一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途
【专利摘要】本发明公开了一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途。本发明采用冷冻干燥发酵工艺制备全蝎发酵物，后经超滤器不同滤膜的超滤获得不同相对分子质量的全蝎超滤物。本发明制备工艺简单，制得的全蝎发酵物及超滤物能抑制病毒和癌细胞的生长，尤其是在抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549）肿瘤细胞的生长方面作用显著。
【专利说明】一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其用途
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种全蝎发酵物及超滤物、制备工艺及其在抑制病毒和癌细胞生长中 的应用，属于中药发酵物及其应用【技术领域】。
【背景技术】
[0002] 病毒感染是目前世界范围内发病频率最高，范围最广泛，危害最大的一类疾病，每 年世界各国都投入了大量的人力与物力开发研究抗病毒类药物。由于病毒本身所具有的变 异性，这就决定了抗病毒药物开发的难度，尽管如此，人们还是锲而不舍地在研究对抗各种 病毒的新技术、新方法。目前抗病毒药物数量有限，效果也不尽如意，有些病毒人类目前还 没有解决的有效办法。本发明的全蝎发酵物及其超滤物就是对抗HlNl病毒、上呼吸道合胞 病毒、肠道病毒和珂萨奇病毒的较有希望的物质，它的发明成功必将对抗病毒事业产生巨 大的影响。
[0003] 癌症是当今世界上仅次于心脑血管病的第二大杀手，尤其是肺癌，发病率高、愈后 差、死亡率高，是目前最为凶险的疾病，目前西医上对癌症的治疗主要采用化疗，但是化疗 副作用大，给患者带来极大的痛苦，治疗效果也不理想。在中医治疗癌症方面，中药的复方 也能起到一定的辅助作用。全蝎发酵物及其超滤物为研究抗癌药物提供了全新的思路。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种全蝎发酵物及超滤物。本发明制得的全蝎发酵物及 超滤物能抑制病毒和癌细胞的生长，尤其是在抗HSVl、HlNl、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌 (A549)肿瘤细胞的生长方面作用显著。
[0005] 本发明的另一目的在于提供一种全蝎发酵物及超滤物的制备工艺及制备的产品 在抑制病毒和癌细胞的生长中的应用。
[0006] 本发明采用以下技术方案： 一种全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，它是由以下步骤的方法制备得到： (1) 将活的野生全蝎用清水漂洗，浙干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温 度-60°C，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉； (2) 取步骤（1)制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，力口 水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵 品； (3) 将步骤（2)制得的全蝎发酵品加入25飞0倍于其重量的纯净水，经超声提取2~3次， 合并提取液，过滤，得全蝎发酵物； (4) 将步骤（3)所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤， 分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
[0007] 上述步骤（1)中冷冻室温度为-18°C ?-60°C，冷冻时间为2-72小时。
[0008] 上述步骤（1)中冷冻干燥时间为12-24小时，真空度为IPa。
[0009] 上述步骤（2)中恒温培养箱温度为25?28°C，湿度为70?95%。
[0010] 上述步骤（3)中超声时间为30-60min。
[0011] 上述全蝎发酵物及超滤物的制备工艺，其特征在于，它包括以下步骤： (1) 将活的野生全蝎用清水漂洗，浙干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温 度-60°C，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉； (2) 取步骤（1)制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，力口 水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵 品； (3) 将步骤（2)制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，，经超声后提取2~3 次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物； (4) 将步骤（3)所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤， 分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
[0012] 上述全蝎发酵物及超滤物在抑制病毒和癌细胞生长中的应用。实验结果表明，本 发明制备的全蝎发酵物对体外肺腺癌细胞具有明显的抑制生长作用，全蝎超滤物也能明显 的起到抗HSVl、HlNl、RSV病毒的活性和抑制肺腺癌（A549)肿瘤细胞的生长的作用。
[0013] 本发明所有实验中使用的冷冻干燥机型号为LGJ-18A型(北京四环仪器设备有限 公司），全蝎为钳蝎科、向荆属的东亚钳蝎（ButhusmartensiKarsch),白僵菌为球孢白僵 菌（Beauveriabassiana，100亿/g,山东农业科学院制)，超滤器(型号WT6002G)。
[0014] 与现有技术相比，本发明的有益效果是： (1)本发明制备的全蝎发酵物对体外肺腺癌（A549)细胞的生长具有明显的抑制作用。
[0015] (2)采用本发明工艺制备的全蝎超滤物在抗HSV1、H1N1、RSV病毒的活性和抑制肺 腺癌（A549)肿瘤细胞的生长方面作用显著。
[0016] (3)本发明的全蝎发酵物、超滤物的制备工艺简单合理。
【具体实施方式】
[0017] 下面结合具体实施例对本发明做进一步的详细说明。
[0018] 实施例1 采用以下方法制备一种全蝎发酵物： (1) 将活的野生东亚钳蝎用清水漂洗，浙干，然后放入-18°C的冷冻室冷冻72小时，匀 浆，在冷阱温度_60°C，真空度IPa，室温下，冷冻干燥12小时至粉末得全蝎冻干粉； (2) 取全蝎冻干粉25重量份，加入活的球孢白僵菌孢子粉（100亿/g，山东农业科学院 制）2重量份，加水10重量份，拌匀，置于恒温恒湿培养箱中，温度25°C，湿度为70%，发酵8 天，得全蝎发酵品。
[0019] (3)取全蝎发酵品，加入25倍于其重量的纯净水，超声提取2次，每次30min，合并 提取液，抽滤得全蝎发酵物。将所得的全蝎发酵物经Iowrry法测定可溶性蛋白的含量。
[0020] 用MTT法测定上述全蝎发酵物对体外食道癌、乳腺癌和肺腺癌（A549)细胞的生长 抑制作用。采用SPSS16. 0单因素方差分析观察各组与空白组之间是否存在显著性差异。实 验结果显示如下表1 :
【权利要求】
1. 一种全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，它是由以下步骤的方法制备得到： 将活的野生全蝎用清水漂洗，浙干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温 度-60°C，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉； 取步骤（1)制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，加水 10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵品； 将步骤（2)制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，经超声提取2~3次，合 并提取液，过滤，得全蝎发酵物； 将步骤（3)所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤，分 别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
2. 根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述全蝎为东亚钳蝎。
3. 根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（1)中冷冻室温 度为-18°C ~_60°C，冷冻时间为2-72小时。
4. 根据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（1)中冷冻干燥 时间为12-24小时，真空度为IPa。
5. 据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（2)中恒温培养箱 温度为25?28°C，湿度为70?95%。
6. 据权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物，其特征在于，所述步骤（3)中超声时间为 30_60min。
7. -种权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物的制备工艺，其特征在于，它包括以下 步骤： (1) 将活的野生全蝎用清水漂洗，浙干，然后放入冷冻室冷冻后匀浆，然后在冷阱温 度-60°C，室温真空状态下冷冻干燥至粉末得全蝎冻干粉； (2) 取步骤（1)制得的全蝎冻干粉25重量份，加入活的白僵菌孢子粉2~25重量份，力口 水10-25重量份，拌匀，在恒温恒湿培养箱中发酵8~30天，停止发酵，粉碎后制成全蝎发酵 品； (3) 将步骤（2)制得的全蝎发酵品加入25~50倍于其重量的纯净水，，经超声后提取2~3 次，合并提取液，过滤，得全蝎发酵物； (4) 将步骤（3)所得的全蝎发酵物用30KDa，3 KDa，8 KDa超滤膜在超滤器上进行超滤， 分别得到对应相对分子质量的全蝎超滤物。
8. -种权利要求1所述的全蝎发酵物及超滤物在抑制病毒和癌细胞生长中的应用。
【文档编号】A61P31/14GK104306406SQ201410621734
【公开日】2015年1月28日 申请日期:2014年11月7日 优先权日:2014年11月7日
【发明者】王集会, 王俊香, 高世杰, 焦方文, 马明珠 申请人:山东中医药大学