乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法
【专利摘要】本发明属生物医药【技术领域】，具体涉及乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法。主要用于治疗临床上引起肺的急性损伤，从形态学特征、生化检测指标等证实，在发生急性肺损伤的初期阶段，及时有效地应用乳铁蛋白，可以有效地缓解和治疗急性肺损伤的进一步发展，乳铁蛋白能够明显减轻急性肺损伤的炎症反应，减少肺组织内中性粒细胞浸润、减轻肺毛细血管通透性；对肺损伤具有保护作用。
【专利说明】乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法
【技术领域】
[0001]本发明公开了乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法，属于生物医药领域。
【背景技术】
[0002]急性肺损伤0^111:6 111118^1)是临床上常见的危重病之一，其本质是多种炎细胞及炎症介质共同参与的肺内失控性炎症反应，中性粒细胞
？1⑷在其发生、发展中具有重要的作用。在八II时，大量的聚集、扣押于肺组织，释放活性氧、胶原酶、弹性蛋白酶、基质金属蛋白酶及促炎因子等多种有害物质加重八II。正常情况下？丽通过自身凋亡从炎症部位消除，而在从I中存在？丽凋亡延迟的现象，延长了 ？丽存活的时间。急性肺损伤0^111:6 111118是在严重感染、休克、创伤及烧伤等非心源性疾病过程中，肺毛细血管内皮细胞和肺泡上皮细胞损伤造成弥漫性肺间质及肺泡水月中，导致的急性低氧性呼吸功能不全或衰竭。以肺容积减少、肺顺应性降低、严重的通气丨血流比例失调为病理生理特征，临床上表现为进行性低氧血症和呼吸窘迫临床多种疾病可以引起肺损伤。？丽的增多、激活以及释放的多种炎症介质是从1的主要发生机制。
[0003]乳铁蛋？3属转铁蛋自家族，是体内一种重要的非血红素铁结合蛋白，它主要存在于乳汁及眼泪、鼻分泌物、唾液、肠粘膜等分泌物中，另外，还存在于中性粒细胞内。血浆中的I？主要来源于激活的中性粒细胞。当机体受到感染时，存在于中性粒细胞二级颗粒中的…大量释放，通过螯合致病菌的铁离子使其死亡。重症肺炎患者肺部中性粒细胞释放的I？增加，肺炎的严重程度与血液中中性粒细胞释放的I？成负相关，说明I？的释放是机体的重要防御反应之一。⑶是人体第一道防御系统的组成部分，能够抵抗多种微生物的感染及预防全身炎症的发生。实验证实，…可以通过抑制粒细胞的迀移，抑制局部炎症因子的产生。
【发明内容】
[0004]本发明公开了乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法，属于生物医药领域，用于治疗急性肺损伤。本发明通过以下实验证明乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法:健康雄性昆明小鼠60只，清洁级，体重26±29 ；随机分为对照组
、乳铁蛋白组(…、脓毒症组^0111))、乳铁蛋白预处理组、乳铁蛋白治疗组(…分…取^即)、地塞米松治疗组仏？分0狀取^即)，每组10只。实验证明乳铁蛋白在急性肺损伤中具有潜在的抗炎作用:明显减轻引起的肺泡水肿、出血、炎细胞浸润、肺泡间隔增宽及肺间质内炎细胞的浸润；明显减少肺组织中即0的含量；说明了乳铁蛋白在急性肺损伤中具有保护作用。
[0005]具体实施方法
[0006]下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。
[0007]健康雄性昆明小鼠60只，清洁级，体重26±29 ；按随机数字化分为对照组(￠0111:1-01邑抓即)、乳铁蛋白组(…邑抓即)、脓毒症组邑抓即)、乳铁蛋白预处理组、乳铁蛋白治疗组(…分…取^即)、地塞米松治疗组仏？分0狀取^即)，每组10只。对照组(￠0111:1-01聊即):腹腔注射吧0.21111，乳铁蛋白组(…聊即):腹腔注射I？
脓毒症组仏?3狀0即):腹腔注射1^3 5呢八8，乳铁蛋白预处理组:(1^+1^3狀0即):腹腔注射1^5呢/化办，111后腹腔注射1？3 5呢八8，乳铁蛋白治疗组仏?3+1^？狀。即):腹腔注射1？33呢八8，111后腹腔注射…〖呢/—办，地塞米松治疗组(1^3+0?狀0卯):腹腔注射1？35呢八8，111后腹腔注射01? 2呢八8。
[0008]将小鼠麻醉、固定后，消毒胸部皮肤，打开胸腔暴露肺野，分别取下右肺上、中、下三叶，用冰的生理盐水进行左肺泡灌洗，回收率达90%左右；肺泡灌洗液离心后(41,500呢，10111111),取上清储存于-80X:，用于检测蛋白及细胞因子的含量，沉淀重悬后用于总细胞计数。并进行肺组织病理学观察和即0等检测。
[0009]1肺组织病理学观察:将取下的右肺下叶浸泡于10%中性甲醛溶液中固定2处，然后脱水、透明、包埋、切片，册染色观察肺损伤程度，采用&111访评分方法对肺水肿、肺泡及间质炎症、肺泡及问质出血、肺不张和透明膜形成，分别进行0?4分半定量分析，无损伤为0分；病变范围? 25%为1分；25%?病变范围? 50%为2分；50%?病变范围? 75%为3分；病变范围多75%为4分。每张切片观察10个高倍视野进行评分。在光镜下(^200)观察发现4011廿01组及…组肺泡腔清晰，结构完整，肺间隔均匀，肺泡壁光滑，肺泡腔及间质内无渗出物。1？3组可见肺泡间隔增宽，间质水肿、毛细血管扩张、充血、炎细胞浸润，部分肺泡断裂、内有水肿液聚集。I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组肺损伤明显减轻，表现为肺泡间隔增厚不明显，肺泡内渗出减少，间质出血、水肿、炎细胞浸润减轻，与￠011廿01及I？组比较，1？8组肺组织病理学评分增加1^0.05)；给予…、0?后肺组织病理学评分降低1)^0.05) ；0011^01组与…组之间相互比较，肺组织病理学表现及肺组织病理学评分无明显差异(9)0.05)组、…分…组、1？3—0狀组之间相互比较，肺组织病理学表现及肺组织病理学评分也无明显差异。正常肺组织中，肺泡上皮细胞通过钠通道和水通道蛋白调节肺泡腔内的水平衡，是防止肺水肿的重要屏障。八11/八即3发病早期，由于肺泡上皮细胞凋亡增加及由其损伤造成的肺问质压力增高可破坏该屏障，造成肺水肿。另外，水肿也是炎症的表现形式之一，在本实验结果中I？明显减轻1/0，说明I？可以减轻1？3导致肺毛细血管内皮细胞及肺泡上皮通透性的损伤。灌洗液中的蛋白浓度是显示肺通透性的另一指标，在本实验中我们发现模型组与对照组比较，肺泡灌洗液中蛋白浓度明显增加，给予I？后蛋白明显降低。总之，…可以减轻引起的肺通透性的增加，明显减轻引起的肺泡水肿、出血、炎细胞浸润、肺泡间隔增宽及肺间质内炎细胞的浸润。
[0010]2即0活性测定:采用肺组织匀浆，分别设定试剂空白、对照管、测定管，于460=1！！处，测各管00值。在0)11^01组、…组、1？8组、I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组中，各组1？0 的活性分别是(0.45±0丨 16)晌、(0.38±0丨 12)晌、(12.50±2丨 16)晌、(5.21±0丨 31)晌、(4.53±1 14)晌、(4.13±1 53)晌；与0011^01组及I？组比较，1？8组1？0活性增加(1^0.05)；与1？3组比较，…预处理组、…治疗组及0?治疗组即0活性减弱(1^0.05)；与0011廿01组及…组比较，I？预处理组、…治疗组及0?治疗组即0活性增加(9(0.05)；〇011廿01组与…组之间相互比较，即0活性无明显差异(9)0.05)山？预处理组、…治疗组及0?治疗组之涮相互比较即0活性也无明显差异(9)0.05)；肺组织即0活性的高低反应了肺间质内活化中性粒细胞的数目的多少，正常情况下，1？0具有杀害病原微生物的作用，急性肺损伤时会产生过多的1？0，可以引起组织损伤。在本实验中我们发现，I？可以减轻1？3弓丨起肺组织中性粒细胞的浸润，降低1？0的活性，预防性与治疗性给予⑶具有相似的功能。
[0011]3灌洗液中总细胞计数:肺泡灌洗液离心后的沉淀加入101吧重悬，取少许滴加在盖玻片边缘，使悬液充满盖玻片和计数板之间，静置3分钟，注意盖玻片下不要有气泡，不能让悬液流入旁边槽内。计数细胞总数，0011^1-01组、I？组、1？8组、I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组肺泡灌洗液中总细胞数分别为(24^5^1(^ (28^4)父104、(202 + 24)XI。4、(90^7)父104、(92^5)父104、(69^8) X 104，与(^^01 组比较，组肺泡灌洗液中细胞含量增加⑴切.05)；与组比较，I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组肺泡灌洗液中总细胞数减少⑴切.05)；与0)11廿01组及…组比较，I？预处理组、…治疗组及0?治疗组肺泡灌洗液中总细胞数增加⑴切.05) ；00！1^01组与…组之间相互比较，肺泡灌洗液中总细胞数无明显差异$)0.05) ；1？预处理组、I？治疗组及0?治疗组之间肺泡灌洗液中总细胞数也无明显差别$)0.051
[0012]4肺湿/干比值检测:取右肺中叶，用吸水纸吸干表面水分及血液，称量肺湿重(胃)。置于801:烤箱721！后，称量肺干重(0)，计算湿/干重比0^/0)=肺湿重/肺干重。与〇011 钍01 组(4.07^0.51)及⑶组(4.32^0.48)比较，组(6.39±0^ 20)8 组织湿 / 干比值升高(户⑶.05)山？预处理组、…治疗组及0?治疗组肺湿/干比值分别是(4.88^0.30)、(4.96^0.71)及(4.51^0.19)，与组相比肺湿干比值降低0^0.05)；与0)11廿01组及I？组比较，I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组肺湿/干比值升高(9(0.05) ；0011^01组与I？组相互比较，肺湿/干比值无明显统计学意义$)0.05)山？预处理组、…治疗组及0?治疗组肺湿/干比值也无明显统计学意义(9)0.05)。
[0013]5灌洗液中总蛋白含量的检测:在0)11廿01组、I？组、1？8组、I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组中，各组蛋白含量分别为(0.48 ±0^ 03)1^/1111、(0.39 ±0^ 03)呢加1、
(0.75^0.06)11^/1111 (0.80^0.03)11^/1111^ (0.64^0.05)11^/1111,与0011^1-01组及…组比较，1？8组总蛋白含量增加？〈0丨05)；与组比较，I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组总蛋白含量减少1^0.05)；与0)11廿01组及…组比较，I？预处理组、I？治疗组及0?治疗组总蛋白含量增/邛(1^0.05) ；0011^01组与…组相互比较，总蛋白含量无明显差别00.05) ；1？预处理组、I？治疗组及0?治疗组之间相互比较总蛋白含量也无明显差异00.05)。给予I？后肺泡灌洗液中细胞含量及蛋白含量也明显减少，说明肺组织中渗出减少，炎症表现较轻。
[0014]6肺泡灌洗液中1,-0、几-10含量组、…组、组、…预处理组、…治疗组及0?治疗组肺泡灌洗液中I'即-(1含量分别为:(38.42^1.(36.98^3.62)肫加1、(168.15^5.91)^^/1111, (69.32±8丨 08)1^/1111、(62.22±7丨 38)^/1111、(55.62^1.73)呢/…，11-10 含量分别是(63.58±10^ 25)^/^1, (63.32±19^ 42)^/1111、(100.52±24 35)呢/…、(147.46^20.62)1^/1111、(145.04^28.73)^/1111、(158.54^17.46)1^/1111° 与0011^01及I？组相比较，1？8组1, 0、11-10含量升高(户⑶.05)，给予I？后1,- 0值含量降低，而11-10含量升高⑴切.05),提示…可以降低，增加11-10等抗炎因子含量。
[0015]实例一
[0016]临床上引起肺的急性损伤的疾病很多，在急性肺损伤的初期阶段，及时有效地应用乳铁蛋白，可以有效地缓解和治疗急性肺损伤的进一步发展；其特征在于:发现有急性肺损伤可能时应及时应用乳铁蛋白，乳铁蛋白能够明显减轻急性肺损伤的炎症反应，减少肺组织内中性粒细胞浸润、减轻肺毛细血管通透性；用量为208/次；应用方法为温水冲服，
三次/天。
【权利要求】
1.乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法。
2.根据权利要求1所述的乳铁蛋白对急性肺损伤保护作用的一种治疗方法，其特征在于:在急性肺损伤的初期阶段，及时有效地应用乳铁蛋白，可以有效地缓解和治疗急性肺损伤的进一步发展，能够明显减轻急性肺损伤的炎症反应，减少肺组织内中性粒细胞浸润、减轻肺毛细血管通透性；用量为20g/次；应用方法为温水冲服，三次/天。
【文档编号】A61K38/40GK104491847SQ201410768846
【公开日】2015年4月8日 申请日期:2014年12月12日 优先权日:2014年12月12日
【发明者】庞庆丰, 范红斌, 杜斌, 陈俊良 申请人:江南大学