用于刺激哺乳动物对病原体的先天免疫抵抗力的组合物的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于刺激哺乳动物对病原体的先天免疫抵抗力的组合物，其涉及微生物学、免疫学和抗微生物药物治疗学领域。本发明的组合物和方法涉及使用小分子组合物调节个体肺中的先天免疫，以用于治疗或减轻微生物感染或侵入。具体而言，本发明的实施方案涉及在患有微生物感染或有发生这种感染之风险的个体中治疗、抑制或减轻微生物感染的方法，其包括向所述个体施用有效量的TLR9和TLR2/6激动剂的步骤。
【专利说明】用于刺激晡乳动物对病原体的先天免疫抵抗力的组合物
[0001]本申请是申请号为201080022634.7、发明名称为“用于刺激哺乳动物对病原体的先天免疫抵抗力的组合物”的申请的分案申请，该母案申请是2010年3月25日提交的PCT申请PCT / US2010 / 028658进入中国国家阶段的申请。
[0002]发明背景
1.发明领域
[0003]本发明一般地涉及微生物学、免疫学和抗微生物药物治疗学领域。具体而言，本发明的组合物和方法涉及使用小分子组合物调节个体肺中的先天免疫，以用于治疗或减轻微生物感染或侵入。
[0004]I1.发明背景
[0005]肺对感染的易感性来自于空气交换的结构要求。为了支持换气，人持续地将IOOm2肺表面积暴露于外界环境。肺不仅暴露于空气，还暴露于其中所悬浮的颗粒、小液滴和病原体中。与包裹在不通透皮肤中的皮肤表面或具有厚吸附粘液层的胃肠道不同，肺呈现出具有极小屏障防御的大环境界面。无妨碍气体扩散的需求将更大的屏障排除在外。
[0006]尽管其结构脆弱，但肺一般能通过多种机械、体液和细胞机制成功地防御感染(Knowles 等，2002 ;Martin 和 Frevert, 2005 ;Rogan,等，2006 ;Travis,等，2001)；(Mizgerd, 2008 ;Bals 和 Hiemstra, 2004 ;Bartlett 等，2008 ；Hiemstra, 2007 ；Hippenstiel等，2006 ;Schutte和McCray，2002)。大多数被吸入的微生物病原体由于嵌入到气道壁中而不能穿透至肺泡，它们由于粘液而滞留在气道壁，然后通过粘液纤毛升降机系统(mucociliary escala`tor system)排出(Knowles 等，2002)。对于逃脱该命运的那些病原体，气道内壁流体中抗微生物肽的组成型存在限制了它们的生长(Rogan，等，2006;Travis，等，2001)。位于空气腔最远端的肺泡巨噬细胞能够摄取这些生物体，由此清理肺以防止可能的感染。
[0007]尽管经常被认为是被动气体交换的屏障，但气道和肺泡上皮在遇到病原体刺激时通过发生重大的局部结构和功能改变而为基础肺部防御提供补充。应答于病毒、真菌或变应性炎症，气道分泌细胞迅速提高其高度并在其顶端细胞质中充入分泌性颗粒，该过程称为炎性化生(inflammatory metaplasia) (Evans 等，2004 ;Williams 等，2006)。在病原体存在下，肺泡上皮激活其质膜系统和分泌机器，由此使白细胞参与肺部保护(Evans等，2005)。可能最重要的是，与呼吸道上皮模式识别受体的微生物相互作用使得许多微生物产物表达在气道内壁流体中，包括防御素、cathelicidins、溶菌酶和活性氧簇(Rogan等，2006 ；Forteza 等，2005 ；Akinbi 等,2000 ；Bals 和 Hiemstra, 2004 ；Bals 和 Hiemstra,2006)。应注意的是，肺炎(细菌性的或病毒性的)是全世界范围内的感染致死的首要原因。
[0008]存在对抑制和/或治疗微生物感染的其他方法和组合物的需要。
[0009]发明概述
[0010]本发明提供刺激先天抵抗力(受激先天抵抗力(Stimulated Innate Resistance,StIR))的组合物和使用此类组合物刺激StIR的方法。在某些实施方案中，StIR是肺的StIR0本发明的一方面提供更高的治疗/毒性比值或指数。本发明的一些实施方案包括用于增强哺乳动物(例如人)受试者对感染的生物防御(例如受试者对感染的免疫力)的组合物、制剂和方法。在某些方面，本发明的组合物以有效量沉积在个体的肺中。本发明的一些方面提供针对微生物感染快速且暂时性的生物防御增强或放大。受试者免疫力的增强减轻了微生物感染。减轻可以是通过对感染或微生物生长或存活的抑制、治疗或预防来实现的。本发明的一些方面增强了受试者肺和呼吸道的防御。
[0011]在某些方面，考虑在患有微生物感染或具有发生该感染之风险的个体中治疗、抑制或减轻微生物感染的方法，所述方法包括施用有效量的StIR组合物，所述组合物包含一种或多种先天性受体(innate receptor)的一种或多种配体。已经鉴定了许多先天性受体，其包括但不限于Toll样受体(TLR)、C型凝集素受体(CLR)和核苷酸结合寡聚化结构域样受体(Nod样受体或NLR)。TLR是在先天免疫系统中起关键作用的一类蛋白质。它们是单次跨膜的非催化性受体，其识别来自微生物的结构上保守的分子。一旦这些微生物存在于皮肤或肠道、肺和泌尿生殖道粘膜上或存在于其中，它们即被TLR识别，激活免疫细胞应答。有趣的是，当单独施用时，许多这些TLR激动剂不诱导显著的StIR。通常，使用本文所述方法治疗的个体或受试者已经接触病原性微生物或具有这种接触的风险。
[0012]某些实施方案涉及能够向呼吸道施用的组合物，以及使用这些组合物的方法，所述组合物包含1、2、3、4种或更多种TLR激动剂。所述TLR激动剂选自TLR2 / UTLR2 / 6、TLR3、TLR4、TLR5、TLR9或TLR7激动剂。在某些方面，所述TLR激动剂选自TLR9和TLR2 /6激动剂。在另一方面，所述TLR激动剂选自TLR5激动剂。在又一方面，TLR5激动剂可与TLR2 / 6、TLR4、TLR9或TLR7激动剂组合使用。在某些方面，TLR9激动剂可与TLR2 / 6、TLR4、TLR5或TLR7组合使用。在另一方面，TLR2 / 6激动剂可与TLR4、TLR5、TLR9或TLR7激动剂组合使用。在某些方面，TLR4激动剂可与TLR2 / 6、TLR5、TLR9或TLR7激动剂组合使用。在另一方面，TLR7激动剂可与TLR2 / 6、TLR4、TLR5或TLR9激动剂组合使用。在又一方面，任何这些两两组合可包括选自TLR2 / 6、TLR4、TLR5、TLR9或TLR7激动剂的第三种或第四种或第五种TLR激动剂。
[0013]某些实施方案涉及治疗、抑制或减轻微生物感染的方法，其包括向患有微生物感染或者有发生或获得微生物感染之风险的个体施用有效量的TLR9激动剂和TLR2 / 6激动剂。在某些方面，所述TLR2 / 6激动剂是PAM2CSK4。在另一方面，所述TLR9激动剂是C型寡聚脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide, 0DN)。C型ODN可包括但不限于0DN2395或0DNM362或0DN10101或另一 C型ODN或其类似物。在某些方面，受试者已经接触病原性微生物或有接触病原性微生物的风险。所述微生物可以是病毒、细菌或真菌。
[0014]在另一些方面，以喷雾制剂施用所述TLR9激动剂和TLR2 / 6激动剂。以约0.1、l、5、10、50ii g或mg / kg至约5、10、50、100ii g或mg / kg个体体重(包括其间的所有数值和范围)的量施用所述TLR9激动剂和/或TLR2 / 6激动剂。
[0015]某些实施方案涉及可药用组合物，其包含TLR9激动剂和TLR2 / 6激动剂、抗炎剂和一种或多种药物赋型剂，其中所述组合物是无菌的并基本上不含病原性微生物。在某些方面，所述TLR2 / 6激动剂是PAM2CSK4。在另一方面，所述TLR9激动剂是C型寡聚脱氧核苷酸(ODN)。C型ODN可包括但不限于0DN2395或0DNM362或0DN10101。
[0016]在某些方面，所述StIR组合物包含鞭毛蛋白多肽或其区段或衍生物，所述鞭毛蛋白多肽包含称为 TLR5 激动剂的肽 QRLSTGSRINSAKDDAAGLQIA(SEQ ID NO:2)的 10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22个连续氨基酸。本发明的多肽也可包含与SEQ ID NO:2具有至少70、80或90% (包括其间所有值和范围)同一性的氨基酸序列。在另一些方面，鞭毛蛋白是合成的和/或纯化的或分离的鞭毛蛋白多肽或肽。术语“纯化的”或“分离的”表示该组分是之前从其他蛋白质或合成反应物或副产物中分离或纯化的，并且所述组分在配制到组合物中之前的纯度为至少约95%。在某些实施方案中，所述纯化或分离的组分的纯度约为或至少约为80、95、96、97、98、99、99.1,99.2,99.3,99.4,99.5%或更高，或其中可导出的任何范围。然后可将这种纯化的组分与其他组分混和，以形成本文所述的组合物。
[0017]重组鞭毛蛋白或其片段或区段包含SEQ ID N0:2或其他鞭毛蛋白多肽的5、10、15、20、21、22、23、24、25、30、35、40、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、150、200、250、300、350或400个连续氨基酸，包括其间所有值和范围。这些片段或区段与SEQ ID N0:2或其他鞭毛蛋白多肽具有至少、至多或约70、75、80、85、90、95、96、97、98、99或100%的同一性。在某些方面，鞭毛蛋白多肽或区段与SEQ ID NO:2的序列具有至少75%的同一性。在另一方面，鞭毛蛋白多肽或区段与SEQ ID NO:2的序列具有至少80%的同一性。在另一方面，鞭毛蛋白多肽或区段与SEQ ID NO:2的序列具有至少85%的同一性。在另一方面，鞭毛蛋白多肽或区段与SEQ ID NO:2的序列具有至少90%的同一性。在另一方面，鞭毛蛋白多肽或区段与SEQ ID NO:2的序列具有至少95%的同一性。鞭毛蛋白或其区段的衍生物或变体包括对SEQ ID NO:2的插入、缺失和点突变。一种特定的插入突变是融合蛋白，其在羧基端或氨基端包含对鞭毛蛋白而言是外源的氨基酸序列。许多鞭毛蛋白为本领域所知，包括但不限于以下登录号的鞭毛蛋白 BAB58984(gi 114278896) ；YP_001330159 (gi 1150402865)；YP_001323483 (giI 150399716) ；CAA28975 (gi|1333716) ；CAA02137 (gi|1567895)；CAA67105 (giI 1580779) ；AAR10473 (gi|38049688) ；CAR58992 (gi|197093531)；YP_001217666(gi1147675484) ；CAL12564(gi1122089712) ；BAD14977(gi|46093563)；或CAD05707 (gi 116503200)，均以援引方式将其在本申请 优先权日:期时的内容整体并入本文。
[0018]本发明的一些实`施方案可通过呼吸道施用。本发明的方法包括通过吸入或其他给药方法向上呼吸道和/或下呼吸道施用组合物。在某些方面，通过吸入进行施用。在某些方面，所述StIR组合物在喷雾剂或气雾剂中施用。在另一方面，所述组合物是气雾化的或喷雾化的，或是可以被吸入或滴入受试者中的形式。所述组合物可通过吸入或吸气施用。可以约 0.01,0.05,0.1,0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70μ g 或 mg /kg 至约 55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、200μ g 或 mg / kg 个体体重的量施用所述StIR组合物，包括单独的或凝集的TLR激动剂。在另一些方面，可向受试者施用约0.01,0.05,0.1,0.5、1、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、200 μ g或mg的StIR或每种TLR激动剂或全部TLR激动剂。所述受试者可以是有接触吸入的病毒、细菌或真菌的风险，或者已经接触吸入的病毒、细菌或真菌。又一实施方案包括这样的方法，其中在接触或疑似接触生物体或者接触生物体的风险提高之前；之后；过程中；之前和之后；之前和过程中；过程中和之后；之前、之后和过程中施用所述组合物。所述受试者可接触生物武器或条件性病原体。在一些特定方面中，受试者是免疫受损的，如癌症患者或AIDS患者。
[0019]在又一实施方案中，本发明涉及可药用组合物，其包含一种或多种TLR激动剂；抗炎剂；抗微生物剂；和/或一种或多种药物赋型剂。通常，此类组合物是无菌的，并且基本上不含病原性微生物。
[0020]在某些方面，所治疗的或针对其进行保护的病原性或潜在病原性微生物是病毒、细菌和/或真菌。在某些方面，微生物是病毒。病毒可来自腺病毒科(Adenoviridae)、冠状病毒科(Coronaviridae)、丝状病毒科(Filoviridae)、黄病毒科(Flaviviridae)、嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)、痕疫病毒科(Herpesviridae)、正粘病毒科(Orthomyxoviridae)、副粘病毒科(Paramyxovirinae)、肺病毒亚科(Pneumovirinae)、小核糖核酸病毒科(Picornaviridae)、痕病毒科(Poxyiridae)、逆转录病毒科(Retroviridae)或披膜病毒科(Togaviridae)的病毒；和/或副流感病毒(Parainfluenza)、流感病毒(Influenza)、H5N1、马尔堡病毒(Marburg)、埃博拉病毒(Ebola)、严重急性呼吸器官综合征冠状病毒、黄热病病毒、人呼吸道合胞体病毒、汉坦病毒(Hantavirus)或痘苗病毒。
[0021]在又一方面，所治疗的或针对其进行保护的病原性或潜在病原微生物是细菌。细菌可以是胞内细菌、革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。在另一方面，所述细菌包括但不限于葡萄球菌(Staphylococcus)、芽抱杆菌(Bacillus)、弗朗西丝氏菌(Francisella)或耶尔森氏菌(Yersinia)。在又一方面，所述细菌是炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、土拉热弗朗西丝氏菌(Francisella tularensis)、绿脓假单胞菌(Pseudomonas aerugenosa)或金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureas)。在某些实施方案中，细菌是炭疽芽孢杆菌和/或金黄色葡萄球菌。在又一方面，所述细菌是药物抗性菌，如多药物抗性金黄色葡萄球菌(multiple drug resistant Staphylococcusaureas, MRSA) 0代表性的医学相关性革兰氏阴性菌包括流感嗜血杆菌(Hemophilusinfluenzae)、肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)、嗜肺性军团病杆菌(Legionellapneumophila)、绿脓假单胞菌、大肠杆菌(Escherichia col i)、奇异变形菌(Proteusmirabilis)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、粘质沙雷菌(Serratia marcescens)、幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)、肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)和伤寒沙门菌(Salmonella t`yphi)。代表性革兰氏阳性菌包括但不限于芽孢杆菌、李斯特菌(Listeria)、葡萄球菌、链球菌(Streptococcus)、肠球菌(Enterococcus)、放线菌(Actinobacteria)和梭菌(Clostridium)、缺少细胞壁并且不能革兰氏染色的支原体(Mycoplasma)，包括来自这些形式的那些细菌。
[0022]在又一方面，所治疗的或针对其进行保护的病原性或潜在病原性微生物是真菌，如曲霉(Aspergillus)、假丝酵母(Candida)、隐球菌(Crytpococus)、组织胞衆菌(Histoplasma)、球抱子菌(Coccidioides)、芽生菌(Blastomyces)、肺囊虫(Pneumocystis)或接合菌(Zygomyces)类的成员。在又一其他实施方案中，真菌包括但不限于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、白色假丝酵母(Candida albicans)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、夹膜组织胞衆菌(Histoplasma capsulatum)、粗球抱子菌(Coccidioides immitis)或卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)。接合菌类包括娃粪霉目(Basidiobolales)(娃类霉科(Basidiobolaceae))、双珠霉目(Dimargaritales)(双珠霉科(Dimargaritaceae))、内囊霉目(Endogonales)(内囊霉科(Endogonacea))、虫霉目(Entomophthorales)(新月霉科(Ancylistaceae)、藤霉科(Completoriaceae)、虫霉科(Entomophthoraceae)、顶裂霉科(Meristacraceae)、新接霉科(Neozygitaceae))、梳霉目(Kickxellales)(梳霉科(Kickxellaceae))、被抱霉目(Mortierellales)(被抱霉科(Mortierellaceae))、毛霉菌目(Mucorales)和捕虫菌目(Zoopagales)。曲霉类包括但不限于浅蓝灰曲霉(Aspergillus caesiellus)、亮白曲霉(A.candidus)、肉色曲霉(A.carneus)、棒曲霉(A.clavatus)、弯头曲霉(A.def Iectus)、黄曲霉(A.f Iavus)、烟曲霉(A.fumigatus)、灰绿曲霉(A.glaucus)、构巢曲霉(A.nidulans)、黑曲霉(A.niger)、赫曲霉(A.0chraceus)、米曲霉(A.0ryzae)、寄生曲霉(A.parasiticus)、帚状(A.penicilloides)、局限曲霉(A.restrictus)、酱油曲霉(A.sojae)、萨氏曲霉(A.sydowi)、Α.tamar1、土曲霉(A.terreus)、焦曲霉(A.ustus)、杂色曲霉(A.versicolor)等。假丝酵母家族包括但不限于白色假丝酵母、杜氏假丝酵母(C.dubliniensis)、光滑假丝酵母(C.glabrata)、高里假丝酵母(C.guiIIiermondii)、乳酒假丝酵母(C.kefyr)、克柔假丝酵母(C.krusei)、葡萄牙假丝酵母(C.lusitaniae)、C.miller1、C.0leophila、近平滑假丝酵母(C.parapsilosis)、热带假丝酵母(C.tropicalis)、产朊假丝酵母(C.utilis)等。
[0023]在某些方面，病原菌是胞内细菌、革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。在某些实施方案中，所述细菌是链球菌、葡萄球菌、芽孢杆菌、弗朗西丝氏菌或耶尔森菌。在又一些方面中，所述细菌是炭疽芽孢杆菌、鼠疫耶尔森氏菌、土拉热弗朗西丝氏菌、肺炎链球菌(Streptococcus pnemoniae)、金黄色葡萄球菌、绿脓假单胞菌和/或洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia)。
[0024]用于权利要求书和/或说明书时，术语“减轻”、“抑制”、“降低”或“防止”或这些术语的任何变型包括任何可测量的降低或完全抑制，以得到想要的结果，例如接触后的微生物负荷或生长减少。
[0025]在权利要求书和/或说明书中与术语“包含”结合使用时，无数量词修饰的名词可以指一个/种，但也 与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的意思一致。
[0026]本文讨论的任何实施方案可用本发明的任何方法或组合物来实施，反之亦然。此外，本发明的组合物和药盒可用于实现本发明的方法。
[0027]在本申请中，术语“约”用于表示数值，包括用于测定该值的装置或方法的误差的标准差。
[0028]权利要求中的术语“或”的使用用于表示“和/或”，除非明确地表明仅指备选方案或者备选方案是互斥的，但本公开内容支持仅指备选方案和“和/或”的定义。在包括“和/或”、“或”或者“和”的某些列举中，一个或多个所列成员可以明确地从所述列举中排除在外。
[0029]如本说明书和权利要求中所用，词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括式或开放式的，并且不排除其他未提及的要素或方法步骤。
[0030]本发明的其他目标、特征和优势会从以下详细描述中变得更为明显。然而应理解，详细描述和具体实施例尽管表明了本发明的特定实施方案，但它们仅用于说明目的，因为基于该详细说明，本发明精神和范围内的多种改变和修改对本领域技术人员来说是很明显的。
[0031]附图描述
[0032]以下附图形成本说明书的一部分，并且为进一步说明本发明的某些方面而包括在内。通过参考这些附图中的一个或多个并结合本文呈现的对具体实施方案的详细说明，可以更好地理解本发明。
[0033]图1.天然内毒素(TLR4激动剂)诱导一定的StIR。在用NTHI溶胞产物(“NTHisup”)、NTHi溶胞产物中的估计LPS浓度(“内毒素lx”)、认为溶胞产物中LPS的10倍(“内毒素10x”)处理或不处理24小时后，用肺炎链球菌(5X101(ICFU / ml)攻击野生型Swiss-Webster 小鼠(10 只 / 组)。
[0034]图2.合成的六酰基化脂质A(TLR4激动剂)不诱导StIR。在用绿脓假单胞菌攻击前24小时,用合成的脂质A悬液或PBS处理野生型Swiss-Webster小鼠(8只/组)。
[0035]图3.显示了在用绿脓假单胞菌进行感染性攻击前24小时，用高剂量或低剂量的咪喹莫特(TLR7激动剂)或PBS处理Swiss-Webster小鼠(8只/组)的代表性实验。
[0036]图4.仅有TLR9刺激时诱导极小的保护。在用吸入的绿脓假单胞菌感染前24小时，用PBS或0DN2395处理野生型Swiss-Webster小鼠(8只/组)。
[0037]图5.利用TLR2 / 6激动剂进行的高剂量处理诱导了 StIR。在用绿脓假单胞菌感染前24小时，用高剂量或低剂量的Pam2CSK4或PBS处理野生型Swiss-Webster小鼠。
[0038]图6.TLR激动剂的组合比任何单独激动剂诱导更强的StIR。用0DN2395 (20 u g /ml，8只小鼠)、Pam2CSK4 (20 u g / ml, 8只小鼠)、两种激动剂(10只小鼠)或PBS (10只小鼠)处理野生型Swiss-Webster小鼠。
[0039]图7.合成的鞭毛蛋白片段(TLR5激动剂)诱导StIR。在用绿脓假单胞菌感染前24小时，将鞭毛蛋白的22个氨基酸高保守性区段或仅有PBS气雾化到野生型Swiss-Webster中。
`[0040]图8.甲型流感病毒/ HK肺合并物11-29-05气雾剂感染对体重的影响:一次30分钟气雾剂处理；流感病毒剂量:~100倍TCID5tl /小鼠。体重开始时随感染的发展而下降，反映了疾病的严重程度，然后在恢复过程中上升。
[0041]图9.甲型流感病毒/ HK肺合并物11-29-05气雾剂感染对存活的影响:一次30分钟气雾剂处理；流感病毒剂量:~100倍TCID5tl /小鼠。
[0042]图10.展示了 ODN / PAM2 / PolyIC的一次30分钟气雾剂预处理对感染甲型流感病毒/ HK气雾剂的小鼠存活的影响；病毒剂量~130倍TCID5tl /小鼠。
[0043]图11.甲型流感病毒/ HK肺合并物11-29-05气雾剂感染对体重的影响:一次30分钟气雾剂处理；流感病毒剂量:~100倍TCID5tl /小鼠。体重开始时随感染的发展而下降，反映了疾病的严重程度，然后在恢复过程中上升。
[0044]图12A和12B.细菌溶胞产物诱导的肺炎抵抗力需要的是MyD88 (而不是TRIF)信号转导。图12A.在之前24小时用不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)的雾化溶胞产物预处理或不进行预处理的情况下，用绿脓假单胞菌吸入攻击MydSS—r和野生型小鼠。左，存活(N =10只小鼠/组，< 0.0001)。右，感染后立即出现的肺细菌负荷(右，N = 3只小鼠/组，
〃p< 0.004，tp=0.39相对于野生型对照)。图12B.用细菌溶胞产物预处理或不预处理
的情况下，Trif+小鼠的绿脓假单胞菌攻击。左，存活(N= 10只小鼠/组，*p< 0.0001)。右，感染后立即出现的肺细菌负荷(右，N = 3只小鼠/组，* p < 0.0001)。
[0045]图13.所诱导的病原体杀伤在白细胞介素-1受体缺陷型小鼠中不受损。在用绿脓假单胞菌攻击前24小时，用气雾化的PBS或不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)处理I; lr_ / _和野生型小鼠。所显示的是感染后立即出现的肺匀浆的细菌负荷。(N=3只小鼠/组Zp =0.0Ol相对于野生型+PBS,** P = 0.01相对于I Ilr^,、fp=0.66:相对于野生型+PBS,
|p=0.89相对于野生型+NTHi)。
[0046]图14.用单一合成TLR配体处理后支气管肺泡灌洗液中的白细胞计数。用PBS或以下TLR配体之一处理24小时后，对小鼠进行BAL:Pam3CSK4 (TLR2 / I激动剂，Iyg/ml >3 μ g / ml、10 Ug / ml)、Pam2CSK4 (TLR2 / 6 激动剂，I μ g / ml>3 μ g / ml、10 Ug /ml)、Poly (I:C) (TLR3 激动剂，I μ g / ml、IOyg / ml、IOOyg / ml)、合成的脂质 A (MPLA,TLR4 激动剂，Iyg / mlUOy g / mlUOOy g / ml)、Flg22 (合成的 22-mer 鞭毛蛋白，TLR5激动剂，IOyg / ml、100yg / ml、1000yg / ml)、咪喹莫特(TLR7 和 TLR8，100 μ g / ml、300 μ g / ml、1000yg / ml)或 0DN2395 (TLR9 激动剂，2 μ g / ml、20 μ g / ml)。所显示的是BAL液内的嗜中性粒细胞(黑色条)和巨噬细胞(灰色条)。
[0047]图15A-15G.利用单一合成TLR配体进行气雾化处理不诱导高水平的肺炎抵抗力。用PBS或以下合成TLR配体处理(8ml喷雾，在20分钟中施用)之后24小时，利用绿脓假单胞菌攻击野生型小鼠:图15A.TLR2 / I激动剂Pam3CSK4100y g / ml，图15B.TLR2 / 6激动剂 Pam2CSK410 μ g / ml，图 15C.TLR3 激动剂 poly (I:C) 100 μ g / ml，图 15D.TLR4 激动剂 MPLA100 μ g / ml，图 15E.TLR5 激动剂 Flg22100 μ g / ml，图 15F.TLR7 和 TLR8 激动剂咪喹莫特Img / ml，或图15G.TLR9激动剂0DN239520yg / ml。存活曲线是处理和未处理小鼠的至少三组不同实验的代表性实例(N = 8只小鼠/组，= 0.5，= 1.0，fp=0.47, |p=0.2)。
[0048]图16A-16C.TLR2 / 6和TLR9激动剂协作诱导针对细菌性肺炎的抵抗力。图16A.左，用PBS、Pam2CSK410y g / ml、0DN239520 μ g / ml、组合、或双倍剂量的组合处理 后24小时，用绿脓假单胞菌攻击的小鼠的存活(N = 6只小鼠/组，|p=0.008相比于
PBS)。右，绿脓假单胞菌感染后立即产生的肺匀浆的细菌负荷(N = 3只小鼠/组，#p =0.045 相比于 PBS, ##p = 0.030 相比于 PBS)。图 16B.左，用 PBS、Pam2CSK410 μ g / ml、0DN239520 μ g / ml、组合或双倍剂量组合处理后24小时，用肺炎链球菌攻击的小鼠的存活
(N= 10只小鼠/组，tp<0.0001相比于PBS处理)。右，肺炎链球菌感染2 X 101°后立即
产生的肺匀浆的细菌负荷(N = 3只小鼠/组，fp<0.001, |p<0.0001)。图16C.pbs、
Pam2CSK410 μ g / ml、0DN239520 μ g / ml 或者 Pam2CSK4 与 0DN2395 的组合处理后 4 或 24小时，来自小鼠的BAL细胞计数(N = 3只小鼠/组，* P = 0.016相比于PBS，* * P < 0.0001相比于PBS，fp=0.041相比于仅有Pam2)。
[0049]图17A-17F.并非所有的TLR激动剂组合都提供针对肺炎的显著保护。利用PBS或以下TLR激动剂组合处理后24小时，用绿脓假单胞菌攻击野生型小鼠:图17A.Pam2CSK4和 poly (I:C)，图 17B.Pam2CSK4 和 Flg22,图 17C.Pam2CSK4 和咪喹莫特，图 17D.0DN2395 和poly (1:C)，图 17E.0DN239 和 Flg22，图 17F.0DN2395 和 Pam3CSK4。存活曲线是至少三个不
同实验的代表性实例(N = 8只小鼠/组，= 0.20，= 0.08，fp=1.0, |p=0.5 ) 0
[0050]图18A-18B.TLR2足以促进保护性Pam2CSK4和0DN2395协同作用，但并不是诱导抵抗力所必需的。图18A.左，用或不用0DN2395和Pam2CSK4处理后24小时，用绿脓假单胞菌攻击的Hrf+和野生型小鼠的存活(N = 8只小鼠/组Zp < 0.0002)。右，用绿脓假单胞菌感染后立即出现的肺匀浆的细菌负荷(N = 4只小鼠/组，Mp < 0.0001相比于
野生型+PBS，tP=0.59相比于Hrfi+PBS)。图18B.左，用或不用不可分型流感嗜血杆菌
(NTHi)的雾化溶胞产物处理后24小时，用绿脓假单胞菌攻击TLR2+和野生型小鼠的存活(N = 10只小鼠/组，< 0.0002)。右，用绿脓假单胞菌感染后立即出现的肺匀浆的细菌
负荷(N = 3只小鼠/组，Ip=0.03相比于野生型+PBS，#p = 0.002相比于Tlr2++PBS)。
[0051]图19A-19B.C型(而不是A类和B类)与TLR9结合的CpG ODN与Pam2CSK4协同作用，以诱导对细菌性肺炎的抵抗力。图19A.绿脓假单胞菌攻击之前24小时，用Pam2CSK4和0DN2395或者Pam2CSK4和乱序对照ODN处理的野生型小鼠的存活(N = 10只小鼠/组，* p < 0.0001)。FIG.19B.用 PBS 或 Pam2CSK4 组合 A 类 CpG 0DN(0DN1585 或 0DN2216)、B类CpG 0DN(0DN2006-G5)或C类CpGODN(M362或0DN2395)处理后24小时，用绿脓假单胞菌攻击的野生型小鼠的存活(N = 10只小鼠/组，* p = 0.01相比于PBS，= 0.0001相比于 PBS ； fp=0.3 相比于 Pam2+0DN2395)。
[0052]图20A-20D.TLR2 / 6和TLR9激动剂在体外协同诱导小鼠和人呼吸道上皮细胞的细菌杀伤。图20A.用炭疽芽孢杆菌(1000个芽孢)感染前，用Pam2CSK4(10ii g / ml)和/或0DN2395 (20 ii g / ml)处理MLE-15细胞4小时。所显示的是感染后4小时的细菌CFU(*P = 0.05相比于PBS，**p = 0.016相比于PBS，#p > 0.05相比于任一单一激动剂)。图20B.用0DN2395和Pam2CSK4处理MLE培养基(无细胞)，4小时后用炭疽芽孢杆菌(1000
个芽孢)感染并培养(tp=1.0)。图20C.用绿脓假单胞菌(2700CFU)感染之前，用0DN2395
和Pam2CSK4处理A549细胞`4小时。所显示的是感染后4小时的细菌CFU(* p = 0.01相比于 PBS，**p = 0.003 相比于 PBS，* * * p = 0.001 相比于 PBS，#p = > 0.05 相比于任一单一激动剂)。图20D.用0DN2395和Pam2CSK4处理MLE培养基(无细胞)，4小时后用绿
脓假单胞菌(4000CFU)感染并培养(:j:p=0.58)。
[0053]图21.用多种合成的TLR激动剂免疫并用5倍LD50炭疽芽孢杆菌Ames芽孢(MD-10-013)鼻内攻击的Swiss-Webster小鼠的存活。如所示，在用炭疽攻击前24小时，用气雾化的TLR激动剂预处理小鼠。ALIIS = NTHi细菌溶胞产物，2395 = 0DN2395,10101 =0DN10101，M362 = 0DN-M362.1X = 40 u g / ml 的 ODN 和 20 y g / ml 的 Pam2。
[0054]图22.利用ODN / Pam2或NTHi溶胞产物进行气雾剂预处理对甲型流感病毒/ HK感染的小鼠存活的影响。一次30分钟气雾剂处理；流感病毒剂量:~100倍TCID5tl /小鼠。
[0055]发明详述
[0056]免疫系统是保护生物免受外界生物影响的特化细胞和器官的系统。当免疫系统功能正常时，其保护机体免受微生物感染，并破坏癌细胞和异物。如果免疫系统弱化，其保护机体的能力也弱化，使得病原体能够在机体内生长。
[0057]免疫系统经常分成:(a)先天免疫，其包含提供直接“第一线”防御的组分，以持续阻挡病原体，和(b)适应性(获得性)免疫，其包含抗体的产生和特异地设计用于靶向特定病原体的T细胞的产生或刺激。利用适应性免疫性,身体可在一定时间后产生针对特定病原体的特异性免疫。该应答需要数天才能发生，并对防止首次侵袭无效，但通常会防止任何后续的感染，也帮助清除持续更久的感染。
[0058]应答于某些炎性刺激，小鼠和人呼吸道上皮的分泌细胞迅速发生显著的结构变化，称为炎性化生。大多数结构变化是由于形成凝胶的分泌性粘蛋白的产生增加，同时在粘蛋白分泌、微生物杀伤或炎症信号转导中起功能的其他大分子也上调。认为该应答的生理功能是加强针对微生物病原体的局部防御，但该假说接受了的正式测试有限。自相矛盾的是，形成凝胶的粘蛋白的过度产生和分泌是呼吸道常见炎性疾病(如哮喘、囊性纤维化和肺慢性阻塞性疾病(COPD))中气流堵塞的主要原因。刺激不产生粘蛋白的先天免疫将通过预防和/或治疗受试者而提供一种减轻呼吸道感染的其他方法。
[0059]本发明的一些实施方案包括用包含1、2、3、4种或更多种TLR激动剂(包括其区段或衍生物或类似物)的组合物刺激受试者的气道。施用本发明组合物的受试者被赋予针对潜在感染生物的治疗性、预防性或者治疗性和预防性应答。在一些具体方面中，将组合物雾化并通过呼吸道施用。所述组合物用于例如通过激活或增强肺的先天免疫来诱导或以其他方式引发保护作用。
[0060]本发明的某些方面包括小分子和/或TLR激动剂，其来自不同的微生物，或是人工合成的。通常，所述小分子和/或TLR激动剂不引起分泌性粘蛋白的产生增加。本发明的实施方案可用作针对例如生物武器、新的有毒微生物或条件性微生物的预防性和先行性(preemptive)治疗剂。
[0061]1.StIR 组合物
[0062]A.异源化合物 和部分
[0063]许多非宿主或异源分子可以刺激、增强或促进免疫应答的产生。这些部分包括多种先天性受体激动剂和/或微生物组分。
[0064]1.先天性受体配体
[0065]模式识别受体(或称为PRR, pattern recognition receptor)(先天性受体)是先天免疫系统的细胞表达的用来识别病原体相关分子模式(或称为PAMP，pathogen-associated molecular pattern)(其与微生物病原体或细胞胁迫相关)的蛋白质。PAMP包括但不限于细菌碳水化合物(例如，脂多糖或LPS、甘露糖)、核酸(例如，细菌或病毒DNA或RNA)、肽聚糖和脂磷壁酸(来自革兰氏阳性菌)、N-甲酰甲硫氨酸、脂蛋白、真菌葡聚糖等。
[0066]PRR通常根据其配体特异性、功能、定位和/或进化关系进行分类。基于功能，PRR可分为胞吞PRR或信号转导PRR。信号转导PRR包括膜结合Tol I样受体和胞质NOD样受体的大家族。胞吞PRR促进吞噬细胞对微生物的附着、吞食和破坏，但不传递胞内信号。这些PRR识别碳水化合物，并包括巨噬细胞的甘露糖受体、存在于所有吞噬细胞上的葡聚糖受体，以及存在于所有巨噬细胞的识别带电配体并介导凋亡细胞的清除的清道夫受体(scavengerreceptor)。
[0067]已经鉴定了许多先天性受体，包括但不限于Toll样受体(TLR)、C型凝集素受体(CLR)和与核苷酸结合的寡聚化结构域样受体(Nod样受体或NLR)。TLR是在先天免疫系统中起关键作用的一类蛋白质。它们是单次跨膜的非催化性受体，其识别来自微生物的结构上保守的分子。一旦这些微生物存在于皮肤或肠道粘膜其上或其中，它们即被激活免疫细胞应答的TLR所识别。有趣的是，当单独施用时，许多这些TLR激动剂不诱导显著的StIR。通常，使用本文所述方法治疗的个体或受试者已经接触病原性微生物，或有这种接触的风险。
[0068]a.Toll样受体(TLR)激动剂
[0069]Toll样受体(TLR)是最充分表征的PRR(Ishii等，2008)。它们是高度保守的跨膜蛋白，由外功能区(ectodomain)(具有用于模式识别的多个富亮氨酸重复)、跨膜a -螺旋和用于胞内信号转导的Toll /白介素-1受体(TIR)结构域组成。已经鉴定了至少13种哺乳动物TLR，每一种均特异性定位在质膜或内体膜上，并且每一种检测PAMP中的独特对应物(Akira等，2006 ;Shi等，2006)。PAMP识别后，通过细胞溶胶TIR衔接蛋白组合的TLR特异性募集发生信号转导。与四种其他衔接蛋白中的一个或多个一起，TIR衔接蛋白MyD88是始自大多数TLR的信号转导所需的。从TLR3和TLR4观察到的不依赖MyD88的信号转导事件需要TIR衔接蛋白TRIF (也称为TICAM-1)，其有或没有TRAM的参与(Yamamoto等，2003)。TLR特异性TIR衔接蛋白信号级联激活受体特异性转录因子如NF-K B，激活蛋白-1和干扰素调节因子(IRF)，导致炎性基因和抗微生物基因的表达(Akira等，2006 ;0’Neill，L.A.，和 Bowie, 2007 ；Takeda, K.，和 Akira, 2004)。
[0070]TLR激动剂是发挥激活TLR (例如从而诱导通过TLR信号转导途径介导的信号转导事件)的功能的任何化合物或物质。合适的TLR激动剂包括TLRl激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂。
[0071]目前广泛公认的是，保护性免疫的产生不仅依赖于抗原接触，还依赖于遇到抗原时的环境。存在许多实例，其中在炎性环境中向宿主中引入新抗原产生免疫耐受而不是长期免疫，而在炎性试剂(佐剂`)存在下接触抗原则诱导免疫(Mondino等，1996 ；PuIendran等，1998 Jenkins等，1994 ;和Keamey等)。由于这可意味着耐受与免疫之间的差异，所以已经付出大量努力用于发现感染原内存在的“佐剂”，其刺激参与产生抗原呈递的适当免疫原性环境的分子途径。目前已知的是，大量佐剂活性是由于微生物和病毒产物与免疫细胞上表达的Toll样受体(TLR)的不同成员之间的相互作用(Beutler等，2004 ;Kaisho，2002 ;Akira等，2003 ;以及Takeda和Akira，2004)。TLR得名于其与果蝇中的分子(称为Toll，其在果蝇发育中发挥功能并参与抗微生物免疫)的同源性(Lernaitre等，1996 ;和Hashimoto 等，1988)。
[0072]早期工作显示，Toll的哺乳动物同源物和Toll途径分子对先天免疫系统细胞应答微生物攻击和微生物副产物的能力而言至关重要(Medzhitov等，1997 ;Medzhitov等，1998 ；Medzhitov等，2000 ；和Janeway等，2002)。自从将LPS鉴定为TLR4激动剂以来(Poltorak等，1998)，已经描述了许多其他TLR激动剂，如三酰基多类型HPV多肽(TLRI)、肽聚糖、脂磷壁酸和Pam3Cys (TLR2)、dsRNA (TLM)、鞭毛蛋白(TLR5)、二酰基多类型HPV多肽，如Malp-2 (TLR6)，咪唑喹啉和单链RNA(TLR7、8)、细菌DNA、非甲基化的CpG DNA序列，甚至是人基因组 DNA 抗体复合体(TLR9) (Takeuchi 等，2001 ；Edwards 等，2002 ；Hayashi 等，2003；Nagase 等，2003)。
[0073]如本文所用，术语“激动剂”指可与受体(例如，TLR)组合产生细胞活性的化合物。激动剂可以是直接结合受体的配体。或者，激动剂可以通过以下与受体间接组合，例如，(a)与直接结合受体的另一分子形成复合体，或(b)以其他方式导致其他化合物的修饰，使得所述其他化合物直接结合受体。激动剂可以称为特定TLR的激动剂(例如，TLR7激动剂)或特定TLR组合的激动剂(例如，TLR7 / 8激动剂一一 TLR7和TLR8两者的激动剂)。
[0074]在本文可互换使用的术语“CpG_0DN”、“CpG核酸”、“CpG多核苷酸”和“CpG寡核苷酸”指这样的多核苷酸，其包含至少一个5’ -CG-3’部分，并且在许多实施方案中包含未甲基化的5’ -CG-3’部分。一般而言，CpG核酸是具有至少6个核苷酸碱基的单链或双链DNA或RNA多核苷酸,其可包含修饰的核苷酸或修饰的核苷序列，或由其组成。在一些实施方案中，CpG核酸的5’ -CG-3’部分是回文核苷酸序列的一部分。在一些实施方案中，CpG核酸的5’ -CG-3’部分是非回文核苷酸序列的一部分。
[0075]合适的TLR激动剂包括分离的天然TLR激动剂，以及合成的TLR激动剂。从天然的TLR激动剂来源分离的TLR激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %或高于99 %。合成的TLR激动剂通过标准方法制备，一般纯度为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%、或高于99%。
[0076]合适的TLR激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR激动剂。合适的TLR激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR激动剂。在一些实施方案中，TLR激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR激动剂通过接头附着到另一化合物上。TLR激动剂所附着的化合物包括载体、支架、不溶的支持物、微粒、微球等。载体包括治疗性多肽；提供更高溶解度的多肽；提高TLR激动剂在生理性介质(例如血清或其他体液)中的半衰期的多肽等。在一些实施方案中，TLR激动剂将直接或通过接头缀合到另一TLR激动剂上。
[0077]在一些实施方案`中，TLR激动剂是TLR激动剂的前药形式。前药由与活性治疗剂共价连接的前药部分组成。前药能够在体内通过其结构的某些化学或酶促修饰转化成药物(活性治疗剂)。前药部分的实例为本领域所熟知，并可见于以下参考文献中=BiologicalApproaches to the Controlled Delivery of Drugs, R.L.J uliano, New York Academyof Sciences, (1988) ；Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism:Chemistry,Biochemistry,and Enzymology,Bernard Testa,Vch Verlagsgesellschaft Mbh, (2003)；和 Prodrugs:Topical and Ocular Drug Delivery, Kenneth Sloan, Marcel Dekker ；(1992)。前药部分的实例是肽，例如将TLR配体引导到作用位点上的肽，和在其氨基端具有两个或更多个游离且未偶联的羧酸的肽。其他示例性可切割前药部分包括酯基、醚基、酰基、烷基、憐酸基、横酸基、N氧化物和叔丁氧基擬基。
[0078]在一些实施方案中，TLR激动剂是单体TLR激动剂。在另一些实施方案中，TLR激动剂是多聚化的，例如TLR激动剂是多聚体的。在一些实施方案中，多聚化的TLR激动剂是同功能的，例如由一种类型的TLR激动剂组成。在另一些实施方案中，多聚化的TLR激动剂是异功能TLR激动剂。
[0079]在一些实施方案中，TLR配体是嵌合的TLR配体(本文也称为“异功能”TLR配体)。在一些实施方案中，嵌合的TLR激动剂包含TLR9激动剂部分和TLR2激动剂部分。以下是异功能TLR激动剂的非限制性实例。[0080]在一些实施方案中，嵌合的TLR配体具有以下通式:(X) n- (Y) m，其中X是TLRl激动剂、TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂，而Y是TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂和TLR9激动剂，n和m独立地是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更大(包括其间的所有值和范围)的整数。在某些实施方案中，X或Y是TLR9，并且X或Y 是 TLR2 / 6。
[0081]TLR2激动剂.TLR2激动剂包括分离的天然TLR2激动剂；和合成的TLR2激动剂。从天然TLR2激动剂来源分离的TLR2激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR2激动剂的纯度为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。合成TLR2激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0082]TLR2激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR2激动剂。TLR2激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR2激动剂。在一些实施方案中，TLR2激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR2激动剂通过接头附着到另一化合物上。
[0083]TLR2激动剂包括合成的三酰基化的和二酰基化的脂肽。TLR2配体的非限制性实例是FSL-1 (来自唾液支原体I的合成脂蛋白)、Pam3Cys (三棕榈酰基-S-甘油基半胱氨酸)或S-[2，3-二(棕榈酰基氧基)_(2RS)_丙基]-N-棕榈酰-(R)-半胱氨酸，其中“Pam3”是“三棕榈酰基-S-甘油基”)(Aliprantis等，1999)。Pam3Cys的衍生物也是合适的TLR2激动剂，其中衍生物包括但不限于S-[2，3-二(棕榈酰基氧基)-(2-R，S)-丙基]_N_ 棕榈酰-(R)-Cys-(S)-Ser-(Lys)4-羟基三盐酸化物；Pam3Cys-Ser-Ser-Asn-Ala ；PaM3Cys-Ser- (Lys) 4 ；Pam3Cys-Ala-GIy ；Pam3Cys-Ser-Gly ;Pam3Cys_Ser ;PaM3Cys_0Me ；Pam3Cys-OH ；PamCAG,掠桐酸 _Cys ((RS) -2, 3- 二(掠桐酸基氧基)_ 丙基)-Ala-Gly-OH 等。合适的TLR2激动剂的另一非限制性实例是Pam2CSK415 PaM2CSK4 (二棕榈酰基-S-甘油基半胱氨酸-丝氨酸_(赖氨酸)4或`Pam2Cys-Ser-(Lys)4)是合成的二酰基化脂肽。已经在参考文献中描述了合成的TLR激动剂。参阅例如，Kellner等(1992) ;Seifer等(1990) ；Lee等(2003)。
[0084]TLR3激动剂.TLR3激动剂包括分离的天然的TLR3激动剂；和合成的TLR3激动剂。从天然TLR3激动剂来源分离的TLR3激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR3激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %、或高于99 %。合成的TLR3激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0085]TLR3激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR3激动剂。TLR3激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR3激动剂。在一些实施方案中，TLR3激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR3激动剂通过接头附着到另一化合物上。
[0086]TLR3激动剂包括天然的双链RNA(dsRNA);合成的dsRNA ;和合成的dsRNA类似物等(Alexopoulou等,2001)。合成的ds RNA类似物的示例性非限制实例是poly (1:C)。
[0087]TLR4激动剂.合适的TLR4激动剂包括分离的天然TLR4激动剂；和合成的TLR4激动剂。从天然的TLR4激动剂来源分离的TLR4激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR4激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %或高于99 %。合成的TLR4激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0088]TLR4激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR4激动剂。合适的TLR4激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR4激动剂。在一些实施方案中，TLR4激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR4激动剂通过接头附着到另一化合物上。TLR4激动剂所附着的合适的化合物包括载体、支架等。
[0089]TLR4激动剂包括天然的脂多糖(LPS)，例如来自多种革兰氏阴性菌的LPS;天然LPS的衍生物；合成的LPS ;细菌热休克蛋白60(Hsp60);甘露糖醛酸聚合物；黄脂素(fIavolipin);糖醒酸磷壁酸；肺炎链球菌(S.pneumoniae)的肺炎球菌溶血素(pneumolysin);细菌菌毛(fimbriae),呼吸道合胞体病毒外壳蛋白等。TLR4激动剂也包括合成的单磷酸脂质A(MPLA, Invivogen)和磷酸化六酰基二糖(PHAD, Avanti PolarLipids)，以及其他合成的TLR4激动剂。
[0090]TLR5激动剂.合适的TLR5激动剂包括分离的天然TLR5激动剂；和合成的TLR5激动剂。从天然的TLR5激动剂来源分离的TLR5激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR4激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %或高于99 %。合成的TLR5激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0091]TLR5激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR5激动剂。合适的TLR5激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR5激动剂。在一些实施方案中，TLR5激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR5激动剂通过接头附着到另一化合物上。TLR5激动剂附着的合适的化合物包括载体、支架等。
`[0092]TLR5激动剂包括鞭毛蛋白的高度保守的22氨基酸区段以及全长鞭毛蛋白及其其他区段。
[0093]TLR7激动剂.合适的TLR7激动剂包括分离的天然TLR7激动剂；和合成的TLR7激动剂。从天然的TLR7激动剂来源分离的TLR7激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR7激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %或高于99 %。合成的TLR7激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0094]TLR7激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR7激动剂。合适的TLR7激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR7激动剂。在一些实施方案中，TLR7激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR7激动剂通过接头附着到另一化合物上。
[0095]TLR7配体包括咪唑喹啉化合物；鸟苷类似物；嘧啶化合物，如溴匹立明和溴匹立明类似物等。起TLR7配体功能的咪唑喹啉化合物包括但不限于咪喹莫特(也称为Aldara、R-837、S-26308)和R-848 (也称为瑞喹莫德，S-28463 ;具有以下化学结构:4_氨基-2-乙氧基甲基-α, α - 二甲基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉_1_乙醇)。合适的咪唑喹啉剂包括咪唑喹啉胺、咪唑并吡啶胺、6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺和1，2桥接的咪唑喹啉胺。已经在美国专利 4，689，338,4, 929，624,5, 238，944,5, 266，575,5, 268，376,5, 346，905,5, 352，784、5，389，640,5, 395，937,5, 494，916,5, 482，936,5, 525，612,6, 039，969 和 6，110，929 中描述了这些化合物。适用于本发明方法中的咪唑喹啉剂的具体种类包括R_848(S-28463)；4-氨基-2乙氧基甲基-a, a-二甲基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉_s_1-乙醇；和1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺(R-837或咪喹莫特)。还适合使用的是化合物4-氨基-2-(乙氧基甲基)-a，a-二甲基-6，7，8，9-四氢_1H_咪唑[4，5_c]喹啉_1_乙醇水合物(参阅例如，BM-003, Gorden 等(2005)。
[0096]合适的化合物包括2-氨基吡啶与五员含氮杂环稠合的那些化合物。此类化合物包括如咪唑喹啉胺，包括但不限于取代的咪唑喹啉胺，例如酰胺取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉胺、芳基醚取代的咪唑喹啉胺、杂环醚取代的咪唑喹啉胺、氨基醚取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺醚取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉醚、硫醚取代的咪唑喹啉胺，和6-、7-、8_或9-芳基或杂芳基取代的咪唑喹啉胺；四氢咪唑喹啉胺，包括但不限于酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺、磺酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺、尿素取代的四氢咪唑喹啉胺、芳基醚取代的四氢咪唑喹啉胺、杂环醚取代的四氢咪唑喹啉胺、氨基醚取代的四氢咪唑喹啉胺、磺酰胺醚取代的四氢咪唑喹啉胺、尿素取代的四氢咪唑喹啉醚和硫醚取代的四氢咪唑喹啉胺；咪唑并吡啶胺包括但不限于酰胺取代的咪唑并吡啶胺、磺酰胺取代的咪唑并吡啶胺、尿素取代的咪唑并吡啶胺、芳基醚取代的咪唑并吡啶胺、杂环醚取代的咪唑并吡啶胺、氨基醚取代的咪唑并吡啶胺、磺酰胺醚取代的咪唑并吡啶胺、尿素取代的咪唑并吡啶醚和硫醚取代的咪唑并吡啶胺；1，2-桥接咪唑喹啉胺；6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺；咪唑并萘啶胺；四氢咪唑并萘啶胺；p恶唑并喹啉胺；噻唑并喹啉胺^恶唑并吡啶胺；噻唑并吡啶胺恶唑并萘啶胺；噻唑并萘啶胺；和与吡啶胺稠合的IH-咪唑二聚体、喹啉胺、四氢喹啉胺、萘啶胺和四氢萘啶胺。
[0097]化合物包括取代的咪唑喹啉胺、四氢咪唑喹啉胺、咪唑并吡啶胺、I，2-桥接的咪唑喹啉胺、6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺、咪唑并萘啶胺、四氢咪唑萘啶胺、0恶唑并喹啉胺、噻唑并喹啉胺、P恶 I唑并吡啶胺、噻唑并吡啶胺、P恶I唑并萘啶胺和噻唑并萘啶胺。
[0098]如本文所用，取代的咪唑喹啉胺指酰胺取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉胺、芳基醚取代的咪唑喹啉胺、杂环醚取代的咪唑喹啉胺、氨基醚取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺醚取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉醚、硫醚取代的咪唑喹啉胺，或6-、7-、8_或9-芳基或杂芳基取代的咪唑喹啉胺。
[0099]发挥TLR7配体功能的鸟苷类似物包括某些C8-取代的和N7，C8- 二取代的鸟嘌呤核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸，包括但不限于罗唑利宾(7-烯丙基-8-氧鸟苷)、7_硫代-8-氧鸟苷(TOG)、7_脱氮鸟苷和7-脱氮脱氧鸟苷(Lee等，2003)。在参考文献中描述了溴匹立明(PNU-54461) (5-卤代-6-苯基嘧啶酮)和溴匹立明类似物，并且其也适合使用。参阅如Vroegop等(1999)。合适的C8取代鸟苷的额外实例包括但不限于，8-巯基鸟苷、8-溴代鸟苷、8_甲基鸟苷、8_氧代-7,8- 二氢鸟苷、C8-芳氨基-2’ -脱氧鸟苷、C8-丙块基鸟苷、C8-和N7-取代的鸟嘌呤核糖核苷，如7-烯丙基-8-氧鸟苷(罗唑利宾)和7-甲基_8_氧鸟苷、8_氨基鸟苷、8_羟基-2’ -脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷。
[0100]在一些实施方案中，取代的鸟嘌呤TLR7配体是单体。在另一些实施方案中，取代的鸟嘌呤TLR7配体是多聚的。因此，在一些实施方案中，TLR7配体具有通式:(B) q，其中B是取代的鸟嘌呤TLR7配体，q是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。多聚TLR7配体中的各TLR7配体单体直接或通过接头与另一配体共价或非共价连接。合适的TLR7激动剂包括如美国专利公开2004 / 0162309中描述的TLR7配体。
[0101 ] 在一些实施方案中，TLR7激动剂是选择性TLR7激动剂，例如所述激动剂通过TLR7调节细胞活性，但不通过TLR8调节细胞活性。TLR7选择性激动剂包括在美国专利公开2004 / 0171086中显示的那些。此类TLR7选择性激动剂化合物包括但不限于，#-{4_[4_氨基-2-(2-甲氧基乙基)-6，7，8，9-四氢-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基]丁基}-4-氟-1-苯磺酰胺、N1-[4-(4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]-4-氟-1-苯磺酰胺、N-[4-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基)丁基]甲磺酰胺、N-{3-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]-2，2-二甲丙基}苯甲酰胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧乙基)-1Η-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-N-甲基甲磺酰胺、N-(2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧乙基)_6，7，8，9-四氢-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)苯甲酰胺、N-[4-(4-氨基-2-甲基-1H-咪唑基[4，5-c]喹啉基-1-基)丁基]环戊甲酰胺、1-[4-(1，1_ 二氧异噻唑烷-2-基)丁基]-2-(2-甲氧基乙基)-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、2-甲基_1_[5_甲基磺酰基]戊基-6，7，8，9-四氢-1H-咪唑[4，5-c]喹啉_4_胺、N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)_6，7- 二甲基-1H-咪唑[4，5-c]吡啶-1-基]-1，1- 二甲基乙基}-N-环己基脲、N-[2-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)_1，1-二甲基乙基]苯甲酰胺、N-[3-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)-2，2-二甲基丙基]甲磺酰胺、1_[6_(甲磺酰基)己基]_6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]吡啶_4_胺、6-(6-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)-N-甲氧基-N-甲基己酰胺、1-[2，2-二甲基-3-(甲磺酰基)丙基]-2-(乙氧基甲基)-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、N-[4-(4-氨基-2-甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]-N-甲基-N-苯脲、1-{3-[4-氨基-1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-8-基]苯基}乙酮、7-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基)-2-甲基庚-2-醇、N-甲基-4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基)丁烷-1-磺酰胺、N-(4-甲氧基苄基)-4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基)丁烷-1-磺酰胺、N-{2-[4`-氨基-3-(乙氧基甲基)_6，7-二甲基-1H-咪唑基[4，5_c]吡啶-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺、2-乙氧甲基-1-(3-甲氧基丙基)-7-(5-羟甲基吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、1-[ (2，2- 二甲基-1，3- 二氧戊环_4_基)甲基]-2-(乙氧基甲基)-7-(批啶-3-基)-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉_4_胺、4-[3_(4_氨基-6，7-二甲基-2-丙基-1!1-加^11匕0[4，5-(3]吡啶_1_基)丙烷_1_磺酰基]-苯甲酸乙酯、2-丁基-1-{2-[2-(甲基磺酰基)乙氧基]乙基}-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉_4_胺、N-(2-{4-氨基-2-乙氧基甲基_7-[6-(甲磺酰基氨基)己氧基]-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基} -1，1- 二甲基乙基)甲磺酰胺、N- (6- {[4-氨基-2-乙氧基甲基-1- (2-甲磺酰基氨基-2-甲基丙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-7-基]氧基}己基)乙酰胺、1-[4-(I，1-二氧异噻唑啉-2-基)丁基]-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉_4_胺、1-[4- (I，1- 二氧异噻唑啉-2-基)丁基]-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-4-基)-1H-咪唑[4, 5-c]喹啉-4-胺、l-[4-(l，l-二氧异噻唑啉-2-基)丁基]_2_乙氧基甲基_7_苯基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、2-(乙氧基甲基)-1_{[1-(甲基磺酰基)哌啶_4_基]甲基}-7_(吡啶-3-基)-1Η-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、2-(乙氧基甲基)_1_[ (1_异丁基哌啶-4-基)甲基]-7-(吡啶-3-基)-lH-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、2-(乙氧基甲基)-1_{[1-(吗啉-4-基羰基)哌啶-4-基]甲基}-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺、环丙烷酸[3-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丙氧基]酰胺、异丙基氨基甲酸4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1_丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-7-基酯、4-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁酸乙酯、1-[4-氨基-2-乙基-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]-2-甲基丙-2-醇、1-(4-氨基-2-乙基-7_[5-{羟甲基}吡啶-3-基]-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)-2-甲基丙_2_醇、1-(3-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-8-(吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基]丙基)吡咯烷-2-酮、N-(2-{4-氨基-2-乙氧基甲基-7-[6-(甲磺酰基氨基)己氧基]-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基}_1，1-二甲基乙基)乙酰胺、1-{3-[4_氨基-7-(3-羟甲基苯基)-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]丙基}吡咯烷-2-酮、N-{4-[4-氨基-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-3-基)-lH-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]丁基}_N’ -丙基脲、N-{4-[4-氨基-2-乙氧基甲基-7-(吡啶-3-基)-1H-咪唑[4，5_c]喹啉-1-基]丁基} 丁酰胺、5-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)-4,4-二甲基戊-2-酮、1-环己基甲基-2-乙氧基甲基-7-(5-羟甲基吡啶-3-基)-lH-咪唑[4，5-c]喹啉_4_胺、N，N-二甲基-5-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)戊烷_1_磺酰胺、N-{3-[(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)氨基]丙基}甲磺酰胺和/或N，N-二甲基-4-(4-氨基-2-乙氧基甲基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁烧-1-磺酰胺。
[0102]其他合适的TLR7选择性激动剂包括但不限于2_(乙氧基甲基)_1_(2_甲基丙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺(美国专利5，389，640) ;2-甲基-1- [2- (3-吡啶-3-基丙氧基)乙基]-1H-咪唑[4, 5-c]喹啉-4-胺(W002 / 46193) ;N_ (2-{2-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-lH-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]乙氧基}乙基)-N-甲基环己烷羧酰胺(美国专利公开2004 / 0171086) ;1_[2_(苯甲氧基)乙基]-2-甲基-1H-咪唑[4，5_c]喹啉_4_胺(W002 / 46189) #-{8-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-111-咪唑[4，5-(3]喹啉-1-基]辛基}-N-苯脲(美国专利公`开2004 / 0171086 (IRM5)) ;2_ 丁基_1-[5_(甲基磺酰基)戊基]-1H-咪唑[4, 5-c]喹啉-4-胺(W002 / 46192) ;N_ {3-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]丙基}-4_甲基苯磺酰胺(美国专利6，331，539);和N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]环己烷羧酰胺(美国专利公开2004 / 0171086 (IRM8))。也适合使用的是TLR7选择性激动剂N-[4-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基_]甲磺酰胺(Gorden等，2005)。
[0103]TLR8激动剂.合适的TLR8激动剂包括分离的天然TLR8激动剂；和合成的TLR8激动剂。从天然的TLR8激动剂来源分离的TLR8激动剂一般是纯化的，例如纯化的TLR8激动剂的纯度为至少约80 %、至少约90 %、至少约95 %、至少约98 %、至少约99 %或高于99 %。合成的TLR8激动剂通过标准方法制备，纯度一般为至少约80%、至少约90%、至少约95%、至少约98%、至少约99%或高于99%。
[0104]TLR8激动剂包括不附着到任何其他化合物上的TLR8激动剂。TLR8激动剂包括共价或非共价附着到另一化合物上的TLR8激动剂。在一些实施方案中，TLR8激动剂直接附着到另一化合物上。在另一些实施方案中，TLR8激动剂通过接头附着到另一化合物上。[0105]TLR8激动剂包括但不限于诸如R-848及其衍生物和类似物的化合物。合适的TLR8激动剂包括具有与五员含氮杂环稠合的2-氨基吡啶的化合物。此类化合物包括如咪唑喹啉胺，包括但不限于取代的咪唑喹啉胺，例如酰胺取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉胺、芳基醚取代的咪唑喹啉胺、杂环醚取代的咪唑喹啉胺、氨基醚取代的咪唑喹啉胺、磺酰胺醚取代的咪唑喹啉胺、尿素取代的咪唑喹啉醚、硫醚取代的咪唑喹啉胺，和6-、7-、8_或9-芳基或杂芳基取代的咪唑喹啉胺；四氢咪唑喹啉胺，包括但不限于酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺、磺酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺、尿素取代的四氢咪唑喹啉胺、芳基醚取代的四氢咪唑喹啉胺、杂环醚取代的四氢咪唑喹啉胺、氨基醚取代的四氢咪唑喹啉胺、磺酰胺醚取代的四氢咪唑喹啉胺、尿素取代的四氢咪唑喹啉醚和硫醚取代的四氢咪唑喹啉胺；咪唑并吡啶胺，包括但不限于酰胺取代的咪唑并吡啶胺、磺酰胺取代的咪唑并吡啶胺、尿素取代的咪唑并吡啶胺、芳基醚取代的咪唑并吡啶胺、杂环醚取代的咪唑并吡啶胺、氨基醚取代的咪唑并吡啶胺、磺酰胺醚取代的咪唑并吡啶胺、尿素取代的咪唑并吡啶醚和硫醚取代的咪唑并吡啶胺；1，2-桥接的咪唑喹啉胺；6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺；咪唑并萘啶胺；四氢咪唑并萘啶胺；p恶唑并喹啉胺；噻唑并喹啉胺恶唑并吡啶胺；噻唑并吡啶胺P恶唑并萘啶胺；噻唑并萘啶胺；和与吡啶胺稠合的IH-咪唑二聚体、喹啉胺、四氢喹啉胺、萘啶胺或四氢萘啶胺。
[0106]在一个具体实施方案中，TLR8激动剂是酰胺取代的咪唑喹啉胺。在一个备选实施方案中，TLR8激动剂是磺酰胺取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是芳基醚取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是杂环醚取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是氨基醚取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是磺胺醚取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的咪唑喹啉醚。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是硫醚取代的咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是6-、7-、8_或9-芳基或杂芳基取代的咪唑喹啉胺。
[0107]在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂`是磺酰胺取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的四氢咪唑喹啉胺。
[0108]在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是芳基醚取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是杂环醚取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是氨基醚取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是磺酰胺醚取代的四氢咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的四氢咪唑喹啉醚。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是硫醚取代的四氢咪唑喹啉胺。
[0109]在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是酰胺取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是磺酰胺取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是芳基醚取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是杂环醚取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是氨基醚取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是磺酰胺醚取代的咪唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是尿素取代的咪唑并吡啶醚。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是硫醚取代的咪唑并吡啶胺。[0110]在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是1，2-桥接咪唑喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是6，7-稠合的环烷基咪唑并吡啶胺。
[0111]在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是咪唑并萘啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是四氢咪唑并萘啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是p恶唑并喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是噻唑并喹啉胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是p恶唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是噻唑并吡啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是P恶唑并萘啶胺。在另一备选实施方案中，TLR8激动剂是噻唑并萘啶胺。
[0112]在又一备选实施方案中，TLR8激动剂是与吡啶胺稠合的IH-咪唑二聚体、喹啉胺、四氢喹啉胺、萘啶胺或四氢萘啶胺。
[0113]在一些实施方案中，TLR8激动剂是选择性TLR8激动剂，例如所述激动剂通过TLR8调节细胞活性，但不通过TLR7调节细胞活性。TLR8选择性激动剂包括在美国专利公开2004 / 0171086中显示的那些。此类TLR8选择性激动剂化合物包括但不限于美国专利公开2004 / 0171086中显示的化合物，其包括N-{4-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑[4,5-c]喹啉-1-基]丁基}喹啉-3-羧酰胺、N-{4-[4-氨基-2-(2-甲氧基乙基)-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]丁基}喹喔啉-2-羧酰胺、和N-[4-(4-氨基-2-丙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基]吗啉-4-羧酰胺。
[0114]其他合适的TLR8选择性激动剂包括但不限于2-丙基噻唑[4，5-c]喹啉_4_胺(美国专利 6，110,929) #-[2-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑[4，5_c][l，5]萘啶 _1_ 基)乙基]-2-氨基-4-甲基戊酰胺(美国专利6，194, 425) #-[4-(4-氨基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)丁基] -2-苯氧基-苯甲酰胺(美国专利6，451，810) #-[2-(4-氨基-2-丁基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)乙基]-1-丙磺酰胺(美国专利6，331，539)；N-{2-[2-(4-氨基-2-乙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基)乙氧基]乙基}_N’ -苯脲(美国专利公开2004 / 0171086) ;1-{4_[3，5-二氯苯基]硫基} 丁基)-2-乙基-1H-咪唑[4，5-c]喹啉-4-胺(美国专利公开2004 / 0171086) ;N-{2_[4-氨基_2_(乙氧基甲基)-lH-咪唑[4，5-c]喹啉-1-基]乙基}_N’-(3-氰基苯基)尿素(W000 / 76518和美国专利
【发明者】伯顿·迪基, 迈克尔·图维姆, 斯科特·埃文斯 申请人:德克萨斯大学系统董事会