治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法
【专利摘要】一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，由下列重量份数的原料药制备而成：黄芪10～20g，人参5～15g，夏枯草10～25g，甘草2～5g，莪术20～25g，半枝莲25～30g，干蟾5～10g，猫爪草15～20g，猪苓20～25g，水牛角20～25g，仙鹤草25～30g，这种治疗恶性肿瘤的中药制剂成本低、疗效好。
【专利说明】治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法。
【背景技术】
[0002]恶性肿瘤是一类严重威胁人类健康的多发病和常见病，2002年恶性肿瘤发病人数约220万，死亡约160万，预计到2020年，我国癌症发病人数将达到300万，死亡220万；全球新发病例将达1500万，死亡1000万，使人类面临着防治恶性肿瘤新的挑战。现有治疗肿瘤手段有手术、化疗、放疗、生物疗法和中医中药等五大临床治疗方法。中医药治疗是我国治疗恶性肿瘤独特的手段之一，优势明显、疗效确切。它能增强机体免疫力，减少放化疗的毒副反应，加强放化疗效果，防止肿瘤治疗后复发与转移，在减轻癌症患者症状和痛苦，提高生存质量，延长寿命等方面起着极其重要的意义。
[0003]为此 申请人:于2007年2月I日申请了一项治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法发明专利，并于2011年6月I日获得授权，专利号为ZL2007100670450，该发明公开了一种治疗恶性肿瘤的中药制剂及其制备方法，该中药制剂由下列重量份数的原料药制备而成:夏枯草15?25份，仙鹤草15?25份，白花蛇舌草15?25份，半枝莲15?25份，黄药子10?20份，猪苓10?20份，苦参5?15份，猫爪草10?20份，海浮石10?20份，生晒参5?10份，生黄芪10?20份，灵芝3?7份，水牛角10?20份，羚羊角I?2份，野菊花5?15份,金钱草10?20份,莪术10?20份,干蟾皮3?7份,生甘草I?2份。本发明中药制剂具有扶正祛邪、散结消瘤之功效，主治消化系统、泌尿系统及脑胶体瘤等各型肿瘤，防止术后复发，增强化疗作用，减轻化疗、放疗之后的毒副作用，取得较好的疗效。但该发明专利的中药配方药味太多，导致成本太高，不利于推广应用；该中药配方还存在不合理之处，有待进一步改善。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种成本低、疗效好的治疗恶性肿瘤的中药制剂。
[0005]为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案:一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，由下列重量份数的原料药制备而成:黄苗10?20g,人参5?15g,夏枯草10?25g,甘草2?5g,莪术20?25g,半枝莲25?30g,干蟾5?1g,猫爪草15?20g,猪茶20?25g,水牛角20?25g，仙鹤草25?30g。
[0006]优选下列重量份数配比:黄苗20g,人参15g,夏枯草25g,甘草5g,莪术20g,半枝莲25g，干蟾10g，猫爪草15g，猪苓20g，水牛角20g，仙鹤草25g。
[0007]本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂的型剂可以为颗粒剂。
[0008]本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种本发明颗粒剂的制备方法。
[0009]本发明颗粒制剂的制备方法是:
[0010]a.取莪术粉碎过20目筛，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油，加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，0-5°C冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入c ；
[0011]b.取人参、猪苓、黄芪、干蟾、水牛角、猫爪草、甘草加12倍量70%乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70%乙醇，合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用，药渣转入c ；
[0012]c.取仙鹤草、夏枯草、半枝莲及上述a、b药渣加10倍量水煮液提取1.0小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水，合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为1.2，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用，弃去药渣；
[0013]将a、b、c三步提取液合并减压浓缩至1.2，减压干燥后粉碎，加入莪术油环糊精饱和物、辅料适量混合均匀制成颗粒剂。
[0014]本发明治疗恶性肿瘤的中药制剂对C6脑胶质瘤、S180肉瘤及H22肝癌具有明显的抗肿瘤作用，且与化药(环磷酰胺、司莫司汀)合用能增强化药的抑瘤作用，还具有改善化药引起的骨髓和免疫抑制等作用，起到增效减毒的疗效。其抗肿瘤作用机制为促进活化的巨噬细胞产生大量的NO，对肿瘤细胞产生细胞毒作用，同时能降低肿瘤组织TNOS、iNOS及VEGF，抑制肿瘤血管新生；抑制肿瘤细胞合成和分泌IGF-1，抑制肿瘤细胞增殖，诱导凋亡；阻止肿瘤组织产生PGE2，解除其引起的免疫抑制，遏制肿瘤生长；调节体液免疫，增加机体免疫因子的释放，增强对肿瘤的抵抗作用；降低血液粘度，从而抵抗肿瘤侵袭转移。为临床治疗高尿酸血症提供了依据。
[0015]下面结合【具体实施方式】来进一步说明本发明药物的有益效果。
【具体实施方式】
[0016]制备实施例1
[0017]配方1:黄苗20g,人参15g,夏枯草25g,甘草5g,莪术20g,半枝莲25g,干蟾1g,猫爪草15g，猪苓20g，水牛角20g，仙鹤草25g。
[0018]a.取莪术20粉碎过20目筛但不能过40目，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油，加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，0-5°C冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入c ；
[0019]b.取人参15g、猪苓20g、黄芪20g、干蟾10g、水牛角20g、猫爪草15g、甘草5加12倍量70%乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70%乙醇，合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用，药渣转入C。
[0020]c.取仙鹤草25g、夏枯草25g、半枝莲25及上述a、b药渣加10倍量水煮液提取1.0小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水，合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为1.2，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用，弃去药渣；
[0021]将a、b、c三步提取液合并减压浓缩至1.2，减压干燥后粉碎，粉碎后加入莪术油环糊精包合物、甜菊甙、可溶性淀粉及乳糖，混合均匀后用95%乙醇制粒，45-55°C烘干，制成颗粒剂。
[0022]制备实施例2
[0023]配方2:黄苗1g,人参15g,夏枯草1g,甘草5g,莪术25g,半枝莲30g,干蟾1g,猫爪草20g，猪苓25g，水牛角25g，仙鹤草30g。
[0024]a.取莪术25g粉碎过20目筛但不能过40目，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油，加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，0-5°C冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入c ；
[0025]b.取人参15g、猪苓25g、黄芪10g、干蟾10g、水牛角25g、猫爪草20g、甘草5g加12倍量70%乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70%乙醇，合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用，药渣转入C。
[0026]c.取仙鹤草30g、夏枯草10g、半枝莲30g及上述a、b药渣加10倍量水煮液提取
1.0小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水，合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为
1.2，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用，弃去药渣；
[0027]将a、b、c三步提取液合并减压浓缩至1.2，减压干燥后粉碎，粉碎后加入莪术油环糊精包合物、甜菊甙、可溶性淀粉及乳糖，混合均匀后用95%乙醇制粒，45_55°C烘干，制成颗粒剂。
[0028]药效试验例
[0029]一、材料与仪器
[0030]动物
[0031]健康ICR小鼠，雌雄各半，体重18g?22g，由浙江省实验动物中心提供，许可证号:SCXK(浙)2008-0033 ;健康雄性Wistar大鼠，体重130g?170g，由上海市西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证号:SCXK (沪)2008-0016。
[0032]药品
[0033]瘤株
[0034]小鼠肉瘤S18tl细胞株、小鼠肝癌H22细胞株、大鼠胶质瘤C6细胞株均由浙江中医药大学生命科学院提供。
[0035]受试药
[0036]扶正消瘤提取物(FZXLF)，即本发明中药制剂，以水配制成浓度为含饮片量0.2g/ml、0.4g/ml、0.6g/ml (供小鼠试验用)，以及 0.12g/ml、0.24g/ml、0.36g/ml 的药液(供大鼠试验用)。
[0037]阳性对照药
[0038]注射用环磷酰胺(CTX):江苏恒瑞医药股份有限公司，批号为09092321，用生理盐水配制成浓度为 1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml,备用。
[0039]司莫司汀胶囊(Me-CCNU)，浙江瑞新药业股份有限公司，批号20100112，用蒸馏水配制成浓度为2.33mg/ml,备用。
[0040]试剂
[0041]血液分析试剂，批号5018，美国 A Drew Scientific GrouP C0.;RPM1640 培养基:批号1285082，美国GIBC0BRL ;超级新生牛血清:批号091025，杭州四季青生物工程材料研究所；骨蜡:批号OBDZTM，美国强生。
[0042]大鼠TNF-a、IL-2、IFN1、VEGF、PGE2' IGF-1 ELISA 检测试剂盒，批号均为09/2011，以上试剂盒均由美国R&D公司提供。
[0043]免疫球蛋白(IgA, IgG, IgM)、补体(C3，C4)免疫透射比浊试剂盒，批号均为10/03/2011，以上试剂盒均由北京瑞格博科技发展有限公司提供。
[0044]NO试剂盒，批号20110119 ;N0S试剂盒(测分型)，批号20110214 ;考马斯亮蓝试剂盒，批号20110111。
[0045]绵羊红细胞(SRBC)悬液的制备:取绵羊血8ml，用生理盐水洗涤3次，每次2000rpm离心5min，弃上清液，再用生理盐水以1:5(V:V)稀释得20%的绵羊红细胞悬液20ml。
[0046]补体的制备:采集豚鼠血液，分离出血清并混合，将ImL压积SRBC加入到5mL豚鼠血清中，放入4oC冰箱30min，经常振荡，离心取上清液，分装_20oC保存。用时以生理盐水按1:8稀释。
[0047]主要仪器
[0048]HEMAVET950 动物血液分析仪，A Drew Scientific GrouP C0.。
[0049]Power waveiMO 酶标仪，美国 B1-TEK 公司。
[0050]XHF-D高速分散器(内切式匀浆机)，宁波新芝生物科技股份有限公司。
[0051]Microcl 17 离心机，Thermo。
[0052]JY10001型电子天平，上海民桥精密仪器有限公司。
[0053]Heraeus三气细胞培养箱，德国Heraeus公司。
[0054]Sff-CJ-1F层流超净工作台，苏州安泰空气技术公司。
[0055]Olympus IX-70倒置突光显微镜，日本Olympus公司。
[0056]ALC-H动物脑立体定位仪，上海奥尔科特生物科技有限公司。
[0057]ALC-1P微量注射泵，上海奥尔科特生物科技有限公司。
[0058]ALC-CED动物颅骨钻，上海奥尔科特生物科技有限公司。
[0059]统计学处理
[0060]计量资料数据结果以? 土 S表示，组间差异采用t-test。P〈0.05为有统计学意义。
[0061]二、方法与结果
[0062](一 )本发明中药制剂单用及与环磷酰胺合用对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究
[0063]1.实验方法
[0064]1.1本发明中药制剂单用对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究
[0065]1.1.1动物分组
[0066]ICR小鼠，雌雄各半。随机分为6组:正常对照组、模型对照组、CTX(20mg.kg—1)组、FZXLF (6.0g.kg’ 组、FZXLF (4.0g.kg’ 组、FZXLF (2.0g.kg’ 组，每组 12 只。
[0067]1.1.2模型制备
[0068]取肝癌H22细胞腹腔内接种8天的ICR小鼠，无菌条件下用5mL注射器取吸出I?2mL牛奶状、较粘稠的腹水，用生理盐水1:4倍稀释，得到约1.0X 16个/ml的瘤株稀释液，除正常对照组外，其余每只小鼠0.1mL接种左前肢腋窝皮下。
[0069]1.1.3给药方法
[0070]本发明中药制剂FZXLF各给药组分别按6.0g.kg—1、4.0gkg—1、2.0g.kg—1灌胃给予肿瘤小鼠。CTX组按20mg.kg—1腹腔注射给予环磷酰胺溶液。正常对照组、模型对照组均灌相应体积的蒸馏水，每日I次，连续14d，灌胃体积为0.lmL/10g体重。
[0071]1.1.4指标测定
[0072]⑴一般肿瘤指标:①抑瘤率:末次给药后，动物处死，剥取瘤体组织称重，并计算抑瘤率，抑瘤率(％ ) = (1-给药组平均瘤重/对照组平均瘤重)X 100%。
[0073]②生命延长率:记录各组小鼠死亡时间，即存活时间，计算生命延长率。生命延长率(％ ) = (1-给药组平均生存天数/对照组平均生存天数)X 100%。
[0074]⑵免疫指标:末次给药后，动物处死，剥取脾和胸腺组织称重，计算脾指数、胸腺指数，脏器指数(％。)=脏器指数=脏器重量/体重X1000%。。并检测T淋巴细胞增殖率。
[0075]1.2本发明中药制剂与环磷酰胺合用对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究
[0076]1.2.1动物分组
[0077]ICR小鼠，雌雄各半。随机分成14组，共三批实验。其中正常对照组、模型对照组共用。
[0078]①第一批分正常对照组、模型对照组、CTXOOmg.!^1)组、FZXLF (6.0g.kg-1) +CTX (20mg.kg-1)组、FZXLF (4.0g.kg-1) +CTX (20mg.kg-1)组、FZXLF (2.0g.kg_1)+CTX(20mg.kg’ 组，每组 10 只；
[0079]②第二批分为 CTX(15mg.kg—1)组、FZXLF (6.0g.kg_1)+CTX (15mg.kg’ 组、FZXLF (4.0g.kg_1)+CTX(15mg.kg-1)组、FZXLF (2.0g.kg-1)+CTX (15mg.kg-1)组，每组 10P.八;
[0080]③第三批分为CTXdOmg.kg—1)组、FZXLF (6.0g.kg_1)+CTX (1mg.kg’ 组、FZXLF (4.0g.kg—1)+CTX(10mg.kg’ 组、FZXLF 低剂量(2.0g.kg_1)+CTX (1mg.kg’ 组，每组10只。
[0081]1.2.2模型制备
[0082]取肝癌H22细胞腹腔内接种8天的ICR小鼠，无菌条件下用5mL注射器取吸出I?2mL牛奶状、较粘稠的腹水，用生理盐水1:4倍稀释，得到约1.0X 16个/ml的瘤株稀释液，除正常对照组外，其余每只小鼠0.1mL接种左前肢腋窝皮下。
[0083]1.2.3给药方法
[0084]本发明中药制剂FZXLF各给药组分别按6.0g.kg—1、4.0gkg—1、2.0g.kg—1灌胃给予肿瘤小鼠，同时对各组小鼠注射相对的不同剂量CTX进行联用。CTX组按20、15、10mg -kg^1腹腔注射给予环磷酰胺溶液。正常对照组、模型对照组均灌相应体积的水，每日I次，连续14d,灌胃体积为0.lmL/10g体重。
[0085]1.2.4指标测定
[0086]⑴一般肿瘤指标:抑瘤率、生命延长率。
[0087]⑵免疫指标:脾指数、胸腺指数。
[0088]2.实验结果
[0089]2.1本发明中药制剂单用对H22荷瘤小鼠的抗肿瘤作用
[0090]2.1.1对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制的影响
[0091]与模型对照组相比，FZXLF(6.0,4.0g.kg—1)对H22实体瘤的瘤重均有抑制作用(P〈0.05?0.01)，最大抑制率为32.37%。模型对照组脾指数、胸腺指数均升高，提示肿瘤可以使免疫器官代偿性肥大，FZXLF(2g.kg—1)能降低脾指数(P〈0.05?0.01)。结果见表
1-1 ο
[0092]表1-1 FZXLF对小鼠肝癌H22生长的抑制作用(η = 12，i ± s )
[0093]
5.组别 ^ , -κ 瘤重/g 抑制率/% 脾指数/%。 胸腺指数/%。 _/ (g.kg )_
正常对照组一一一11.52土1.70 1.20±0.31
模型对照组一3.48±1.10 —12.88±2.36 1.81 ±1.50
In 454-7
FZXLF2.02,82±0.79 18.97%1,52±0.94
氺
FZXLF4.02.60±0.81 25.31% 11.95土3.44 1.52±0.63
氺
2 35+0 73
FZlLF6.0_ —.32.37% 11,00±3。36 1.22±0.57
氺氺
CTX0.022.03±0.46 41.48% !0.43±1.72* !.Q2土ο.18*
氺氺氺
[0094]与正常对照组相比:ΔΡ〈0.05δδΡ<0.0l与模型对照组比较:*P〈0.05#P〈0.0l
[0095]2.1.2对H22荷瘤小鼠生命延长率的影响
[0096]与模型对照组相比，FZXLF各给药组均有延长生存时间的趋势，各给药组生命延长率为7.69%?22.49%，呈现出一定的剂量相关性。结果见表1_2。
[0097]表1-2 FZXLF对H22荷瘤小鼠腹水瘤的生命延长率的影响(η = 10，^ ±s )
[0098]
组别剂量/(g 1? ) 存活时间/ d 生命延长率/ %
模型对照组—16.9±4.1—
FZXLF 2.0 18.2±6.6 7.69
FZXLF 4.0 20.4±6.6 20.71
FZXLF 6.0 20.7 ±8.5 22.49
CTX_002_21.5±7.0*_27.22
[0099]与模型对照组比较:*Ρ〈0.05#Ρ〈0.0l
[0100]2.1.3对H22荷瘤小鼠脾T淋巴细胞增殖能力的影响
[0101]与正常对照组比较，模型对照组肿瘤小鼠T淋巴细胞加PHA刺激前后OD差值、OD增殖率显著降低(ρ〈0.01)。与模型对照组比较，FZXLF三个剂量(6.0g.kg'4.0g.kg'
2.0g.kg—1)具有提高小鼠T淋巴细胞增值的趋势，其中4.0g.kg'2.0g.kg—1能明显升高PHA刺激前后OD差值；6.0g.kg-1能升高OD增殖率(Ρ〈0.05?0.01)。结果见表1-3。
[0102]表1-3对H22荷瘤小鼠T淋巴细胞增殖反应的影响(η = 12，χ±3 )
[0103]
组别剂量/(g ^kf1)AOD值OD增值率正常对照组—0.511 + 0.0560.532±0.068
模型对照组—0.393±0.081“λ ?0.345±0.095
FZXLF2.00.500±0.062材0.406±0.080
FZXLF4.00.444±0.033*0.375±0.064
FZXLF6.00.409 ±0.0740.424 ±0.079
[0104]
【权利要求】
1.一种治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成:黄苗10?20g,人参5?15g,夏枯草10?25g,甘草2?5g,莪术20?25g,半枝莲25?30g,干蟾5?1g,猫爪草15?20g,猪茶20?25g,水牛角20?25g,仙鹤草25?30g。
2.根据权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成:黄苗1g,人参15g,夏枯草1g,甘草5g,莪术25g,半枝莲30g,干蟾1g,猫爪草20g，猪苓25g，水牛角25g，仙鹤草30g。
3.根据权利要求1所述的治疗恶性肿瘤的中药制剂，其特征在于由下列重量份数的原料药制备而成:黄苗20g,人参15g,夏枯草25g,甘草5g,莪术20g,半枝莲25g,干蟾1g,猫爪草15g，猪苓20g，水牛角20g，仙鹤草25g。
4.权利要求书I至3所述治疗恶性肿瘤的中药制剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤: a.取莪术粉碎过20目筛，加12倍量水浸泡4小时，水蒸气蒸馏5小时，分取莪术油，加无水乙醇稀释后，在搅拌下滴加入到环糊精饱和溶液中，搅拌2小时，0-5°C冷冻24小时，过滤，低温干燥，干燥后密封，提取液备用，药渣转入c ； b.取人参、猪苓、黄芪、干蟾、水牛角、猫爪草、甘草加12倍量70%乙醇加热回流提取2小时，提取3次，2、3次分别用10倍、8倍量70%乙醇，合并提取液过滤，回收乙醇，药液备用，药渣转入c ； c.取仙鹤草、夏枯草、半枝莲及上述a、b药渣加10倍量水煮液提取1.0小时，提取3次，2、3次分别用8倍、8倍量水，合并提取液过滤，浓缩至相对密度约为1.2，醇沉24小时，回收乙醇，药液备用，弃去药渣； 将a、b、c三步提取液合并减压浓缩至1.2，减压干燥后粉碎，加入莪术油环糊精饱和物、辅料适量混合均匀制成颗粒剂。
【文档编号】A61K35/56GK104127808SQ201410337308
【公开日】2014年11月5日 申请日期:2014年7月15日 优先权日:2014年7月15日
【发明者】南中兴, 南宁 申请人:南中兴, 南宁