专利名称：一种中药的应用及其筛选方法和抗衰老药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种中药的应用及其筛选方法和抗衰老药物。
背景技术：
随着年龄的增长，机体弹性的丧失引起皮肤皱纹的增加是衰老的典型特征。因此延缓皮肤衰老的分子筛选可以筛选能提高机体弹性的分子来实现。现在已知，机体弹性主要由空间上高度有序交联的弹性纤维提供，其中弹性纤维的交联度是评估弹性的主要指标。早于2004及2006年，有研究发现，赖酰基氧化酶I (Lysyl oxidase-like I, LOXLl)是特异地维护机体弹性纤维的发育及其更新的关键因子。没有LOXLl直接特异性地影响弹性纤维的交联形成，进而导致一系列的动态结缔组织的病变，包括皮肤松弛、肺气肿、心血管异常、血管增生 诱发的视网膜黄斑退变、性器官脱垂及尿失禁。进一步研究发现，随着组织器官的老化，LOXLl的水平大大降低，并伴随着弹性纤维交联度的下降及弹性蛋白单体无序堆积的增加。这些发现揭示通过增强LOXLl蛋白的表达水平或活性能延缓生物有机体胞外基质的衰老过程(Nature Genetics 2004 (36):178 ；Am J Path 2006(168): 519 ； IOVS2008 (49):2599 ；W0/2005/069975, US Patent 7255856, US Patent 7255857, Europeanpatent 1706139)。但是，现有技术还有没有出现一种药物筛选方法，能用于筛选出对LOXLl蛋白的表达水平或活性有效促进作用的物质，并将此类物质用于制备抗衰老的药物、化妆品等。另夕卜，现有技术中用于抗衰老的药物，其活性成分采用了一定量的化学合成材料。这些化学合成材料对皮肤都有一定刺激性，不同程度的毒副作用。而且，并不能从基因水平上解决皮肤衰老问题。因此，现有技术还有待于改进和发展。
发明内容
鉴于上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种中药的应用及其筛选方法和抗衰老药物，旨在解决现有抗衰老药物问题。本发明的技术方案如下:
一种中药的应用，其中，所述中药具有进LOXLl基因转录的作用，将所述中药用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。所述的中药的应用，其中，所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。一种抗衰老药物，其中，所述抗衰老药物中含有如上所述的中药的抽提物。所述的抗衰老药物，其中，所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。一种筛选药物的方法，其中，用于筛选具有进LOXLl基因转录的作用的药物，所述筛选药物的方法包括以下步骤:研磨粉碎中药药材，以乙醇回流法抽提数次，过滤并合并滤液，冷冻干燥；将抽提物粉末加入到生理盐水中，制备抽提物溶液，加入到待测细胞培养体系中，培养24-48小时之后，通过实时PCR的方法检测LOXLl mRNA水平，并通过免疫印迹实验检测LOXLl蛋白水平。所述筛选药物的方法，其中，所述筛选方法，还包括以下步骤:
将培养过的待测细胞经过IN盐酸110°C消化过夜后，检测锁链素的含量，通过锁链素的含量确定弹性纤维交联度是否提高。有益效果:本发明中提供了所述的中药的应用，所述中药具有促进LOXLl基因转录的作用，将所述药物用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。所述中药具有提高皮肤弹性，延缓皮肤衰老的作用。而且本发明还提供了一种促进LOXLl基因转录的药物的筛选方法，筛选出具有促进胞外基质交联的中药，此方法操作简单，能快速检测出具有促进作用的中药。
图1为本发明实施例1中人成纤维细胞的LOXLl mRNA水平检测结果。图2为本发明实施例1中人成纤维细胞的LOXLl蛋白水平检测结果。图3为本发明实施例2中人成纤维细胞的LOXLl锁链素含量检测结果。图4为本发明实施例3中人皮肤组织细胞的LOXLl mRNA水平检测结果。图5为本发明实施例3中人皮肤组织细胞的LOXLl蛋白水平检测结果。图6为本发明实施 例4中人皮肤组织细胞的LOXLl锁链素含量检测结果。
具体实施例方式本发明提供一种中药的应用及其筛选方法和抗衰老药物，为使本发明的目的、技术方案及效果更加清楚、明确，以下对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。为寻找能够提高体内LOXLl水平的药物分子，本发明通过实时PCR的方法，发现了一系列能促进LOXLl基因转录的中药，将这些中药作用于组织细胞，从而提高了细胞中的LOXLl蛋白及弹性纤维的交联度。所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。这些中药的抽提物分子均具有能促进LOXLl基因转录的作用，从而促进胞外基质交联。其中，虎杖的促进作用最为突出。因此，本发明提供一种中药的应用，所述中药具有进LOXLl基因转录的作用，将所述中药用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。由于此类中药的抽提物可以通过提高胞外基质弹性纤维交联度的方式，以延缓皮肤衰老。因此本发明中还提供一种抗衰老药物，所述抗衰老药物中含有具有促进LOXLl基因转录的中药的抽提物。本发明中还提供所述中药的筛选方法，通过简单的步骤，有效快速地筛选出具有促进LOXLl基因转录的中药。所述筛选方法，包括以下步骤:
研磨粉碎适量中药药材，以乙醇回流法抽提数次，过滤并合并滤液，冷冻干燥；将抽提物粉末加入到生理盐水中，制备抽提物溶液，加入到待测细胞培养体系中，培养24-48小时之后，通过实时PCR的方法检测LOXLl mRNA水平，并通过免疫印迹实验检测LOXLl蛋白水平。这样，通过实时PCR和免疫印迹实验双重检测，确定中药是否具有促进LOXLl基因转录的作用。为了进一步评估经所述药物抽提物处理之后弹性纤维交联度是否提高，所述筛选方法，还包括以下步骤:
将培养过的待测细胞经过IN盐酸110°C消化过夜后，检测锁链素的含量，通过锁链素的含量确定弹性纤维交联度是否提高。其中，所述待测细胞可以是人成纤维细胞或人皮肤组织细胞。以下通过实施例对本发明做进一步说明。实施例1:中药粗提物的制备及刺激人成纤维细胞中LOXLl基因表达的药物筛选 研磨粉碎适量药材，以乙醇回流法抽提数次，过滤并合并滤液，冷冻干燥。将粗提物粉
末加入到生理盐水中，制备浓度为I mg/ml的储液。使用时药物粗提物以200倍稀释加入到人成纤维细胞培养体系中，培养24小时之后检测LOXLl mRNA水平和蛋白水平。LOXLl mRNA水平检测结果如图1所示，LOXLl蛋白水平如图2所示。实时PCR结果表明，郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖抽提物能显著性提高LOXLl mRNA水平；免疫印迹实验表明，LOXLl的蛋白水平增加了 1.3-2.1倍，图示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。实施例2:中药粗提物对人成纤维细胞中弹性纤维交联的促进作用
为评估经药物处理之后弹性纤维交联度，本实施例中测定了人成纤维细胞经IN盐酸110°C消化过夜后反应弹性纤维交联度的锁链素的含量，检测结果如图3所示。结果表明经郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖抽提物处理细胞之后24小时，细胞的锁链素含量提高了
0.4-1.7倍，说明弹性纤维的交联度显著性提高，图示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。实例3:中药抽提物对人皮肤组织中LOXLl表达的促进作用
本实施例中进一步测定了人皮肤组织培养48小时之后，药物200倍稀释对LOXLl表达的影响。LOXLl mRNA水平检测结果如图4所示，LOXLl蛋白水平如图5所示。实时PCR的结果表明，LOXLl mRNA水平提高了 0.4-1.9倍；免疫印迹的实验表明，LOXLl蛋白水平提高7 0.7-1.6 倍，图示的是平均值土SEM (η=6; Ρ〈0.01)。实施例4:中药抽提物对人皮肤组织中弹性纤维交联的促进作用
本实施例中进一步测定了人皮肤组织培养48小时之后，细胞的弹性纤维交联度。人皮肤组织经IN盐酸110°C消化过夜后，检测弹性纤维交联度的锁链素的含量，结果如图6所示。结果表明经郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖抽提物处理后，锁链素含量提高了 0.5-1.8倍，说明弹性纤维的交联度显著性提高，图示的是平均值土SEM (n=6; P〈0.01)。综上，本发明提供了一种促进LOXLl基因转录的药物的筛选方法，筛选出具有促进胞外基质交联的中药，此方法操作简单，能快速检测出具有促进作用的中药。而且本发明中还提供了所述的中药的应用，将所述药物用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织 病变所致的疾病的药物。所述中药具有提高皮肤弹性，延缓皮肤衰老的作用。 应当理解的是，本发明的应用不限于上述的举例，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换，所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。
权利要求
1.一种中药的应用，其特征在于，所述中药具有进LOXLl基因转录的作用，将所述中药用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。
2.根据权利要求1所述的中药的应用，其特征在于，所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。
3.一种抗衰老药物，其特征在于，所述抗衰老药物中含有如权利要求1所述的中药的抽提物。
4.根据权利要求3所述的抗衰老药物，其特征在于，所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。
5.一种筛选药物的方法，其特征在于，用于筛选具有进LOXLl基因转录的作用的药物，所述筛选药物的方法包括以下步骤: 研磨粉碎中药药材，以乙醇回流法抽提数次，过滤并合并滤液，冷冻干燥；将抽提物粉末加入到生理盐水中，制备抽提物溶液，加入到待测细胞培养体系中，培养24-48小时之后，通过实时PCR的方法检测LOXLl mRNA水平，并通过免疫印迹实验检测LOXLl蛋白水平。
6.根据权利要求5所述筛选药物的方法，其特征在于，所述筛选方法，还包括以下步骤: 将培养过的待测细胞经过IN盐酸110°C消化过夜后，检测锁链素的含量，通过锁链素的含量确定弹性纤维 交联度是否提高。
全文摘要
本发明公开一种中药的应用及其筛选方法和抗衰老药物，所述中药具有进LOXL1基因转录的作用，将所述中药用于制备化妆品添加剂、食品添加剂，或用于制备治疗或改善因动态结缔组织病变所致的疾病的药物。所述中药为郁金、大黄、姜黄、芦荟、虎杖。这些中药的抽提物分子均具有能促进LOXL1基因转录的作用，从而促进胞外基质交联。
文档编号A61P19/04GK103239380SQ20131018673
公开日2013年8月14日 申请日期2013年5月20日 优先权日2013年5月20日
发明者刘小青 申请人:刘小青