一种板蓝根提取物的制备方法
【专利摘要】本发明提供了一种板蓝根提取物的制备方法，该提取物中含有DL-告依春，所述制备方法包括粉碎、加水于20～60℃浸提3～6小时、过滤、滤液浓缩干燥的步骤；该方法极大地简化了现有板蓝根提取工艺，并且显著地提高了DL-告依春的提取率。
【专利说明】一种板蓝根提取物的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种板蓝根提取物的制备方法，特别是一种简便并可以提高DL-告依春含量的板蓝根提取物制备方法。
【背景技术】
[0002]板蓝根为十字花科蒋蓝属植物蒋蓝(Isantis indigotica Fort.)的干燥根,味苦性寒，具有清热、解毒、凉血、利咽等功效，用于瘟毒发斑、高热头痛、肝炎、流行性感冒等，是清热解毒类中药的代表药物。板蓝根制剂生产、销售量堪称中成药之最，仅单味制剂就包括板蓝根颗粒、板蓝根片、板蓝根口服液、板蓝根胶囊、板蓝根滴丸、板蓝根分散片在内的十余个品种，批准文号近1000个。
[0003]板蓝根制剂的开发和应用历史悠久，其疗效早已获得医患的普遍认可。但由于板蓝根化学成分复杂，早期对其有效物质基础和作用机理都不够了解，所以现有制剂多采用传统提取方法，如水提醇沉法(水煎煮乙醇沉淀)、乙醇回流提取法等，这些方法存在工艺繁琐、耗时长、活性成分提取率低等不足，同时，各厂家的提取方法的差异也导致了疗效不够稳定。
[0004]经过近几年的研究，人们逐渐认识到板蓝根中所含的DL-告依春具有明显的抗病毒活性，中国药典2010年版也将DL-告依春((R，S)-告依春)的含量做为板蓝根药材及饮片的质控指标。但由于 现有制剂采用的制备工艺不利于DL-告依春的提取，使得制剂中DL-告依春的含量极低，甚至有部分批次未检出。这严重影响了板蓝根制剂的药效，从另一个角度来讲，也是对板蓝根药材的浪费。
【发明内容】
[0005]针对现有板蓝根制剂提取方法中存在的不足，发明人经过大量的系统实验研究，建立了一种板蓝根提取物的制备方法，该制备方法不但简单易行、重复性好，更显著地提高了提取物中DL-告依春的含量。
[0006]本发明提供了一种板蓝根提取物的制备方法，所述的提取物中含有DL-告依春，该制备方法包括以下步骤:
[0007]⑴将板蓝根粉碎至20~80目的颗粒或粉末；
[0008]⑵向步骤⑴得到板蓝根颗粒或粉末中加10~60倍量的水，于20~60°C浸泡3~6小时，过滤，得滤液；
[0009]⑶将步骤⑵得到滤液浓缩、干燥，得到板蓝根提取物。
[0010]本发明所述的DL-告依春也可称为(R，S)-告依春。
[0011]上述板蓝根可以是板蓝根药材或其饮片，优选干燥品。所述“10~60倍量的水”是指，加水量为板蓝根颗粒或粉末重量的10~60倍，下同。
[0012]实验表明，提取方法对板蓝根中DL-告依春含量的影响，与硫代葡萄糖苷-芥子酶系统有关。硫代葡萄糖苷(简称硫苷)本身不具备生物活性，但其酶水解、热分解或肠内分解产物具有多种生物活性，D-告依春和L-告依春分别由板蓝根中的硫代葡萄糖苷前表告依春和前告依春经芥子酶水解产生。硫苷与芥子酶共同存在，但在微观空间上却相互隔离，因此如何激活并保持芥子酶的活性、促进二者反应使硫苷完全转化，是提高板蓝根提取物中DL-告依春含量的关键。
[0013]发明人研究中发现，提取溶媒中水的比例越低，有机试剂(如甲醇、乙醇等)的比例越高，酶越容易失活、DL-告依春提取率越低。除了提取溶媒及提取方式外，板蓝根的粒度及提取温度对DL-告依春提取率影响更为显著。当提取温度高于60°C时，芥子酶随温度升高而迅速失活，相应的，酶解产物DL-告依春含量下降。由于硫苷与芥子酶所处的空间位置不同，当板蓝根粒度大于20目时，细胞破碎不完全，二者不能完全溶出、接触、相互反应，从而影响活性产物(DL-告依春)的含量，但该粒度并非越小越好，当小于80目时，提取液中的DL-告依春含量明显降低，这是一方面是由于表面吸附作用，造成化学成分溶出受限，另一方面是因为在粉碎过程中，物料与刀片剧烈抵触产热(众所周知，粉碎粒度越细所需时间越长)，破坏了部分芥子酶活性。
[0014]传统方法的水提(煎煮)温度为100°C，时间通常在I小时以上，严重破坏了芥子酶活性，虽然也有研究人员采用超声法(约I小时)，但超声同样产热，特别是长时间超声，试验证明，超声I小时水温可高达70°c，也对芥子酶的酶活性具有一定的破坏作用，更重要的是，目前超声方法仅停留在实验室小规模提取，尚不能应用到大生产中去，实用性较差。
[0015]经过大量的试验研究，发明人筛选优化出本发明所述制备方法，该方法有效保障了芥子酶活性，满足了芥子酶与硫苷的结合条件、环境，从而大大提高了 DL-告依春前体的转化率，即，提高了板蓝根药材中DL-告依春的提取率，从而提高了以该提取物所制备药品的疗效，并可降低服用剂量。该方法极大地简化了现有板蓝根提取工艺，减少人力、能源等耗费，更令人^(喜的是显著地提高了提取物中有效成分DL-告依春的含量。
[0016]步骤⑴所述的粉碎，可采用任何本领域常规粉碎方法。
[0017]所述步骤⑵的于20~60°C浸泡3~6小时，可以通过本领域常规手段实现，如直接加入20~60°C的水，并进行保温处理，或加入常温水后加热至所需温度后再进行保温处理。步骤⑶的浓缩、干燥，为本领域常规的浓缩干燥方法，如减压浓缩至干、加热浓缩蒸干等。[0018]所述板蓝根粉碎的粒度，优选40~65目，该粒度范围的粉碎过程不会影响芥子酶活性，又可基本满足硫苷与芥子酶的反应条件；进一步的，优选粉碎至50目，该粒度是利于硫苷与芥子酶的溶出、充分反应与保持酶活性的最佳结合，该粒度板蓝根DL-告依春的提取最为完全。
[0019] 所述的浸泡温度，优选采用20~39°C，该优选温度并不是本领域通常说的温浸的温度，温浸在《中国药典》中的规定为40-50°C，高于本发明所述的优选温度，20~39°C的温度范围更有利于芥子酶发挥其活性；本发明浸泡温度进一步优选为36~38°C，最优选为37 0C，该温度条件下芥子酶活性最高。
[0020]本发明所述制备方法中的用水量优选为20~40倍，试验证明，当水量超过40倍后，DL-告依春含量随用水量增加的提高幅度逐渐变小，特别是超过60倍后，上升幅度更小，说明，40倍量水硫苷基本水解完全，因此，考虑到水资源利用率问题，用水量优选20~40倍，更优选30倍。[0021]所述的浸泡时间，优选为4小时，该优选时间既保证了 DL-告依春的提取率，又兼顾提取效率，同时，也有利于保证提取物的质量。长时间浸提(浸泡)过程中，水液非常容易霉变，特别是当温度达到或超过30°C时。试验表明，37°C浸泡12小时后，可检出霉点。
[0022]所述步骤⑵优选为:向步骤⑴得到板蓝根颗粒或粉末中加10~60倍量的水，于36~38°C浸泡4小时，过滤，得滤液。该用水量、提取温度及时间的结合，可显著提高DL-告依春的提取率。
[0023]当需要得到表告依春单体时，可将本发明制备方法得到的提取物进一步纯化分离，如，先经柱层析纯化，再进行手性色谱拆分。
[0024]为了加快提取，可在本发明制备方法步骤⑵浸泡过程中添加震摇、搅拌等步骤。
[0025]本发明的另一个目的在于，提供一种上述制备方法得到的提取物，及含有该提取物的药用组合物，该药物组合物可以通过本领域常规工艺制成口服形式或注射形式的药物制剂，所述的口服形式，如片剂、颗粒剂、口服液、胶囊剂等，注射形式，如注射液、冻干粉针等。该药物组合物还含有常规辅料，所述的常规辅料为本领域可接受的药用辅料。本发明制备方法制得的板蓝根提取物中的有效成分一DL-告依春含量更高，疗效更有保障。
[0026]发明人通过以下实验来优化得到本发明制备方法。
[0027]再次重申:以下实验只是本发明研制过程中众多实验中的举例性实验，并未涵盖和穷尽了发明人为本发明所 做的所有实验，目的仅仅在于用那些数据来阐述本发明制备方法对DL-告依春的提取效率的影响。
[0028]I提取方法对板蓝根中DL-告依春的影响
[0029]1.1仪器与试药
[0030]Waters2695液相色谱仪,Waters2996 二极管阵列检测器,CLIMACELL恒温恒湿箱。色谱纯乙腈购于Merck，分析纯甲醇、三乙胺、冰醋酸购于北京化学试剂公司，水为超纯水。
[0031]DL-告依春((R，S)-告依春)对照品来自中国食品药品检定研究院。
[0032]三产地板蓝根药材购于药材市场。
[0033]1.2色谱条件
[0034]色谱柱:AlltimaC18 柱(4.6mmX 250mm, 5 μ m)。流动相:水-乙腈-三乙胺(90:10:0.2)，用冰醋酸调pH值至5.2，流速:0.8ml/min。检测波长:241nm。进样量:10 μ I。
[0035]1.3提取方式的影响
[0036]称取不同产地50目的板蓝根药材粉末lg，加溶剂30ml，分别按表1中所示方法制备供试品溶液，每组平行3份，进样测定，外标法计算DL-告依春含量，并折算提取率(提取率是指提取出的DL-告依春占投料药材的重量百分比含量，下同)，结果显示，不同产地板蓝根药材的DL-告依春提取率规律一致，即水浸泡 > 水超声 > 乙醇回流 > 水煎煮 > 甲醇回流〉乙醇超声〉甲醇超声。
[0037]表1不同提取方式DL-告依春的提取率％
【权利要求】
1.一种板蓝根提取物的制备方法，该提取物中含有DL-告依春，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤: ⑴将板蓝根粉碎至20~80目的颗粒或粉末； ⑵向步骤⑴得到板蓝根颗粒或粉末中加10~60倍量的水，于20~60°C浸泡3~6小时，过滤，得滤液； ⑶将步骤⑵得到滤液浓缩、干燥，得到板蓝根提取物。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤⑴的板蓝根粉碎至40~65目的粉末。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤⑴的板蓝根粉碎至50目的粉末。
4.如权利要求 1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤⑵浸泡温度为20~39°C。
5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤⑵浸泡温度为36~38°C。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤⑵的加水量为20~40倍量。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤⑵的加水量为30倍量。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤⑵的浸泡时间为4小时。
9.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤⑵为:向步骤⑴得到板蓝根颗粒或粉末中加10~60倍量的水，于36~38°C浸泡4小时，过滤，得滤液。
10.一种含有DL-告依春的药用组合物，其特征在于，该组合物含有权利要求1-9任一项所述的制备方法制得的提取物及药学上可接受的辅料。
【文档编号】A61K36/195GK104013655SQ201410250141
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2014年6月6日 优先权日:2014年6月6日
【发明者】聂黎行, 戴忠, 马双成 申请人:中国食品药品检定研究院