对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备及应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备及应用，具体涉及茅苍术提取物的制备方法，还公开了上述提取物在对雷公藤内酯醇减毒方面的应用，属于中药学领域；本发明提供的茅苍术提取物的制备方法，较其它制备方法快速、高效；同时，本发明还进一步对茅苍术提取物的应用进行探索，使它更具社会实用价值；本实验采用临床上应用较多的雷公藤内酯醇（TP），对减轻其毒副作用进行探讨，最后发现茅苍术水提物对TP具有减毒作用，是一种能与TP联用的良好的水提物；本发明提供对雷公藤内酯醇具有减毒作用的茅苍术水提物的制备方法及其应用，将大大提高临床用药的安全性。
【专利说明】对雷公藤内醒醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备及应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种对雷公藤内醋醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备及应用，具体 涉及茅苍术提取物的制备方法，还公开了上述提取物在对雷公藤内醋醇减毒方面的应用， 属于中药学领域。
【背景技术】
[0002] 雷公藤内醋醇（triptolide，TP)，是从卫矛科雷公藤属雷公藤、昆明山海棠W及东 北雷公藤等植物中分离出的效价最高的二聰内醋类化合物，具有广泛的药理活性作用，女口 抗炎、抗癌、免疫抑制、抗生育、抗白血病等作用。然而，随着TP药理作用研究的深入，其巨 大的不良反应，限制了其在临床的使用。研究证明肝脏中CYP3A是导致TP轻化的主要P450 酶，并且阐明了肝脏CYP3A对TP的代谢和减毒有着重要作用，并且肝脏CYP3A的低活性水 平是导致体内不良反应产生的关键因素之一。在临床应用中，中药雷公藤往往是与中药配 伍或与西药联用W减少副作用和毒性，获得更好的药理作用。
[0003] 茅苍术为菊科多年生草本植物茅苍术7<3/7cea仍CC的根 茎，具有燥湿健脾，巧风散寒，明目等功效，目前药理研究表明茅苍术具有减轻炎症、抑制肿 瘤细胞、抗菌、抗溃瘍等活性。有研究表明采用RT-PCR法在mRNA水平上茅苍术提取物对 CYP3A具有诱导作用。
【发明内容】
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一种茅苍术提取物的制备方法及其在对雷公藤 内醋醇（TP)减毒方面的应用，使TP的药理作用能更好的发挥。
[0005] 为解决上述技术问题，本发明提供对雷公藤内醋醇有减毒作用的茅苍术提取物的 制备方法。
[0006] 本发明所述的对雷公藤内醋醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方法，按照下述 步骤进行： 称取一定量的茅苍术药材粉末，加入10倍体积蒸觸水，加热回流提取2 h，放冷，过滤， 滤渣再加10倍体积蒸觸水，回流提取2 h，过滤，合并滤液，于6(TC下减压浓缩至含生药量 Ig/mL的矛苍术提取物。
[0007] 制备的茅苍术提取物对雷公藤内醋醇的减毒作用的验证： (1)精密称取TP适量，充分溶解于吐温80,再W氯化轴注射液稀释至所需浓度，吐温80 在终溶液中比例不超过1% (V/V)，制得TP注射液。
[000引（2)将C57化/6小鼠随机分为四个实验组，每组10化分别设为正常对照组、TP单 独给药组、TP与茅苍术水提物低剂量联用组、高剂量联用组。对四组小鼠进行给药，一段时 间后，对小鼠进行血清生化指标、组织生化指标、肝脏指数的测定，病理切片的观察，W及耳 肿胀实验。
[0009] (3)检测结果表明TP与茅苍术水提物联用可W降低TP毒性，还可W起到药理协同 作用，抗炎效果更好。
[0010] 本发明的优点：本发明提供的茅苍术提取物的制备方法，简单、方便，较其它制备 方法快速、高效。同时，本发明还进一步对茅苍术提取物的应用进行探索，使它更具社会实 用价值。本实验采用临床上应用较多的雷公藤内醋醇（TP)，对减轻其毒副作用进行探讨，最 后发现茅苍术水提物对TP具有减毒作用，是一种能与TP联用的良好的水提物，亦具有良好 的抗炎作用。本发明提供对雷公藤内醋醇具有减毒作用的茅苍术水提物的制备方法及其应 用，将大大提高临床用药的安全性。
【专利附图】
【附图说明】
[0011] 图1为正常对照组、茅苍术水提物组、茅苍术挥发油组和苯己比妥组CYP3A蛋白水 平的影响。
【具体实施方式】
[0012] 本发明中，采用TP单用及与茅苍术提取物联用对小鼠亚慢性毒性，抗炎作用及各 个指标的影响，说明茅苍术水提物对TP产生减毒作用，提高其临床应用的安全性。
[0013] 通过W下实施例对本发明进一步说明。W下所列举的实施例不W任何方式构成限 制。
[0014] 实施例1: 本发明中茅苍术提取物对巧7BL/6小鼠肝脏CYP3A蛋白表达水平的影响 1)称取100 g茅苍术药材粉末，加入IOOOmL蒸觸水，加热回流提取2 h，放冷，过滤，滤 渣IOOg再加IOOOmL蒸觸水，回流提取2 h，过滤，合并滤液，于6(TC下减压浓缩至含生药量 Ig/mL的茅苍术水提物。
[0015] 2)取茅苍术粗粉100 g，过65目筛，精密称定，加水及玻璃珠数粒，振摇混合后，连 接挥发油测定器的刻度部分，置电热套中加热至沸，并保持微沸数小时，放置片刻，放出挥 发油，制得茅苍术挥发油。
[0016] 3)将巧7BL/6小鼠随机分为四个实验组，每组8只，分别设为正常对照组，茅苍术 挥发油组、水提物组、苯己比妥诱导组。给药时间为15 d，给药方式为每2化灌胃给药一次， 剂量依次为：正常对照组，按体重给予0. 9%氯化轴注射液；茅苍术挥发油组和水提物组按 2〇g/kg分别灌胃给药（20g/kg为生药量）；苯己比妥组，按80mg/kg，灌胃给药苯己比妥溶 液。末次给药后，禁食12 h，二氧化碳窒息法处死小鼠。取小鼠肝脏并用生理盐水清洗，剪 碎肝组织并称重，加入50mmol/L缓冲溶液，制成5%组织匀浆。匀浆液在9000g离也20min ; 上清液IOOOOOg超速离也60min，得到肝微粒体沉淀。W上操作均在低温（4°C)下进行。于 肝微粒体蛋白中加入250 mmol/L的藏糖溶液息浮进行匀浆，用BCA蛋白试剂盒测定其蛋白 浓度，胆藏于-8(TC冰箱中备用。最后采用Western Blot法检测茅苍术提取物对巧7BL/6 小鼠肝脏CYP3A蛋白表达水平的影响。（图1) 4)结果表明茅苍术水提物组能提高CYP3A蛋白表达水平。
[0017] 实施例2: 本发明中茅苍术水提物对雷公藤内醋醇减毒作用的研究 1)称取100 g茅苍术药材粉末，加入1000 mL蒸觸水，加热回流提取2 h，放冷，过滤， 滤渣IOOg再加IOOOmL蒸觸水，回流提取2 h，过滤，合并滤液，于6(TC下减压浓缩至含生药 量Ig/ml的茅苍术水提物。
[0018] 2)精密称取TP 5mg，充分溶解于吐温80 2ml，再加0.5ml DMSO充分溶解。取其 中0. 1 ml加至IOml生理盐水至所需浓度0. 02 mg/ml，吐温80在终溶液中比例不超过1% (V/V)，制得TP注射液。
[0019] 3)将巧7BL/6小鼠完全随机分为四个实验组，每组10只，第一组：生理盐水，正 常对照组；第二组；TP单独给药组（300g/kg)，第H组；TP与茅苍术水提物低剂量联用组 (300g/kg，lOg/kg)，第四组；TP与茅苍术水提物高剂量联用组300g/kg，20g/kg)。正常对 照组与TP单独给药组先给予生理盐水，对另两组小鼠灌胃给药茅苍术剂量为10g/kg，20g/ kg,给药时间为10 d。随后TP单独给药组、TP与茅苍术水提物低剂量联用组，TP与茅苍术 水提物高剂量联用组，每4她腹腔注射给药300 y g/kg TP -次，同时联用组每4她灌胃给 茅苍术水提物按上述剂量（lOg/kg，20g/kg均为生药量)，连续给药30d。最后对小鼠进行血 清生化指标、组织中生化指标、脏器指数进行测定。具体数据见表1、表2、表3。
[0020] 表1. TP单用与茅苍术水提物联用对巧7BL/6小鼠血清生化指标的影响（n=10， 巧S)
【权利要求】
1. 对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的应用，其特征在于，所述茅苍 术提取物与雷公藤内酯醇联用，对雷公藤内酯醇有减毒作用。
2. 对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的应用，其特征在于，所述茅苍 术提取物与雷公藤内酯醇联用，具有抗炎作用。
3. 对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的应用，其特征在于，所述茅苍 术提取物能提高小鼠肝脏CYP3A蛋白表达水平。
4. 对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方法，其特征在于，按照 下述步骤进行： 称取一定量的茅苍术药材粉末，加入蒸馏水，加热回流提取，放冷，过滤，滤渣再加蒸馏 水，回流提取，过滤，合并滤液，减压浓缩得到茅苍术水提物。
5. 根据权利要求2所述的对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方 法，其特征在于，第一次加入的蒸馏水与茅苍术药材粉末的比例为lg :10mL。
6. 根据权利要求2所述的对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方 法，其特征在于，第二次加入的蒸馏水与滤渣的比例为lg :10mL。
7. 根据权利要求2所述的对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方 法，其特征在于，两次回流提取时间均为2h。
8. 根据权利要求2所述的对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方 法，其特征在于，所述减压浓缩的温度为60°C条件下。
9. 根据权利要求2所述的对雷公藤内酯醇有减毒作用的茅苍术提取物的制备方 法，其特征在于，所制备的茅苍术提取物含生药量lg/mL。
【文档编号】A61P39/02GK104224880SQ201410477955
【公开日】2014年12月24日 申请日期:2014年9月19日 优先权日:2014年9月19日
【发明者】魏渊, 许海淼, 吴娜 申请人:江苏大学