具有益生菌的营养组合物的制作方法

具有益生菌的营养组合物的制作方法
【专利摘要】组合物，包含短双歧杆菌,不可消化的糖A和不可消化的糖B,其可选组合有副干酪乳杆菌，以及所述组合物在治疗和/或预防胃肠疾病、免疫疾病和/内分泌疾病中的用途。
【专利说明】具有益生菌的营养组合物
[0001] 本申请是2006年2月28日提交的题为"具有益生菌的营养组合物"的中国专利 申请200680006368. 2的分案申请。

【技术领域】
[0002] 本发明涉及包含至少两种不同的不可消化的益生素糖（prebiotic saccharide) 和至少一种益生菌（probiotic bacterium)。所述营养组合物尤其适合喂养婴儿。 技术背景
[0003] 婴儿在出生时缺乏肠道菌群。作为在出生过程中与母亲的接触以及随后用母乳或 配方奶喂养的结果，肠道菌群快速发展。在肠道菌群发展的过程中，其仍然是不成熟的并且 其平衡是脆弱的。母乳喂养的婴儿与配方奶喂养的婴儿相比较少出现感染或疾病。因此， 与配方奶喂养的婴儿相比，母乳喂养的婴儿的胃肠感染的发病率和持续期都较低，较少出 现特应性疾病诸如过敏症，湿疹，较少的绞痛和痉挛，以及较少的便秘。生命后期中出现的 疾病，诸如幼儿肥胖，糖尿病以及哮喘与生命早期阶段喂养类型也相关，母乳喂养的婴儿具 有优势。
[0004] 通常，母乳喂养的婴儿的肠道菌群主要由双歧杆菌属（Bifidobacteria)和乳杆菌 属（Lactobacilli)组成。母乳含有母乳寡糖，其是婴儿肠道中双歧杆菌的生长因子。配 方奶喂养的婴儿中的菌群更加多样化并且通常含有更多的拟杆菌（Bacteroides),梭菌 (Clostridium)和肠杆菌（Enterobacteriaceae)。配方奶喂养的婴儿具有的双歧杆菌的数 量是母乳喂养的婴儿所具有的大约十分之一到大约三分之二。双歧杆菌和乳杆菌被认为对 于维持平衡良好的肠道小型生物群中非常重要，并且认为双歧杆菌和乳杆菌具有多种健康 促进效应，包括预防和/或治疗腹泻和肠道感染。此外，已经显示、双歧杆菌和乳杆菌在宿 王免疫系统中起作用。
[0005] 目前的方法是在总体上促进双歧杆菌，即在属的水平。双歧杆菌属由多种不同种 组成，其在代谢、酶活性、寡-和多糖利用，细胞壁组成，以及与宿主的免疫系统的相互作 用等方面不同。因此，不是每种双歧杆菌都对婴儿具有相同的功能影响。青春双歧杆菌 (B. adolescentis)在成人以及过敏性婴儿的菌群中更加常见，在健康婴儿的粪便中较少。 动物双歧杆菌（B.animalis)/乳酸双歧杆菌（B. Iactis)并非天然存在人中。在健康婴儿 中，双歧杆菌菌群主要由婴儿双歧杆菌（B. infantis)，短双歧杆菌（B. breve)和长双歧杆 菌（B. Iongum)组成。本发明的主要目的在于在配方奶喂养的婴儿中获得这样的菌群，其在 双歧杆菌水平上与母乳喂养的婴儿中的菌群相似。
[0006] EP1105002描述了两种不同的不可消化的碳水化合物在改善肠菌群中的用 途。所述碳水化合物具体包括半乳-寡糖（galacto-oligosaccharide)以及果-聚糖 (fructo-polysaccharide)〇


【发明内容】

[0007] 本发明人发现了对人类婴儿喂以不同不可消化的单糖的组合增加粪便中 的双歧杆菌水平并在种的水平调节肠道中的双歧杆菌群体达到类似在母乳喂养的 婴儿中观察到的水平，即低水平的小链双歧杆菌（B. catenulatum)，假链双歧杆菌 (B.pseudocatenulatum),和青春双歧杆菌（青春双歧杆菌）。但是，发现短双歧杆菌与母 乳喂养的婴儿的情况相比相对较低。
[0008] 因此，一方面，本发明提供组合物，其包含不可消化的单糖A和不可消化的单糖B 以及短双歧杆菌。所述组合物优选用于平衡双歧杆菌在配方奶喂养的婴儿的胃肠道中的分 布。
[0009] 另一方面，还发现对婴儿喂以含有不同不可消化的糖的组合的配方奶增加粪 便中乳杆菌水平并在种的水平调节肠道中的乳杆菌水平，使其达到与在母乳喂养的婴 儿中观察到的水平相似的水平。但是，发现副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei) (L. paracasei)的浓度与母乳喂养的婴儿相比相对较低。因此，本发明另一方面提供一种组 合物，其包含短双歧杆菌和副干酪乳杆菌，优选与不可消化的糖A以及不可消化的糖B组 合。发现这些细菌的群体在接受配方奶的婴儿的胃肠道中发育较差。因此，益生细菌的这 种组合可优选用于喂养婴儿以及模拟母乳喂养的婴儿的肠道菌群。

【专利附图】

【附图说明】
[0010] 图1:气道高反应性的图，其显示为相对PenH(延长的暂停）相对于以 下组的小鼠中的醋甲胆碱浓度的图，所述小鼠为接受短双歧杆菌、反式半乳寡糖 (transgalacto-oligosaccharide)以及果聚糖（fructopolysaccharide)的组合的小鼠； 以及接受盐水的小鼠对照组。


【发明内容】
[0011]
[0012] 本发明提供具有以下性质的组合物：粘度l_60mPa. s，热密度10-250kcal每 100ml，包含短双歧杆菌，不可消化的糖A以及不可消化的糖B，其中：
[0013] a.不可消化的糖A的聚合度为2-200并且糖A的总单糖单位的至少60mol%是选 自半乳糖，果糖或葡萄糖单糖的单糖；以及
[0014] b.不可消化的糖B的聚合度为2-200并且糖B的总单糖单位的至少60mol%是选 自半乳糖，果糖或葡萄糖单糖的单糖；以及
[0015] 其中
[0016] i)糖A中选自葡萄糖，果糖或半乳糖的至少一种单糖的百分比比糖B中相同单糖 的百分比高至少40mol% ;和/或
[0017] ii)糖A的至少一个糖苷键基于糖A的总糖苷键的百分比比糖B中相同糖苷键的 百分比高至少40% ;和/或
[0018] iii)糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5个单糖单位。
[0019] 另一方面，本发明提供一种组合物，其包含5_16en. %蛋白质，30_60en. %脂肪， 和25-75en. %碳水化合物，并包含短双歧杆菌以及副干酪乳杆菌。
[0020] 另一方面，本发明提供本发明的组合物用于制备将非母乳喂养的或部分母乳喂养 的婴儿胃肠道中的双歧杆菌和/或乳杆菌种类的群体正常化为母乳喂养的婴儿中的双歧 杆菌和/或乳杆菌种类的群体的组合物中的用途。
[0021] 本发明另一方面提供本发明的组合物在制备用于预防和/或治疗胃肠道疾病、免 疫疾病和/或内分泌疾病，优选牛奶过敏症和/或感染的组合物中的用途。
[0022] 粘度
[0023] 本发明组合物的粘度为l_60mPa. s，优选l_20mPa. s，更优选I-IOmPa. s，最优选 l-6mPa.s。低粘度保证液体的适当给予，例如适宜地通过奶嘴的给予。该粘度也非常接近 母乳的粘度。此外，低粘度导致正常胃排空以及更好的能量吸收，其对于需要能量用于最佳 生长和发育的婴儿而言是必需的。本发明的组合物优选通过将粉末状的组合物与水混合来 制备。通常婴儿配方奶以此种方式制备。本发明因此涉及包装的粉末组合物，其中所述包 装提供将粉末与适宜量的液体混合的说明，由此产生粘度l-6〇mPas的液体组合物。
[0024] 液体粘度利用 Physica Rheometer MCR 300 (Physica Messtechnik GmbH, Ostfilden, Germany)在20°C、剪切速率95s4的条件下测定。
[0025] 短双歧杆菌
[0026] 短双歧杆菌是革兰氏阳性厌氧型分支棒状细菌。优选，本发明的短双歧杆菌与短 双歧杆菌常规菌株ATCC 15700相比其16S rRNA具有至少95 %的相同性，更优选至少97 % 相同性（Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44:846-849)。本发明所 用双歧杆菌优选与短双歧杆菌探针杂交，并且利用本文下文所述的5'核酸酶测定法产生信 号。
[0027] 优选的短双歧杆菌菌株是分离自健康母乳喂养的婴儿的粪便的那些。通 常，这些可商购得自乳酸细菌生产商，但是也可直接分离自粪便，经鉴定、定性并产 生。根据优选实施方案，本发明的组合物含有至少一种选自下组的短双歧杆菌：短双 歧杆菌 Bb_03 (Rhodia)，短双歧杆菌 M-16V (Morinaga)，短双歧杆菌 R0070 (Institute Rosell, Lallemand), DSM 20091，或LMG 11613。最优选，所述短双歧杆菌是短双歧杆菌 M-16V(Morinaga)。
[0028] 本发明的组合物优选含IO2-IO13集落形成单位（cfu)的短双歧杆菌/本发明组合 物的每克干重，优选IO 4-IO12,更优选IO5-IOici,最优选IO 5-IxlO9Cfu短双歧杆菌/本发明 组合物的每克干重。
[0029] 最优选，本发明的组合物含有IO4-IO12,更优选IO 5-IO11,最优选107-5X101(I集落 形成单位（cfu)短双歧杆菌/每g糖A和B总量。
[0030] 根据本发明短双歧杆菌的剂量优选以日剂量IO2-IO13给药，更优选以IO 5-IO11,最 优选以108_5x101ci集落形成单位（cfu)给药。
[0031] 不可消化的糖
[0032] 本发明提供一种组合物，其包含不可消化的糖A和不可消化的糖B，在本文中分别 称为糖A和糖B。糖A和糖B是不同的糖并具有不同的糖苷键和/或聚合度和/或单糖组 成。
[0033] 除了单糖半乳糖，果糖和葡萄糖，糖A和B可含有其他单糖单元诸如阿拉伯糖，木 糖和甘露糖，总量可达40%。但是优选，糖A和/或B的至少75%，更优选至少90%，或 甚至至少98mol %的单糖单元总量是选自半乳糖，果糖或葡萄糖的单糖。优选α -连接的葡 萄糖的相对量低于30%，具体低于15%。
[0034] 本发明术语糖优选指不可消化的糖的混合物。本发明术语糖B优选指不可消 化的糖的混合物。这是常识，因为利用具有例如一种链长度的糖非常昂贵。优选且常 见地，所述混合物仅仅在主要单糖的数量上不同。当糖A和/或B是糖混合物，每种 参数的平均值用于定义本发明。例如，如果糖A是各种糖的混合物，其中包含25wt. % Glu-Gal-Gal-Gal, 25wt. % Glu-Gal-Gal 和 50wt. % Gal-Gal,平均单糖组合物是 85. 4% Gal和14. 6% Glu。平均聚合度（DP)是2. 75。
[0035] 术语不可消化的糖指胃肠道中保持未消化并且不被吸收到达大肠的糖，即没有在 人优选人婴儿的上消化道中消化的糖，例如没有被存在人肠道中的酸或酶消化。注意到可 消化的糖不是糖A和B的一部分。因此，例如葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖和麦芽糊精 被认为是可消化的。
[0036] 优选糖 A 和 B 是水溶性的。根据 L. Prosky et al, J. Assoc. Anal. Chem 71:1017-1023, 1988所述的方法，水溶性糖至少50%是水溶性的。
[0037] 优选实施方案中至少80wt. %的不可消化的糖A和B是可发酵的。术语"可 发酵的"在本文指由胃肠道下半部分（例如结肠）中的微生物分解成小分子的能力， 具体是短链脂肪酸和乳酸盐。不可消化的糖A和B的可发酵性优选通过Am. J. Clin. Nutr. 53,1418-1424(1991)所述的方法确定。更优选的实施方案中，至少80wt. %的不可 消化的糖A和B是益生素。"益生素（prebiotic)"定义为不可消化的食物成分，其选择性 刺激一或多种细菌种类在结肠中的生长和/或活性，并由此有利地影响宿主（Gibson and Roberfroid, J. Nutr. 125:1401-1412(1995))〇
[0038] 单糖纟目合物
[0039] 糖A和B的全部单糖单元的至少60mol %，优选至少75mol %，更优选至少 90mol%，最优选至少98mol%是选自半乳糖（gal),果糖（fru)或葡萄糖（glu)的单糖。 根据本发明的优选实施方案，糖A中至少一种选自葡萄糖，果糖或半乳糖的单糖的百分比 比糖B中的相同单糖的百分比高至少40mol%，优选至少50mol%，更优选至少75mol%， 更优选至少90mol %。单糖的多样性增加刺激更广泛的有益肠细菌的群体。
[0040] 优选糖A和B的至少50wt. %，优选至少75wt. %的累积重量是DP2-8的不可消 化的糖。通过利用高小糖重量百分比的混合物，对乳酸细菌和双歧杆菌的可发酵性以及生 长的刺激效应将增加。
[0041] 糖中单糖的百分比可通过用糖中的各个单糖单元（例如葡萄糖）的量除以糖中的 单糖单元总量再乘以100来简单计算。当糖是糖混合物的情况，每种单独的糖在糖混合物 中的贡献必须被考虑在内。糖混合物的百分比可通过将所述混合物完全水解并测定每种单 糖的摩尔百分比来简单地测定。
[0042] 优选糖A含有至少40m〇l%半乳糖，更优选至少67m〇l%半乳糖，更优选至少 75mol%半乳糖。优选糖B含有至少30mol%果糖，更优选至少67mol%果糖，更优选至少 75wt. % 果糖。
[0043] 例如，在糖A是glu-(gal)n = 2_7混合物且平均单糖组成为20mol %葡萄糖和 80mol%半乳糖、并且糖B是glu-(fru)n = 2_7和（fru)n2_7混合物且平均单糖组成为10mol% 葡萄糖和90Π 1Ο11%果糖的情况下，区别是a)葡萄糖为lOmol% ;b)果糖为90Π 1Ο11% ;c)半 乳糖为SOmol %。在该实例中半乳糖满足了这样的标准，即糖A中至少一种选自葡萄糖，果 糖或半乳糖的单糖的百分比比糖B中相同单糖的百分比高至少40mol%。
[0044] 聚合度
[0045] 糖A和B的聚合度（DP)为2-200。优选糖A和B的累积重量的至少80wt. %，更优 选至少95wt. %，最优选至少98wt. %的聚合度（DP)低于100,更优选低于60,最优选低于 40。较低的DP优选降低粘度并增加不可消化的糖的可发酵性。优选糖A的至少50wt. %， 优选至少75wt. %是DP 2-8的不可消化的糖。通过利用高小糖重量百分比的混合物，对乳 酸细菌和双歧杆菌的可发酵性以及对其生长的刺激效应将得以增加。
[0046] 根据本发明的优选实施方案，糖A的DP比糖B的聚合度低至少5个，优选至少10 个，更优选至少15个单糖单元。使糖具有增加的聚合度降低渗透负荷，其对于婴儿营养有 利并且提供对结肠最远端部分的肠道菌群的益生素刺激。
[0047] 最优选，糖A的DP为2-15,更优选2-8。优选糖B的DP为8-100。DP不同的糖 A和B具有相同或者稍微不同的单糖组成。如果糖A和B的DP不同而单糖组成相似，则糖 A和糖B的平均DP的差异优选至少5,更优选至少10,更优选至少15。优选，糖A和B具 有不同的单糖组成（见上文）以及不同的DP。
[0048] 例如，如果糖A是平均DP4. 5单糖单位的glu_frum = 2_7和frum = 2_6的混合物，并 且糖B是平均DP为25个单糖单元的glu-frun= 12_1QQ，则平均DP差异为（25-4. 5 = ) 20. 5。
[0049] 糖苷键
[0050] 本发明优选实施方案中，糖A的至少一个糖苷键基于糖A的总糖苷键的百分比比 糖B中的相同的糖苷键的百分比高至少40%，优选至少50%，更优选至少75 %。术语"糖 苷键"在本发明指两个环状单糖的环通过消去水形成的C-O-C连接。糖苷键的密度增加刺 激更广范围的有益细菌。
[0051] 糖苷键的区别在于它们共价结合于单糖单元中不同编号的位置的碳原 子，和/或它们形成α或β键。不可消化的糖中存在的不同糖苷键的实例是 β (1，3)，α (1，4)，β (2, 1)，α (1，2)，和 β (1，4)键。
[0052] 优选糖A中的糖苷键包含至少40 %，更优选至少75 %的β (1，4)和/或β (1，6) 糖苷键。糖B中的糖苷键优选包含至少40%，更优选至少75%的β (2, 1)糖苷键。
[0053] 鉬合
[0054] 具体优选的实施方案中，本发明的糖A和B在选自糖苷键、聚合度或单糖组成中 的至少两个方面不同。优选，本发明的糖A和B的聚合度不同并且在选自糖苷键或单糖组 成的至少一个方面不同。更优选，本发明的糖A和B的聚合度和单糖组成不同。最优选所 有三个方面均不同。给药不同大小，不同"级别"，和/或"结构"的糖的混合物协同性刺激 肠道菌群。其有利地影响健康。
[0055] 糖A和B的浓度
[0056] 本发明的组合物优选包含至少5mg糖A每100ml,优选至少50mg糖A每100ml, 更优选至少0. Ig糖A每100ml,最优选至少0.5g糖A每100ml。优选本发明的组合物包含 不超过IOg糖A每100ml,优选不超过2. Og每100ml。本发明的组合物优选包含至少5mg 糖B每100ml,优选至少IOmg糖B每100ml,更优选至少25mg糖B每100ml,最优选至少 50mg糖B每100ml。优选本发明的组合物包含不超过IOg糖B每100ml，优选不超过Ig每 IOOmlo
[0057] 糖A和B的重量比优选0.01-100,更优选0.5-100,更优选4-100,最优选24-99。 高重量比在糖A具有低DP且糖B具有相对高DP的情况中尤其有利。其保证可渗透性和可 发酵性之间的最佳平衡。
[0058] 基于本发明组合物中不可消化的糖的总重量，糖A和糖B优选包含5-lOOwt. %，更 优选50-lOOwt. %不可消化的糖。
[0059] 本发明的不可消化的糖A和B优选以日剂量0. l_30g (糖A重量+糖B重量），更 优选0. 5-15g,更优选3-10g给药。
[0060] 优诜的糖
[0061] 不可消化的糖A优选选自β -半乳寡糖，α -半乳寡糖或（阿拉伯（arabino)-) 半乳聚糖。根据更加优选的实施方案，糖A是β-半乳寡糖，更优选反式半乳寡糖（TOS)。 优选糖A包含β-半乳寡糖，其具有β (1，4)和/或β (1，6)糖苷键以及末端葡萄糖。TOS 例如可以商品名 ViGOS (Borculo Domo Ingredients, Zwolle, Netherlands)购得。
[0062] 不可消化的糖B优选选自果聚糖或果糖寡糖。术语果聚糖 (frctopolysaccharide)，多聚果糖（polyfructose)，多聚果聚糖（polyfructan)和聚果 糖（fructan)在本文可互换使用，并且指包含β-连接的果糖单元的多糖，其优选通过 β (2, 1)和/或β (2, 6)糖苷键连接。最优选，果聚糖含有末端β (2, 1)糖苷键连接的葡 萄糖。最优选，果聚糖含有至少7β-连接的果糖单元。另一优选实施方案中，胰岛素用作 糖Β。胰岛素是这种类型的果聚糖，其中至少75%的糖苷键是β (2, 1)键。通常，胰岛素 的平均链长度为8-60个单糖单元。适宜用于组合物的果聚糖可以商品名例如Raftiline?: HP(Orafti)购得。
[0063] 另一优选实施方案中，糖B果聚寡糖（fructooligosaccharide)。果聚寡糖 是包含β连接的果糖单元的糖，其优选通过β (2, 1)和/或β (2, 6)糖苷键连接。果 聚寡糖优选含有在还原末端由β (2, 1)糖苷键连接的葡萄糖。最优选，所述果聚寡糖 含有2-6个连接的果糖单兀。果聚募糖的适且来源是(Orafti),或 Actilight(Beghin-Meiji) 〇
[0064] 副干酪乳杆菌
[0065] 优选实施方案中，本发明的组合物包含副干酪乳杆菌。发现该细菌以有限的量存 在非母乳喂养的婴儿中。因此，给药包含不可消化的糖A，不可消化的糖B，短双歧杆菌， 和副干酪乳杆菌的组合物使得双歧杆菌在种的水平的正常化成为可能，也使得乳杆菌群体 正常化到等同于母乳喂养婴儿的胃肠道中的水平成为可能。这是重要的，因为不同乳杆菌 种类对宿主的影响不同。例如，保加利亚乳杆菌（Ldelbrueckii)形成D-乳酸盐，其导致 不成熟婴儿中的酸中毒，而副干酪乳杆菌形成L-乳酸盐。
[0066] 优选本发明的乳杆菌菌株的16S rRNA序列与副干酪乳杆菌的典型菌株 ATCC25032 (Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44:846-849)相比具有 至少95,更优选至少97%的序列相同性。本发明所用的乳杆菌优选与副干酪乳杆菌探针杂 交，并且利用本文进一步描述的5'核酸酶测定法时产生信号。
[0067] 优选的副干酪乳杆菌菌株是分离自健康母乳喂养的婴儿的粪便的那些。数种副 干酪乳杆菌菌株可购自乳酸细菌生产商，但是它们也可直接从粪便分离，鉴定，定性并制 备。根据优选的实施方案，本发明的组合物至少含有选自副干酪乳杆菌F19 (Aria，Sweden)， 副干酿乳杆菌 LAFTI L26(DSM Food Specialties, the Netherlands)和副干酿乳杆菌 CRL431 (Chr. Hansen, Denmark), LMG12165 和 LMGl 1407 组成的组的副干酪乳杆菌。
[0068] 本发明的组合物优选含有IO2-IO13集落形成单位（Cfu)的副干酪乳杆菌/本发明 组合物的每克干重，优选IO 4-IO12,更优选IO5-IOici,最优选Io 5-IxlO9Cfu副干酪乳杆菌/ 每克干重组合物。
[0069] 最优选，本发明的组合物含有1〇4-1〇12,更优选IO 5-IO11,最优选107-5X101(I集落 形成单位（Cfu)的副干酪乳杆菌/每g糖A和B总重。
[0070] 本发明的副干酪乳杆菌优选以日剂量1〇2-1〇13,更优选IO 5-IO11,最优选 108-5x101ci集落形成单位（cfu)给药。
[0071] 益牛.组合物（Combiotics)
[0072] 另一方面，本发明提供这样的组合物，其包含5_16en. %的蛋白质，30_60en. %的 脂肪，25-75en. %的碳水化合物，并包含短双歧杆菌和副干酪乳杆菌。给药这些细菌的组合 据信刺激婴儿的胃肠道健康。本发明中描述关于包含糖A和B以及双歧杆菌的组合物的优 选组合物特征、细菌种类和医学指征等同地应用于含有短双歧杆菌和副干酪乳杆菌的组合 物。本发明中所述的糖A和/或糖B可优选地与短双歧杆菌和副干酪乳杆菌组合。如果副 干酪乳杆菌存在于本发明的组合物中，单一类型的不可消化的糖足以获得所需的效果。另 一方面，如果副干酪乳杆菌不存在，本发明具体涉及包含重量比为95 :5-99 :1的糖A和糖B 的组合物。
[0073] 除了短双歧杆菌和/或副干酪乳杆菌，其它微生物也可存在，但是没有获得实质 性的进一步改善。所述其他微生物可包括其他双歧杆菌或其他乳杆菌或其他乳酸细菌。优 选的双歧杆菌是长双歧杆菌和/或婴儿双歧杆菌。优选的乳杆菌是干酪乳杆菌（Lcasei) 和/或嗜酸性乳杆菌（L. acidophilus)。
[0074] 常量营养素
[0075] 本发明的组合物优选含有脂肪、碳水化合物和蛋白质。
[0076] 优选本发明的组合物含有可消化的碳水化合物，其选自以下物质组成的组：麦芽 糊精，淀粉，乳糖，麦芽糖，葡萄糖，果糖，和蔗糖。优选本发明的组合物含有乳糖。优 选至少35wt. %，更优选至少50wt. %，最优选至少75wt. %的可消化性碳水化合物是乳 糖。在液体形式中时，本发明的组合物优选包含6-19g可消化的碳水化合物每100ml，更优 选 6_10g 每 100ml。
[0077] 优选10% -80%的总能量含量本发明的组合物通过可消化的碳水化合物提供。最 优选，本发明的组合物含有25-75en. %碳水化合物。En. %是能量百分比的缩写，代表每种 组成成分对制备物的总热量值的贡献的相对量。热量值由可消化的碳水化合物、蛋白质和 脂肪提供。
[0078] 常见的用于液体来源的组分包括动物油，植物油和微生物发酵油。脂肪是重要 的能量来源并且对于婴儿的正常发育来讲非常重要。本发明优选含有亚麻酸（LA ;〇mega6 脂肪酸）和α -亚麻酸（ALA ;〇mega3脂肪酸）。所述组合物优选包含0. 3-1. 5g LA每 100ml，0.05-5g ALA每100ml。LA/ALA重量比优选5-15。优选本发明的组合物包含长链多 不饱和脂肪酸（LC PUFA)，更优选二十碳五烯酸（EPA)和/或二十二碳六烯酸（DHA)。优 选实施方案中，所述组合物包含花生四烯酸（ARA)。优选所述组合物包含l_25mg，更优选 4-15mg DHA 每 100ml。优选所述组合物包含 2-50mg,更优选 6-30mg ARA 每 100ml。LC-PUFA 的存在有利地影响乳杆菌和/或双歧杆菌尤其是副干酪乳杆菌的建群。本发明的组合物优 选包含30-60en. %脂肪，更优选39-50en. %脂肪。所述组合物优选包含2. 1-6. 5g脂肪每 IOOml。
[0079] 优选本发明的组合物包含5_16en. %，更优选8_12en. %的蛋白质。优选本发明 的组合物包含选自下组的蛋白质：酪蛋白，乳清蛋白，脱脂奶，大豆蛋白，豌豆蛋白质（pea protein),胶原蛋白，大米蛋白质（rice protein)和/或玉米蛋白质（corn protein)。优 选至少25wt. %，更优选至少50wt. %，最优选至少90wt. %本发明的组合物的总蛋白通过 水解的蛋白质和/或游离氨基酸来提供。蛋白水解物和/或有利氨基酸的利用降低过敏症 的风险，具体是牛奶过敏症的风险。如果组合物是液体形式，优选其包含1.0-6. 0g，更优选 L 0-2. 5g 蛋白质每 100ml。
[0080] 本发明的组合物优选是液体。大便无规律（例如大便干硬，大便量不足，腹 泻）是许多婴儿和接受液体食物的患者的主要问题。因此，本发明的组合物优选渗量 (osmolality)为50-500m0sm/kg,更优选100-400m0sm/kg。具有所述的渗量的本发明的组 合物特别适合用于治疗和/或预防腹泻。
[0081] 同样重要的是本发明的组合物不具有过高的热密度，但是仍提供足够的热量来喂 养受试者。因此，优选液体食物的热密度为10-250kcal每100ml，更优选50-90kcal/ml， 最优选60-71kcal每100ml。最佳热密度也对腹泻的出现减少有贡献。
[0082] 本发明的组合物优选包含矿物质，微量元素和维生素，胆碱，牛磺酸，肉碱，肌 醇和/或其混合物。优选本发明的组合物含有牛磺酸，其减少哮喘症状（Adv.Exp.Med. Biol. 2003526:403-10)。牛磺酸与本发明组合物中的组分协同作用。优选本发明的组合物 包含核苷酸。最优选，所述组合物包含胞嘧啶5'-单磷酸盐，尿嘧啶5'-单磷酸盐，腺嘌 呤5' -单磷酸盐，鸟嘌呤5' -单磷酸盐，以及肌苷5' -单磷酸盐。优选所述组合物包含 0. 75-10,更优选I. 5-5mg核苷酸每100ml。核苷酸的存在有利地支持了双歧杆菌和乳杆菌， 具体是短双歧杆菌和/或副干酪乳杆菌的存活和生长。优选本发明的组合物含有有机酸， 香料和/或着色剂。
[0083] 应甩
[0084] 已经发现本发明的组合物具体可用作婴儿营养物。所述组合物尤其适合根据母 乳喂养的婴儿中的种类分布正常化在非或部分母乳喂养的婴儿的胃肠道中的双歧杆菌和/ 或乳杆菌群体，尤其是在早产儿、足月儿以及处于固体食物过渡期的婴儿中的那些。因此， 本发明提供向人婴儿提供营养元素的方法，所述方法包括向婴儿提供本发明的组合物。优 选，所述婴儿的年龄为0-36个月，更优选0-18个月，最优选0-12个月。
[0085] 胃肠菌群对对于疾病诸如胃肠疾病、免疫疾病和/或内分泌疾病等具有重要影 响。因此，另一方面，所述组合物可有利地用于制备用于预防和/或治疗胃肠疾病、免疫疾 病和/或内分泌疾病的药物。尤其是过敏症（allergy)，过敏性鼻炎（allergic rhinitis)， 食物超敏反应（food hypersensitivity)，异位性皮炎（atopic dermatitis)，湿疫 (eczema)，哮喘（asthma)，腹泻（diarrhoea)，肠道炎症（intestinal inflammation)，感染 (infection),便秘（constipation),肠痉挛（intestinal cramp),绞痛（colic),幼儿肥胖 症（childhood obesity),和/或糖尿病（diabetes)可适宜地利用本发明的组合物治疗。 优选实施方案中，本发明提供用于治疗和/或与预防过敏症和/或感染的方法。本发明的 组合物可有利地用于制备用于预防和/或治疗婴儿中的胃肠疾病、免疫疾病和/或内分泌 疾病的药物。这些疾病的发病率降低是由于优化的菌群，具体是优化的双歧杆菌群体和/ 或优化的乳杆菌群体。本发明具体提供利用本发明的组合物制备用于预防和/或治疗牛奶 过敏症和/或感染的药物。 实施例
[0086] 实施例1:临床研究
[0087] 该研究中，检测含有反式半乳寡糖和聚果糖的婴儿营养素对肠道双歧杆菌和乳杆 菌的影响。如W02005/039319所述进行所述研究并分析粪便样品。
[0088] 婴儿被随机分入两个治疗组之一：一组（SF-组）接受标准婴儿配方奶 I (Aptamil IMilupa); -组（GFSF-组）接受补充有0· 72g/100ml反式半乳-寡糖 (GOS，Vivinal?(Borculo Domo Ingredients, Netherlands)和 0.08g/100ml 聚果糖 (inulin, Raftilin HP, Orafti, Belgium)的标准配方奶。母乳喂养婴儿组包含在参照组 (HMF组）中。
[0089] 粪便样品中的不同双歧杆菌和乳杆菌的相对量通过双链体5'核酸酶测定法来测 定。如W02005/039319针对属于双栖杆菌的菌种设计并验证探针和引物，并针对乳杆菌设 计并验证探针和引物。乳杆菌的探针和引物显示于表1。F是前向引物，R是反向引物，P是 探针。表2显示用于对乳杆菌进行的双链体5'核酸酶测定法中的最终的最佳引物和探针浓 度。双歧杆菌的总量也借助于FISH如前所述测定（1^叩611(1;[」1^6七31.19954。。1』11￥；[1'011· Microbiol. 61:3069-75.)测定。
[0090] 蓋11用于5'核酸酶测定法中的设计的引物和探针
[0091]

【权利要求】
1. 组合物，粘度为l-60mPa. S，热密度为10-250kcal每100ml，其包含短双歧杆菌，不 可消化的糖A和不可消化的糖B，其中： a. 不可消化的糖A聚合度为2-200,并且糖A的总单糖单元的至少60mol %是选自半乳 糖，果糖或葡萄糖的单糖；且 b. 不可消化的糖B的聚合度为2-200,并且糖B的总单糖单元的至少60mol %是选自半 乳糖，果糖或葡萄糖的单糖；且 其中 i) 糖A中至少一种选自葡萄糖，果糖或半乳糖的单糖的百分比比糖B中相同单糖的百 分比高至少40Π 1Ο11% ;和/或 ii) 糖A中至少一个糖苷键基于糖A中总糖苷键的百分比比糖B中相同糖苷键的百分 比高至少40% ;和/或 iii) 糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5个单糖单元。
2. 权利要求1的组合物，其粘度为l_6mPa. s。
3. 权利要求1或2的组合物，其中糖A和糖B的重量比是24-99。
4. 权利要求1或2的组合物，其中 i) 糖A中至少一种选自葡萄糖，果糖或半乳糖的单糖的百分比比糖B中相同单糖的百 分比高至少40Π 1Ο11% ;和 ii) 糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5个单糖单元。
5. 权利要求1或2的组合物，还包括副干酪乳杆菌。
6. 权利要求1或2的组合物，其中基于组分A中存在的糖链的单糖单元的总量，糖A的 糖链包含至少67mol%半乳糖单元。
7. 权利要求1或2的组合物，其中基于糖B中存在的单糖单元的总量，糖B的糖链包含 至少67Π 1011%果糖单元。
8. 权利要求1或2的组合物，其中每g组合物干重包含102-1013集落形成单位的短双 歧杆菌。
9. 权利要求1或2的组合物，包含5-16en. %蛋白质，30-60en. %脂肪，和25-75en. % 碳水化合物。
10. 权利要求1或2的组合物，包含至少5mg糖A每100ml和/或至少5mg糖B每100ml。
11. 权利要求1或2的组合物，包含至少0. 75mg核苷酸每100ml。
12. 包含5-16en. %蛋白质、30-60en. %脂肪以及25-75en. %碳水化合物的组合物，其 中包含短双歧杆菌和副干酪乳杆菌。
13. 前述任意权利要求的组合物制备用于为婴儿提供营养的方法中的营养组合物的用 途，所述方法包括将所述营养组合物给药婴儿。
14. 权利要求1-12之一的组合物在制备组合物中的用途，所述组合物用于将在用非母 乳或部分母乳喂养的婴儿的胃肠道中的双歧杆菌和/或乳杆菌种类群体正常化到母乳喂 养的婴儿中的双歧杆菌和/或乳杆菌种类群体。
15. 权利要求1-12之一的组合物在制备用于预防和/或治疗胃肠疾病、免疫疾病和/ 或内分泌疾病的组合物中的用途。
16. 权利要求15的用途，其中所述疾病选自以下疾病组成的组：过敏症，感染，过敏性 鼻炎，食物超敏反应，异位性皮炎，湿疹，哮喘，腹泻，病毒性腹泻，肠道炎症，便秘，肠痉挛， 绞痛，幼儿肥胖症和糖尿病。
17.权利要求1-12之一的组合物在制备用于预防和/或治疗过敏，异位性皮炎，湿疹和 /或感染的组合物中的用途。
【文档编号】A61P37/08GK104223094SQ201410366993
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2006年2月28日 优先权日:2005年2月28日
【发明者】G·斯皮尔曼斯, J·克诺尔, M·哈尔曼, J·加尔森, A·J·M·弗里塞玛, M·S·阿勒斯 申请人:纽崔西亚公司