一种抑制免疫球蛋白k轻链基因增强子多肽治疗急性炎症药物中应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及具有促进免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白，具有减轻急性炎症反应对机体破坏的多肽。其序列为VNTLLQTPLHLAVITR是全新的序列，它们可以在体内试验中增加内毒素休克小鼠的生存率，具有潜在的新药开发价值。
【专利说明】一种抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽治疗急性炎症药物中应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白多肽及其应用，具体涉及具有促进免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白、具有减轻急性炎症反应对机体破坏的多肽。
【背景技术】
[0002]脓毒血症(s^sis) —直是一个严重的医学问题。早期脓毒血症不经过及时有效治疗可进展为重症脓毒血症和脓毒血症性休克，两者死亡率分别为20%~30%和40%~70%。医学界一直在研究有效的治疗手段，如早期对症治疗、激活蛋白C、皮质激素治疗等。近年来随着医学研究的深入，对脓毒血症的认识和治疗取得了很大进展。其中，免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白(IKB-Ci)在内毒素休克中扮演着重要角色。
[0003]IKB 蛋白家族成员有 IKB a (MAD-3，pp40)、IKB 3、IKB y /pl05、IKB 8 /plOO、IKB e、Bcl_3以及果蝇属的Cactus等。其家族结构特点是均有多个约33个氨基酸的重复序列，称为崐SWI6/锚蛋白重复序列，主要参与与Rel蛋白的RHD相互作用。IKB蛋白主要有以下三个部分构成:1.与蛋白降解有关的N-末端区；2.能与NF-k B相互作用的内部区(区内含有锚蛋白重复序列ANK)(家族共有结构)主要参与与Rel蛋白的RHD相互作用；
3.称为PEST的C 一端区，主要参与“囚禁"NF-K B在细胞浆中。IKBs家族参与两个信号通路:NF- K B和Toll-like Receptor信号通路。NF- k B的激活必须通过两个步骤:①IKB从NF-k B复合体中解离并降解，暴露NF-K B的核定位序列；②NF-K B发生核易位，并与特异的K B序列结合。
[0004]因此，IKB通过介`导这两条通路，从而调控前炎症性细胞因子、细胞表面受体、转录因子、粘附分子等的生成。最终产生抗炎的作用。因而成为治疗中性粒细胞为主的炎症反应的主要靶点。尽管如此，并没有成熟开发的免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白多肽抑制剂问世，用于治疗脓毒血症。
【发明内容】
[0005]发明目的
本发明提供全新的序列，该序列为免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白多肽，对急性炎症具有很好的疗效。
[0006]技术方案
抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽，其特征在于其序列为VNTLLQTPLHLAVITR。
[0007]抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽在治疗急性炎症药物中的应用。
[0008]有益效果
利用固相合成法化学合成抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽，该多肽具有全新的序列，该多肽可体外促进免疫球蛋白K轻链基因增强子抑制蛋白活力。在内毒素休克模型实验中成功的增加了小鼠的生存率。单核巨噬细胞表达肿瘤坏死因子释放酶，这种酶可切割并释放肿瘤坏死因子，肿瘤坏死因子是炎症反应的核心细胞因子，有加重炎症反应的作用。我们发现的多肽抑制剂可以抑制肿瘤坏死因子释放酶的酶活力，从而减轻了炎症反应，保护机体并减轻炎症的破坏作用。
【具体实施方式】
[0009]本发明涉及多肽由吉尔生化(上海)有限公司合成。
[0010]实施例1
多肽抑制剂体外祀点酶:肿瘤坏死因子释放酶(均购于sigma公司)的IC50值。
[0011]肿瘤坏死因子释放酶的活力是通过切割荧光产生底物Mca-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Dpa-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-NH 检测的(激发波长=320 nm,发射波长=405 nm)。反应在37° C下100沿反应体系中进行。反应开始时向反应体系中加4 W基质金属蛋白酶-3存储液(I ng/W)底物的终浓度为10剛。测得的IC50值为65.32iimol。
[0012]实施例2
用内毒素休克模型检测多肽的体内活力
在建立内毒素休克模型之前，我们首先测定了 LPS (E.coli 0111:B4)小白鼠的LD50为50呢每只小鼠，在实验中我们采用了 100呢每只小鼠，这样，对照组的小鼠可全部死亡。用Regas印in2做了一个阳性对照实验。对照组小鼠注射100 I^g LPS，而Regasepin2实验组的小鼠在注射LPS 5分钟之后,每只小鼠再注射0.7 mg的多肽。通过制作Kaplan-Meier生存曲线发现Regasepin2可有效的保护注射了 100 Mg的小鼠，提高了生存率。成功地在小白鼠上建立内毒素休克模型之后，用该模型检测VNTLLQTPLHLAVITR的体内活力。对照组小鼠(12只)注射100 I^g LPS，而多肽抑制剂组小鼠(12只)在注射LPS 5 min后，每只小鼠注射0.7 mg多肽抑制剂。用Kaplan-Meier生存曲线分析，多肽VNTLLQTPLHLAVITR可有效地保护小白鼠，提高内毒素休克小鼠的生存率。
【权利要求】
1.抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽，其特征在于其序列为VNTLLQTPLHLAVITR。
2.抑制免疫球蛋白K轻链基因增强子多肽，在治疗急性炎症药物中的应用。
【文档编号】A61K38/10GK103739676SQ201310748580
【公开日】2014年4月23日 申请日期:2013年12月31日 优先权日:2013年12月31日
【发明者】罗瑞雪 申请人:罗瑞雪