一种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂及其制备方法，涉及抗应激食品领域，包括γ-氨基丁酸、粒径为110～160nm姜黄素纳米脂质颗粒、粒径为120～170nm维生素B6微胶囊和丝蛋白肽，所述γ-氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素B6微胶囊、丝蛋白肽的质量比为1.5～3：2.4～4：7.1～9：0.1～2。本发明的丝蛋白肽能够分解产生丙氨酸，丙氨酸能够异生成糖并进入血浆，肝脏从血浆中获得大量的糖后，能够加快分解偏二甲肼的速率，该添加剂的生物安全性好，能够有效提高脑细胞中γ-氨基丁酸的含量，降低谷氨酸的含量。
【专利说明】-种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及抗应激食品领域，具体涉及一种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂及 其制备方法。
【背景技术】
[0002] 偏二甲肼，又称1，1-二甲基联氨，是导弹、卫星、飞船等发射试验和运载火箭的主 体燃料，在军事和航天领域应用比较广泛。
[0003] 偏二甲肼能够通过皮肤和呼吸道渗入人体内，偏二甲肼进入人体后，能够与人体 内的5-磷酸吡哆醛发生化学反应，生成腙和水。
[0004] 5-磷酸吡哆醛是人体内谷氨酸脱羧酶和Y -氨基丁酸转氨酶的辅酶，谷氨酸脱羧 酶和氨基丁酸转氨酶能够调节人体内氨基丁酸的含量，进而调节人体的中枢神经。
[0005] 当5-磷酸吡哆醛含量降低时，会导致谷氨酸脱羧酶和Y -氨基丁酸转氨酶的反应 活性降低，进而引起人体内氨基丁酸的含量急剧降低，导致神经传导的抑制因素减弱 或消失，继而造成神经中枢过度兴奋，引发痉挛症状。
[0006] 5-磷酸吡哆醛还是维生素 B6的组成成分之一，5-磷酸吡哆醛与偏二甲肼反应后， 会导致维生素 B6的大量流失，进而引发人体产生维生素 B6缺乏症，导致人体的皮肤、中枢 神经系统和造血功能受到损害。
[0007] 现有的流行病学调查表明：偏二甲肼为一种神经毒素，能够引起轻度脂肪肝和血 清中谷丙转氨酶活性升高，长期接触偏二甲肼的工作人员，其神经系统、呼吸系统和消化系 统均受到一定程度的损伤。
[0008] 对小鼠进行偏二甲肼灌胃后，其脑组织中氨基丁酸的含量显著降低，随着偏 二甲肼服用量的增加，氨基丁酸逐渐减少。
[0009] 氨基丁酸是脊椎动物的枢神经系统中特有的抑制性神经递质，介导了 40%上 抑制性神经传导。神经细胞突触间隙中氨基丁酸含量降低后，会导致神经传导的抑制 因素减弱或消失，继而造成神经中枢过度兴奋，引发痉挛等神经症状。
[0010]目前，为了防止长期接触偏二甲肼的工作人员受到伤害，通常在工作人员的饮食 中添加富含维生素 B6的食品牛奶和啤酒、或者直接添加维生素 B6。
[0011] 但是现有的预防偏二甲肼慢性损伤的方法存在以下缺陷：
[0012] 工作人员服用富含维生素 B6的食品牛奶和啤酒、或者直接服用维生素 B6,维生素 B6在人体内先转化为磷酸鹣哆醛与磷酸吡哆胺，磷酸鹣哆醛与磷酸吡哆胺在人体内进行氨 基传递，由于偏二甲肼主要与5-磷酸吡哆醛，导致人体脑细胞中的γ -氨基丁酸含量降低。 维生素 B6不能及时转化成谷氨酸脱羧酶和γ -氨基丁酸转氨酶，难以达到提高人体脑细胞 中的氨基丁酸含量的功能。
【发明内容】
[0013] 针对现有技术中存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种用于抗偏二甲肼的应激 食品添加剂及其制备方法，能够提高人体脑细胞中的γ -氨基丁酸含量。
[0014] 为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种用于抗偏二甲肼的应激食品添 加剂的制备方法，包括以下步骤：
[0015] Α、制备纯度为75 %?85 %的丝蛋白肽，制备粒径为110?160nm、姜黄素质量分数 为3. 5%?4. 5%的姜黄素纳米脂质颗粒；制备粒径为120?170nm、维生素 B6的质量分数 为75 %?85 %的维生素 B6微胶囊；
[0016] B、按质量份将2. 4?4份姜黄素纳米脂质颗粒，7. 1?9份维生素 B6微胶囊， 0. 1?2丝蛋白肽和1. 5?3份纯度为95%?99%的γ-氨基丁酸混合均匀，得到抗偏二 甲肼应激食品添加剂。
[0017] 在上述技术方案的基础上，步骤A中所述制备纯度为75%?85%的丝蛋白肽，包 括以下步骤：
[0018] 将蚕丝加入质量浓度为0.5%、温度为1001：的似2〇)3溶液中，保温301^11，得丝胶 水溶液和内层丝心；将丝胶水溶液透析、并浓缩，得到浓度为5. 8%的丝胶蛋白溶液；
[0019] 将内层丝心放入浓度为40%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温30min、得到丝 心粗溶液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为5. 8 %的丝心溶液；按摩尔份将1份复合 风味蛋白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合，得到复合酶，将复合酶配置成浓度为 5. 8 %的复合酶溶液；
[0020] 按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液；向混合液中体积 份为0. 005份的复合酶溶液后，搅拌反应3h后进行灭酶处理，得到丝肽蛋白粗溶液；将丝肽 蛋白粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇，直至浓缩液的浓度为75%后进 行离心，得到酶解液；将酶解液透析、浓缩、干燥，得到纯度为75%?85%的丝蛋白肽。
[0021] 在上述技术方案的基础上，步骤B所述制备粒径为150?200nm、姜黄素质量分数 为3. 5%?4. 5%的姜黄素纳米脂质颗粒包括以下步骤：
[0022] 按质量份将5份卵磷脂与1份植物留醇混合均匀，得到脂质，按质量份将1份姜黄 素、16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯混合均匀，得到复配溶 液；
[0023] 按体积份将1份复配溶液与1. 5?4份浓度为30 %?60 %的甘露醇溶液混合 均匀后、并乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为150?200nm、姜黄素质量份为 3. 5 %?4. 5 %的姜黄素纳米脂质颗粒。
[0024] 在上述技术方案的基础上，所述步骤B还包括以下步骤：按质量份将3份姜黄素 纳米脂质颗粒，8份的维生素 B6微胶囊，1份丝蛋白肽和1. 5?2份纯度为95%?99%的 Y -氨基丁酸，混合均匀，得到抗偏二甲肼应激食品添加剂。
[0025] 在上述技术方案的基础上，所述步骤B之后还包括以下步骤：
[0026] 按质量份，将1份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀，得到药粉，在 符合GMP的清洁条件下，将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
[0027] -种基于所述的制备方法得到的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，包括氨基丁 酸、粒径为110?160nm姜黄素纳米脂质颗粒、粒径为120?170nm维生素 B6微胶囊和丝 蛋白肽，所述Y -氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6微胶囊、丝蛋白肽的质量比为 1. 5 ?3 :2· 4 ?4 :7. 1 ?9 :0· 1 ?2。
[0028] 在上述技术方案的基础上，所述氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6微 胶囊、丝蛋白肽的质量比为2 :3 :8 :1。
[0029] 在上述技术方案的基础上，所述Υ -氨基丁酸的纯度为99%、维生素 Β6微胶囊中 维生素 Β6的含量为80%、丝蛋白肽的纯度为83%。
[0030] 在上述技术方案的基础上，所述姜黄素纳米脂质颗粒包括姜黄素、脂质、脱氧胆 酸钠和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，所述姜黄素、脂质、脱氧胆酸钠、聚氧乙烯脱水山梨 醇单油酸酯的质量比为1:16:4:1 ;所述脂质包括卵磷脂和留醇，卵磷脂与留醇的质量比为 5:1。
[0031] 在上述技术方案的基础上，所述姜黄素纳米脂质颗粒中，姜黄素的质量分数为 3. 5%?4. 5%。
[0032] 与现有技术相比，本发明的优点在于：
[0033] (1)本发明的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，包括氨基丁酸、姜黄素纳米脂质 颗粒、维生素 Β6微胶囊和丝蛋白肽，丝蛋白肽在人体内能够分解为丙氨酸和甘氨酸，丙氨 酸能够异生成糖并进入血浆，肝脏从血浆中获得大量的糖后，能够加快分解偏二甲肼；丙氨 酸能够促进TCA循环（tricarboxylicacidcycle，三羧酸循环）、活化苹果酸穿梭系统，加快 分解抗偏二甲肼，甘氨酸能够增加丙氨酸的活性，促进抗偏二甲肼的分解。
[0034] 部分氨基丁酸能够通过血液循环进入脑细胞中，防止氨基丁酸缺失引起 的疾病；粒径为120?170nm的维生素 B6微胶囊具有缓释功能，与现有技术中直接服用维 生素 B6相比，能够提高维生素 B6的吸收效果，能够有效降低染毒小鼠体内谷氨酸的含量， 提高染毒小鼠海马中氨基丁酸的含量。
[0035] (2)本发明的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，包括粒径为110?160nm的姜黄素纳 米脂质颗粒，姜黄素纳米脂质颗粒能够与细胞膜融合，将姜黄素送入细胞内部，与现有技术 中直接使用姜黄素相比，能够更好地降低染毒小鼠体内谷氨酸的含量，提高染毒小鼠海马 中氨基丁酸的含量。
[0036] (3)本发明的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗 粒、维生素 B6微胶囊、丝蛋白肽的质量比为1. 5?3 :2. 4?4 :7. 1?9 :0. 1?2,该添加剂 的生物安全性好，能够有效提高脑细胞中Y -氨基丁酸的含量，降低谷氨酸的含量，有效防 治了抗偏二甲肼带来的疾病。
【具体实施方式】
[0037] 以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
[0038] 本发明的一种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，包括以下步骤：
[0039] 步骤一、将蚕丝加入质量浓度为0.5%、温度为1001：的似2〇)3溶液中，保温20? 40min，得丝胶水溶液和内层丝心。
[0040] 步骤二、将丝胶水溶液透析并浓缩至4%?7%，得到丝胶蛋白溶液。
[0041] 步骤三、将内层丝心放入浓度为30%?50%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温 30min、得到丝心粗溶液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为4%?8%的丝心溶液。
[0042] 步骤四、按摩尔份将1份复合风味蛋白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合， 得到复合酶，将复合酶配置成浓度为5. 8%的复合酶溶液。
[0043] 步骤五、按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液，向混合 液中加入体积份为〇. 005份的复合酶溶液，搅拌反应3h后，进行灭酶处理，得到丝肽蛋白 粗溶液，将丝肽蛋白粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇至浓度为60%? 80%后、离心，得到酶解液，将酶解液透析浓缩后，进行喷雾干燥，得到丝蛋白肽粉，采用色 谱仪对丝蛋白肽粉进行检测，得到丝蛋白肽的浓度为75%?85%。
[0044] 步骤六、按质量份将5份卵磷脂与1份植物留醇混合均匀，得到脂质，按质量份将 1份姜黄素、16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份吐温80 (聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯）混 合均匀，得到复配溶液。
[0045] 步骤七、按体积份将1份复配溶液与1. 5?4份浓度为30 %?60%的甘露醇溶液 混合均勻后，加入超声仪乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为110?160nm、姜黄 素质量分数为3. 5 %?4. 5 %的姜黄素纳米脂质颗粒。
[0046] 步骤八、将维生素 B6制备成粒径为120?170nm的维生素 B6微胶囊，维生素 B6 微胶囊中，维生素 B6的质量分数为75 %?85%。
[0047] 步骤九、按质量份将1.5?3份浓度为95%?99%的氨基丁酸，2. 4?4份姜 黄素纳米脂质颗粒，7. 1?9份维生素 B6微胶囊，0. 1?2份丝蛋白肽混合均匀，得到抗偏 二甲肼应激食品添加剂，按质量份将1份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀， 得到药粉，在符合GMP的清洁条件下，将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
[0048] 一种抗偏二甲肼损伤的应激药物，包括氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生 素 B6微胶囊和丝蛋白肽，γ-氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的 质量比为1. 5?3 :2· 4?4 :7. 1?9 :0· 1?2。
[0049] 氨基丁酸的纯度为99%、维生素 B6微胶囊的纯度为80%、丝蛋白肽的纯度为 83%，维生素 B6微胶囊的直径为120?170nm。姜黄素纳米脂质颗粒包括姜黄素、脂质、脱 氧胆酸钠和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，脂质包括卵磷脂和留醇，卵磷脂与留醇的质量 比为5:1。
[0050] 在实际使用中，氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的 质量比可以根据具体情况进行调节，在本发明实施例中，Y -氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗 粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的质量比为2 :3 :8 :1。
[0051] 下面，通过3个实施例对本发明进行进一步的说明
[0052] 实施例1
[0053] 5101:将蚕丝加入质量浓度为0.5%、温度为1001：的似2〇)3溶液中，保温201^11， 得丝胶水溶液和内层丝心.
[0054] S102 :将丝胶水溶液透析并浓缩至4%，得到丝胶蛋白溶液。
[0055] S103 :将内层丝心放入浓度为30%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温30min、得 到丝心粗溶液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为4%的丝心溶液。
[0056] S104 :按摩尔份将1份复合风味蛋白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合， 得到复合酶。
[0057] S105 :按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液，按质量 份向混合液中加入〇. 005份复合酶溶液，搅拌反应3h后，进行灭酶处理，得到丝肽蛋白粗 溶液，将丝肽蛋白粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇至浓度为60%后、离 心，得到酶解液，将酶解液透析浓缩后，进行喷雾干燥，得到丝蛋白肽粉，采用色谱仪对丝蛋 白肽粉进行检测，得到丝蛋白肽的浓度为75%。
[0058] S106 :按质量份将5份卵磷脂与1份植物甾醇混合均匀，得到脂质，按质量份将1 份姜黄素、16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份吐温80混合均匀，得到复配溶液。
[0059] S107 :按体积份将1份复配溶液与1. 5份浓度为30%的甘露醇溶液混合均匀 后，加入超声仪乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为ll〇nm、姜黄素质量分数为 3. 5 %的姜黄素纳米脂质颗粒。
[0060] S108 :将维生素 B6制备成粒径为120nm的维生素 B6微胶囊，维生素 B6微胶囊中， 维生素 B6的质量分数为75%。
[0061] S109 :按质量份将1. 5份浓度为95%的氨基丁酸，2. 4份姜黄素纳米脂质颗 粒，7. 1份维生素 B6微胶囊，0. 1份丝蛋白肽混合均勻，得到抗偏二甲肼应激食品添加剂，按 质量份将1份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀，得到药粉，在符合GMP的清 洁条件下，将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
[0062] 一种抗偏二甲肼损伤的应激药物，包括氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生 素 B6微胶囊和丝蛋白肽，γ-氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的 质量比为 1. 5 :2. 4 :7. 1 :0· 1。
[0063] 实施例2
[0064] 5201:将蚕丝加入质量浓度为0.5%、温度为1001：的似2〇)3溶液中，保温401^11， 得丝胶水溶液和内层丝心.
[0065] S202 :将丝胶水溶液透析并浓缩至7%，得到丝胶蛋白溶液。
[0066] S203 :将内层丝心放入浓度为50%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温30min、得 到丝心粗溶液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为8%的丝心溶液。
[0067] S204 :按摩尔份将1份复合风味蛋白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合， 得到复合酶。
[0068] S205 :按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液，按质量 份向混合液中加入〇. 005份复合酶溶液，搅拌反应3h后，进行灭酶处理，得到丝肽蛋白粗 溶液，将丝肽蛋白粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇至浓度为80%后、离 心，得到酶解液，将酶解液透析浓缩后，进行喷雾干燥，得到丝蛋白肽粉，采用色谱仪对丝蛋 白肽粉进行检测，得到丝蛋白肽的浓度为85%。
[0069] S206 :按质量份将5份卵磷脂与1份植物留醇混合均匀，得到脂质，按质量份将1 份姜黄素、16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份吐温80混合均匀，得到复配溶液。
[0070] S207 :按体积份将1份复配溶液与4份浓度为60 %的甘露醇溶液混合均匀后，力口 入超声仪乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为160nm、姜黄素质量分数为4. 5% 的姜黄素纳米脂质颗粒。
[0071] S208 :将维生素 B6制备成粒径为170nm的维生素 B6微胶囊，维生素 B6微胶囊中， 维生素 B6的质量分数为85 %。
[0072] S209 :按质量份将3份浓度为97%的氨基丁酸，4份姜黄素纳米脂质颗粒，9份 维生素 B6微胶囊，2份丝蛋白肽混合均匀，得到抗偏二甲肼应激食品添加剂，按质量份将1 份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀，得到药粉，在符合GMP的清洁条件下， 将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
[0073] -种抗偏二甲肼损伤的应激药物，包括氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生 素 B6微胶囊和丝蛋白肽，氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的 质量比为3 :4 :9 :2。
[0074] 实施例3
[0075] 5301:将蚕丝加入质量浓度为0.5%、温度为1001：的似2〇)3溶液中，保温301^11， 得丝胶水溶液和内层丝心.
[0076] S302 :将丝胶水溶液透析并浓缩至5. 8%，得到丝胶蛋白溶液。
[0077] S303 :将内层丝心放入浓度为40%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温30min、得 到丝心粗溶液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为5. 8%的丝心溶液。
[0078] S304 :按摩尔份将1份复合风味蛋白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合， 得到复合酶。
[0079] S305 :按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液，按质量 份向混合液中加入〇. 005份复合酶溶液，搅拌反应3h后，进行灭酶处理，得到丝肽蛋白粗 溶液，将丝肽蛋白粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇至浓度为75%后、离 心，得到酶解液，将酶解液透析浓缩后，进行喷雾干燥，得到丝蛋白肽粉，采用色谱仪对丝蛋 白肽粉进行检测，得到丝蛋白肽的浓度为83%。
[0080] S306 :按质量份将5份卵磷脂与1份植物留醇混合均匀，得到脂质，按质量份将1 份姜黄素、16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份吐温80混合均匀，得到复配溶液。
[0081] S307 :按体积份将1份复配溶液与2. 5份浓度为45%的甘露醇溶液混合均匀 后，加入超声仪乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为130nm、姜黄素质量分数为 4. 3 %的姜黄素纳米脂质颗粒。
[0082] S308 :将维生素 B6制备成粒径为150nm的维生素 B6微胶囊，维生素 B6微胶囊中， 维生素 B6的质量分数为80%。
[0083] S309 :按质量份将2份浓度为99%的氨基丁酸，3份姜黄素纳米脂质颗粒，8份 维生素 B6微胶囊，1份丝蛋白肽混合均匀，得到抗偏二甲肼应激食品添加剂，按质量份将1 份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀，得到药粉，在符合GMP的清洁条件下， 将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
[0084] 一种抗偏二甲肼损伤的应激药物，包括氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生 素 B6微胶囊和丝蛋白肽，γ-氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 B6、丝蛋白肽之间的 质量比为2 :3 :8 :1。
[0085] 下面为本发明的抗偏二甲肼损伤的应激药物的验证过程。
[0086] 按质量份，将0.2?1.4份氨基丁酸、0. 1?2.0份丝蛋白肽、2. 4?4.0份姜 黄素脂质体和〇. 1?2. 0份微胶囊维生素 B6作为第一添加剂A1。
[0087] 按质量份，将0.2?1.4份氨基丁酸、2. 4?4.0份丝蛋白肽、4.0?7.0份姜 黄素脂质体和2. 1?4. 0份微胶囊维生素 B6配制为第二添加剂A2。
[0088] 按质量份，将0. 2?1. 4份氨基丁酸、4. 1?6. 0的丝蛋白肽、7. 1?9. 0的姜 黄素脂质体、4. 1?6. 0份微胶囊维生素 B6配制为第三添加剂A3。
[0089] 按质量份，将1. 5?3. 0份γ -氨基丁酸、0. 1?2. 0的丝蛋白肽、4. 0?7. 0份姜 黄素脂质体、4. 1?6. 0份微胶囊维生素 B6配制为第四添加剂A4。
[0090] 按质量份，将1. 5?3. 0份γ -氨基丁酸、2. 4?4. 0的丝蛋白肽、7. 1?9. 0份姜 黄素脂质体、〇. 1?2. 0份微胶囊维生素 Β6配制为第五添加剂Α5。
[0091] 按质量份，将1. 5?3. 0份γ -氨基丁酸、4. 1?6. 0的丝蛋白肽、7. 1?9. 0份姜 黄素脂质体、2. 1?4. 0份微胶囊维生素 Β6配制为第六添加剂Α6。
[0092] 按质量份，将3. 1?5.0份氨基丁酸、0. 1?2.0的丝蛋白肽、7. 1?9.0份姜 黄素脂质体、2. 1?4. 0份微胶囊维生素 Β6配制为第七添加剂Α7。
[0093] 按质量份，将3. 1?5.0份氨基丁酸、2. 4?4.0的丝蛋白肽、2. 4?4.0份姜 黄素脂质体、2. 1?4. 0份微胶囊维生素 Β6配制为第八添加剂Α8。
[0094] 按质量份，将3. 1?5. 0份γ -氨基丁酸、4. 1?6. 0的丝蛋白肽、4. 0?7. 0份姜 黄素脂质体、〇. 1?2. 0份微胶囊维生素 Β6配制为第九添加剂Α9。
[0095] 选择由北京大学医学部实验动物科学部提供，来自ICR(Institute of Cancer Research,美国癌症研究所）的SPF级（Specific pathogen Free,无特定病原体）小鼠作为 实验对象，每只小鼠的重量均为18?22g。
[0096] 在温度为22?23°C，湿度为60 %?70 %的条件下开展实验。
[0097] 按照78. 873mg/kg的标准向若干实验小鼠腹腔内注射偏二甲肼，作为染毒小鼠， 将所有染毒小鼠分配为维生素 B6测试组、微胶囊维生素 B6测试组、姜黄素测试组、姜黄素 脂质体测试组和添加剂测试组。
[0098] 所有测试组均设置相应的正常组和单纯染毒组，用于验证对应测试组的使用效 果。
[0099] 将维生素 B6测试组的染毒小鼠分为两组，对两组分别进行7天灌胃干预，一组每 次均灌入浓度为l〇〇mg/kg的维生素 B6,另一组每次均灌入浓度为200mg/kg的维生素 B6。 [0100] 将微胶囊维生素 B6测试组的染毒小鼠分为两组，对两组染毒小鼠分别进行7天 灌胃干预，一组每次均灌入浓度为l〇〇mg/kg的微胶囊维生素 B6,另一组每次均灌入浓度为 200mg/kg的微胶囊维生素 B6。
[0101] 7天后，取维生素 B6测试组、微胶囊维生素 B6测试组的所有染毒小鼠的海马，将所 有染毒小鼠的海马均制备成匀浆，测定所有染毒小鼠海马中谷氨酸、氨基丁酸的含量。
[0102] 参见表1所示，正常小鼠海马中谷氨酸的含量为2148±21ng/mg，γ-氨基丁酸的 含量为326. 7±7.4ng/mg ;染毒小鼠海马中谷氨酸的含量为2671±53ng/mg，γ-氨基丁酸 的含量为264. 2±13. 7ng/mg ;由此可知，偏二甲肼能够提高小鼠海马中谷氨酸的含量，降 低小鼠海马中氨基丁酸的含量。
[0103] 维生素 B6测试组中，当维生素 B6的用量为100mg/kg时，对应的小鼠海马中的谷 氨酸的含量为2593±44ng/mg，γ -氨基丁酸的含量为282. 8±9. 6ng/mg ;当维生素 B6的用 量为200mg/kg时，对应的小鼠海马中的谷氨酸的含量为2467±31ng/mg，其P值（P-Value， Probability,可能性）< 0. 05,准确性显著，γ-氨基丁酸的含量为293. 5±6. 4ng/mg，其P 值< 0.05,准确性非常显著。
[0104] 微胶囊维生素 B6测试组中，当微胶囊维生素 B6的用量为100mg/kg时，对应的海 马中的谷氨酸的含量为2482±29ng/mg其P值< 0. 05,准确性显著，γ-氨基丁酸的含量为 301.5±10. lng/mg，其P值<0. 01，准确性非常显著；当微胶囊维生素 B6的用量为200mg/ kg时，对应的小鼠海马中的谷氨酸的含量为2368±37ng/mg，其P值< 0. 01，准确性显著， Y -氨基丁酸的含量为310. 9 ±5. 6ng/mg，其P值< 0. 01，准确性非常显著。
[0105] 由上述数据可知，维生素 B6、微胶囊维生素 B6均能降低染毒小鼠体内谷氨酸的含 量，提高染毒小鼠海马中Y -氨基丁酸的含量，高浓度的维生素 B6、微胶囊维生素 B6效果优 于低浓度的维生素 B6、微胶囊维生素 B6。
[0106] 微胶囊维生素 B6在降低染毒小鼠体内谷氨酸的含量，提高染毒小鼠海马中氨 基丁酸的含量时，效果优于维生素 B6。
[0107] 表1维生素 B6、微胶囊维生素 B6对UDMH染毒小鼠海马组织中Glu、GABA含量的 影响比较
[0108]
【权利要求】
1. 一种用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： A、 制备纯度为75%?85%的丝蛋白肽，制备粒径为110?160nm、姜黄素质量分数为 3. 5%?4. 5%的姜黄素纳米脂质颗粒；制备粒径为120?170nm、维生素 B6的质量分数为 75 %?85 %的维生素 B6微胶囊； B、 按质量份将2. 4?4份姜黄素纳米脂质颗粒，7. 1?9份维生素 B6微胶囊，0. 1?2 丝蛋白肽和1. 5?3份纯度为95 %?99 %的γ -氨基丁酸混合均匀，得到抗偏二甲肼应激 食品添加剂。
2. 如权利要求1所述的用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，其特征在于： 步骤A中所述制备纯度为75 %?85%的丝蛋白肽，包括以下步骤： 将蚕丝加入质量浓度为0. 5%、温度为100°C的Na2C03溶液中，保温30min，得丝胶水溶 液和内层丝心；将丝胶水溶液透析、并浓缩，得到浓度为5. 8%的丝胶蛋白溶液； 将内层丝心放入浓度为40%、温度为80°C的氯化钙溶液中，保温30min、得到丝心粗溶 液，将丝心粗溶液透析并浓缩，得到浓度为5. 8 %的丝心溶液；按摩尔份将1份复合风味蛋 白酶、1份木瓜蛋白酶和1份碱性蛋白酶混合，得到复合酶，将复合酶配置成浓度为5. 8%的 复合酶溶液； 按体积份将1份丝胶蛋白溶液和2份丝心溶液混合，得到混合液；向混合液中体积份为 〇. 005份的复合酶溶液后，搅拌反应3h后进行灭酶处理，得到丝肽蛋白粗溶液；将丝肽蛋白 粗溶液浓缩、得到浓缩液；向浓缩液中加入无水乙醇，直至浓缩液的浓度为75%后进行离 心，得到酶解液；将酶解液透析、浓缩、干燥，得到纯度为75%?85%的丝蛋白肽。
3. 如权利要求1所述的用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，其特征在于： 步骤B中所述制备粒径为150?200nm、姜黄素质量分数为3. 5%?4. 5%的姜黄素纳米脂 质颗粒包括以下步骤： 按质量份将5份卵磷脂与1份植物留醇混合均匀，得到脂质，按质量份将1份姜黄素、 16份脂质、4份脱氧胆酸钠和1份聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯混合均匀，得到复配溶液； 按体积份将1份复配溶液与1. 5?4份浓度为30 %?60%的甘露醇溶液混合均匀后、 并乳化，得到乳化溶液，将乳化溶液制备成粒径为150?200nm、姜黄素质量份为3. 5%? 4. 5 %的姜黄素纳米脂质颗粒。
4. 如权利要求1所述的用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，其特征在于， 所述步骤B还包括以下步骤：按质量份将3份姜黄素纳米脂质颗粒，8份的维生素 B6微胶 囊，1份丝蛋白肽和1. 5?2份纯度为95%?99%的γ -氨基丁酸，混合均勻，得到抗偏二 甲肼应激食品添加剂。
5. 如权利要求1所述的用于抗偏二甲肼的应激食品添加剂的制备方法，其特征在于， 所述步骤B之后还包括以下步骤： 按质量份，将1份抗偏二甲肼应激食品添加剂与1份淀粉混合均匀，得到药粉，在符合 GMP的清洁条件下，将药粉造粒，得到抗偏二甲肼损伤的应激药片。
6. -种基于权利要求1?5中任一项所述的制备方法得到的抗偏二甲肼的应激食品 添加剂，其特征在于：包括氨基丁酸、粒径为110?160nm姜黄素纳米脂质颗粒、粒径为 120?170nm维生素 B6微胶囊和丝蛋白肽，所述γ -氨基丁酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生 素 B6微胶囊、丝蛋白肽的质量比为1. 5?3 :2. 4?4 :7. 1?9 :0. 1?2。
7. 如权利要求6所述的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，其特征在于：所述γ-氨基丁 酸、姜黄素纳米脂质颗粒、维生素 Β6微胶囊、丝蛋白肽的质量比为2 :3 :8 :1。
8. 如权利要求6所述的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，其特征在于：所述γ-氨基丁 酸的纯度为99 %，所述维生素 Β6微胶囊中维生素 Β6的含量为80%，所述丝蛋白肽的纯度 为 83%。
9. 如权利要求6所述的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，其特征在于：所述姜黄素纳米 脂质颗粒包括姜黄素、脂质、脱氧胆酸钠和聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯，所述姜黄素、月旨 质、脱氧胆酸钠、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯的质量比为1:16:4:1 ;所述脂质包括卵磷 脂和甾醇，卵磷脂与甾醇的质量比为5:1。
10. 如权利要求6所述的抗偏二甲肼的应激食品添加剂，其特征在于：所述姜黄素纳米 脂质颗粒中，姜黄素的质量分数为3. 5%?4. 5%。
【文档编号】A61P39/00GK104146269SQ201410362732
【公开日】2014年11月19日 申请日期:2014年7月28日 优先权日:2014年7月28日
【发明者】苏喜生, 李德远, 李玮, 钟飞, 徐祖武, 胡杰, 郑哲君 申请人:苏喜生, 李德远, 李玮, 钟飞, 徐祖武, 胡杰, 郑哲君