一种抗恶性肿瘤的中药提取物及其制备工艺和应用的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种抗恶性肿瘤的药物提取物及其制备工艺和应用，该中药提取物为白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位。本发明涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可以抑制肿瘤细胞增殖，而且因其来源于天然植物，因此毒副作用低。
【专利说明】一种抗恶性肿瘤的中药提取物及其制备工艺和应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物【技术领域】，具体而言，涉及一种抗恶性肿瘤的中药提取物及其制 备工艺和应用。
【背景技术】
[0002] 恶性肿瘤是目前危害人类健康最为严重的一类疾病。通过手术、放疗和化疗治疗 癌症虽能延长癌症患者的生命，但随之而来的各种副作用（如免疫功能抑制、肝脏功能损 害等）使癌症病人的生活质量明显下降，故寻找高效低毒的抗恶性肿瘤药物是目前研究的 热点之。目前，人们积极寻找抗恶性肿瘤新药，一方面从天然产物中提取新药，另一方面探 索改进已有药物，增加新功能；中药是我国的传统药物，其在治疗疑难杂症方面具有先天优 势。由于新药开发难度大，周期长，对中药的深入研究成为新的热点。
[0003] 白紫草为多年生草本，高20 - 80厘米，根粗壮，绳状扭曲，外面紫红色，折断里面 粉红色，直生或横生。茎直立，单生或从基部分出几个枝条，上部分枝较多，全株密被白色刚 毛。叶互生，披针形，长3 - 6厘米，宽0. 5 - 0. 8厘米，先端渐尖，基部微收缩圆形，边全缘，微 向后反卷，正面暗绿色，叶脉中部一个，侧脉二对有时为一对，明显突出，正面微凹，两面均 密被白色的刚毛。花序总状，着生于分枝的顶端；苞叶披针形，通常比花长，密被白色刚毛， 小花着生在苞叶间，花萼5裂，裂片线形，长约4毫米，密被白色刚毛，先端钝，果期裂片延长 宿存；花冠白色，微伸出萼外，外面被白色，花冠上部5裂，裂片长形，长4 - 5毫米，喉部有5 片短小的被短绒毛的鳞片状物；雄蕊5个，花丝短，着生于花筒内的中部，不伸出于外，花药 长圆形。花柱较长，不伸于外，先端不分裂。目前，尚无文献报道白紫草花或其提取物具有 诱导抗恶性肿瘤的功效。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是在民间验方的基础上进行深入研究和探索，从而提供一种抗恶性 肿瘤的中药提取物及其制备工艺和应用。
[0005] 本发明的第一个目的是这样实现的：一种抗恶性肿瘤的中药提取物，其中，所述的 中药提取物为白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位。
[0006] 需要说明的是，在目前所做的试验中，由于该中药提取物在抗肝癌BEL-7402细胞 和H印G2细胞增殖方面有非常显著的生物活性，因此本发明优选该中药提取物用于防治 肝癌。另外，白紫草花选用紫草科长蕊斑种草属植物长蕊斑种草Antiotrema dunnianum (Diels) Hand.-Mazz.的盛开花朵，可以为鲜品，也可以为干品。
[0007] 本发明的第二个目的还在于提供了上述白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位的 制备工艺，其中该工艺包括如下步骤：取白紫草花原料，置于提取装置中，以甲醇或乙醇加 热回流提取，所得醇提液回收试剂并继续浓缩成膏状，加水混悬，以乙酸乙酯萃取，对萃取 液回收乙酸乙酯，得白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位。
[0008] 优选地，如上所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其中：甲醇或乙醇加热回 流提取1-3次，每次甲醇或乙醇的用量为原料的4-10倍。
[0009] 进一步优选地，如上所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其中：每次甲醇或 乙醇回流提取的时间为2_6h。
[0010] 优选地，如上所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其中：所述的乙酸乙酯萃 取步骤为等体积萃取。
[0011] 体外试验结果显示，白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位对肝癌BEL-7402细胞、 Hep G2细胞的增殖有非常显著的抑制作用，抑制率高达50%左右；白紫草花正丁醇部位对 Hep G2细胞增殖抑制率低于10%，可视为无抑制作用，对BEL-7402细胞增殖有明显的促进 作用。另外，白紫草花正丁醇部位和氯仿部位对BEL-7402细胞增殖有明显的促进作用，高 剂量下促BEL-7402细胞增殖率在100%以上，且呈量-效关系，分析可能是这两个有效部位 中含有促进细胞增殖的活性成分。基于以上研究结果，本发明的第三个目的在于提供一种 制药用途，即上述的白紫草花醇提物的乙酸乙酯有效部位在制备抗恶性肿瘤的药物中的应 用。在制药用途中，该药物组合物可制备为口服制剂；其中的口服制剂包括口服液、片剂、胶 囊、颗粒剂。
[0012] 与现有技术相比，本发明涉及的中药提取物由单一的中草药制备而成，其不仅可 以抑制肿瘤细胞增殖，而且因其来源于天然植物，因此毒副作用低，属于"绿色治疗药物"的 范畴，可望被开发成抗恶性肿瘤的一线用药。
[0013]
【具体实施方式】
[0014] 以下是本发明的具体实施例，对本发明的技术方案做进一步作描述，但是本发明 的保护范围并不限于这些实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发 明的保护范围之内。
[0015] 实施例1白紫草花的乙酸乙酯有效部位提取 取干燥的白紫草花1.36kg，置于设有圆底烧瓶的多功能提取装置中，分别加甲醇约 8L，加热回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并两次甲醇提取液，滤过，回收甲醇并继续 浓缩成膏状，加入适量水，混悬，总体积约〇. 6L，用乙酸乙酯进行提取，每次用量为0. 6L，均 萃取3次，经萃取得到的3次乙酸乙酯提取液合并，然后对提取液回收乙酸乙酯并继续浓缩 成稠膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，即得。
[0016] 实施例2白紫草花的乙酸乙酯有效部位提取 取干燥的白紫草花2. 2kg，置于设有圆底烧瓶的多功能提取装置中，分别加甲醇约 12L，加热回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并两次甲醇提取液，滤过，回收甲醇并继续 浓缩成膏状，加入适量水，混悬，总体积约1L，用乙酸乙酯进行提取，每次用量为1L，均萃取 3次，经萃取得到的3次乙酸乙酯提取液合并，然后对提取液回收乙酸乙酯并继续浓缩成稠 膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，即得。
[0017] 对比例1白紫草花的正丁醇有效部位提取 取干燥的白紫草花1.29kg，置于设有圆底烧瓶的多功能提取装置中，分别加甲醇约 8L，加热回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并两次甲醇提取液，滤过，回收甲醇并继续 浓缩成膏状，加入适量水，混悬，总体积约〇. 6L，用正丁醇进行提取，每次用量为0. 6L，均萃 取3次，经萃取得到的3次正丁醇提取液合并，然后对提取液回收正丁醇并继续浓缩成稠 膏，冷冻干燥，粉碎成细粉，即得。
[0018] 对比例2白紫草花的氯仿有效部位提取 取干燥的白紫草花1.57kg，置于设有圆底烧瓶的多功能提取装置中，分别加甲醇约 9L，加热回流提取2次，第一次5h，第二次3h，合并两次甲醇提取液，滤过，回收甲醇并继续 浓缩成膏状，加入适量水，混悬，总体积约〇. 72L，用氯仿进行提取，每次用量为0. 72L，均萃 取3次，经萃取得到的3次氯仿提取液合并，然后对提取液回收氯仿并继续浓缩成稠膏，冷 冻干燥，粉碎成细粉，即得。
[0019] 实施例3白紫草花不同有效部位对BEL-7402肿瘤细胞增殖的抑制试验研究 取对数生长期的BEL-7402细胞，用0. 25 %的胰酶消化，计数细胞密度为5 X IO4个/ mL 的细胞悬液，接种于96孔板，每孔100 μ L细胞悬液，培养12h贴壁后更换培养液并按分组 加入相应的受试物，37°C、5% CO2浓度，最大饱和湿度培养48h，检测波长为550nm，以每组 各孔吸光度（A)的平均值作为各组A值。
[0020] 试验分为10组如下：水对照组，5-FU高、低剂量组，DMSO对照组，白紫草花正丁 醇部位高、低剂量组，白紫草花氯仿部位高、低剂量组，白紫草花乙酸乙酯部位高、低剂量 组，每组设6个重复。选用实施例1、对比例1和对比例2制备的药粉分别作为相应试验 组的受试物，白紫草花正丁醇部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位药粉分别溶于DMSO, 5-Fu溶于 双蒸水，分别设双蒸水和DMSO作为试剂对照。白紫草花各提取物加药终浓度选取1. 000、 0. 250mg/mL两个浓度点作为高、低剂量，5-Fu加药终浓度为5. 000、0. 200mg/mL。
[0021] 根据公式：抑制率=(1-加药组A值/对照组A值）X100%，计算各加药组对 BEL-7402细胞的抑制率。
[0022] 通过表1的试验结果可以看出，白紫草花乙酸乙酯部位对BEL-7402细胞的增殖有 显著抑制作用0° < 〇. 05)。白紫草花正丁醇部位和氯仿部位对BEL-7402细胞增殖有明显 的促进作用。
[0023] 表1各组BEL-7402细胞增殖情况比较
【权利要求】
1. 一种抗恶性肿瘤的中药提取物，其特征在于，所述的中药提取物为白紫草花醇提物 的乙酸乙酯部位。
2. -种根据权利要求1所述治疗抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其特征在于该 工艺包括如下步骤：取白紫草花原料，置于提取装置中，以甲醇或乙醇加热回流提取，所得 醇提液回收试剂并继续浓缩成膏状，加水混悬，以乙酸乙酯萃取，对萃取液回收乙酸乙酯， 得白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位。
3. 根据权利要求2所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其特征在于：甲醇或乙 醇加热回流提取1-3次，每次甲醇或乙醇的用量为原料的4-10倍。
4. 根据权利要求3所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其特征在于：每次甲醇 或乙醇回流提取的时间为2-6h。
5. 根据权利要求2所述抗恶性肿瘤的中药提取物的制备工艺，其特征在于：所述的乙 酸乙酯萃取步骤为等体积萃取。
6. 权利要求1所述的白紫草花醇提物的乙酸乙酯部位在制备抗恶性肿瘤的药物中的 应用。
【文档编号】A61P35/00GK104288202SQ201410542655
【公开日】2015年1月21日 申请日期:2014年10月15日 优先权日:2014年10月15日
【发明者】李健 申请人:李健