鼠在icv STZl周前或I周后以lml/kg的体积口服给予Ladostigil (lmg/kg)。其余大鼠接受lml/kg的水。将大鼠用戊巴比妥钠麻醉、经心灌流，然后脑经处理用于如下面描述的免疫细胞化学。组织病理学在冷冻箱中将所述脑切片成30 μ m厚的薄片，并用下述的标记物经免疫化学法染色:硝化/氧化应激的标记物硝基酪氨酸用Upstate公司(Lake Placid, NY, USA)的稀释成1: 100的兔抗硝基酪氨酸染色。星形胶质细胞激活的标记物-胶质纤维酸性蛋白质(GFAP)用小鼠抗体-Sigma 公司(Rehovot，Israel)的稀释成 I: 500,1: 250 的克隆 GA-5染色。对于兔抗体，与Chemicon公司(Temecula, CA,USA)的辣根过氧化酶共轭的二次驴抗兔抗体稀释成1: 200。对于小鼠抗GFAP, 二次羊抗小鼠与Sigma公司(Rehovot, Israel)的辣根过氧化酶共轭，且稀释成1: 100。如Shoham等所描述，通过与二氨基联苯胺和过氧化氢反应获得显色，Shoham 等，Intracerebroventricular injection of streptozotocincauses neurotoxicity to myelin that contributes to spatial memory deficits inrats (侧脑室注射链脲佐菌素导致对髓鞘的神经毒性，这有助于大鼠的空间记忆衰退)，Exp.Neurol.(2003) 184:1043_52。通过亮视野显微镜检查获得图像，且通过用分析软件光密度测量的方式进行定量评价适当的标记物。共聚焦显微镜研究在星形胶质细胞的激活和氧化应激之间的联系脑切片用兔抗NT和小鼠抗GFAP培养。代替DAB-过氧化酶显色反应，二抗与异硫氰酸荧光素(FITC) (NT)或异硫氰酸罗丹明(RITC) (GFAP)共轭。用图像分析定量NT-免疫反应性星形胶质细胞可见于海马的始层、辐射层和海马槽。测量为200 μ mX 100 μ m的矩形域由包含每个大鼠的海马的两个切片中从这些区域取样。计算在硝基酪氨酸免疫反应性可见的百分比面积，并求两个切片的平均值。统计分析通过单变量ANOVA分析光密度数据，随后进行Duncan事后检验。表 1*
权利要求
1.R (+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐在制备用于预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现的药物中的用途，所述药物包含有效预防所述疾病症状出现或延缓所述疾病进展的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，所述有效预防所述疾病症状出现或延缓所述疾病进展的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐是少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6_(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐。
2.权利要求1所述的用途，其包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐。
3.权利要求1-2任一项所述的用途，其中所述药物中的活性成分是R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐。
4.权利要求3所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的盐是酒石酸盐。
5.权利要求1-4任一项所述的用途，其中所述受治疗者是人。
6.权利要求5所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基却满的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。
7.权利要求6所述的用途，其中所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的 0.46mg/kg/ 天。
8.权利要求5所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基却满的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。
9.权利要求8所述的用途，其中所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的 2.9mg/kg/ 天。
10.权利要求5所述的用途，其中所施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基却满或其盐的量为IOmg/天_25mg/天。
11.权利要求5所述的用途，其中所施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.14mg/kg/天-0.42mg/kg/天。
12.权利要求11所述的用途，其中所施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐的量为受治疗者的0.15mg/kg/天。
13.权利要求1-12任一项所述的用途，其中将抗氧化剂进一步施用至受治疗者。
14.权利要求1-13任一项所述的用途，其中所述神经退行性疾病是阿尔茨海默病、痴呆、轻度认知障碍、帕金森病、年龄相关的黄斑变性或肌萎缩侧索硬化。
15.权利要求14所述的用途，其中所述疾病是痴呆，且所述痴呆是静态痴呆、老年性痴呆、早老性痴呆、进展性痴呆、血管性痴呆或路易体痴呆。
16.R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)_N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐在制备用于减少患有氧化应激的受治疗者脑的氧化应激的药物中的用途，所述药物包含少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地减少受治疗者脑的氧化应激，其中所述药物预防在易患神经退行性疾病的受治疗者中神经退行性疾病症状的出现。
17.权利要求16所述的用途，其中所述药物包含少于抑制胆碱酯酶的量和少于抑制单胺氧化酶的量的R(+) -6- (N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地治疗受治疗者。
18.权利要求16或17所述的用途，其中所述药物包含R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酸氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐。
19.权利要求18所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满的盐是酒石酸盐。
20.权利要求16-19任一项所述的用途，其中所述受治疗者是人。
21.权利要求20所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制单胺氧化酶的量不超过受治疗者的0.37mg/kg/天，或其盐的相应量。
22.权利要求21所述的用途，其中所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的0.46mg/kg/天。
23.权利要求22所述的用途，其中所述R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N'-炔丙基-1-氨基茚满的少于抑制胆碱酯酶的量不超过受治疗者的2.3mg/kg/天，或其盐的相应量。
24.权利要求23所述的用途，其中所述盐是酒石酸盐，且所述盐的相应量不超过受治疗者的2.9mg/kg/天。
25.权利要求20所述的用途，其中所施用的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-氨甲酰氧基)-N' _块丙基-1-氨基却满或其盐的量为受:治疗者的IOmg/天_25mg/天。
26.权利要求16-25 任一项所述的用途，其中所述氧化应激发生在脑的海马区。
27.权利要求26所述的用途，其中所述氧化应激发生在脑的海马区的星形胶质细胞中。
全文摘要
本发明提供预防受治疗者的神经退行性疾病或受治疗者脑的氧化应激的方法，其包含对受治疗者施用少于抑制胆碱酯酶的量或少于抑制单胺氧化酶的量的R(+)-6-(N-甲基，N-乙基-1-氨甲酰氧基)-N′-炔丙基-1-氨基茚满或其盐，其有效地预防受治疗者的神经退行性疾病或氧化应激。
文档编号A61P25/16GK103142570SQ20131004939
公开日2013年6月12日 申请日期2006年12月8日 优先权日2005年12月9日
发明者玛塔·温斯塔克-罗辛 申请人:耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展公司, 技术研究及发展基金有限公司