一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明属于药物制剂【技术领域】，具体来说，涉及到一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物及其应用。本发明所述的组合物是主要利用水蒸气蒸馏法、特定型号的阳离子交换树脂和大孔吸附树脂联用的方法，依次提取分离枳实中挥发油、总黄酮和总生物碱，然后将三者按质量比1:(10-20):(5-15)进行配伍得到。与现有技术相比，本发明所述的含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物通过将挥发油、总黄酮和总生物碱进行合理配伍，使其在制备治疗消化不良尤其是功能性消化不良药物方面得到较好的应用。
【专利说明】一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物制剂【技术领域】，具体来说，涉及到一种含枳实挥发油、总黄酮和总 生物碱的组合物及其应用。
【背景技术】
[0002] 根据国内外的统计，普通人群消化不良的患病率为7%?41%，可见消化不良非 常常见。在美国消化不良的年发生率为9%，欧洲消化不良的年发生率为1%。消化不良可 以分为两类：器质性消化不良和功能性消化不良。功能性消化不良是指患者有吞咽困难、反 食、呕吐、腹胀、便秘或腹泻等非特异症状，通过内镜、影像、生化等检查没有发现有器质性 疾病的证据，但是如果进行进一步的检查可能发现患者有动力、感觉或分泌的异常。在消化 不良患者中，约有30%为功能性消化不良，其有可能进一步发展成器质性消化不良。
[0003] 枳实始载于《神农本草经》，为芸香科植物酸橙及其栽培变种或甜橙的干燥幼果。 味苦，性寒，入脾、胃经。功能：破气、散痞、泻痰、消积。主用于积滞内停、痞满胀痛、泻痢后 重、大便不通、痰滞气阻胸痹、结胸、胃下垂、脱肛、子宫脱垂。研究发现，枳实、枳壳的水煎 齐U、酊剂及流浸膏对小鼠、家兔的离体肠管及家兔的在体肠管均有抑制作用。水煎液使胃、 肠瘘狗的胃肠收缩节律有力，呈兴奋作用，但抑制狗在体胃肠运动。枳实提取物对乙酰胆碱 和组胺所致肠管收缩有明显的拮抗作用。
[0004] 实验表明，不同提取方法对枳实成分的影响较大，从而导致该提取物的药理作用 有很大变化。中国专利（CN201110400856.4)就提供了以枳实或枳实提取物为基础的药物 组合物，其通过改善肠敏感性，降低结肠频率、峰电位、峰峰值及峰面积，从而在对肠易激综 合征的治疗过程中发挥显著疗效，能够抑制肠易激综合征所致的腹痛，改善结肠功能紊乱 的现象。但是，该发明所述枳实药物组合物相对来说，针对性太强，仅用于结肠功能紊乱，没 有充分发挥枳实"消食强胃"的功效。
【发明内容】
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供了一种配伍合理的含枳实挥发油、总黄酮和总 生物碱的组合物及其应用。
[0006] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)枳实饮片加5-12倍量水，浸泡l_4h，水蒸汽蒸馏法提取2_12h得枳实挥 发油；2)在提取挥发油后，药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍量的55-95%乙醇回流 提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取 物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-0. 8g/ml，通过阳离子交换树脂，吸附 流速l-3BV/h，树脂柱径高比为1:5-8,以生药量计，上样量为0. 8-1.6g/ml，先用30-80% 乙醇洗脱2-4BV，洗脱流速为l-4BV/h，洗脱液待用；然后用0. 8-2mol/L的30-80 %乙醇氨 水洗脱3-5BV，洗脱流速为2-4BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述 乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，以生药量计，使上样液浓度为 0. 4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为1:5-8,以生药量计， 上样量为0.3-0.6 §/1111，先用5-20%乙醇洗脱2-38￥进行除杂，除杂流速为1-38￥/11，然后 用50-90 %乙醇洗脱3-4BV，洗脱流速为0. 8-2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提 取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量比1: (10-20) : (5-15)进行配伍。
[0007] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取枳实饮片2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸汽蒸馏法提取7h，得枳实挥 发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇回流提取3次，每 次1. 〇h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以 生药量计使上样液浓度为〇. 6g/ml，通过1. 8LUBK530阳离子交换树脂，吸附流速2BV/h， 树脂柱径高比为1:6,以生药量计上样量为1. 2g/ml，先用50%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为 3BV/h，50 %乙醇洗脱液待用，然后用1. 4mol/L50 %乙醇氨水洗脱4BV，洗脱流速为3BV/h， 1. 4mol/L50 %乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述50 %乙醇洗脱 液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 7g/ml，通过SP-825大孔吸 附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:6,以生药量计上样量为0. 4g/ml，先用10%乙 醇洗脱2BV进行除杂，除杂流速为2BV/h，然后用70%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为1. 4BV/h， 70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量 比1:15:10进行配伍。
[0008] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述步骤1)中的 阳离子交换树脂为UBK530、WK40、SK1B、WK10、731型中的一种；所述步骤2)中的大孔吸附 树脂为 SP825、HP20、HPD100A、D-101、D-101L 型中的一种。
[0009] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物的应用，所述组合 物用于治疗消化不良药物的制备。
[0010] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物的应用，所述组合 物用于治疗功能性消化不良药物的制备。
[0011] 本发明中，树脂柱内装载树脂的体积称为床容积（bedvolume)，简写为BV。 D-101L型大孔吸附树脂为自制的改性后的D-101型大孔吸附树脂，其具体制备方法为：将 100gD-101型大孔吸附树脂在500ml二氯甲烷中浸泡24h，使树脂完全溶胀，过滤除去孔中 多余杂质；依次将25ml氯甲醚、2. 2g干燥的ZnCl2加入到盛有300mlCCl4和树脂的三口烧 瓶中，恒温水浴38°C下搅拌反应20h。所得树脂干燥后，于4倍量的乙腈中浸泡24h，加入 300ml的1，3-二甲基咪唑四氟硼酸，在恒温水浴801：和队保护下反应28h，之后用乙酸乙 酯、甲醇、蒸馏水、丙酮依次清洗产物，得到D-101L型大孔吸附树脂。
[0012] 与现有技术相比，本发明所述的含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物通过 将挥发油、总黄酮和总生物碱进行合理配伍，使其在制备治疗消化不良尤其是功能性消化 不良药物方面得到较好的应用。
【具体实施方式】
[0013] 下面结合具体的实施例对本发明所述的含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合 物及其应用做进一步说明，但是本发明的保护范围并不限于此。
[0014] 实施例1
[0015] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取枳实饮片2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸汽蒸馏法提取7h，得枳实挥 发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇回流提取3次，每 次1. 〇h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以 生药量计使上样液浓度为〇. 6g/ml，通过1. 8LUBK530阳离子交换树脂，吸附流速2BV/h，树 脂柱径高比为1:6,以生药量计，上样量为1. 2g/ml，先用50 %乙醇洗脱3BV，洗脱流速为 38乂/11，50%乙醇洗脱液待用；然后用1.4111〇1/150%乙醇氨水洗脱48￥，洗脱流速为38￥/11， 1. 4mol/L50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述50%乙醇洗脱 液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 7g/ml，通过SP-825大孔吸 附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:6,以生药量计，上样量为0. 4g/ml，先用10% 乙醇洗脱2BV进行除杂，除杂流速为2BV/h，然后用70 %乙醇洗脱3BV，洗脱流速为1. 4BV/ h，70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质 量比1:10:5进行配伍。
[0016] 实施例2
[0017] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取枳实饮片2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸汽蒸馏法提取7h，得枳实挥 发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇回流提取3次，每 次1. 〇h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以 生药量计使上样液浓度为〇. 6g/ml，通过1. 8LUBK530阳离子交换树脂，吸附流速2BV/h，树 脂柱径高比为1:6,以生药量计，上样量为1.2g/ml，先用50%乙醇洗脱3BV，洗脱流速为 38乂/11，50%乙醇洗脱液待用 ；然后用1.4111〇1/150%乙醇氨水洗脱48￥，洗脱流速为38￥/11， 1. 4mol/L50 %乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述50 %乙醇洗脱 液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 7g/ml，通过D101L大孔吸 附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:6,以生药量计，上样量为0. 4g/ml，先用10% 乙醇洗脱2BV进行除杂，除杂流速为2BV/h，然后用70 %乙醇洗脱3BV，洗脱流速为1. 4BV/ h，70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质 量比1:15:10进行配伍。
[0018]实施例3
[0019] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取酸橙枳实饮片2kg，加12倍量水，浸泡0h，水蒸汽蒸馏法提取4h，得枳 实挥发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入24L75%乙醇回流提取3次，每次1. 0h，滤 过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计， 使上样液浓度为〇. 6g/ml，通过731阳离子交换树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1: 6， 上样量以生药量计为1.2§/1111，先用50%乙醇洗脱38￥，洗脱流速为38￥/11，50%乙醇洗脱 液待用，然后用lmol/L50 %乙醇氨水洗脱4BV，洗脱流速为3BV/h，lmol/L50 %乙醇氨水洗 脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述50 %乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取 物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 8g/ml，通过D101大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树 脂柱径高比为1:6,以生药量计，上样量为0.4g/ml，先用水洗脱2BV进行除杂，除杂流速为 28乂/11，然后用70%乙醇洗脱38￥，洗脱流速为18￥/11，70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总 黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量比1:15:10进行配伍。
[0020] 实施例4
[0021] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取酸橙枳实饮片lkg，加5倍量水，水蒸汽蒸馏法提取2h，得枳实挥发油； 2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计6倍量55%乙醇回流提取2次，每次0. 5h， 滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解，以生药量计 使上样液浓度为〇. 4g/ml，通过UBK530阳离子交换树脂，吸附流速lBV/h，树脂柱径高比为 1:5,以生药量计，上样量为0. 8g/ml，先用30 %乙醇洗脱2BV，洗脱流速为lBV/h，30%乙醇 洗脱液待用，然后用〇? 8mol/L30 %乙醇氨水洗脱3BV，洗脱流速为2BV/h，0? 8mol/L30 %乙 醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述30%乙醇洗脱液，减压回收溶 齐IJ，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为〇. 4g/ml，通过SP-825大孔吸附树脂，吸附流 速lBV/h，树脂柱径高比为1:5,以生药量计，上样量为0. 3g/ml，先用水洗脱2BV除杂，除杂 流速为lBV/h，然后用50 %乙醇洗脱3BV，洗脱流速为0. 8BV/h，50 %乙醇洗脱液浓缩，干燥， 得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量比1:15:10进行配伍。
[0022] 实施例5
[0023] 本发明所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，所述组合物通过 如下步骤制得：1)取枳实饮片5kg，加5倍量水，浸泡4h，水蒸汽蒸馏法提取12h，得枳实挥 发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计12倍量95%乙醇回流提取3次， 每次1. 5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物，加水分散溶解， 以生药量计使上样液浓度为0. 8g/ml，通过WK40阳离子交换树脂，吸附流速lBV/h，树脂柱 径高比为1:8,以生药量计，上样量为1.6g/ml，先用80%乙醇洗脱4BV，洗脱流速为4BV/ h，80 %乙醇洗脱液待用；然后用2mol/L80 %乙醇氨水洗脱5BV，洗脱流速为4BV/h，2mol/ L80%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述80%乙醇洗脱液，减压 回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为1. 〇g/ml，通过HP20大孔吸附树脂，吸 附流速3BV/h，树脂柱径高比为1:8,以生药量计，上样量为0. 6g/ml，先用20%乙醇洗脱3BV 进行除杂，除杂流速为3BV/h，然后用90 %乙醇洗脱4BV，洗脱流速为2BV/h。90 %乙醇洗脱 液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量比1:20:15进 行配伍。
[0024] 现有技术
[0025] 挥发油组、总黄酮组和总生物碱组的原料皆取自实施例2。挥发油总黄酮组：将实 施例2中的挥发油、总黄酮按质量比1:15进行配伍即得。挥发油总生物碱组：将实施例2 中的挥发油、总生物碱按质量比1:10进行配伍即得。总黄酮总生物碱组：将实施例2中的 挥发油、总生物碱按质量比15:10进行配伍即得。
[0026] 药理实验
[0027] 为与现有技术进行比较，本发明分别对实施例1-5中的组合物的促消化作用进行 了考察，主要内容为：对阿托品致胃肠运动障碍小鼠小肠推进率、胃排空率的影响；对实验 性功能性消化不良大鼠胃排空率、小肠推进率、胃泌素（GAS)及胃动素（MTL)分泌的影响。
[0028] 1、对阿托品致胃肠运动障碍小鼠小肠推进率、胃排空率的影响：小鼠适应性喂养 1周，按照完全随机法将140只小鼠分为14组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照 组、发明组（实施例1组、实施例2组、实施例3组、实施例4组、实施例5组）和现有技术 组（挥发油组、总黄酮组、总生物碱组、挥发油总黄酮、挥发油总生物碱、总黄酮总生物碱）。 发明组与现有技术组灌服相应药物，药物浓度〇. 27g/ml，给药体积均为0. lmL/10g，正常对 照组和模型对照组灌服等体积蒸馏水，阳性对照组给予〇. 4mg/ml吗丁啉药液，4mg/Kg，每 日1次，连用3天。末次给药前小鼠禁食18h，可自由饮水。末次给药30min后，除了正常 对照组外，分别腹腔注射相当于〇. 6mg/Kg生药的硫酸阿托品药液及，正常对照组给予生理 盐水，30min后，每只小鼠灌胃0.04%酚红溶液（含10 %明胶）0.25ml，20min后处死动物， 同时取出胃及小肠，将小肠平铺于光滑玻璃板上，滴注NaOH溶液，以酚红在小肠中的移行 距离与小肠全长的百分比乘以100%作为小肠推进百分率。胃置于25ml0. 5mol/L的NaOH 溶液中，沿胃大弯剪开胃，充分洗出胃内容物，取5ml离心（3000rpml0分钟），吸上清液用 8453分光光度计于560nm波长比色，测其吸光度，进行胃排空率计算。结果见表1。
[0029] 表1对阿托品致胃肠运动障碍小鼠小肠推进率、胃排空率的影响（
[0030]
【权利要求】
1. 一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，其特征在于，所述组合物通过如 下步骤制得：1)枳实饮片加5-12倍量水，浸泡l-4h，水蒸汽蒸馏法提取2-12h得枳实挥 发油；2)在提取挥发油后，药液留用，药渣加入以生药量计6-12倍量的55-95%乙醇回流 提取2-3次，每次0. 5-1. 5h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取 物，加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为0. 4-0. 8g/ml，通过阳离子交换树脂，吸附 流速l-3BV/h，树脂柱径高比为1:5-8,以生药量计，上样量为0. 8-1.6g/ml，先用30-80% 乙醇洗脱2-48￥，洗脱流速为1-48￥/11，洗脱液待用；然后用0.8-2111 〇1/1的30-80%乙醇氨 水洗脱3-5BV，洗脱流速为2-4BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上述 乙醇溶液洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，以生药量计，使上样液浓度为 0. 4-1. Og/ml，通过大孔吸附树脂，吸附流速l-3BV/h，树脂柱径高比为1:5-8,以生药量计， 上样量为〇. 3-0. 6g/ml，先用5-20 %乙醇洗脱2-3BV进行除杂，除杂流速为l-3BV/h，然后 用50-90 %乙醇洗脱3-4BV，洗脱流速为0. 8-2BV/h，此洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提 取物；4)将挥发油、总黄酮和总生物碱按质量比1: (10-20) : (5-15)进行配伍。
2. 根据权利要求1所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，其特征在 于，所述组合物通过如下步骤制得：1)取枳实饮片2kg，加8倍量水，浸泡2h，水蒸汽蒸馏法 提取7h，得枳实挥发油；2)提取挥发油后药液留用，药渣加入以生药量计9倍量75%乙醇 回流提取3次，每次1. 0h，滤过，合并各提取液和提取挥发油后药液，减压浓缩，得提取物， 加水分散溶解，以生药量计使上样液浓度为〇. 6g/ml，通过1. 8LUBK530阳离子交换树脂， 吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:6,以生药量计上样量为1.2g/ml，先用50%乙醇洗脱 3BV，洗脱流速为3BV/h，50 %乙醇洗脱液待用，然后用1. 4mol/L50 %乙醇氨水洗脱4BV，洗 脱流速为3BV/h，1. 4m〇l/L50%乙醇氨水洗脱液浓缩，干燥，得枳实总生物碱提取物；3)上 述50%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，得提取物，加水分散溶解，使上样液浓度为0. 7g/ml，通 过SP-825大孔吸附树脂，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比为1:6,以生药量计上样量为0. 4g/ ml，先用10 %乙醇洗脱2BV进行除杂，除杂流速为2BV/h，然后用70 %乙醇洗脱3BV，洗脱流 速为1.4BV/h，70%乙醇洗脱液浓缩，干燥，得枳实总黄酮提取物；4)将挥发油、总黄酮和总 生物碱按质量比1:15:10进行配伍。
3. 根据权利要求1所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物，其特征在 于，所述步骤1)中的阳离子交换树脂为UBK530、WK40、SK1B、WK10、731型中的一种；所述步 骤2)中的大孔吸附树脂为SP825、HP20、HPD100A、D-101、D-101L型中的一种。
4. 根据权利要求1所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物的应用，其 特征在于，所述组合物用于治疗消化不良药物的制备。
5. 根据权利要求1所述的一种含枳实挥发油、总黄酮和总生物碱的组合物的应用，其 特征在于，所述组合物用于治疗功能性消化不良药物的制备。
【文档编号】A61K36/752GK104257819SQ201410474644
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月17日 优先权日:2014年9月17日
【发明者】刘振丽, 宋志前, 王淳, 赵红艳, 杜智勇, 刘志忠, 董运茁, 宁张弛 申请人:中国中医科学院中医基础理论研究所