治疗骨质疏松的植物提取物及其制备药物或保健品的应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于植物提取物领域，涉及一种治疗骨质疏松症的黄开口提取物。该提取物是采用如下方法制备的：（1）将干燥的黄开口粉碎，加70%～90%乙醇，于水浴回流提取，提取液回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏；（2）将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7～9，上样体积6BV～8BV，水洗4BV～6BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂7BV～9BV洗脱，流速为2BV/h～4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
【专利说明】治疗骨质疏松的植物提取物及其制备药物或保健品的应用
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于植物提取物领域，涉及一种治疗骨质疏松症的黄开口提取物。
[0003]
【背景技术】
[0004]骨质疏松症主要分为原发性和继发性，原发性除特发性外，分为I型和II型，I型又称为绝经后骨质疏松，为高转换型，主要原因为雌性激素缺乏；11型又称为老年性骨质疏松，为低转换型，由于年龄的老化。骨质疏松症由多种因素所致，它的基本病理机理是骨代谢过程中骨吸收和骨形成的偶联出现缺陷，导致人体内的钙磷代谢不平衡，使骨密度逐渐减少而引起的临床症状。
[0005]病因:1.特发性(原发性):幼年型、成年型、经绝期、老年性。2.继发性:(1)内分泌性皮质醇增多症、甲状腺功能亢进症、原发性甲状旁腺功能亢进症、肢端肥大症、性腺功能低下、糖尿病等。(2)妊娠、哺乳 。(3)营养性蛋白质缺乏、维生素C、D缺乏、低钙饮食、酒精中毒等。(4)遗传性成骨不全染色体异常。(5)肝脏病。(6)肾脏病慢性肾炎血液透析。
(7)药物皮质类固醇、抗癫痛药、抗肿瘤药(如甲氨蝶呤)、肝素等。(8)废用性全身性骨质疏松见于长期卧床、截瘫、太空飞行等；局部性的见于骨折后、伤后肌萎缩等。(9)胃肠性吸收不良、胃切除。(10)类风湿性关节炎。(11)肿瘤多发性骨髓瘤转移癌、单核细胞性白血病等。(12)其他原因吸烟骨质减少、短暂性或迁徙性骨质疏松。
[0006]检查:(一)实验室检查:1.血钙、磷和碱性磷酸酶在原发性骨质疏松症中，血清钙、磷以及碱性磷酸酶水平通常是正常的，骨折后数月碱性磷酸酶水平可增高。2.血甲状旁腺激素应检查甲状旁腺功能除外继发性骨质疏松症。原发性骨质疏松症者血甲状旁腺激素水平可正常或升高。3.骨更新的标记物骨质疏松症患者部分血清学生化指标可以反应骨转换(包括骨形成和骨吸收)状态，在骨的高转换状态(例如I型骨质疏松症)下，这些指标可以升高，也可用于监测治疗的早期反应。4.晨尿钙/肌酐比值正常比值为0.13±0.01，尿钙排量过多则比值增高，提示有骨吸收率增加可能。(二)辅助检查:骨影像学检查和骨密度:(I)对于有局部症状患者应摄取病变部位的X线片。(2)骨密度检测骨密度检测是骨折最好的预测指标。
[0007]治疗:1.药物治疗:临床上用来防治骨质疏松的药物有:钙制剂，包括有逸得乐、凯思立，钙尔奇D、乐力、葡萄糖酸钙口服液、龙昌钙+D 口服液、劲得钙、巨能钙和超微钙；抑制骨吸收药物，如去氢孕嗣、倍美力片和利维爱等；双膦酸盐类，如福善美、骨麟、邦得林和吉力舒宁；成骨治疗药物，如特乐定；促进矿化的维生素类药物，如法能(Ια-羟基维生素D3)、罗钙全(钙三醇)、萌格旺(阿法骨化醇)、立庆(阿法骨化醇片)。2.外科治疗:只有在因骨质疏松症发生骨折以后，才需外科治疗，其目的在于治疗骨折，尽早恢复正常功能。
[0008]黄开口，是报春花科珍珠菜属植物轮叶过路黄(Lysimachia klattiana Hance)的干燥全草。轮叶过路黄为多年生草本，全株密被锈褐色多细胞长柔毛。茎直立少分枝，高15~45厘米。叶片3~4枚轮生，在茎顶端多数叶聚生，茎下部叶有时对生，叶片椭圆形或椭圆状披针形，长2~5厘米，宽7~12毫米，先端急尖至渐尖，基部狭楔形，全缘，几无柄。花密生于茎顶端；花萼5深裂，裂片披针形，先端渐尖，长约I厘米，被毛并具不明显的黑色线条，背部中脉凸起；花冠黄色，漏斗状，5深裂，裂片舌状椭圆形，较花萼略长，先端渐尖，钝圆或微凹，有黑色线条；雄蕊5枚，长度仅为花冠的1/2，着生于花冠管的基部，花丝基部合生成环状；子房近圆球形，I室，胚珠多数。蒴果球形，直径约4毫米；种子多数，光滑。花期5~6月，果期6~7月。生于山坡林缘，溪边灌丛下或路边草丛中。分布于山东、江苏、安徽、浙江、江西、福建、湖北、湖南、贵州、四川、河南等省区。采收加工:5~6月采收带根的全草，洗净，晒干。药材性状:干燥全草长15~40厘米，通常扭曲。全株被锈褐色细长柔毛，以茎部最多。茎单生，圆柱形，灰绿色，有纵条纹，断面中空。叶片多皱缩、破碎，3至多片轮生，完整叶展平后为椭圆形或披针形，全缘，几无柄。花多朵密集于茎顶叶腋内；萼片狭披针形，被柔毛和黑色线条，花冠黄色，漏斗状，有黑色线条。蒴果近球形，直径约4毫米，含多数种子。气淡，味微酸。以身干、灰绿色、茎叶嫩细、叶多、无泥杂者为佳。性味和功用:微酸、涩，凉。止血，降血压，解蛇毒。用于降血压，肺结核咯血；外用治毒蛇咬伤，外伤出血。常用量15~30克，水煎服，或鲜草捣汁内服，外用鲜草捣烂敷患处。
[0009]本发明提供了一种治疗骨质疏松症的黄开口提取物，研究证明该提取物具有明显的抑制骨代谢，增加骨稳定的作用。
【发明内容】
[0010]本发明的目的是提供一种黄开口提取物。 [0011]本发明的另一目的是提供该提取物的制备方法。
[0012]本发明的还提供该提取物在制备治疗骨质疏松症以及风湿性关节炎症药物中的应用。
[0013]本发明的目的是通过以下方式实现的:
一种治疗骨质疏松症的黄开口提取物，该黄开口提取物是采用如下方法制备的:
(1)将干燥的黄开口粉碎，加15~25倍量70%~90%乙醇，于60V~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到黄开口总提取物浸膏；
(2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7~9，上样体积6BV~8BV，水洗4BV~6BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂7BV~9BV洗脱，流速为2BV/h~4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
[0014]所述黄开口提取物优选是采用如下方法制备的:
(1)将干燥的黄开口粉碎，加15倍量90%乙醇，于60°C水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏；
(2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积88￥，水洗48￥除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
[0015]所述黄开口提取物还可以优选采用如下方法制备:
(I)将干燥的黄开口粉碎，加25倍量70%乙醇，于70°C水浴回流提取2次，每次80min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏；
(2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:9，上样体积68￥，水洗68￥除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂7BV洗脱，流速为4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
[0016]所述黄开口提取物还可以优选采用如下方法制备:
(1)将干燥的黄开口粉碎，加20倍量80%乙醇，于65°C水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏；
(2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积78￥，水洗58￥除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
[0017]所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
[0018]所述口服制剂优选制备为片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
[0019]所述黄开口提取物可采用如下方法制备为硬胶囊剂:取黄开口提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，装入硬胶囊，即得。
[0020]所述黄开口提取物可采用如下方法制备为片剂:取黄开口提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。
[0021]本发明所述的黄开口提取物可用于在制备治疗骨质疏松症药物或保健品。
[0022]本发明所述的黄开口提取物还可用于在制备治疗风湿性关节炎症药物或保健品。
[0023]通过如下实验研究验证本发明的技术效果:
实验一:黄开口提取物治疗去势大鼠骨质疏松症的实验研究 I材料与方法
1.1动物32只4个月龄雌性SD大鼠，体重:260g±30g。
[0024]1.2试剂与药品黄开口，采集于江苏省新浦区南云台林场；黄开口提取物，按照本发明说明书实施例1所述的方法制备；苯甲酸雌二醇(2mg/ml)，上海第九制药厂产品；血钙测定试剂盒、血磷测定试剂盒、ALP试剂盒，北京中生公司。戊巴比妥钠，上海第六制药厂。
[0025]1.3主要仪器BT224半自动生化分析仪，双能X线骨密度仪。
[0026]1.4动物造模去势手术:以2%戊巴妥钠按40mg/kg体重腹腔注射麻醉，在背部中央十二肋下切开肌肉、腹膜，揭开脂肪层，切除左右卵巢。其中8只仅作腹腔切开而不切除卵巢的假手术，作正常空白对照组(Control组)。
[0027]1.5分组和给药实验动物分为4组:正常空白对照组(Control组)8只，即假手术组，生理盐水3ml/kg灌胃。24只切除卵巢的大鼠随机分成3组:模型组(0P组)，以生理盐水3ml/kg ；E组(阳性对照组)，用雌二醇溶解在3 ml生理盐水中，浓度200 μ g/kg ；FM组，将其溶解在3 ml生理盐水中，浓度1.5g/kg。每天灌胃I次，连续给药90d。
[0028] 1.6观察指标用药结束后通过眼球后取血，根据试剂盒说明，用比色法测定Ca2+、P3+和ALPase活力。再取大鼠右侧大股骨和胫骨，剃除软骨组织，用双能X线骨密度仪测定股骨和胚骨的骨密度(Bone Mineral Density, BMD)。
[0029]1.7统计学处理所有数据均用(x 土s)表示，用SPSS 11.0统计软件one wayANOVA, LSD方法分析，P < 0.05为有统计学意义。[0030]2 结果
2.1对Ca2+、P3+、ALPase影响模型组(0P组)去势大鼠血清中的Ca2+、P3+和ALPase活力与正常空白对照组(Control组)相比均明显升高。服用黄开口提取物提物后，Ca2+、P3+和ALPase活力与模型组(0P组)相比，黄开口提取物提物组有明显著降低。见表1。
[0031]表1各组血清中Ca2+、P3+和ALPase活力平均值比较(i 士 s)
【权利要求】
1.一种治疗骨质疏松症的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的黄开口粉碎，加15~25倍量70%~90%乙醇，于60V~70°C水浴回流提取2次~4次,每次70min~80min,合并提取液,回收乙醇,得到黄开口总提取物浸膏； (2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7~9，上样体积6BV~8BV，水洗4BV~6BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂7BV~9BV洗脱，流速为2BV/h~4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
2.如权利要求1所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的黄开口粉碎，加15倍量90%乙醇，于60°C水浴回流提取4次，每次70min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏； (2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:7，上样体积88￥，水洗4BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂9BV洗脱，流速为2BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
3.如权利要求1所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的黄开口粉碎，加25倍量70%乙醇，于70°C水浴回流提取2次，每次80min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏； (2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:9，上样体积68￥，水洗68￥除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂7BV洗脱，流速为4BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
4.如权利要求1所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物是采用如下方法制备的: (1)将干燥的黄开口粉碎，加20倍量80%乙醇，于65°C水浴回流提取3次，每次75min，合并提取液，回收乙醇，得到黄开口总提取物浸膏； (2)将得到的黄开口总提取物浸膏用D-140型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1:8，上样体积78￥，水洗5BV除杂，以乙酸乙酯:丙酮=10:1的洗脱剂8BV洗脱，流速为3BV/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，干燥，即得。
5.如权利要求1~4任意一项所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物采用药学中常规的制药方法制备成口服制剂。
6.如权利要求5所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物采用药学中常规的制药方法制备成片剂、丸剂、硬胶囊剂、颗粒剂、口服液。
7.如权利要求6所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物采用如下方法制备:取黄开口提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，装入硬胶囊，即得。
8.如权利要求6所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物采用如下方法制备:取黄开口提取物，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成颗粒，干燥，压制成片，即得。
9.如权利要求1~4任意一项所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物在制备治疗骨质疏松症药物或保健品中的应用。
10.如权利要求1~4任意一项所述的黄开口提取物，其特征在于，该黄开口提取物在制备治疗风湿 性关节炎症药物或保健品中的应用。
【文档编号】A61P19/02GK103989716SQ201410196352
【公开日】2014年8月20日 申请日期:2014年5月12日 优先权日:2014年5月12日
【发明者】吴平安, 李阳, 姚琳, 刘玲 申请人:王恒信