抗人cd19鼠免疫球蛋白可变区基因及用途的制作方法

专利名称：抗人cd19鼠免疫球蛋白可变区基因及用途的制作方法
技术领域：
本发明属生物技术，主要涉及鼠免疫球蛋白重链和轻链可变区基因，尤其涉及抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因，及在制备B淋巴细胞恶性肿瘤靶向治疗药物中的用途。
背景技术：
血液系统肿瘤如白血病、淋巴瘤是严重危害人类健康的顽症，化学治疗(化疗)仍然是当前治疗血液系统恶性肿瘤的主要方法，但常规化疗对肿瘤细胞与正常细胞之间的选择性较差，因而毒副作用较大，且反复非根治性剂量的化疗，又容易诱生肿瘤细胞的耐药，最终，许多患者因耐药肿瘤复发或大剂量化疗致严重毒副作用如严重感染、出血、重要脏器功能衰竭等而告治疗失败。
与化疗比较，单克隆抗体靶向治疗具有良好的选择性和特异性，它们只杀伤表达靶分子的细胞，而不损伤无靶分子表达的血细胞成分和组织器官细胞，从而可大大提高靶向治疗的特异性，降低药物的全身毒副作用。有效的靶向治疗取决于良好的先导分子，系列特异性表面分化抗原单抗作为先导分子，将药物或毒素特异地带到肿瘤细胞膜上或细胞内，或通过完整抗体激活补体(CDC)或通过抗体介导细胞毒(ADCC)作用以达到杀灭白血病细胞的目的，有着无可替代的优势。目前，大多数高亲和力的单抗属于鼠源性的，用鼠源性单抗进行临床靶向治疗可以发生严重的血清病或因产生人抗鼠免疫球蛋白(Ig)抗体(HAMA)而消除药物的抗肿瘤作用等问题，限制了它们在临床上的有效应用。为了在临床上能大量重复使用鼠源性单抗治疗血液系统恶性肿瘤，就必须最大限度地降低鼠源性单抗对人体的免疫原性。现知，抗体的免疫原性主要位于抗体恒定区(Fc)段，而识别抗原的部分(抗体的可变区)则抗原性较弱。通过适当的方法去除鼠Ig的Fc段而保留可变区Fv段，可以大大降低鼠单抗的免疫原性而保留其识别抗原的特异性。人鼠嵌合型鼠抗人B淋巴细胞表面抗原CD20单抗是该技术的典型代表，其研制方法是采用人B淋巴细胞来免疫Balb/C纯种小白鼠，然后通过鼠-鼠杂交瘤技术研制出抗人CD20单抗杂交瘤细胞株。通过对该杂交瘤细胞株编码抗人CD20免疫球蛋白可变区肽链的信使核糖核苷酸(mRNA)的扩增、克隆以及测序，并将编码该抗体可变区基因与人免疫球蛋白恒定区基因进行重组表达，制成嵌合型人鼠CD20抗体(可变区为鼠源性，恒定区为人源性的基因工程抗体)，使该抗体保留识别CD20抗原的特性，从而特异性地识别人B系淋巴细胞包括表达该抗原的所有淋巴瘤细胞、白血病细胞以及正常细胞，而消除了由鼠源性恒定区对人体产生免疫反应的缺点，从而起到有效的治疗作用。该抗体的临床应用已经使B细胞系肿瘤的治疗进入了一个崭新的时代。该抗体虽然能用于B细胞恶性淋巴瘤的治疗，但大多数急性B祖细胞白血病(B precursor leukemia，BPL)细胞却不表达该抗原而无治疗作用，CD19因它在99％以上的B系肿瘤细胞膜上表达，因而是一个更好的靶向治疗B细胞肿瘤的靶点。要使一个鼠源性单抗能在临床病人体内反复使用的关键是鼠源性抗体的人源化基因改造，而人源化基因抗体研制的关键是该鼠源性抗体可变区基因的序列，因为抗体靶向作用的关键是该抗体的可变区，而编码可变区基因序列是决定每一个单抗各自靶向作用的关键。

发明内容
本发明的一个目的是提供抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8单抗)重链和轻链可变区基因，具有SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2的核苷酸序列，及SEQ IDNO 3和SEQ ID NO 4的氨基酸序列。
本发明的另一个目的是提供抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8单抗)重链和轻链可变区基因在制备治疗B淋巴细胞性恶性肿瘤药物中的应用。B细胞性恶性肿瘤主要包括白血病、淋巴瘤。
采用单抗靶向治疗某种特定血液肿瘤的基本条件是抗体必须能识别某种血液肿瘤细胞膜抗原。ZCH-4-2E8单抗具有良好的识别B淋巴细胞肿瘤细胞膜CD19抗原而不识别其他组织、细胞成分的特性，体外实验表明，2E8免疫毒素对2E8阳性的急性B细胞性白血病细胞具有良好的选择性杀伤作用，而对2E8阴性的细胞却无作用，因此，该抗体具有潜在治疗B细胞性恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤的应用前景。
本发明提供的抗人CD19鼠免疫球蛋白(ZCH-4-2E8单抗)重链和轻链可变区基因，是以小儿未分化型急性淋巴细胞白血病作为免疫原，致敏Balb/C纯种小白鼠，通过鼠-鼠杂交瘤单抗技术研制成功的鼠抗人B淋巴细胞膜抗原[国际分化簇(CD)命名为CD19]的单抗，该抗体已在第6届国际人类白细胞分化抗原协作组会议(HLDA6)上进行了全面鉴定并获得了分化簇(CD)命名。由于同一CD号的单抗，其鼠免疫球蛋白亚类、与细胞的反应谱及某些生物学特性有所不同，某个抗体有它的特殊性，如2E8抗体属鼠免疫球蛋白Mκ轻链(IgMκ亚类)，而我国国内中国医学科学院血液学研究所仅有的另一个CD19克隆(HIB19a)，属IgG1亚类。由于IgM型抗体具有更强的激活补体的作用，因而在靶向杀伤肿瘤细胞方面更显其有效性，为2E8单抗用于B细胞恶性肿瘤的诊断和霸向治疗提供了分子基础。
由于鼠抗人CD19抗体ZCH-4-2E8并非天然存在，而是需要刻意应用特定的抗原进行免疫致敏动物，然后通过细胞融合、筛选、鉴定等一系列繁琐而复杂的技术过程研制而成，本发明完成了对该抗人CD19抗体(ZCH-4-2E8)重链和轻链可变区基因的克隆、测序和完整2E8抗体免疫毒素体外靶向杀伤急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞。基于该基因序列所研制的人源化基因工程抗体将可能对临床B淋巴细胞性白血病及其它B淋巴细胞恶性肿瘤靶向治疗具有十分重要的应用价值。


图1.高纯度的2E8单克隆细胞株的筛选顶排左、中、右图分别为设门策略、阴性对照、2E8抗体阳性；标有红色箭头者(6个)分别为不同阳性程度的2E8亚克隆，其中亚克隆67B11为最佳克隆。
图2.VH2E8PCR扩增电泳图，其中M核酸标志物DL2000，1.模板为2E8cDNA，2.模板为NS-1cDNA；结果显示，采用同一对引物(29号和34号)在2E8细胞cDNA模板中扩增出VH2E8条带，而在NS-1细胞cDNA模板中未扩增出条带，说明该条带为2E8杂交瘤细胞所特有。
图3.VL2E8PCR扩增电泳图，其中M核酸标志物DL2000，1.模板为2E8cDNA，2.模板为NS-1cDNA，引物为37号和44号；3.模板为2E8cDNA，4.模板为NS-1cDNA，引物为37号和42号。采用引物37号和44号在2E8细胞cDNA模板中扩增出VL2E8条带，而在NS-1细胞cDNA模板中没有扩增出条带，说明该条带系2E8杂交瘤细胞所特有；采用另一对引物(37号和42号)虽然在2E8细胞cDNA模板中也扩增出条带，但在NS-1细胞cDNA模板中也扩增出相同大小的片断，说明由该对引物扩增出来的条带并非2E8细胞所特有，而是编码NS-1细胞中非分泌型κ轻链的基因片断。
图4.酶切电泳图。M核酸标志物DL2000，1～4重组质粒(VH2E8)DNA酶切产物，5～8重组质粒(VL2E8)DNA酶切产物。所切出的基因片断大小与目的基因相同，说明VH2E8和VL2E8已分别被成功克隆如载体中。其中2、4、6、7泳道分别为无基因片断插入的空载体。
图5.抗人CD19抗原单抗ZCH-4-2E8的可变区重链基因(VH2E8)序列(两个红色箭头之间的序列)。
图6.抗人CD19抗原单抗ZCH-4-2E8的可变区轻链基因(VL2E8)序列(两个红色箭头之间的序列)。
图7.2E8-Gen免疫毒素(IT)对CD19-的K562(图7A)、Molt-3(图7B)和CD19+的Nalm-6(图7C)白血病细胞的靶向杀伤作用。NC为空白对照，PBS(磷酸盐缓冲液)、Gen为毒素三羟甲基异黄酮、纯2E8为未接毒素的纯化2E8抗体三者为对照组，IT为2E8抗体与毒素耦合物2E8-Gen。
具体实施例方式
本发明结合实施例，作进一步的说明。
实施例一本发明2个基因的核苷酸序列及氨基酸序列1、抗人CD19鼠免疫球蛋白重链可变区基因(单抗ZCH-4-2E8VH2E8)的核苷酸序列(SEQ ID NO 1)及氨基酸序列(SEQ ID NO 3)。
2、抗人CD19鼠免疫球蛋白轻链可变区基因(抗原单抗ZCH-4-2E8VL2E8)的核苷酸(SEQ ID NO 2)及氨基酸序列(SEQ ID NO 4)。
实施例二本发明提供的2个抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因通过下列步骤获得1、ZCH-4-2E8单抗的研制基本按Koller&Milstein报告的鼠-鼠杂交瘤经典方法进行，以小儿急性未分化型淋巴细胞性白血病(uALL)细胞(其免疫表型为HLA-DR+，CD19+，CD10-，CD33-，TdT+，CD7-，CD41a-)作为免疫原，将107白血病细胞给8周龄雌性Balb/C小鼠作腹腔注射，每周一次，共4次，于第4次注射后第3天，脱臼杀死小鼠，无菌取脾细胞与处于对数生长期的小鼠骨髓瘤细胞株NS-1细胞按6∶1混合，以50％聚乙二醇(PEG，美国Sigma公司，分子量3350道尔顿)溶液作为融合媒介进行细胞融合，于96孔板(美国Falcon公司)中进行选择性培养。于融合后第9～20天，隔日用免疫原细胞对培养上清进行间接免疫荧光法(IIF)筛选。阳性孔细胞经3次克隆化并连续2次100％孔达到阳性，即建立了能持续分泌2E8单抗的杂交瘤细胞系。经8个多月的连续传代培养和反复冻融，其分泌2E8单抗的能力稳定。以其腹水(荧光法效价1∶3200)或培养上清(荧光法效价1∶16)作为2E8单抗的来源。
2、最佳克隆的筛选将冻存于液氮(-196℃)中的2E8细胞复苏后进行亚克隆培养，获得6孔单克隆细胞群，分别命名为67A10，67B8，67B11，67D2，67F9，67G10，通过异硫氰酸荧光素(FITC)标记的羊抗鼠免疫球蛋白(GAMIg-FITC)间接标记法比较各单克隆细胞群培养上清在Nalm-6细胞上的平均荧光强度，参见图1。根据两者平均荧光强度的对比，从中筛选出1个最佳亚单克隆细胞株67B11，再次克隆化得到亚克隆83C5，选用83C5作进一步的实验。
3、2E8重、轻链基因(VH2E8、VL2E8)的扩增3.1总RNA的抽提和处理收集最佳克隆(83C5)的2E8杂交瘤细胞及鼠骨髓瘤细胞系NS-1细胞分别约8×106，以核糖核酸(RNA)抽提试剂盒(TRIZOL液)按说明书步骤抽提总RNA。最后溶于25μl DEPC(diethyl-pyrocarbonate，焦碳酸二乙酯)水中，并加入RNasin (核糖核苷酸酶抑制剂)至终浓度为1U/μl(单位/微升)。紫外分光光度计测定A260、A280及其比值，1％琼脂糖电泳观察总RNA。进行逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)前，各取2μl 2E8及NS-1总RNA，按照RQ1(无RNA酶的DNA酶试剂盒)说明的方法，消化总RNA中污染的基因组DNA。
3.2总RNA的抽提(1)计数细胞，共8×106个活细胞；(2)常温下1000转/分钟(rpm)离心15分钟，弃上清；(3)沉淀中加入无菌生理盐水后在1000rpm条件下离心15分钟，重复洗涤2次；(4)向沉淀中加入8ml TRIZOL(1ml/106细胞)，立即用5ml无菌针筒反复抽打剪切数分钟；(5)将上述TRIZOL溶液按1ml/管转入1.5ml带盖小塑料(eppendorf)管中，室温下静置5分钟；(6)每管加入0.2ml氯仿，剧烈摇动15秒，室温下静置10分钟；(7)4℃下12000g离心15分钟，将水相转入新的1.5ml的eppendorf管中，每管加入0.5ml异丙醇，立即摇匀，室温下静置10分钟；(8)4℃下，12000g离心10分钟；(9)弃上清，每管加入1.5ml 75％乙醇，混匀，4℃下，7500g离心5分钟，弃上清；(10)真空干燥机中晾干，每管加入25μl无RNA酶的DEPC水溶解沉淀，-80℃冰箱保存。
3.3总RNA浓度的测定取出2μl新抽提的总RNA，加入98μl DEPC水混匀，紫外分光光度计(GeneQuant II)测定260吸光值(A260)及280吸光值(A280)，RNA实际浓度用如下公式计算 3.4总RNA凝胶电泳取新抽提的总RNA 3μl加入电泳上样缓冲液5μl，1％琼脂糖凝胶内含溴乙啶(EB)浓度0.5μg/ml，经100V直流电压下电泳5分钟，凝胶成像系统观测结果并摄像保存。
3.5总RNA的处理取总RNA 1μl+无RNA酶的DNA酶(RNase-freeDnase)(1U/μl)10μl+RNasin(40U/μl)1μl+氯化镁(25mM)1μl，总量达13μl，经37℃×1小时，90℃×5分钟孵浴后立即置冰上待用。
3.6RT-PCR按照说明书，将RQ1无RNA酶的DNA酶处理过的总RNA进行逆转录(25μl体系)，并用DNA纯化试剂盒(QIAquick)纯化mRNA/cDNA杂交双链。取纯化的cDNA2.5μl进行PCR。
3.6.1RT反应体系取RQ1处理过的总RNA 13μl+寡聚脱氧胸苷[Oligo(dT)]1.5μl，总量达14.5μl，经65℃预变性5分钟，立即置冰上，加入以下试剂DEPC水2.5μl+5倍缓冲液5μl+25mM dNTP(脱氧核苷混合物)0.5μl+RNA酶抑制剂1.5μl+逆转录酶(200U/μL)1μl至总体积25μl，经37℃，30分钟孵浴以合成互补脱氧核糖核苷酸(cDNA)，置95℃5分钟，然后移至4℃冰浴备用。
3.6.2PCR体系(1)50μl的PCR反应体系2.5μl纯化的2E8或NS-1cDNA，10pmol的轻链或重链可变区上下游引物各1μl，0.5μl 25mM的dNTP，5μl 10×高保真PCR缓冲液，2μl 50mM×MgSO4(硫酸镁)溶液，0.2μl高保真Taq聚合酶(Platinum TaqHigh Fidelity)；引物序列如下重链可变区5’引物序列(SEQ ID NO 5)GAGGTGAAGCTGGTGGAGTC重链可变区3’引物序列(SEQ ID NO 6)
GGAGACGAGGGGGAAAAGCTTTGGGAAGGACTGACTCTC轻链可变区5’引物序列(SEQ ID NO 7)GATATCCAGATGACACAGACT轻链可变区3’引物序列(SEQ ID NO 8)GGATACAGTTGGTGCAGCATC(2)反应条件94℃预变性2分钟，94℃变性30秒，57℃退火30秒，72℃延伸30秒，共38个循环；(3)最后一个循环完成后，加入1μl Taq DNA Polymerase(Taq DNA聚合酶)72℃延伸7分钟；(4)取5μl PCR产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，同时加标准分子量标志物DL2000，鉴定PCR产物片断大小，分别命名为VL2E8和VH2E8基因。结果可观察到350碱基对(bp)左右的VL2E8条带和400bp左右的VH2E8条带。将前述阳性条带切胶回收纯化得到VL2E8和VH2E8基因。以作为该杂交瘤融合对象的NS-1细胞cDNA为模板的PCR产物电泳结果未见扩增条带(参见图2，图3)。
4.VH2E8、VL2E8基因扩增产物的克隆和鉴定将VH2E8和VL2E8基因片段通过连接酶分别与克隆载体pGEM-T Easy连接，获得的连接产物pGEM-TEasy/VH和pGEM-T Easy/VL，通过转化DH5α感受态细菌，得到数十个白色菌落和数个蓝色菌落，分别挑取4个白色菌落进行质粒扩增，抽提后进行核酸限制性内切酶EcoRI酶切处理，1％琼脂糖电泳结果均可见350bp和400bp左右的目的片段(图4)，其中M低核糖核苷酸(DNA)标准分子量标志物；1VH2E8基因；2NS-1重链可变区基因(VHNS-1)；3VL2E8基因；4NS-1轻链可变区基因(VLVS-1)；5～8重组质粒pGEM-T Easy/VL的EcoRI酶切；9～12重组质粒pGEM-T Easy/VH的EcoRI酶切。
5.VH2E8、VL2E8基因序列测定和分析对阳性重组质粒纯化后进行测序，VH2E8(图5)和VL2E8(图6)基因均符合小鼠Ig可变区框架结构。VH2E8基因全长366bp(见序列SEQ ID NO 1)，编码122个氨基酸(见序列SEQ ID NO 3)，在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上进行检索，发现此重链可变区基因与小鼠免疫球蛋白重链的同源性达98％，氨基酸序列与小鼠Ig重链的同源性达86％，归属于小鼠Ig的VH基因。氨基酸序列分析结果显示，重链可变区含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR)，在第22位和第96位为特征性Cys(半胱氨酸)。VH2E8氨基酸序列结构框架如下1～25 FR126～33CDR134～50FR251～58CDR259～96FR397～110 CDR3111～122 FR4VL2E8基因全长321bp(见序列SEQ ID NO 2)，编码107个氨基酸(见序列SEQ ID NO 4)，在NCBI上进行检索，发现此轻链可变区基因与小鼠Igκ链的同源性达97％，氨基酸序列与小鼠Igκ链的同源性达95％，归属于小鼠Ig的Vκ基因。氨基酸序列分析结果显示，轻链可变区含有明确的4个框架区(FR)和3个抗原决定簇互补区(CDR)，在第23位和第88位为特征性半胱氨酸(Cys)。VL2E8氨基酸序列框架如下1～26 FR127～32 CDR133～49 FR250～52 CDR253～88 FR389～97 CDR398～107 FR4实施例三为证实2E8抗体的潜在临床治疗应用前景，我们将纯化的2E8鼠源性完整抗体与三羟基异黄酮(Genistein，简称Gen)偶合制成2E8抗体的免疫毒素(2E8-Gen)，观察其对2E8阳性(急性B淋巴细胞性白血病，Nalm-6)和阴性(急性T细胞白血病细胞系Mplt-3和髓性白血病细胞系)细胞进行靶向杀伤研究，结果发现，2E8-Gen对Nalm-6细胞(B细胞系白血病/淋巴瘤细胞株)具有很强的选择性杀伤作用，经37℃48小时孵浴培养后，2E8-Gen组的细胞存活率仅5％，明显高于对照组，且2E8-Gen对2E8阴性的Molt-3和K562细胞却无杀伤作用，说明2E8-Gen具有良好的靶向杀伤B细胞白血病细胞的作用(参见图7)，其中PBS为磷酸盐缓冲液，Gen为游离三羟基异黄酮，纯化2E8为纯化的2E8鼠免疫球蛋白IgMκ。
无需进一步详细阐述，相信采用前面所公开的内容，本领域技术人员可最大限度地应用本发明。因此，前面的实施方案应理解为仅是举例说明，而非以任何方式限制本发明的范围。
本发明涉及的序列<120>抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因及用途<160>6<170>Patent In Version 2.1<210>1<211>366<213>人工序列<220>
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<223>101a 79c 102g 84t<400>1GAGGTGAAGC TGGTGGAGTC GGGACCTGAG CTGAAGAAGC CTGGAGAGAC AGTCAAGATC 60TCCTGCAAGG CTTCCGGGTA TTCCTTCAGA AACTATGGAA TGAACTGGGT GAAGCAGGCT 120CCAGGAAAGG GTTTAAAGTG GATGGGCTGG ATAAACACCT ACAGTGGAGA GCCAACACAT 180GCTGATGACT TCAAGGGACG GTTTGCCTTC TCTTTGGAAA CCTCAGCTAG TACTGCCTAT 240TTGCAGATCA ACAACCTCAA AAATGAGGAC ATGGCTACAT ATTTCTGTGC AAGACGGGAT 300TTCGACGGAT ATTACTATGC TATGGACTAC TGGGGTCAAG GAACCTCAGT CACCGTCTCC 360TCAGAG 366<210>2<211>321<212>DNA<213>人工序列<220>
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<223>92a 71c 74g 84t<400>2GATATCCAGA TGACACAGAC TTCATCCTAC TTGTCTGTAT CTCTAGGAGG CAGAGTCACC 60ATTACTTGCA AGGCAAGTGA CCACATTAAT AATTGGCTAG CCTGGTATCA GCAGAAACCA 120GGAAATGCTC CTAGGCTCTT AATATCTGGT GCAACCAGTT TGGCAACTGG GATTCCTTCA 180AGATTCAGTG GCAGTGGATC TGGAAAGGAT TACACTCTCA GCATTACCAG TCTTCAGACT 240GAAGATGATG CTACTTATTA CTGTCAACAG TATTGGAGTA CTCCGTGGAC GTTCGGTGGA 300
GGCACCAAGC TGGAAATCAA A321<210>3<211>122<212>
<213>人工序列<220>
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<222>
<223>按照大肠杆菌偏爱的密码子，设计了酶切位点和接头肽的编码hPTH(1-34)的合成基因<400>3EVKLVESGPE LKKPGETVKI SCKASGYSFR NYGMNWVKQA PGKGLKWMGW INTYSGEPTH 60ADAFKGRFAF SLETSASTAY LQINNLKNED MATYFCARRD FDGYYYAMDY WGQGTSVTVS 120SE 122<210>4<211>107<212>
<213>人工序列<220>
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<223>
<400>4DIQMTQTSSY LSVSLGGRVT ITCKASDHIN NWLAWYQQKP GNAPRLLISG ATSLATGIPS 60RFSGSGSGKD YTLSITSLQT EDDATYYCQQ YWSTPWTFGG GTKLEIK107<210>5<211>20<212>
<213>人工序列<220>
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<223>重链可变区5’引物序列
<400>5GAG GTG AAG CTG GTG GAG TC<210>6<211>39<212>
<213>人工序列<220>
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<223>重链可变区3’引物序列<400>6GGA GAC GAG GGG GAA AAG CTT TGG GAA GGA CTG ACT CTC<210>7<211>21<212>
<213>人工序列<220>
<221>
<222>
<223>轻链可变区5’引物序列<400>7GAT ATC CAG ATG ACA CAG ACT<210>8<211>21<212>
<213>人工序列<220>
<221>
<222>
<223>轻链可变区3’引物序列<400>8GGA TAC AGT TGG TGC AGC ATC
权利要求
1.抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因，具有SEQ ID NO 1和SEQ ID NO 2的核苷酸序列。
2.抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因，具有SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因在制备治疗B淋巴细胞性恶性肿瘤药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因的用途，其特征是在制备治疗白血病药物中的应用。
5.根据权利要求3所述的抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因的用途，其特征是在制备治疗淋巴瘤药物中的应用。
全文摘要
本发明提供抗人CD19鼠免疫球蛋白可变区基因，具有SEQ ID NO 1和SEQID NO 2的核苷酸序列，及SEQ ID NO 3和SEQ ID NO 4的氨基酸序列。本发明提供的单抗具有良好的识别B淋巴细胞肿瘤细胞膜CD19抗原而不识别其他组织、细胞成分的特性，体外实验表明，该抗体对急性B细胞性白血病细胞具有良好的选择性杀伤作用，因此，该抗体具有潜在治疗B淋巴细胞性恶性肿瘤包括白血病、淋巴瘤的应用前景。可在制备治疗B淋巴细胞性恶性肿瘤药物中的应用。
文档编号C07K16/18GK1884535SQ200610052289
公开日2006年12月27日 申请日期2006年7月4日 优先权日2006年7月4日
发明者汤永民 申请人:浙江大学