头孢喹肟脂质体的制作方法
【专利摘要】头孢喹肟脂质体，属于药剂学领域，所述脂质体的粒径小于1000nm，主要由下述重量份的原料制成：头孢喹肟1份、磷脂1～40份、固醇或大豆异黄酮糖苷或大豆皂醇0～15份、附加剂0～15份。所述头孢喹肟脂质体可以制成液体制剂，也可以添加适量支架剂制成固体制剂。本发明制得的头孢喹肟脂质体或头孢喹肟长循环脂质体不含刺激性物质，能消除过敏反应，所得制剂稳定性好，脂质体平均粒径在1000nm以下，包封率大于80%。其制备方法工艺成熟、简便易行，便于工业化生产。
【专利说明】头孢喹肟脂质体
【技术领域】
[0001]本发明属于药剂学领域，具体涉及一种新型头孢喹肟制剂一头孢喹肟脂质体。【背景技术】
[0002]头孢喹肟(英文名=Cefquinome)是动物专用第四代头孢类抗生素，性状:白色、类白色至淡黄色粉末，其特点是:1)对β -内酰胺酶高度稳定；2)其内在抗菌活性强于第三代头孢菌素头孢噻呋，与第三代头孢相比，四代头孢的血浆半衰期长，无肾毒性；3)有很强的抗菌活性，对金葡菌、链球菌、铜绿假单孢菌、肠细菌科(大肠杆菌、沙门氏菌、克雷伯氏菌、柠檬酸菌、粘质沙雷菌)都有极强的杀灭作用，对许多耐甲氧西林的葡萄球菌及肠杆菌也有良好的杀灭作用；4)抗菌谱广，抗菌活性强，适于非肠道给药。
[0003]然而，头孢喹肟在水中的溶解度极低，因此在制备成制剂时存在一定困难。目前上市的头孢喹肟，是头孢喹肟溶解于有机溶剂(二甲基甲酰胺、苯甲醇、聚氧乙烯蓖麻油、马来酸和乙醇)而形成的制剂，注射使用后可引起严重的过敏反应，主要表现为寒战、发热、心动过速、支气管痉挛、呼吸困难以及低血压。这种过敏反应可能是头孢喹肟本身或溶媒中的聚氧乙烯蓖麻油引起的。因此，迫切需要改变头孢喹肟的剂型，以增加头孢喹肟的水溶性，降低头孢喹肟自身的毒性反应。
【发明内容】
[0004]本发明的目的旨在提供一种新型的头孢喹肟制剂。 [0005]基于上述目的，本发明采取了如下技术方案:头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟1份、磷脂I~40份、固醇或大豆异黄酮糖苷或大豆皂醇O~15份、附加剂O~15份。
[0006]所述磷脂选自卵磷脂、大豆磷脂、氢化大豆磷脂、氢化卵磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺。
[0007]所述固醇选自胆固醇、二氢胆固醇和麦角固醇。
[0008]所述附加剂包括抗氧化剂、表面活性剂和稳定剂。
[0009]所述抗氧剂选自维生素Ε、维生素E酯、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、叔丁基对羟基茴香酯、二叔丁基对甲酚、半胱氨酸和蛋氨酸；所述表面活性剂选自脱氧胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、牛磺胆酸盐、胆酸、吐温80、泊洛沙姆和司盘；所述稳定剂选自硬脂酸、磷脂酸、十四酸、油酸和甘油。
[0010]所述磷脂2~30份、固醇或大豆异黄酮糖苷或大豆皂醇I~10份、附加剂I~10份。
[0011]所述头孢喹肟脂质体为液体制剂，采用下述任意一种方法制备而成:(1)薄膜分散法:将头孢喹肟、磷脂、固醇以及脂溶性附加剂溶于有机溶剂中，在20~60°C下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入溶有水溶性附加剂的水相介质中水合，超声或高压均质后即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(2)注入法:将头孢喹肟、磷脂、固醇以及脂溶性附加剂溶于有机溶剂中制成脂质溶液，吸取该脂质溶液注入20~60°C的溶有水溶性附加剂的水相介质中，注入完毕继续搅拌去除有机溶剂，然后进行超声或高压均质处理即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(3)逆向蒸发法:将头孢喹肟、磷脂、固醇、脂溶性附加剂溶于有机溶剂中，然后加入溶有水溶性附加剂的水相介质，超声或高速剪切使之形成稳定的W/Ο型初乳，然后减压蒸去有机溶剂，即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(4)熔融法:按比例称取头孢喹肟、磷脂、固醇、脂溶性附加剂于60~80°C加热熔融，加入溶有水溶性附加剂的水相介质混合，然后经超声或高压均质处理即得头孢喹肟脂质体液体制剂；所述水相介质为纯水、生理盐水、甘露醇水溶液、葡萄糖水溶液或者是pH为4~8的磷酸盐缓冲液、枸缘酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，有机溶剂选自乙醇、甲醇、乙酸、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷。所得头孢喹肟脂质体液体制剂可作为口服制剂使用，也可与适量注射用水、生理盐水或葡萄糖注射液振荡水合，形成头孢喹肟脂质体注射剂。
[0012]所述原料还包括I~2倍于头孢喹肟重的修饰材料，制备时随水相介质加入体系中或随其他脂质成分一同加入；所述修饰材料选自聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、壳聚糖和聚乙二醇-磷脂衍生物，其中，聚乙二醇-磷脂衍生物选自聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇二棕榈酰磷脂酰胆碱、聚乙二醇二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇氢化大豆磷脂酰乙醇胺和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰胆碱，聚乙二醇的平均分子量为200~20000。加入修饰材料，将头孢喹肟制成长循环脂质体，能够进一步延长头孢喹肟脂质体的血液循环时间，提高头孢喹肟脂质体的靶向性和生物利用度，降低头孢喹肟的毒副作用。
[0013]所述的聚乙 二醇平均分子量为2000~5000。
[0014]所述头孢喹肟脂质体为固体制剂，在所述头孢喹肟脂质体液体制剂中加入支架剂或在制备液体制剂时随水相介质加入支架剂，然后对所得脂质体液体制剂进行冷冻干燥或喷雾干燥即得。所述支架剂可选择甘氨酸、丝氨酸、蔗糖、乳糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖、右旋糖苷或白蛋白中的一种或任意组合，其用量按磷脂重量比计算为1份磷脂加0.1~1000份支架剂。将头孢喹肟脂质体制成固体制剂，可延长头孢喹肟脂质体的存放时间，并便于运输。
[0015]脂质体属于超微粒药物载体，具有淋巴系统走向性，属于靶向给药系统的一种新剂型。它具有类细胞结构，或是通过内吞作用进入溶酶体，然后被酶消化释放药物，或是通过细胞融合作用，即脂质膜材与细胞膜构成物相似而融合进入细胞内，继而被消化释放药物，使药物在靶区组织中维持较高浓度，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数、减小药物的给药剂量和降低药物的毒性；经脂质体携带后，可保护药物活性基团在内环境中不被降解，还可延长药物血中循环时间
本发明将头孢喹肟包封于类脂双分子层中，制成一种超微球状脂质体，增加了药物的水溶性和稳定性，能够阻止药物析出晶体，减少头孢喹肟自身的毒性反应。同时，被脂质体包裹的头孢喹肟具有靶向性，能选择性到达病变部位、组织和细胞，且在更长时间内维持有效血药浓度，提供持续的治疗效果，从而增加头孢喹肟的疗效和生物利用度，降低不良反应。对头孢喹肟脂质体修饰得到的头孢喹肟长循环脂质体，缓慢释放药物，在体内可以逃匿MPS的捕获，延长脂质体在血液中的循环时间，达到缓释、靶向、长效的作用。
[0016]本发明制得的头孢喹肟脂质体或头孢喹肟长循环脂质体不含刺激性物质，能消除过敏反应，所得制剂稳定性好，脂质体平均粒径在1000nm以下，包封率大于80%。其制备方法工艺成熟、简便易行，便于工业化生产。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
[0018]实施例1
头孢喹厢脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹厢50mg、卵磷脂500mg、胆固醇40mg。其为液体制剂，采用薄膜分散法制备而成:取头孢喹肟、卵磷脂、胆固醇投入茄形瓶中，加入20ml乙醇:丙酮体积比=2:1的混合溶剂，超声使原料充分溶解；将茄形瓶置于40°C恒温水浴中减压旋转蒸发挥去有机溶剂，在瓶内壁上形成一层脂质薄膜；缓慢加入IOml磷酸盐缓冲液(pH7.0)，水合，涡旋振荡，使茄形瓶上的脂质薄膜完全溶解下来；混合液经室温超声分散(超声功率600W) 30min,即制得头孢喹肟脂质体液体制剂。
[0019]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为257nm,粒子直径均在500nm以下,粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0020]实施例2
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟50mg、大豆磷脂200mg、脑磷脂50mg、大豆异黄酮糖苷20mg、维生素E (附加剂)10mg、胆酸钠(附加剂)0.15mg。其为液体制剂，采用注入法制备而成:精确称取头孢喹肟、大豆磷脂、脑磷脂、大豆异黄酮糖苷以及维生素E，W IOml乙醇将之溶解，制成脂质溶液；用注射器吸取该脂质溶液缓缓注入30ml含0.5%胆酸钠的生理盐水(水相介质，40°C)中，注入完毕用电子恒速搅拌器以2000r/min的转速搅拌至乙醇除尽，然后高压均质(均质压力1000Opsi)处理5次，即得头孢喹肟脂质体液体制剂，置4°C冰箱中保存备用。
[0021]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为50nm，粒子直径均在150nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0022]实施例3
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟lOOmg、氢化卵磷脂2000mg、心磷脂50mg、大豆皂醇800mg、硬脂酸(附加剂)50mg、泊洛沙姆188 (附加剂)100mg、甘油(附加剂)400mg、维生素C (附加剂)100mg。其为液体制剂，采用熔融法制备而成:准确称取头孢喹肟、氢化卵磷脂、心磷脂、大豆皂醇以及硬脂酸，加入三角烧瓶中加热至75°C熔融，得到脂质熔融液，备用；取IOOmg泊洛沙姆188、400mg甘油、IOOmg维生素C溶于20ml5%葡萄糖溶液中，加热至75°C，加入脂质熔融液中，高速剪切混合，经高压均质(均质压力15000psi)处理3次，即得头孢喹肟脂质 体液体制剂。
[0023]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为47 nm，粒子直径均在140nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0024]实施例4
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟lOOmg、氢化大豆卵磷脂1500mg、二硬脂酰磷脂酰胆碱200mg、麦角固醇300mg、油酸(附加剂)50mg、吐温80 (附加剂)lOOmg、焦亚硫酸钠(附加剂)100mg。其为液体制剂，采用逆向蒸发法制备而成:取头孢喹肟、氢化大豆卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、麦角固醇、油酸溶于30ml氯仿/甲醇(体积比1:1)混合溶剂中，得有机相；另称取IOOmg吐温80、IOOmg焦亚硫酸钠溶于IOml醋酸盐缓冲液(PH6.0)(水相介质)中，得水相；再将有机相与水相混合，高速剪切(12000rpm) 5min使体系形成稳定的W/0型初乳，然后于旋转蒸发仪上减压蒸发除去有机溶剂，即得头孢喹肟脂质体液体制剂。
[0025]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为45 nm,粒子直径均在180 nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0026]实施例5
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟lOOmg、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱1800mg、二棕榈酰磷脂酸lOOmg、二氢胆固醇400mg、十四酸(附加剂)lOOmg、脱氧胆酸钠(附加剂)500mg、亚硫酸钠(附加剂)IOOmg0其为液体制剂，采用逆向蒸发法制备而成:取头孢喹肟、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酸、二氢胆固醇、十四酸溶于30ml 二氯甲烷中，得有机相；另取脱氧胆酸钠、亚硫酸钠溶于IOml枸橼酸盐缓冲液(pH6.2)(水相介质)中，得水相；再将有机相与水相混合，经水浴式超声处理8min，使体系形成稳定的的W/0型乳剂(水浴温度控制在20 °C)，然后于旋转蒸发仪中减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后滴加5ml枸橼酸盐缓冲液，水化，继续短时减压蒸发，经超声处理20min后，即得头孢喹肟脂质体液体制剂。
[0027]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为55 nm,粒子直径均在150 nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0028]实施例6
头孢喹I亏脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹I亏lOOmg、卵磷脂lOOOrng、二硬脂酰磷脂酰甘油lOOmg、胆固醇lOOmg、叔丁基对羟基茴香醚50mg。其为液体制剂，采用薄膜分散法制备而成:取头孢喹肟、卵磷脂、二硬脂酰磷脂酰甘油、胆固醇、叔丁基对羟基茴香醚投入梨形瓶，加IOml乙酸乙脂溶解，然后于30°C减压旋蒸除去有机溶剂，真空干燥2~3天得恒重薄膜。加入IOml含10%蔗糖、10 %甘露醇的tris-HCl缓冲液(20mmol/L，pH7.0，含0.15mol/L NaCl )，旋转摇动梨形瓶使薄膜分散其中，然后高压均质处理(均质压力12000psi)5次，即制得头孢喹肟脂质体液体制剂。
[0029]将所得液体制剂置于40°C下预冻24小时，于冷冻干燥机中冻干(冻干程序为:40°C，8小时；30 °C，6小时；20 °C,6小时；10°C，5小时；0°C，5小时；15°C，5小时.)，得到头
孢喹肟脂质体固体制剂。
[0030]所得头孢喹肟脂质体固体制剂加水复溶后平均粒径为136±31nm，全部粒子均在300nm以下。
[0031]实施例7
头孢喹I亏脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹I亏lOOmg、大豆磷脂1500mg、聚乙二醇(平均分子量4000) - 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG4000-DSPE) 150mg、没食子酸丙酯50mg、牛磺胆酸钠(附加剂)0.15mg。其为液体制剂,采用注入法制备而成:精确称取头孢喹肟、大豆磷脂、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG4000-DSPE)、没食子酸丙酯，加IOml乙醇将之溶解，制成脂质溶液；用注射器吸取该脂质溶液缓缓注入30ml含0.5%牛黄胆酸钠(60°C)的水溶液中，注入完毕用电子恒速搅拌器以lOOOr/min的转速搅拌至乙醇除尽，然后高压均质(均质压力1000Opsi)处理5次，即得头孢喹肟脂质体液体制剂。
[0032]经检测，该液体制剂中脂质体的平均粒径为60 nm，粒子直径均在180 nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。该脂质体液体制剂在室温下可稳定存放数天，4°C下可稳定存放至少3个月，贮存期间观察不到沉淀或分层现象。
[0033]实施例8
头孢喹I亏脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹I亏lOOmg、卵磷脂lOOOrng、聚乙二醇(平均分子量200)-氢化大豆磷脂酰乙醇胺(PEG200-HSPE) lOOmg、胆固醇lOOmg、叔丁基对羟基茴香醚50mg。其为液体制剂，采用薄膜分散法制备而成:称取头孢喹肟、卵磷月旨、聚乙二醇-氢化大豆磷脂酰乙醇胺(PEG200-HSPE)、胆固醇、叔丁基对羟基茴香醚加入梨形瓶中，添加IOml乙酸乙脂溶解后，旋转蒸发，30 °C减压除去有机溶剂，真空干燥2-3天得恒重薄膜；加入IOml含10%山梨醇、5%右旋糖苷、5%白蛋白的水溶液，旋转摇动梨形瓶，得到脂质体悬液，对脂质体悬液进行超声处理(超声功率600W)20min，即制得头孢喹肟长循环脂质体液体制剂 。
[0034]利用喷雾干燥机对所得头孢喹肟脂质体液体制剂进行喷雾干燥，喷雾干燥条件为:进风温度120°C,进料速度50mL/min,旋风分离器压差50mm水,雾化盘转速2500r/min。收集干燥后的产品，即为头孢喹肟长循环脂质体固体制剂。该固体制剂中脂质体的平均粒径为45nm,粒子直径均在145nm以下。
[0035]实施例9
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟lOOmg、氢化卵磷脂1600mg、聚乙二醇(平均分子量1000) - 二棕榈酰磷脂酰胆碱(PEG1000-DPPC) 160mg、硫代硫酸钠lOOmg。其为液体制剂，采用逆向蒸发法制备而成:取头孢喹肟、氢化卵磷脂、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰胆碱(PEG1000-DPPC)溶于30ml 二氯甲烷中，得有机相；另称取硫代硫酸钠溶于IOml水中得水相；将有机相与水相混合，经水浴式超声处理(水浴温度控制在20°C)直至体系形成稳定的W/0型乳剂，然后于旋转蒸发仪中减压蒸发除去有机溶剂，得到头孢喹肟长循环脂质体液体制剂。
[0036]向所得头孢喹厢长循环脂质体液体制剂中加入1000mg乳糖、500mg葡萄糖、500mg海藻糖超声溶解，然后利用微型喷雾干燥器进行减压干燥(进口温度130~140°C，出口温度50~60 °C，空气压力1.2Atm，加料速度60mL/min)，即得头孢喹肟长循环脂质体固体制剂。经检测，该固体制剂中脂质体的平均粒径为65nm，粒子直径均在180 nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。
[0037]实施例10头孢喹I亏脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹I亏lOOmg、卵磷脂2000mg、聚乙二醇(平均分子量4000) - 二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(PEG4000 DPPE) 200mg。其为液体制剂，采用熔融法制备而成:准确称取头孢喹肟、卵磷脂、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺，加入三角烧瓶中加热至80°C熔融，得到脂质熔融液，备用；取100011^甘氨酸、500mg麦芽糖、1000mg甘露醇于20ml水中，加热至80°C，加入脂质熔融液中，高速剪切混合，经高压均质(均质压力15000psi)处理3次，即得头孢喹肟长循环脂质体液体制剂。
[0038]将该液体制剂置于80°C下预冻10小时，然后通过冷冻干燥器冻干(冻干程序为40°C,10小时；20 °C，8小时；0°C，8小时；20 °C，5小时)，即得头孢喹肟长循环脂质体固体(冻干)制剂。
[0039]经检测，该固体制剂中脂质体的平均粒径为55nm，粒子直径均在150nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一。
[0040]实施例11
头孢喹I亏脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹I亏50mg、卵磷脂1200mg、聚乙二醇(平均分子量3350) 二硬脂酰磷脂酰胆碱(PEG3350-DSPC) 50mg、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)
0.1mg0其为液体制剂，采用薄膜分散法制备而成:取头孢喹肟、卵磷脂、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰胆碱，加入IOml乙醇溶解，旋转蒸发，40°C减压除去有机溶剂，形成薄膜；加入IOml含1%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的水溶液，超声处理30min，制得即制得头孢喹肟长循环脂质体液体制剂。加入8 %的乳糖和8 %的甘露醇作支架剂，冷冻干燥，得到头孢喹肟长循环脂质体固体制剂。经 检测，该固体制剂中脂质体的平均粒径为55nm，粒子直径均在130 nm以下，粒径分布狭窄，脂质体大小均一。
[0041]临用前，向所得固体制剂中加入水化介质短时振荡，即能重新获得脂质体液体制剂。
[0042]实施例12
头孢喹肟脂质体，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟50mg、氢化大豆磷脂200mg、胆固醇lOOmg、聚乙二醇(平均分子量5000) 二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)50mg> PEG4000 0.05mg、α -生育酹20mg。其为液体制剂,采用薄膜分散法制备而成:取头孢喹肟、氢化大豆磷脂、胆固醇、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、α -生育酚溶于30ml氯仿，置梨形瓶内，在氮气流下旋转蒸发，减压除去溶媒，真空干燥2~3天，得恒重薄膜。加入IOml含0.5% PEG4000的水溶液，旋转摇动梨形瓶，得到脂质体悬液。用氮气冲洗后，封口室温下平衡I天，探针超声处理15min，然后在1000psi均质压力下高压均质处理3次，使脂质体粒径逐渐减小，得到头孢喹肟长循环脂质体液体制剂。然后加入总体积5 %葡萄糖、5 %甘露醇、6 %海藻糖，冷冻干燥得头孢喹肟长循环脂质体固体制剂。经检测，该固体制剂中脂质体的平均粒径为45nm，粒子直径均在120 nm以下，粒径分布狭窄，脂质体大小较为均一。
[0043]下面选取典型实施例进行测试试验，试验结果如下:
试验例I
取实施例1的头孢喹肟脂质体液体制剂，对脂质体的形态进行观察，并测定脂质体的粒径大小及分布情况。
[0044]取头孢喹肟脂质体液体制剂适量，加注射用水稀释后用2 %磷钨酸染色，透射电镜下观察粒子形态；取头孢喹厢脂质体液体制剂适量，加注射用水稀释后利用Zetamaster光子相关光谱仪测定脂质体的粒径大小及分布、Zeta电位。
[0045]结果:电镜下观察头孢喹肟脂质体呈均匀规则的球形粒子，无聚集和粘联。实验测得的头孢喹肟脂质体粒径分布均匀，平均粒径为257 nm，多分散指数为0.158，zeta电位为26.4。
[0046]试验例2
取实施例1的头孢喹肟脂质体液体制剂，利用RP-HPLC方法测定脂质体的包封率。
[0047]透过透析法分离出头孢喹肟脂质体液体制剂中未包裹的头孢喹肟，用RP-HPLC测定游离头孢喹肟含量。色谱条件:用苯基-已基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙睛-水(20:80)为流动相A，乙醇-水(体积比56:44)为流动相B，流速为1.25mL/min。先以流动相A 100 %维持4min，流动相B以每分钟约3 %的速率增加至35.5 %，维持20min，流动相B再以每分钟约2.7 %的速率增加至100 %，维持30min，进样量10 μL，220nm检测，按下列公式计算包封率。
[0048]包封率(％)=(脂质体中头孢喹肟总量-游离头孢喹肟量)/头孢喹肟总量 结果:测得包封率为87.32 %。
[0049]试验例3
取实施例6的固体冻干品适量，密封，于冰箱4 °C放置，于0、1、2、3、6月取样，对粒径、包封率、渗漏率、含量等指标进行测定，评价头孢喹肟脂质体冻干品的稳定性。
[0050]结果表明，头孢喹肟脂质体冻干品在冰箱4°C放置6个月，其粒径、包封率、含量等质量指标基本不变，表明头孢喹肟脂质体冻干品稳定性好。
[0051]试验例4
取实施例10的头孢喹肟脂质体固体冻干制剂溶于蒸馏水中，制成I mg/ml的溶液，在4°C, 25。。和36 °C放置四周，于8、12、16、20、24和28天高速离心收集沉淀，用HPLC法测定头孢喹肟含量。结果表明，4°C放置四周基本无渗漏；25 °C存放两周基本无渗漏；35 °C放置8天，浓度仅下降3 %左右，放置12天，浓度变化10 % ;在环境温度不高于35°C的情况下，该脂质体能保持8天以上的稳定性，表明头孢喹肟脂质体稳定性好。
【权利要求】
1.头孢喹肟脂质体，其特征在于，主要由下述重量份的原料制成:头孢喹肟1份、磷脂I~40份、固醇或大豆异黄酮糖苷或大豆阜醇O~15份、附加剂O~15份。
2.如权利要求1所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述磷脂选自卵磷脂、大豆磷月旨、氢化大豆磷脂、氢化卵磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱和二油酰磷脂酰乙醇胺。
3.如权利要求1所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述固醇选自胆固醇、二氢胆固醇和麦角固醇。
4.如权利要求1所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述附加剂包括抗氧化剂、表面活性剂和稳定剂。
5.如权利要求1所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述抗氧剂选自维生素E、维生素E酯、亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠、没食子酸丙酯、叔丁基对羟基茴香醚、二叔丁基对甲酚、半胱氨酸和蛋氨酸；所述表面活性剂选自脱氧胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、牛磺胆酸盐、胆酸、吐温80、泊洛沙姆和司盘；所述稳定剂选自硬脂酸、磷脂酸、十四酸、油酸和甘油。
6.如权利要求1-5任一所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述磷脂2~30份、固醇或大豆异黄酮糖苷或大豆皂醇I~10份、附加剂I~10份。
7.如权利要求6所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述头孢喹肟脂质体为液体制剂，采用下述任意一种方法制备而成:(I)薄膜分散法:将头孢喹肟、磷脂、固醇以及脂溶性附加剂溶于有机溶剂中，在20~60°C下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入溶有水溶性附加剂的水相介质中水合，超声或高压均质后即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(2)注入法:将头孢喹肟、磷脂、固醇以及脂溶性附加剂溶于有机溶剂中制成脂质溶液，吸取该脂质溶液注入20~60°C的溶有水溶性附加剂的水相介质中，注入完毕继续搅拌去除有机溶剂，然后进行超声或高压均质处理即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(3)逆向蒸发法:将头孢喹肟、磷脂、固醇、脂溶性附加剂溶于有机溶剂中，然后加入溶有水溶性附加剂的水相介质，超声或高速剪切使之形成稳定的W/Ο型初乳，然后减压蒸去有机溶剂，即得头孢喹肟脂质体液体制剂；或(4)熔融法:按比例称取头孢喹肟、磷脂、固醇、脂溶性附加剂于60~80°C加热熔融，加入溶有水溶性附加剂的水相介质混合，然后经超声或高压均质处理即得头孢喹肟脂质体液体制剂；所述水相介质为纯水、生理盐水、甘露醇水溶液、葡萄糖水溶液或者是pH为4~8的磷酸盐缓冲液、枸缘酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，有机溶剂选自乙醇、甲醇、乙酸、丙酮、乙酸乙酯、氯仿和二氯甲烷。
8.如权利要求7所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述原料还包括I~2倍于头孢喹肟重的修饰材料，制备时随水相介质加入体系中或随其他脂质成分一同加入；所述修饰材料选自聚乙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、壳聚糖和聚乙二醇-磷脂衍生物，其中，聚乙二醇-磷脂衍生物选自聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇二棕榈酰磷脂酰胆碱、聚乙二醇二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇氢化大豆磷脂酰乙醇胺和聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰胆碱，聚乙二醇的平均分子量为200~20000。
9.如权利要求8所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于，所述的聚乙二醇平均分子量为.2000 ~5000。
10.如权利要求7-9任一所述的头孢喹肟脂质体，其特征在于:所述头孢喹肟脂质体为固体制剂，在所述头孢喹肟脂质体液体制剂中加入支架剂或在制备液体制剂时随水相介质加入支架剂，然后对所得脂质体液体制剂进行冷冻干燥或喷雾干燥即得。
【文档编号】A61K31/546GK104000783SQ201410202865
【公开日】2014年8月27日 申请日期:2014年5月14日 优先权日:2014年5月14日
【发明者】孙江宏, 蒋增海, 郭建军, 张军强 申请人:河南牧翔动物药业有限公司