一种用于抗氧化延缓衰老的五指毛桃复方制剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种复方五指毛桃的组方，其特征在于以重量份计，包括以下份数的物质：五指毛桃15-50；大枣5-30；茯苓5-30；当归0-20；薏苡仁5-30。五味中药可以是药材、药材粉末、饮片或提取物组合。本发明提供了这种复方五指毛桃的提取物稠膏的制备方法和质量标准。制备方法包括五指毛桃95％乙醇提取补骨脂素类成分后，药渣中再加入茯苓、当归、薏苡仁、大枣，加水提取多糖类成分。该复方提取物稠膏或粉末，采用薄层色谱法分别对五指毛桃、茯苓、大枣进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对五指毛桃中的补骨脂素进行定量分析。该稠膏亦可用于常用口服剂型的制备，该质量标准亦适用于多种剂型的质量控制。本发明提供的这种复方具有抗氧化延缓衰老的功效。
【专利说明】一种用于抗氧化延缓衰老的五指毛桃复方制剂及其制备方 法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及以五指毛桃为君药，大枣、当归、茯苓、薏苡仁五味中药组成的复方五 指毛桃处方，以及复方稠膏的制备工艺、质量标准及其应用。
【背景技术】
[0002] 五指毛桃（Radix FiciHirtae)为桑科植物粗叶格（Ficus hirta Vahl.)的干燥 根，味辛、甘，性平，具有益气健脾补肺、利湿舒筋的功效，属补益类中药。为岭南常用中药， 又名牛奶木、土黄芪、南芪、五爪龙、五爪毛桃等。其药用始载于清代何克谏《生草药性备 要》，其后吴其浚的《植物名实图考》、肖步丹的《岭南采药录》等均有记载。五指毛桃又是一 种被多民族使用的药食同源的植物，在广东民间被称为"广东人参"，也是民间流传甚广的 "煲汤料"，其应用历史悠久，保健作用广为认可。
[0003] 五指毛桃水提物具有调节免疫功能、抗应激及补血的作用，水提液含有多糖类成 分。有文献报道证明补骨脂素为五指毛桃的主要活性成分之一，分离鉴定出的补骨脂素为 呋喃香豆素类化合物，具有抗菌、抗病毒、抗凝血、抑制肿瘤、免疫调节等作用，并对红细胞 系统的造血有一定的促进作用，而乙醇提取法能有效提取补骨脂素和佛手内酯等成分。
[0004] 大麥，又名红麥、干麥、麥子，起源于中国，在中国已有八千多年的种植历史，自古 以来就被列为"五果"（栗、桃、李、杏、枣）之一。红枣富含蛋白质、脂肪、糖类、胡萝卜素 、B 族维生素、维生素 C、维生素 P以及钙、磷、铁和环磷酸腺苷等营养成分。其中维生素 C的含 量在果品中名列前茅，有维生素王之美称，其中，环磷酸腺苷，更是人体细胞能量代谢的必 需成分，能够增强肌力、消除疲劳、扩张血管、增加心肌收缩力、改善心肌营养，对防治心血 管系统疾病有良好的作用；中医中药理论认为，红枣具有补虚益气、养血安神、健脾和胃等 作用，红枣对慢性肝炎、肝硬化、贫血、过敏性紫癜等病症有较好疗效；红枣含有三萜类化合 物及环磷酸腺苷，有较强的抗癌、抗过敏作用。大枣能润心肺、止咳、补五脏、治虚损、除肠胃 癖气，还能安中养脾、平胃气、通九窍、助十二经等。大枣中含有50多种化学物质，内含有多 糖、蛋白质、脂肪、碳水化合物，维生素 A、B、B2、C、E、P，有机酸和包括硒在内36种微量元素。 采用水提工艺，可有效提取多糖类、水溶性维生素等成分。
[0005] 当归味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，补中有动，行中有补，为血 中之要药。因而，它既能补血，又能活血，既可通经，又能活络。现代研究表明：当归具有清 除自由基的作用，当归中阿魏酸具有抗脂质过氧化作用，能直接消除自由基，抑制氧化反应 和自由基反应，并能与生物膜磷脂结合，保护膜脂质拮抗自由基对组织的损害。当归抗老化 作用，当归煎剂对小鼠学习记忆具有明显的影响，用迷宫法测定，当归能改善三氯化铝所致 的痴呆，降低痴呆小鼠脑的过氧化酯质水准，和B型单胺氧化的活性，能治疗老年痴呆症。
[0006] 茯苓，为多孔菌科真菌茯苓的菌核，出自《神农本草经》，俗称云苓、松苓、茯灵。产 于云南、安徽、湖北、河南、四川等地。古人称茯苓为"四时神药"，因为它的功效非常广泛，不 分四季，将它与各种药物配伍，不管寒、温、风、湿诸疾，都能发挥其独特功效。茯苓味甘、淡、 性平，入药具有利水渗湿、益脾和胃、宁心安神之功用。
[0007] 茯苓能增强机体免疫功能，茯苓多糖有明显的抗肿瘤及保肝脏作用。也可作为食 材用，有茯苓饼，茯苓粥，很有营养，口味平和。与琼珍灵芝配合煮水，有助于治疗糖尿病，肿 瘤等慢性病。
[0008] 薏该仁为禾本科植物薏该（Coix lacryma-jobi L. var. mayuen. (Roman. ) Stapf 的 干燥成熟种仁。主产湖南、河北、江苏、福建等省。味甘、淡，性微寒。有健脾利湿、清热排脓 功能。用于脾虚泄泻水肿脚气、白带、湿、关节疼痛、肠痈、肺痿等症。薏苡种仁是我国传统 的食品资源之一，可做成粥、饭、各种面食供人们食用。尤其对老弱病者更为适宜。其主要 成分包括脂类、不饱和脂肪酸、糖类等成分，薏苡仁糖类含有鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半 乳糖和葡萄糖。其水提物对小鼠有降血糖作用，其活性成分为三种多糖。
[0009] 因此，本处方中以药食同源的五味中药组成，五指毛桃为君药，益气健脾补肺，益 气作用明显，大枣、当归为臣药，具有补虚益气、养血安神、健脾和胃的功效，补血功效显著； 茯苓、薏苡仁，为佐药，共达补气燥湿健脾之效，适用于气血不足、脾失营运、湿气阻滞所致 的病症。
[0010] 本发明比较了单味五指毛桃与复方在抗氧化、延缓衰老方面的作用，结果表明复 方作用优于单味药材，提示中药复方制剂的协同作用。
[0011] 本发明采用醇提法对五指毛桃中的补骨脂素类成分进行了提取，药渣再与其他几 味药材采用水提工艺提取多糖类成分，更好的发挥多糖类成分的补益作用。本发明对复方 中的三味药材采用薄层色谱法进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对君药五指毛桃的香豆 素类成分进行含量测定，从而保证了大生产工艺的可控性，成品质量的稳定性。
【发明内容】
[0012] 本发明的首要目的在于提供一种由五味中药组成的中药组合物，其具有抗氧化延 缓衰老的作用。
[0013] 本发明的另一目的在于提供一种复方五指毛桃组合物稠膏的制备方法和质量标 准，及其在口服制剂中的应用。
[0014] 本发明的目的通过以下方式实现：
[0015] 1、复方五指毛桃处方
[0016] 五指毛桃：15-50 ;大枣：5-30 ;茯苓：5-30 ;当归：0-20 ;薏苡仁：5-30。
[0017] 2、复方五指毛桃稠膏的制备方法
[0018] 步骤一、处方中的五味药材按《中国药典》2010年版一部各药项下有关规定净选或 炮制，备用。五指毛桃净选。
[0019] 步骤二、取五指毛桃干燥药材粉碎成粗粉，用10倍量95%乙醇浸泡lh后，冷凝回 流2h，趁热滤取药液；再加8倍量95%乙醇回流提取lh，合并两次滤液，减压浓缩至稠膏备 用。保留药渣，用于与另外四味药材一起煎煮。
[0020] 步骤三、将除大枣外的三味药材粉碎成粗粉，大枣直接加入，与上一步保留的药渣 合并，加水煎煮二次，第一次3小时，12倍量水；第二次2小时，10倍量水。
[0021] 步骤四、合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1. 30?1. 35 (80°C )的稠膏。
[0022] 3、复方五指毛桃稠膏的质量标准
[0023] (1)薄层色谱法鉴别中药组合物中五指毛桃所含补骨脂素：
[0024] 精密称取稠膏3g,加醋酸乙酯50mL,超声25min,滤过,滤液浓缩至干，加醋酸乙酯 2mL于2mL量瓶中，作为供试品溶液。另取五指毛桃对照药材5g，同法制成对照药材溶液。 另取补骨脂素对照品，加醋酸乙酯溶解，制成每lmL含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄 层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各3 μ L，分别点于同 一硅胶G薄层板上，正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酷-甲酸（20 : 4 : 5 : 0.7)饱和10分 钟后展开，展开前沿至薄层板边缘lcm左右时取出，晾干，置紫外光灯（365nm)下检视。供 试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。再喷以10%硫酸乙醇 溶液，置于l〇5°C烘箱中显色加热至斑点清晰在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色 的主斑点（见说明书附图1和附图2,图中标号1为补骨脂素标准品；2为药材对照品、3为 稠膏样品a ;4为稠膏样品b ;5为稠膏样品c ;6为阴性对照品）。
[0025] (2)薄层色谱法鉴别中药组合物中的茯苓：
[0026] 精密称取稠膏lg，加丙酮100mL回流提取1小时，过滤，取滤液水浴浓缩至约 0. 5mL，作为供试品溶液。另取茯苓对照药材lg，加丙酮20mL回流提取1小时，过滤，滤液浓 缩至约0.5mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试 验，吸取上述两种溶液各15-20 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄 层板上，以石油醚（60-90°C)-乙醚（1 : 1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钥酸 乙醇溶液，在l〇〇°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点（见说明书附图3,图中标号1为药材对照品；2为稠膏样品a、3为稠膏 样品b ;4为稠膏样品c ;6为阴性对照品）。
[0027] (3)薄层色谱法鉴别中药组合物中的大枣：
[0028] 精密称取稠膏lg，加水40mL使溶解，过滤，取滤液用水饱和的正丁醇提取2次，每 次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤2次，每次20mL，分取正丁醇液蒸干，残渣加 lmL甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取大枣对照药材2g，加水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩 至20mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B)试 验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板 上，以正丁醇-冰醋酸-水（3 : 1 : 0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇 溶液，在l〇〇°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显一 个相同的褐色斑点（见说明书附图4,图中标号1为药材对照品；2为稠膏样品a、3为稠膏 样品b ;4为稠膏样品c ;6为阴性对照品）。
[0029] (4)高效液相色谱法测定中药组合物中五指毛桃所含补骨脂素的含量：
[0030] 液相色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为甲醇与 水（60 : 40)，检测波长为254nm，流速为lmL/min，温度为30°C，进样量为10yL。
[0031] 对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品2. Omg至10mL容量瓶中，加甲醇约 5mL，微热溶解，冷却室温，加甲醇稀释刻度，摇匀。精密吸取浓储备液2mL至10mL容量瓶 中，加甲醇稀释刻度，摇匀加甲醇稀释刻度，摇勻，用〇. 25 μ m微孔滤膜过滤，即得对照品溶 液（浓度：〇· 〇4mg/mL)。
[0032] 样品溶液的制备：精密称取稠膏0. 5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇 100mL，精密称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤 过，弃去初滤液，取续滤液，用0. 25 μ m微孔滤膜过滤，作为样品溶液备用。
【专利附图】
【附图说明】
[0033] 图1是365nm紫外光下五指毛桃的薄层色谱图
[0034] 图2是五指毛桃采用10%硫酸乙醇显色后的薄层色谱图
[0035] 图3是茯苓的薄层色谱图
[0036] 图4是大枣的薄层色谱图
[0037] 图5是254nm波长下对照品补骨脂素的色谱图
[0038] 图6是254nm波长下水提取的五指毛桃药材稠膏样品色谱图
[0039] 图7是254nm波长下醇提取的五指毛桃药材稠膏样品色谱图
[0040] 图8是254nm波长下复方五指毛桃的稠膏样品色谱图
【具体实施方式】
[0041] 实施例1 :五指毛桃药材提取工艺研究
[0042] 1. 1五指毛桃药材水提稠膏与醇提稠膏的制备
[0043] 五指毛桃水稠膏的制备方法：称取五指毛桃药材200g，用10倍量（M/V)蒸馏水浸 泡lh后，加热煮沸lh，趁热滤取药液；再加8倍量水，煮沸30min，合并两次滤液，浓缩至稠 膏备用（相对密度为1. 30?1. 35 (80°C ))。
[0044] 五指毛桃醇稠膏的制备方法：称取五指毛桃干燥药材200g，用10倍量95%乙醇浸 泡lh后，加热回流提取2h，趁热滤取药液；药渣再加8倍量95%乙醇回流提取lh，合并两 次滤液，用旋转蒸发仪减压浓缩至稠膏备用（相对密度为1. 30?1. 35 (80°C ))。
[0045] 1. 2两种稠膏中补骨脂素的含量测定
[0046] 采用高效液相色谱法测定，色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色 谱柱，流动相为甲醇与水（60 : 40)，检测波长为254nm，流速为lmL/min，温度为30°C，进样 量为10 μ L。
[0047] 对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品2. Omg至10mL容量瓶中，加甲醇约 5mL，微热溶解，冷却室温，加甲醇稀释刻度，摇匀。精密吸取浓储备液2mL至10mL容量瓶 中，加甲醇稀释刻度，摇匀加甲醇稀释刻度，摇勻，用〇. 22 μ m微孔滤膜过滤，即得对照品溶 液（浓度：〇· 〇4mg/mL)。
[0048] 样品溶液的制备：分别精密称取水提稠膏、醇提稠膏各0. 5g，精密称定，分别置具 塞锥形瓶中，精密加甲醇l〇〇mL，精密称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用甲醇 补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用〇. 22 μ m微孔滤膜过滤，作为样品 溶液备用。
[0049] 两种稠膏中补骨脂素的含量测定结果见表1.采用外标一点法计算药材中补骨脂 素的提取率，结果表明同一批药材，采用95%乙醇回流提取，有效成分补骨脂素的提取率高 于水提的稠膏。
[0050] 表1五指毛桃不同提取工艺补骨脂素含量结果
[0051]
【权利要求】
1. 一种由五味中药组成的中药组合物，其特征在于以重量份计，包括以下份数的物质： 五指毛桃：15-50 ;大枣：5-30 ;茯苓：5-30 ;当归：0-20 ;薏苡仁：5-30。
2. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于可以是单味药材按比例组合、单味药 材分别粉碎后组合、单味药材按比例组合后粉碎成粉末、单味药材分别提取后组合、某一味 或几味药材提取后与其他药材组合。
3. 如权利要求1所述的中药组合物，五味中药可以是药材、药材粉末、饮片或提取物。
4. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于提取物的制备包括如下步骤： 称取处方量的五指毛桃干燥药材粉碎成粗粉，用10倍量95 %乙醇浸泡lh后，冷凝回流 2h，趁热滤取药液；药渣再加8倍量95%乙醇回流提取lh，合并两次滤液，减压浓缩至稠膏 1. 30 ?1. 35(80°C )备用。 五指毛桃药渣中，再加入处方量之茯苓、当归、薏苡仁，三味药材（粗粉），再称取处方 量之大枣于三味药材粗粉中，加12倍量水（重量与体积比），煎煮3小时，过滤；滤渣再加 入10倍量水（重量与体积比），煎煮2小时，过滤，合并两次滤液，减压浓缩至相对密度为 1. 30 ?1. 35(80°C )的稠膏。 将上述两种稠膏混匀，即得；或将两种稠膏混匀后干燥后的干粉即得；或将两种稠膏 分别干燥成干粉后混匀即得。
5. 如权利要求4所述的提取物，用于制备颗粒、胶囊、片剂、粉剂、滴丸剂、汤剂等常用 口服剂型。
6. 如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于采用薄层色谱法对五指毛桃、茯苓和 大枣进行定性鉴别。采用高效液相色谱法对五指毛桃中所含的补骨脂素进行含量测定。
7. 如权利要求1-4所述的提取物，其中五指毛桃的定性鉴别方法如下进行： 如权利要求4所制备的提取物稠膏，精密称取稠膏3g，加醋酸乙酯50mL，超声25min，滤 过，滤液浓缩至干，加醋酸乙酯2mL于2mL量瓶中，作为供试品溶液。另取五指毛桃对照药 材5g，同法制成对照药材溶液。另取补骨脂素对照品，加醋酸乙酯溶解，制成每lmL含2mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VIB)试验，吸取上 述三种溶液各3 μ L，分别点于同一硅胶G薄层板上，正己烷-三氯甲烷-乙酸乙酷-甲酸 (20 : 4 : 5 : 0.7)饱和10分钟后展开，展开前沿至薄层板边缘lcm左右时取出，晾干，置 紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧 光斑点。再喷以10%硫酸乙醇溶液，置于l〇5°C烘箱中显色加热至斑点清晰在与对照药材 色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。
8. 如权利要求1-4所述的提取物，其中茯苓的定性鉴别方法如下进行： 如权利要求4所制备的提取物稠膏，精密称取稠膏lg，加丙酮100mL回流提取1小时， 过滤，取滤液水浴浓缩至约〇. 5mL，作为供试品溶液。另取茯苓对照药材lg，加丙酮20mL回 流提取1小时，过滤，滤液浓缩至约〇. 5mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典 2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各15-20yL，分别点于同一以羧甲基纤 维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90°C)-乙醚（1 : 1)为展开剂，展开，取 出，晾干，喷以10%磷钥酸乙醇溶液，在l〇〇°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对 照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
9. 如权利要求1-4所述的提取物，其中大枣的定性鉴别方法如下进行： 如权利要求4所制备的提取物稠膏，精密称取稠膏lg，加水40mL使溶解，过滤，取滤 液用水饱和的正丁醇提取2次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和水洗涤2次，每次 20mL，分取正丁醇液蒸干，残渣加 lmL甲醇使溶解，作为供试品溶液。另取大枣对照药材2g， 加水煎煮1小时，滤过，滤液浓缩至20mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药 典2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各5 μ L，分别点于同一以羧甲基纤维 素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（3 : 1 : 0.5)为展开剂，展开， 取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在l〇〇°C加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对 照药材色谱相应的位置上，显一个相同的褐色斑点。
10. 如权利要求1-4所述的提取物，稠膏中五指毛桃中补骨脂素的含量测定按如下方 法进行： 液相色谱条件：采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相为甲醇与水 (60 : 40)，检测波长为254nm，流速为lmL/min，温度为30°C，进样量为10 μ L。 对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素对照品2. Omg至10mL容量瓶中，加甲醇约5mL， 微热溶解，冷却室温，加甲醇稀释刻度，摇匀。精密吸取浓储备液2mL至10mL容量瓶中，力口 甲醇稀释刻度，摇匀加甲醇稀释刻度，摇匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜过滤，即得对照品溶液（浓 度：40 μ g/mL)。 样品溶液的制备：如权利要求4所制备的提取物稠膏，精密称取稠膏0. 5g，精密称定， 置具塞锥形瓶中，精密加甲醇l〇〇mL，精密称定重量，超声提取40min，放冷，再称定重量，用 甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，用〇. 22 μ m微孔滤膜过滤，作为 样品溶液备用。
11. 如权利要求1所述的中药组合物具有益气、补血、利湿的功效，用于气血不足、脾失 健运所致的病症，具有抗氧化、延缓衰老的作用。
【文档编号】A61P39/06GK104116963SQ201410291143
【公开日】2014年10月29日 申请日期:2014年6月18日 优先权日:2014年6月18日
【发明者】邓亚利, 崔明汉 申请人:华南农业大学