一种伤寒多糖疫苗的制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种伤寒多糖疫苗的制备方法，包括将培养液离心去除菌体后收集上清液；向上清液中加入十二烷基硫酸钠溶液至终浓度为0.1％～0.2％，混匀，形成沉淀；将沉淀物离心处理后溶解沉淀物，然后向解离液中加入95％乙醇至乙醇终浓度为20％，于2～8℃存放24小时，离心收集上清液，然后洗涤精制。本发明对沉淀剂进行了优化，选择十二烷基硫酸钠作为沉淀剂，提高了疫苗的回收率。
【专利说明】一种伤寒多糖疫苗的制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物制品【技术领域】，具体涉及到一种伤寒多糖疫苗的制备方法。
【背景技术】
[0002] 伤寒疫苗的制备包括了疫苗原液的制备以及将疫苗原液制备成疫苗广品这两 个大的过程。在制备疫苗原液的过程中，往往需要先将培养液中的多糖形成沉淀物，而 加入的沉淀剂常用的为十六烷基三甲基溴化铵。如已经公开的中国发明专利，专利号为 201110171746. 5,其中介绍了将培养液制备成原液的过程；且在该专利文件的【背景技术】中， 也记载了其他多糖纯化工艺，这些文献中记载的沉淀剂均为十六烷基三甲基溴化铵。
[0003] 经过本发明人的研宄，对上述文件中记载的方法进行了确认，发现按照这些方法 记载的步骤获得的回收率均在50%?76%之间。经过研宄，影响回收率的条件可能存在于 沉淀剂的选择、解离剂的选择以及各种工艺步骤的具体参数；且其中沉淀剂的类型选择对 回收率的影响最大，因此发明人着重对沉淀剂进行了研宄。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种可以克服现有生产伤寒VI多糖疫苗原液回收率低的缺 陷的制备方法。
[0005] 为达上述目的，本发明的一个实施例中提供了一种伤寒多糖疫苗的制备方法，包 括以下步骤：
[0006] A、将培养液离心去除菌体后收集上清液；
[0007] B、向上清液中加入十二烷基硫酸钠溶液至终浓度为0. 1 %?0. 2%，混匀，于 2°C?8°C条件下存放24小时，使混合溶液形成沉淀；
[0008] C、将沉淀物离心处理，使用0. 7mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌后使多糖与 十>烧基硫酸纳解尚；
[0009] D、向解离液中加入95%乙醇至乙醇终浓度为20%，于2?8°C存放24小时，离心 收集上清液；
[0010] E、将上清液过滤，并在滤液中加入95%的乙醇至乙醇终浓度为75%，离心收集的 沉淀物依次用无水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入灭菌注射 用水溶解，经除菌过滤即为精制多糖疫苗原液。
[0011] 作为上述实施例的优化，在步骤B中，十二烷基硫酸钠溶液在总溶液中的质量分 数为0. 13% ;同时可以再多糖疫苗原液中加入稳定剂和冻干剂制成疫苗冻干粉。
[0012] 综上所述，本发明具有以下优点：
[0013] 本发明对沉淀剂进行了优化，选择十二烷基硫酸钠作为沉淀剂，提高了疫苗的回 收率。
【具体实施方式】
[0014] 对比实验方法：
[0015] 选用3批不同批次的伤寒菌培养液，批号分别为20130U201302和201303,每个批 号的培养液分成两组，一组采用传统的方法制备原液，另一组采用本发明的方法制备原液， 并比较两者的回收率，并同时检测本发明的疫苗的稳定性。
[0016] 实施例1 :
[0017] 将三个批号的培养液分别按照以下步骤制得三组疫苗原液。
[0018] 步骤一、将培养液离心去除菌体后收集上清液；
[0019] 步骤二、向上清液中加入十二烷基硫酸钠溶液至终浓度为0. 1%?0. 2%，混匀， 于5°C条件下存放24小时，使混合溶液形成沉淀；
[0020] 步骤三、将沉淀物离心处理，使用0. 7mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌后使 多糖与十二烷基硫酸钠解离；
[0021] 步骤四、向解离液中加入95%乙醇至乙醇终浓度为20%，于2?8°C存放24小时， 离心收集上清液；
[0022] 步骤五、将上清液过滤，并在滤液中加入95%的乙醇至乙醇终浓度为75%，离心 收集的沉淀物依次用无水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入灭 菌注射用水溶解，经除菌过滤即为精制多糖疫苗原液；得到三个批次的疫苗原液。
[0023] 对照组：
[0024] 将三个批号的培养液分别按照以下步骤制得三组疫苗原液。
[0025] 步骤一、将培养液离心去除菌体后收集上清液；
[0026] 步骤二、向上清液中加入十六烷基三甲基溴化铵溶液至终浓度为0. 1 %?0. 2%， 混匀，于5°C条件下存放24小时，使混合溶液形成沉淀；
[0027] 步骤三、将沉淀物离心处理，使用0. 7mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌后使 多糖与十二烷基硫酸钠解离；
[0028] 步骤四、向解离液中加入95%乙醇至乙醇终浓度为20%，于2?8°C存放24小时， 离心收集上清液；
[0029] 步骤五、将上清液过滤，并在滤液中加入95%的乙醇至乙醇终浓度为75%，离心 收集的沉淀物依次用无水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入灭 菌注射用水溶解，经除菌过滤即为精制多糖疫苗原液；得到三个批次的疫苗原液。
[0030] 将实施例1和对照组的疫苗原液进行适当的稀释，并对所有稀释后的疫苗产品进 行检测，检测内容按照药典中伤寒VI多糖原液中蛋白含量、核酸含量。
[0031] 表1 :对照组疫苗原液检测结果
[0032]
【权利要求】
1. 一种伤寒多糖疫苗的制备方法，包括以下步骤： A、 将培养液离心去除菌体后收集上清液； B、 向上清液中加入十二烷基硫酸钠溶液至终浓度为0. 1 %?0. 2%，混匀，于2°C?8°C 条件下存放24小时，使混合溶液形成沉淀； C、 将沉淀物离心处理，使用0. 7mol/L的氯化钠溶液溶解沉淀物，搅拌后使多糖与十二 烧基硫酸纳解尚； D、 向解离液中加入95%乙醇至乙醇终浓度为20%，于2?8°C存放24小时，离心收集 上清液； E、 将上清液过滤，并在滤液中加入95%的乙醇至乙醇终浓度为75%，离心收集的沉淀 物依次用无水乙醇和丙酮洗2次，干燥后的多糖按200?300毫升/克加入灭菌注射用水 溶解，经除菌过滤即为精制多糖疫苗原液。
2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：在步骤B中，十二烷基硫酸钠溶液在总 溶液中的质量分数为〇. 13%。
3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：还包括将多糖疫苗原液中加入稳定剂 和冻干剂制成疫苗冻干粉的步骤。
【文档编号】A61K39/112GK104436183SQ201410658686
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年11月18日 优先权日:2014年11月18日
【发明者】侯文礼, 周蓉 申请人:成都康华生物制品有限公司