相关申请的交叉引用本申请要求提交于2013年12月19日的美国临时申请序列No.61/918,420的优先权，该美国临时申请的公开内容全文以引用方式并入本文。
背景技术：
技术领域本发明整体涉及减少或预防猫变态反应或其症状，并且具体地讲，涉及用于减少来自环境的猫主要变应原Feld1的组合物和方法。相关领域的描述家猫会产生变态反应的一些最强效诱导子，全世界的人群都受此影响。症状的严重程度范围为从轻微的鼻炎和结膜炎到危及生命的哮喘应答。猫皮屑中最突出且强效的变应原为Feld1。Feld1在90-95％患有猫变态反应的患者中会引起IgE应答(vanReeetal.,1999,J.AllergyClin.Immunol.104:1223-1230(vanRee等人，1999年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第104卷，第1223-1230页))并占猫皮屑中总变应原活性的60-90％(Kleine-Tebbe,etal.,1993Int.Arch.AllergyImmunol.100:256-262(Kleine-Tebbe等人，1993年，《国际变态反应学与免疫学文集》，第100卷，第256-262页))。仅一些变应原的三维结构有所报道(参见Valenta&Kraft,2001,Immunol.Rev.179:119-127(Valenta和Kraft，2001年，《免疫学评论》，第179卷，第119-127页))。这些变应原的生物学功能多种多样或尚属未知，没有任何似乎易使蛋白质充当变应原的特定生物学特征或结构特征(参见Aalberse,2000,J.AllergyClin.Immunol.106:228-238(Aalberse，2000年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第106卷，第228-238页))。据信与变应原性相关的蛋白质结构特征包括蛋白质的溶解度、稳定性、尺寸和致密度。这些方面反映了变应原性依赖于越过粘膜屏障的转运和对蛋白酶的敏感性(Aalberse，2000年，出处同上)。翻译后修饰也可影响变应原性，诸如通过引入新表位或改变溶解度、稳定性、尺寸、对蛋白酶的敏感性和/或由抗原递呈细胞进行的摄取和加工(Aalberse，2000年，出处同上)。虽然糖基化影响许多这类过程，但对变应原性本身不起决定性作用。许多变应原未被糖基化，而有些被高度糖基化(Aalberse，2000年，出处同上)。因此，对变应原性基础的确定可能需要变应原的详细结构研究，并且即便是这样，也可能无法得出确切结果。Feld1是由两个异源二聚体形成的35-kDa四聚糖蛋白。每个18-kDa二聚体由来源于两个独立基因的两条共价连接的链构成，这两条链为包含70个残基的链1，以及包含90或92个残基的链2(其有两种同工型)。已确定了Feld1的三维结构(Kaiseretal.,2003,J.Biol.Chem.278:37730-37735(Kaiser等人，2003年，《生物化学杂志》，第278卷，第37730-37735页)，Kristensenetal.,1997,Biol.Chem.378:899-908(Kristensen等人，1997年，《生物化学》，第378卷，第899-908页))。已发现该蛋白质的折叠与子宫珠蛋白的折叠有着惊人的相似之处，子宫珠蛋白是一种具有抗炎和免疫调节特性的类固醇诱导性细胞因子样分子。在Feld1的分子表面上确定了三个IgE表位的相对定位，分别位于第15-28位残基(链2)、第117-130位残基和第138-151位残基(链1)(Kaiser等人，2003年，出处同上)。Feld1由皮脂腺和鳞状上皮细胞产生，并通过舔舐和梳理而转移到毛皮(Bartholomeetal.,1985,J.AllergyClin.Immunol.76:503-506(Bartholome等人，1985年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第76卷，第503-506页)；Charpinetal.,1991,J.AllergyClin.Immunol.88:77-82(Charpin等人，1991年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第88卷，第77-82页)；Dabrowskietal.,1990,J.AllergyClin.Immunol.86:462-465(Dabrowski等人，1990年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第86卷，第462-465页))。Feld1也存在于唾液腺、肛周腺和泪腺中(Andersonetal.,1985,J.AllergyClin.Immunol.76:563-569(Anderson等人，1985年，《变态反应与临床免疫学杂志》，第76卷，第563-569页)；vanMilligenetal.,1990,Int.Arch.AllergyAppl.Immunol.92:375-378(vanMilligen等人，1990年，《国际变态反应学与应用免疫学文集》，第92卷，第375-378页))。因此，变应原存在于动物体内和身上，并且还由较小空气传播颗粒携带到猫所占据环境内的表面。开发用于控制对此类变应原反应的策略包括在个体中建立对变应原的耐受性，以及简单的回避。耐受性策略需要建立或重建对外源变应原的更小危害或更富成效的应答。耐受性诱导策略传统上涉及变应原免疫疗法，其中致敏个体以受控方式有意接触变应原，例如通过一系列注射，或经口或鼻吸收。免疫疗法已使用超过100年并且是成功的，但可能需要数年才能建立可接受的耐受性水平。虽然在接受治疗的特定个体中有潜在疗效，但耐受性策略价格昂贵、具有侵入性、耗时并且需要专家诸如医生、免疫学家等来施用。耐受性治疗还涉及与不良反应和消极后果相关的特定风险水平。原则上讲，回避Feld1很有吸引力，但难以实现。针对养猫家庭的一项研究表明，FelD1广泛存在，例如存在于96.6％的床、96.9％的卧室地板、96.1％的客厅地板和97.9％的沙发。(Geanyetal.,Pediatrics,116(2):August2005(Geany等人，《儿科》，第116卷，第2期，2005年8月))。对养猫家庭的学龄儿童所穿衣服在家外(学校内)进行测试，发现含有FelD1抗原。因此，该环境抗原会造成重大风险，不仅会影响生活在养猫家庭的致敏个体，还会影响全体变态反应性人群。(Gerge&Dreborg,Ped.AllergyImmun.,9(1):25-30,1998(Gerge和Dreborg，《儿科变态反应和免疫学》，第9卷，第1期，第25-30页，1998年))。因此，虽然美国的养猫人数在上升，但对猫的变态反应已成为并且仍然是猫被放弃送到动物收容所的主要原因(Scarlettetal.,1999,J.Appl.AnimalWelfareSci.2:41-57(Scarlett等人，1999年，《应用动物福利科学杂志》，第2卷，第41-57页))。虽然完全回避Feld1可能不切实际，但Feld1量的降低、甚至极小的降低都对致敏个体的健康有着实质影响。这可最大程度减少因家中人员发生致敏而招致的弃养行为。已尝试减少环境中的猫变应原。例如，U.S.7,704,532公开了旨在减轻人和其他易感动物的变态反应的方法，该方法是通过施用于衣物、表面、室内、家具、植物褥草、植物等，使包含酸式盐溶液的组合物与变应原(包括猫变应原)直接接触，所述酸式盐溶液包括铝盐、钙盐和/或镁盐。U.S.5,826,546公开了用于清洗宠物的无水方法，包括联合使用发泡香波组合物和能够以泡沫形式分配该组合物的分配器。该组合物可包含如下一种或多种：阴离子洗涤剂、非离子洗涤剂、两性洗涤剂、防腐剂、抗微生物剂、抗氧化剂、温和皂、表面活性剂、皮肤调理剂诸如芦荟提取物、芳香剂、用于处理跳蚤侵扰的药剂诸如白千层油、pH调节剂如柠檬酸，这取决于宠物的具体需要。U.S.2011/0135750公开了旨在使变应原诸如猫Feld1变性的方法和组合物，该组合物包含钙盐与镧盐的组合。U.S.2004/0007251公开了湿擦净剂和干擦净剂，其包含诸如凝集素、蛋白酶和/或酶抑制剂等添加剂，该添加剂旨在能够结合或裂解变应原如猫Feld1，并将变应原从表面清除。U.S.2006/0142394公开了用于使用组合物抑制尘螨排泄物并使动物毛发角蛋白和/或植物花粉或孢子变性的方法，该组合物包含能够分解多肽以使得它们不会引起对人的变应原性效应的酶。U.S.8,454,953公开了用于减轻或预防对变应原的变态反应或变态反应症状的方法，包括使变应原的源与组合物接触，该组合物包含能够抑制变应原与易发变应性应答动物中肥大细胞的结合能力的分子。该分子可为对变应原具有特异性的抗体，如对猫Feld1变应原具有特异性的抗体。各种市售产品和方法也旨在减少环境中的变应原。一种据称可用于预防或减轻人的变态反应(包括由猫Feld1引起的变态反应)的方法通过如下方式进行：首先清洁环境中的表面，然后使用喷雾器将包含源自水果与蔬菜种子提取物的成分的水基溶液施加到诸如床垫、地毯、软垫家具、小毯和窗饰等表面(参见有关RESPONSIBLECARESYSTEMTMALLERGYRELIEFTREATMENTTM的特别报道，urlmasterblend.net)。APDC公司(urlapdc-inc.com)生产了抗变应原喷雾剂，其为据称源自植物和天然存在的有机化合物且包含二氧化氯的液体组合物。另一种方法涉及将包含香波和皮肤调理成分的组合物直接施加于动物，以清除动物毛皮和皮肤上的变应原，包括猫Feld1(参见由纽约州纽约市的Allerpet公司(Allerpet,Inc.,NewYork,NY)生产)。将该组合物直接施加于猫已证实能减少猫毛皮上和与猫接触的地毯上的Feld1的量(LGHKoren,EJanssen,AWillemse,AmericanAcademyofAllergyandImmunologyMarch1995AnnualMeeting,Eindhoven&Utrecht,Netherlands(LGHKoren、EJanssen、AWillemse，美国变态反应和免疫学研究院1995年3月年会，荷兰埃因霍温和乌特勒支))。尽管如上所汇总，在本领域中可使用某些方法和组合物，但仍然需要用于减少环境中的Feld1或使其变应原性减弱或呈非变应原性的另外的改进方法。还需要这样的组合物，其允许充分控制Feld1的水平和/或效力，以减轻、最小化或预防易发变应性应答的个体中的这种应答。
技术实现要素：
因此，本发明的目的是减少或消除环境中的变应原性Feld1。本发明的另一个目的是减少或消除环境中的变应原性Feld1，所述环境包括可受猫变应原影响的个体的局部环境。本发明的又一个目的是减少或消除变应原来源(例如猫毛发、皮肤或毛皮、或猫唾液)中的变应原性Feld1。这些其他目的中的一者或多者可使用包含蛋白酶的制剂、产品、套装和方法实现，所述蛋白酶与Feld1相互作用并大幅降低Feld1上的变应原表位，从而减弱或消除其变应原性。本发明另外的和更多目的、特征和优点对于本领域的技术人员将是显而易见的。附图说明图1：SDS-PAGE表明Feld1被地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)枯草杆菌蛋白酶完全降解。将天然Feld1(1.9μg)与0.1、1或10rfus-1的地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(诺维信公司(Novozymes))温育过夜，在37℃下于Tris/HCl缓冲液(200mM，pH7.8)或醋酸铵缓冲液(100mM，pH4.0)中的活性。使用不含Feld1的枯草杆菌蛋白酶(10rfus-1)和不含枯草杆菌蛋白酶的Feld1充当对照。图2：直方图示出了通过ELISA测定的在蛋白酶催化的降解之后的残余Feld1浓度。将天然Feld1(2.5μg)与最低要求活性的所有所测试商业蛋白酶(BLAP除外)一起在20μl的最佳缓冲液中温育过夜，以实现Feld1的完全降解(参见表2)。以20和30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。作为稀释的结果，预计得到初始浓度为12ngmL-1的Feld1(即，不存在降解)。阴性对照(NegCtrl)不含Feld1，阳性对照包含与以下不同缓冲液一起温育的Feld1：阳性对照1：Tris/HCl缓冲液(200mM，pH7.8)；阳性对照2：磷酸钠缓冲液(100mM，pH7.8)；阳性对照3：磷酸钠缓冲液(100mMpH6.0)；阳性对照4：醋酸铵缓冲液(100mM，pH4.0)。蛋白酶催化的降解双份地进行。图3：直方图示出了通过TNBS测定法测定的蛋白酶的角蛋白水解活性。将角蛋白粉与各浓度的目标蛋白酶在已发现最适于Feld1降解的反应条件下一起温育过夜(参见表2)。在与苦基磺酸(TNBS)发生偶联反应后，用分光光度法在405nm处测定样品的10倍稀释液中的角蛋白降解产物。数据表示在样品中及在含相同缓冲液但不含蛋白酶的对照中测定的吸光度之间的差值。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。图4：直方图示出了通过磺酰罗丹明B和WST-1测定法测定的蛋白酶对人角质细胞的细胞毒性效应。将汇合生长的原代人角质细胞与一定浓度的目标蛋白酶(细胞培养基中)一起温育过夜，所述浓度被确定为降解125μgmL-1Feld1所需的最低浓度(参见表2)。温育后，通过用WST-1(对代谢活跃的细胞)染色，测定每孔中所有细胞(贴壁细胞和脱落细胞)的剩余细胞活力。然后通过用磺酰罗丹明B(对活细胞的蛋白质)染色，测定单独的贴壁细胞的剩余细胞活力。未与蛋白酶一起温育的细胞充当对照(对应于100％剩余细胞活力)。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。图5：直方图示出了异丙醇对蛋白酶催化的Feld1降解的影响。将目标蛋白酶以据发现最适于Feld1降解的浓度和反应条件与0、2.5％、5.0％、7.5％、10.0％和12.5％的异丙醇一起温育过夜(参见表2)。以20分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1与具有最大异丙醇浓度但不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。图6：坐标图示出了20对蛋白酶催化的Feld1降解的影响。将目标蛋白酶以据发现最适于Feld1降解的浓度和反应条件与0、10％、20％和30％的20一起温育过夜(参见表2)。以20分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1与具有相应20浓度但不含蛋白酶的缓冲液对照的Feld1相比的百分比。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。图7：直方图示出了在37℃下过夜温育期间人工猫唾液中半胱氨酸和不同浓度的脱脂奶对木瓜蛋白酶催化的不同浓度Feld1的降解的影响。将1.25、12.5和125μgmL-1天然Feld1与4.65μgmL-1的木瓜蛋白酶(对应于20μl反应混合物中的60rfus-1，参见表2)在37℃下于含0、71、714和7140μgmL-1脱脂奶且含和不含40mM半胱氨酸的人工猫唾液中温育过夜。温育后，以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。作为稀释的结果，预计得到最大浓度为12ngmL-1的Feld1(即，不存在降解)。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。图8：直方图示出与不同浓度的地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(6L)一起在37℃下于人工猫唾液(极端条件)中温育1小时和温育过夜后通过ELISA测定Feld1。将125μgmL-1天然Feld1与0、9.5、95、950和9500μgmL-1的枯草杆菌蛋白酶一起在37℃下于人工猫唾液(极端条件)中温育0分钟、1小时或20小时(过夜)。通过添加1mMPMSF来终止反应。以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。作为稀释的结果，预计得到最大浓度为12ngmL-1的Feld1(即，不存在降解)。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。图9：直方图示出了测试浓度为1000倍的木瓜蛋白酶和地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(6L)在温育5至60分钟后人工猫唾液中Feld1降解的结果。将4.5mgmL-1的木瓜蛋白酶和9.5mgmL-1的枯草杆菌蛋白酶与人工猫唾液中的Feld1一起在37℃下于正常条件和极端条件下温育0、5、10、15和60分钟。通过添加100μME64(就木瓜蛋白酶而言)和1mMPMSF(就枯草杆菌蛋白酶而言)终止反应。以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1的与不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。缩写：n.d.，未测定。图10：直方图示出了测试木瓜蛋白酶与地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(6L)浓度的不同组合(以恒定比率)在温育0至60分钟后人工猫唾液中Feld1降解的结果。将木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶浓度的不同组合(木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶分别为4.5和9.5μgmL-1；45和95μgmL-1；450和950μgmL-1；4500和9500μgmL-1)与人工猫唾液中的Feld1一起在37℃下于正常条件和极端条件下温育0、5、10、15和60分钟。通过添加100μME64和1mMPMSF终止反应。以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1的与不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。图11：直方图示出了测试木瓜蛋白酶与地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(6L)浓度的不同组合(木瓜蛋白酶浓度保持恒定)在温育0至10分钟后人工猫唾液中Feld1降解的结果。将木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶浓度的不同组合(木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶分别为4500和1188μgmL-1；4500和2375μgmL-1；4500和4750μgmL-1；4500和9500μgmL-1)与人工猫唾液中的Feld1一起在37℃下于正常条件和极端条件下温育0、5和10分钟。通过添加100μME64和1mMPMSF终止反应。以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1的与不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。图12：直方图示出了测试木瓜蛋白酶与地衣芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶(6L)浓度的不同组合(枯草杆菌蛋白酶浓度保持恒定)在温育0至10分钟后人工猫唾液中Feld1降解的结果。将木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶浓度的不同组合(木瓜蛋白酶和枯草杆菌蛋白酶分别为565和1188μgmL-1；1125和1188μgmL-1；2250和1188μgmL-1；4500和1188μgmL-1)与人工猫唾液中的Feld1一起在37℃下于正常条件和极端条件下温育0、5和10分钟。通过添加100μME64和1mMPMSF终止反应。以30分钟的时间间隔稀释样品并通过ELISA进行分析。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1的与不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。具体实施方式定义如本文所用，术语“变态反应”与“变应性应答”或“变应性反应”是同义的。这些术语中的每一者是指动物体内发生的原本不会有害于动物的针对外源性抗原(或“变应原”)的免疫应答状态。变应性应答的“症状”是指上述免疫应答的任何量度，例如在分子水平(包括蛋白质或转录物或基因的活性或表达的量度)、细胞水平、器官水平、系统水平或生物体水平上的量度。此类症状可包括一种或多种此类水平。症状可包括一般现象，诸如通常与变态反应相关的炎症、呼吸系统症状、肿胀或不适，鼻炎、水肿和变应性皮肤病，包括但不限于特应性皮炎(例如，湿疹)、荨麻疹(例如，麻疹)和血管性水肿，以及变应性接触性皮炎。变应性应答“症状”的更具体现象包括例如在细胞水平的任何可测量或可观察的变化，包括但不限于细胞群的局部或系统变化、嗜酸性粒细胞增多症、免疫细胞(包括例如肥大细胞和/或嗜碱性粒细胞)的募集和/或活化、抗原递呈细胞(包括但不限于携带FcεRI的树突细胞)的变化、细胞内或分子变化，包括免疫级联中一个或多个步骤的测量或观察、介导变应性应答的细胞内化合物(例如，介导因子)的释放以及一个或多个细胞因子(例如，IL-3、IL-5、IL-9、IL-4或IL-13)或其相关化合物或拮抗剂的变化。本领域的技术人员应当理解，本文所定义的某些症状比其他症状更易测量，并且一些症状通过对症状的主观评估或自我评估来测量。对于其他症状，存在方便或快速的测定法或测量法，用于客观地评估变化。本文所用的术语“环境”具有三个组成部分，因为这些组成部分都与猫变应原Feld1相关。这些组成部分有时称为“猫周围”、“猫身上”和“猫体内”。“猫周围”的环境是指可受到猫变应原影响的个体的局部环境和/或猫栖居的局部环境。例如，房屋、房间、汽车、办公室、旅馆、庭院、车库等均可以是本文所用的“环境”。其上可能落有变应原的任何无生命表面被视为环境的一部分。包含变应原的空气传播粒子也被视为环境的一部分。虽然猫周围的环境常常是室内，但本文决不是要排除部分或完全敞开的或户外的有限区域作为环境，例如露台、甲板、梯台、阳台、观景楼、门廊等可构成用于本文目的的环境。环境还可包括作为变应原来源的动物的一部分或全部，例如，猫的皮肤、毛皮或者猫的皮肤或毛皮上的唾液(“猫身上”)，或者猫的口腔或其中的唾液(“猫体内”)。如本文所用，“个体”意指任何物种或种类的个体动物，包括人。就套装而言，术语“单个包装”是指套装的多个组成部分在一个或多个容器中物理相关联，或与一个或多个容器物理相关联，而且被视为一个制造、分装、销售或使用单元。容器包括但不限于袋、盒或纸箱、瓶，任何类型、任何设计或任何材料的包装，外包装、收缩包装、附连部分(例如，装订部分、粘附部分等)，或前述的任意组合。例如，单个包装套装可提供各组合部分和/或食物组合部分的容器，这些容器物理相关联以使得它们被视作一个制造、分装、销售或使用单元。术语“虚拟包装”，是指套装的组成部分通过在一个或多个物理或虚拟套装组成部分上的指导相关联，这些指导指示用户如何(例如)在装有一种组成部分和指导的袋子或其他容器中获取其他组成部分，该指导内容指示用户访问网站或个人装置应用程序(“app”)、联系预先录制的留言或回传服务、观看视觉信息或者联系护理员或指导员获取(例如)关于如何使用套装或者关于套装的一个或多个组成部分的安全或技术信息的说明。可作为虚拟套装一部分提供的信息的示例包括使用说明；安全信息，诸如材料安全数据表；中毒控制信息；潜在不良反应信息；临床研究结果；膳食信息，诸如食物组成或热量组成；关于体力活动、运动、新陈代谢、耐力等的一般信息。除非另外特别规定，否则本文表述的所有百分比都以组合物的干物质基础按重量计算。本领域的技术人员将认识到，术语“干物质基础”是指除去组合物中的任何游离水分后，再测量或测定组合物中某种组分的浓度或百分比。本文使用的范围都是缩略范围，以免必须详细陈列或描述范围内的每个数值。可选择范围内的任何适当的值，适当时，可选择上限值、下限值或该范围的端值。本文使用术语“约”表示预期在给定值上加上或减去该值的20％、15％、10％、5％或1％。因此使用“约”作为简写，表示认可由规定字面值发生较小变化后，仍在本发明的范围之内。如本文及所附权利要求书所用，词语的单数形式包括复数，反之亦然，除非上下文另外明确规定。因此，提及“一个”、“一种”和“该”通常包括相应术语的复数形式。例如，提及“一只猫”、“一种方法”或“一种产品”，包括多只这种“猫”、多种此类“方法”或多种此类“产品”。与此类似，词语“包括”、“包含”和“含有”都作包含性而非排他性地解释。同样地，术语“包括”、“包含”和“或”都应当视为包含性的，除非上下文明确禁止这一解释。本文使用“例子”或“例如”时，尤其是其后跟着术语罗列时，仅为示例性和说明性的，并且不应视为排他的或详尽的。术语“包含”旨在包括术语“基本上由…组成”和“由…组成”所涵盖的实施方案。与此类似，术语“基本上由…组成”旨在包括术语“由…组成”所涵盖的实施例。在此公开的方法、组合物和其他进展不限于本文所述的具体方法、方案及试剂，因为正如本领域的技术人员将认识到的，这些具体方法、方案及试剂可改变。此外，本文所用的术语只出于描述具体实施方案的目的，并非旨在限制、也不会限制本文公开或受权利要求书保护的范围。除非另外定义，否则本文使用的全部科技术语、专门术语及首字母缩略词都具有本发明所属领域或使用这些术语的领域的普通技术人员所通常理解的含义。虽然在本发明的实施中可使用任何与本文所述那些组合物、方法、制品或者其他手段或材料类似或等效的组合物、方法、制品或者其他手段或材料，但本文描述了优选的组合物、方法、制品或者其他手段或材料。本文中引述或提及的所有专利、专利申请、出版物和其他参考文献都在适用法律允许的范围内以引用方式并入本文。对这些参考文献的论述仅旨在总结其中作出的论断。我们并不承认任何这些专利、专利申请、出版物或参考文献或它们的任何一部分是相关的、实质性的或为现有技术；并特别保留质疑这些专利、专利申请、出版物及其他参考文献是相关的、实质性的或为现有技术的任何断言的准确性和相关性的权利。本发明的实施方案提供了用于减少或消除环境中的猫变应原Feld1的组合物、方法、制品、套装和包装。本发明部分地源自于本发明人的以下发现：某些酶、特别是蛋白水解酶(蛋白酶)能够降解Feld1的抗原表位，从而减弱或消除其变应原性效应。本发明的一个方面特征在于一种用于减弱或消除Feld1变应原性的制剂，所述制剂包含与Feld1相互作用并大幅降解Feld1上的变应原表位的至少一种蛋白酶。有效的蛋白酶选自丝氨酸蛋白酶、硫醇蛋白酶、天冬氨酰蛋白酶、锌金属蛋白酶，或它们的任何组合。在某些实施方案中，丝氨酸蛋白酶包括枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶、内切蛋白酶Glu-C和内切蛋白酶Lys-C。如果使用枯草杆菌蛋白酶，则其可来源于选自以下的芽孢杆菌(Bacillus)物种：地衣芽孢杆菌、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、耐盐芽孢杆菌(B.haloudurans)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)、枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，或它们的任何组合。硫醇蛋白酶可包括菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶，它们获自植物来源，例如，菠萝、木瓜和无花果植物。天冬氨酰蛋白酶可包括牛凝乳酶、内座壳属胃蛋白酶(例如，源自栗疫病菌(Chryphonectriaparasitica))、毛霉菌胃蛋白酶/凝乳酶(例如，源自米黑毛霉(Mucormiehei))、胃蛋白酶(例如，猪源)和曲霉胃蛋白酶(例如，源自里氏木霉(Trichodermareesei)、黑曲霉(Aspergillusniger)或米曲霉(Aspergillusoryzae))。锌金属蛋白酶可包括嗜热菌蛋白酶(例如，源自六甲嗜热溶蛋白芽孢杆菌(Bacillusthermoproteolyticusrokko)或地芽孢杆菌属物种(Geobacillussp.))和内切蛋白酶Asp-N(例如，源自脑膜炎败血性黄杆菌(Flavobacteriummeningosepticum))。下表1示出了适用于本发明的蛋白酶。蛋白酶可自生物来源纯化或者可获自商业来源。该表中示出了某些示例性商业来源；还可使用许多其他商业来源。表1(G)＝杜邦工业生物科技(DupontIndustrialBioscience)(前身为杰能科公司(Genencor))；(NZ)＝诺维信公司(Novozymes)；(CH)＝丹麦汉森集团公司(ChristianHansenA/S)在某些实施方案中，制剂中的蛋白酶或蛋白酶组合在如实施例中所述适用于蛋白酶或其组合的条件下将结合于抗Feld1抗体的Feld1减少至少50％，如通过用于检测抗原和/或抗原表位的存在或抗原与Feld1特异性抗体的结合的ELISA、SDS-PAGE或任何其他已知方法中的一者或多者所测量。例如，蛋白酶可包括以下中的一种或多种：枯草杆菌蛋白酶、蛋白酶K、α-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、内切蛋白酶Lys-C、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、凝乳酶、内座壳属胃蛋白酶、毛霉菌胃蛋白酶/凝乳酶、胃蛋白酶、曲霉胃蛋白酶、嗜热菌蛋白酶和内切蛋白酶Asp-N。更具体地讲，制剂中的蛋白酶或蛋白酶组合在如实施例中所述适用于蛋白酶或其组合的条件下将结合于抗Feld1抗体的Feld1减少至少90％，如通过用于检测抗原和/或抗原表位的存在或抗原与Feld1特异性抗体的结合的ELISA、SDS-PAGE或任何其他已知方法中的一者或多者所测量。例如，蛋白酶可包括以下中的一种或多种：枯草杆菌蛋白酶(例如，源自地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、克劳氏芽孢杆菌(B.clausii)、迟缓芽孢杆菌(B.lentus)、解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)和/或枯草芽孢杆菌(B.subtilis))、胰蛋白酶(例如，猪的)、α-胰凝乳蛋白酶(例如，牛的)、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶、凝乳酶(例如，牛的)、内座壳属胃蛋白酶、毛霉菌胃蛋白酶/凝乳酶、胃蛋白酶、曲霉胃蛋白酶(例如，源自里氏木霉(Trichodermareesei)、黑曲霉(Aspergillusniger)或米曲霉(Aspergillusoryzae))、嗜热菌蛋白酶和内切蛋白酶Asp-N。在某些实施方案中，蛋白酶包括以下中的一种或多种：木瓜蛋白酶、源自地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)的枯草杆菌蛋白酶、源自米曲霉的曲霉胃蛋白酶、内切蛋白酶Asp-N、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶、源自栗疫病菌(Cryphonectriaparasitica)的内座壳属胃蛋白酶、胃蛋白酶以及源自地芽孢杆菌(Geobacillussp.)的嗜热菌蛋白酶。在特定实施方案中，蛋白酶包括以下中的一种或多种：木瓜蛋白酶、源自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶、源自米曲霉的曲霉胃蛋白酶以及内切蛋白酶Asp-N。本发明人已确定某些蛋白酶可特别适用于包含醇或某些洗涤剂的组合物。例如，在某些实施方案中，在如针对表2中相应酶类别所述的反应条件下，在存在至多7.5％异丙醇的情况下，蛋白酶或蛋白酶组合将结合于抗Feld1抗体的Feld1减少至少50％。这些蛋白酶可包括以下中的一种或多种：无花果蛋白酶、菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶、源自米曲霉的曲霉胃蛋白酶或内切蛋白酶Asp-N。在其他实施方案中，在如表2中所述的反应条件下，在存在至多10％非离子洗涤剂例如聚山梨醇酯20(20)的情况下，蛋白酶或蛋白酶组合将结合于抗Feld1抗体的Feld1减少至少50％。这些蛋白酶可包括以下一种或多种：源自米曲霉的曲霉胃蛋白酶、内切蛋白酶Asp-N、源自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶。我在想范围应该更广？该制剂还可包含增强酶在降解Feld1方面效力的添加剂。在某些实施方案中，该添加剂为半胱氨酸或钙盐/钙离子(Ca2+)、或半胱氨酸与钙盐/钙离子的组合、或原位形成半胱氨酸或钙盐/钙离子的化合物。在各种实施方案中，将制剂置于选自例如以下的组合物内：液体、固体或粉末清洁剂、喷雾剂、湿布、擦拭物、海绵、水溶性片剂、过滤器、食物、油或水补充剂、真空清洁器过滤器或添加剂、颗粒、洗涤剂、地毯与房间除臭剂、猫砂、猫砂添加剂、手套、非织造产品的添加剂、洗衣机荚包(片剂)、多室液体片剂。另外，可将制剂置于口服制剂中。在一个方面，可将制剂置于玩具(例如猫玩具，包括可食用和不可食用玩具)内。在某些实施方案中，制剂可包括颗粒、粉剂或片剂，其在使用前用液体(例如，水、缓冲液或其他液体)进行重构。在其他实施方案中，制剂可包含可施加到表面或动物身上的液体或喷雾剂。优选地，喷雾剂不会雾化。可根据本领域已知的方法制备不雾化的合适喷雾剂。在某些实施方案中，制剂包含被公认为可安全用于食物和化妆品的酶。此类制剂特别适用于皂、香波、泡沫/摩丝、粉剂、喷雾剂、调理剂、护毛素、凝胶、洗剂、颈圈、分散剂、湿手套、擦拭物、洁牙剂和/或漱口液，或适用于施加到皮肤、毛发、毛皮或口腔的、或置于可食用组合物内的、或配制用于添加到任何此类组合物中的任何其他组合物。在某些实施方案中，蛋白酶与包括角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白、纤连蛋白、其他蛋白质和纤维或织物(衣物、地毯、内饰、窗帘和寝具中)的物质基本上没有相互作用。对此类蛋白质没有活性的合适蛋白酶包括但不限于木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。在其他实施方案中，蛋白酶可对角蛋白有活性，并且可用于降低在用香波清洗宠物时会发生的角蛋白积聚。例如，已发现菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、曲霉胃蛋白酶、内座壳属胃蛋白酶、某些枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、内切蛋白酶Asp-N和α-胰凝乳蛋白酶降解角蛋白(实施例2)。本发明的另一个方面特征在于一种用于减弱或消除Feld1变应原性的制剂的制备方法。一般来讲，该方法包括将至少一种蛋白酶与一种介质组合，所述蛋白酶与Feld1相互作用并大幅降解Feld1上的变应原表位，在所述介质中蛋白酶有活性或可在使用前变成活性的。该介质可为满足上述要求的任何介质，包括但不限于液体、固体、颗粒、粉末、湿布、擦拭物、手套、海绵、水溶性片剂、过滤器、食物、膳食补充剂、饮料、添加到食物和饮料的浓缩物、真空清洁器过滤器或添加剂、洗涤剂、地毯、内饰与房间除臭剂、猫砂、猫砂添加剂、手套、洗衣机荚包(片剂)，仅举几例。蛋白酶可包括上述讨论的任何蛋白酶或它们的任何组合，其含量适于在制剂与环境中(猫周围、猫身上或猫体内)Feld1接触期间充分降解Feld1，以抑制其结合于抗Feld1抗体。例如，旨在施加到环境并在之后不久(例如，数分钟或数小时内)清除的制剂，诸如清洁剂、宠物香波或口腔产品，应包含在该时间段内足以降解Feld1的蛋白酶浓度。实施例中所讨论的动力学分析提供了实现这种结果的蛋白酶浓度范围。例如，人工猫唾液中的木瓜蛋白酶和源自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶的动力学分析表明，在正常猫唾液条件下，超过80％的Feld1在5分钟内被4.5mgmL-1的木瓜蛋白酶降解，以及被9.5mgmL-1的枯草杆菌蛋白酶降解。旨在长时间(例如，若干小时或整夜)保留的制剂，诸如内饰或织物喷雾剂或免洗摩丝、凝胶、香波或喷雾剂，将需要较小浓度的蛋白酶。本领域的技术人员可通过本领域已知的任何方法测量Feld1降解。例如，可通过ELISA和/或SDS-PAGE，或它们的组合来测量Feld1的降解。在一个具体的实施方案中，使用ELISA测定法测定在接触蛋白酶后Feld1结合于Feld1特异性抗体的量。在一个实施方案中，使用标准蛋白酶测定法来测量蛋白酶活性并将其标准化。使用这种测定法，可在全部蛋白酶和测定条件中标准化蛋白酶活性。典型的蛋白酶活性测定体系包括蛋白酶底物和适于支持蛋白酶活性的缓冲液，并且还可包括对于蛋白酶活性有用的稀释剂或溶剂以及其他试剂(例如，半胱氨酸)。通常，底物被设计为使得底物被蛋白酶裂解生成可检测的产物。例如，一种类型的蛋白酶测定法利用蛋白质例如酪蛋白，该蛋白质经衍生化而包含荧光团，该荧光团被淬灭，直到蛋白酶裂解该蛋白质。在被蛋白酶裂解后，将荧光团与淬灭剂分离并产生可定量检测的荧光信号。其他类型的蛋白酶活性测定法也是适用的。例如，测定法可利用琥珀酰化蛋白质如酪蛋白作为底物。在存在蛋白酶的情况下该底物的水解释放出具有游离末端氨基的肽片段。将这些肽与三硝基苯磺酸(TNBS)反应，然后测量因形成黄色TNB-肽加合物所致的吸光度增量。由蛋白酶测定法测定的酶活性通常可表达为每秒内的相对产物单位，并且被归一化为酶制剂的量(rpus-1g-1)。就基于荧光的测定法如上述测定法而言，酶活性可表达为每秒内的相对荧光单位，并且被归一化为酶制剂的量(rfus-1g-1)。该方法包括将必需量的蛋白酶与介质组合。制剂中的蛋白酶含量将取决于其是以“即用”形式制备，还是制备成供随后稀释的浓缩物。本发明的另一个方面特征在于一种减少或消除环境中变应原性Feld1的方法。该方法包括使存在Feld1的环境的要素与包含至少一种蛋白酶的制剂接触，所述至少一种蛋白酶与Feld1相互作用并大幅降解Feld1上的变应原表位，从而减少或消除环境中的变应原性Feld1。在某些实施方案中，环境是“猫周围”。在一个实施方案中，Feld1存在于无生命表面上，并且将制剂施加到该表面。通常的表面可包括柜台、地板、墙壁、家具、内饰和衣物，仅举几例。在另一个实施方案中，Feld1是空气传播的，并且制剂与空气接触。例如，可将制剂置于空气穿过其的过滤器内，诸如风扇、加热器或空调的空气过滤器、或真空清洁器过滤器。在其他实施方案中，环境是“猫身上”，并且将制剂施加到其上存在Feld1的动物的部分。例如，Feld1可存在于动物的毛发、毛皮或外皮上，或存在于动物毛发、毛皮或皮肤上所留的唾液中。在其他实施方案中，环境是“猫体内”，通常在产生含Feld1唾液的动物口腔中，并且将制剂作为洁牙剂、清洗剂、食物、零食、薄膜或条状泡沫或喷雾剂或饮料施加。本发明的另一个方面特征在于一种制品(本文也称为“产品”)，该制品包含一种制剂，该制剂包含与Feld1相互作用并大幅降解Feld1上的变应原表位的至少一种蛋白酶，以及将该制品用于减少或消除环境中的变应原性Feld1的使用说明。在一个实施方案中，该产品可被配制为用于施加到无生命表面的液体、固体或粉末清洁剂、喷雾剂、湿布、擦拭物、海绵、水溶性片剂、洗涤剂、地毯或织品除臭剂、猫砂、猫砂添加剂、手套、非织造或织造产品的添加剂、洗衣机荚包(片剂)、多隔室液体片剂。在另一个实施方案中，该产品可被配制为用于接触空气传播Feld1的空气过滤器添加剂。在其他实施方案中，该产品被配制用于施加或施用到产生Feld1的动物。例如，该产品可被配制为用于施加到动物毛发、毛皮或外皮的香波、调理剂、清洗剂、摩丝、凝胶、喷雾剂、洗液或粉剂。备选地，该产品可被配制为用于施加到动物口腔的洁牙剂、食物、零食、或动物食物或水的添加剂。本文所公开的此类产品和制品可有效使环境中的Feld1失活。在一个实施方案中，这些产品和/或制品可使其相应环境中的Feld1减少或失活至少10％。在一些方面，Feld1可被这些产品和/或制品失活至少50％。在其他方面，Feld1可被失活至少1％、5％、15％、20％、30％、40％、60％、70％、80％、90％或甚至至少95％。在某些实施方案中，该产品包括用于减弱或消除猫变应原Feld1的变应原性的食物或其他可食用组合物。在一个实施方案中，食物产品是含有包含蛋白酶的制剂的干燥宠物食物或宠物零食。例如，可通过以下方式施加制剂：在包装或运输之前将制剂撒在或涂布在干燥食物组合物上。由于食物产品是干燥的，可在运输和保存期间保留蛋白酶的活性。制剂还可被提供为在喂食之前溶解的浓缩物，或包含粉末状或颗粒状蛋白酶制剂的小袋或小包，所述蛋白酶制剂可喷洒在食物组合物上或混合在水或其他液体饮料中。制剂可提供为液体制剂，所述液体制剂例如可直接施加到食物组合物(干燥、潮湿或适中)或施加到水或其他液体饮料。在另一方面，本发明提供了用于减弱或消除猫变应原Feld1的变应原性的套装。一般来讲，这些套装包括一种上述含蛋白酶的制剂以及将其用于清除环境中变应原性Feld1的使用说明。在一个实施方案中，该套装包括用于从猫周围的环境(如无生命物体的表面)清洁或以其他方式清除Feld1的组合物。这些套装包括例如液体、固体或粉末清洁剂、喷雾剂、湿布、擦拭物、海绵、地毯与房间除臭剂、颗粒或洗涤剂以及使用说明，所述组合物包含降解Feld1的制剂。在某些实施方案中，蛋白酶制剂可以浓缩形式提供，并且说明书将包含关于稀释的指导。在其他实施方案中，提供了多组分套装。例如，清洁套装可包括一个容器中的清洁剂和另一个容器中的蛋白酶制剂，并且说明书可指导用户如何在使用之前将各组分组合。此类实施方案在以下情况下可特别有利：制剂中的蛋白酶对清洁剂中的成分较敏感，使得它们在长时间接触清洁剂时会失活。同样，套装可包括用于洗涤织物的组合物诸如液体、固体或粉末、水溶性片剂或洗衣机荚包(片剂)以及使用说明，所述组合物包含降解Feld1的制剂。在另一个实施方案中，套装包括包含空气过滤器(如真空清洁器过滤器)或降解Feld1的制剂的添加剂以及使用说明。在这些实施方案中，蛋白酶制剂同样可以浓缩形式提供，并且说明可包含关于稀释的指导。在其他实施方案中，提供了多组分套装。例如，洗衣套装可包括一个容器中的衣物洗涤剂和另一个容器中的蛋白酶制剂，并且说明书指导用户如何在使用之前将各组分组合。空气过滤器套装可包括空气过滤器和蛋白酶制剂，以及用于将这两者组合以减少或消除空气传播Feld1的说明。在另一个实施方案中，套装包括“猫身上”例如毛皮、毛发或皮肤的处理剂。此类套装可包括适用于施加到皮肤、毛发或毛皮的、或被配制用于添加到任何此类组合物的皂、香波、粉剂、喷雾剂、调理剂、清洗剂、摩丝、凝胶、洗剂、颈圈、分散剂或湿手套或擦拭物，以及使用说明。含蛋白酶的制剂可包含于毛皮/毛发处理组合物内，或其可单独地作为浓缩物或以其他方式提供，并且在使用之前与毛皮/毛发处理剂混合。这些套装还可包含各毛皮/毛发处理剂的组合。例如，套装可包括用于擦拭毛皮的手套或布料以及液体蛋白酶制剂。说明可提供关于如何用液体浸渍手套或布料并将其施加到猫的指导。又如，套装可包括香波和清洗剂、喷雾剂、凝胶或摩丝，其中香波是不包含蛋白酶制剂的标准宠物香波，并且清洗剂、喷雾剂、凝胶或摩丝包含蛋白酶制剂。在另一个实施方案中，套装包括口腔组合物诸如液体、固体或粉末、湿布、擦拭物、洁牙剂或漱口液以及使用说明，所述组合物包含适用于施加到口腔的、或被配制用于添加到任何此类组合物的降解Feld1的制剂。在另一个实施方案中，套装包括包含水溶性片剂的牙科套装，该水溶性片剂可例如通过溶解于饮用水中来施用给动物。在另一个实施方案中，套装包括附属于食物组合物(如宠物食物包装)或推荐与食物组合物(如宠物食物包装)一起使用的、小袋或小包中的本文所述组合物的可食用形式，以及以下说明：将可食用组合物混合到食物中，将组合物添加到食物中，或将组合物溶解、混合或添加到流体如饮用水中，所述流体将施用给接受食物的动物。在另一个实施方案中，套装包括包含降解Feld1的制剂的至少一种本文所述的食物组合物以及使用说明。在另一种套装中，提供了组合物的浓缩形式，并且还提供了一种工具或装置，该工具和装置用于方便地测量合适量的浓缩物，以便与待提供给动物的食物或流体混合，添加到待提供给动物的食物或流体中，或用待提供给动物的食物或流体稀释或溶解。在一种套装中，可食用形式的组合物以适当的剂量提供于一系列相同包装中，使得在不需要测量的情况下将一个包装的组合物添加到一个包装(例如，罐)的宠物食物中。可提供此类套装，使得对于销售点包装中的每个包装的宠物食物，提供一个包装的降解Feld1的制剂。例如，将十二罐食物和十二个包装的组合物一起打包在单个套装中。在任何上述实施方案中，套装可包括浓缩形式或其他形式的组合物、使用说明(如果需要，包括用于制备合适稀释液的说明)以及任选地以下中的一者或多者：稀释剂或增量剂、用于制备合适稀释液的工具或测量装置、以及施加器诸如喷雾器、撒粉器、擦拭物等。此类套装对被配制用于处理表面、用于处理环境中的空气或以外用组合物处理动物的组合物可以是有用的。对于所有此类套装，套装可包括装置、施加器、稀释器等，其为自动化的或自动地进行组合物的定量给料、稀释、混合、添加或施加以用于适当的用途。对于本文所述的任何套装，它们可作为小袋提供或与其他产品捆绑以便达到使用和购买的最大便利性、符合性和效率。因此，套装可包括宠物用的任何或所有食物、宠物寝具、宠物用的香波或化妆品、宠物用的药物，或与其捆绑。还可将任何上述套装及其他套装作为虚拟套装提供。当该套装包括虚拟包装时，该套装在虚拟环境中结合一种或多种物理套装组成部分(诸如上述那些)提供说明。该套装包含至少一种本文所述的组合物和其他组成部分，包括任选的组成部分。该套装可包含多种组合和/或混合物形式中的任意形式的套装组成部分。在一个实施方案中，该套装包括含有一种或多种组合物的小包和供动物食用的食物的容器。该套装可包含额外的用品，诸如用于混合组合物和成分的装置或用于容纳混合物的装置，例如食物碗。在另一个实施方案中，将组合物与促进动物良好健康的额外的营养补充剂(诸如维生素和矿物质)混合。在为购买者提供的虚拟环境中提供另外的信息和说明—即至网站、回传传真服务器或包括的计算机可读装置(如CD-ROM)和/或装置的应用程序(“app”)的指示。在另一个方面，本发明提供了通信方法，或用于以下一项或多项中的有关信息或说明的通信方法：用于降低环境中变应原性Feld1的变应原性或减少环境中变应原性Feld1的量的本文所述的制剂、方法、组合物、制品、产品和/或套装。在各种实施方案中，该信息涉及本发明的制剂、组合物、制品或产品。在其他实施方案中，该信息涉及可用于实践本文所述的本发明的方法或套装。在其他实施方案中，该信息涉及任何上述内容的组合。通信方法包括以下中的一种或多种：文本信息、音频信息、静态或动态图像，包括动画或视频。在各种实施方案中，通信方法包括以下中的一种或多种：打印的文件，静态或动态电子文件(例如超文本文件)，计算机可读或数字存储介质(包括但不限于任何类型的电子、光学或磁性介质)，音频信息，音频、视听或视觉显示或呈现，或以任何方式编码的视频信息，其中通信方法显示或包含包括任意上述内容的信息或说明。在某些实施方案中，通信方法包括网址、FAQ(常见问题)页面或文件、电子文件或相同或不同类型的两种或更多种电子文件的集合、电子邮件或电子邮件文件、视觉显示、信息亭(kiosk)、宣传册、广告、包装或产品标签、包装或产品插页、分发的印刷品、公告、录音磁带或在任何机器可读或计算机可读介质中体现的电子音频文件、录像带、录像盘、或在任何机器可读或计算机可读介质中体现的电子视频文件、DVD、CD-ROM、app等，或上述包含这类信息或说明的任何组合。可用信息包括以下中的一种或多种：(1)用于组合和施用变应原特异性分子和/或其他组分的方法和技术；(2)如果对有关套装、组合物或其应用有问题，提供给变应性动物或其监护人或护理者使用的联系信息；(3)任何套装中提供的关于食品组合物和其他组分的营养信息；(4)安全信息，包括例如应急信息，和发生不良反应情况时的另外联系方式，毒物控制，材料数据安全页；(5)用于再订购的信息，例如通过自动执行系统；(6)关于变态反应、环境变应原的一般信息以及用于将特异性环境变应原减少到最低限度或消除它们的方法。可用的说明可包括混合的量、施用量和施用频率。通信方法可用于对使用本发明的益处进行指导，并将经批准的施用本发明的方法传达给动物。本发明的另一个方面提供一种包装，所述包装包括本文所述的制剂、组合物、产品和/或套装中的任何一种或多种。该包装上附着有标签，该标签包含表示包装内含物包含用于减少或消除环境中变应原性Feld1的蛋白酶制剂的文字、图片、符号、设计、缩写字、标语、短语或其他装置或它们的组合(标签“装置”)。实施例可通过以下实施例进一步说明本发明的各个方面。应当理解，除非另外指明，否则提供这些实施例仅出于举例说明目的，而并非限制本文公开的本发明范围。实施例1测试了与化学试剂(诸如半胱氨酸)相组合的一组32种蛋白酶降解Feld1的能力。虽然不希望受限于具体机理，但酶催化的Feld1失活的基本原理是确定哪些蛋白酶可降解Feld1，使得IgE抗体不能识别并结合于Feld1，从而导致无法产生免疫应答和变态反应。候选蛋白酶选自若干不同的蛋白酶家族，包括丝氨酸蛋白酶、硫醇蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶和锌金属蛋白酶。为了标准化活性并确定每种候选蛋白酶的最佳反应条件，使用购自加利福尼亚州卡尔斯巴德的英杰公司(Invitrogen,Inc.(CarlsbadCA))的蛋白酶测定试剂盒(绿色荧光)，该试剂盒基于作为底物的酪蛋白，该酪蛋白经衍生化而包含荧光团，对其进行淬灭直到该荧光团被蛋白酶裂解。由蛋白酶测定法测定的酶活性表达为每秒内的相对荧光单位，并且被归一化为酶制剂的量(rfus-1g-1)。为了确定不同类别的酶的适当反应条件，在37℃下测试了不同缓冲液和pH条件。表2提供了具有最佳表现的缓冲液pH，以及由蛋白酶测定法所测定的单位量的蛋白酶制剂(g-1)的活性(每秒内的荧光增量，rfus-1)。大多数所测试蛋白酶(丝氨酸蛋白酶、硫醇蛋白酶和锌金属蛋白酶)在pH7.8的反应缓冲液中表现出最佳活性。天冬氨酸蛋白酶在pH4.0或pH6.0下活性最佳。通过添加钙盐/钙离子(Ca2+)来活化一些丝氨酸和天冬氨酸蛋白酶。当向反应缓冲液中添加半胱氨酸时，硫醇蛋白酶具有显著更大的活性。在蛋白酶测定法中，在所测试条件下，内切蛋白酶Lys-C是唯一无活性的蛋白酶。为了表征Feld1降解，将不同浓度的候选蛋白酶与Feld1一起在37℃下温育过夜(约18小时)，然后通过凝胶电泳(非还原条件下的SDS-PAGE)分离蛋白质，并进行染色。用于测试Feld1降解的一般反应混合物包含2.5μg的天然Feld1(nFeld1，天然Feldd1购自室内生物技术公司(IndoorBiotechnologies)(LTN-FD1-1))和不同浓度的候选蛋白酶，总反应体积为20μl(Feld1终浓度为125μgmL-1)。据报道，Feld1是由两个18kDa异源二聚体形成的35kDa四聚糖蛋白。因此，通过约18kDa的Feld1蛋白质条带消失的程度来评估Feld1降解。对于大多数蛋白酶，将条件优化为用最小蛋白酶活性来促进Feld1的完全降解。对于所有所测试蛋白酶，基于SDS-PAGE凝胶上Feld1条带的不存在来评估在20μL的缓冲液(具有对于相应蛋白酶而言的最佳pH)中完全降解2.5μgFeld1所需的最小活性(rfus-1)以及对应酶量(μg)。结果汇总于表2中。表2：蛋白酶的表征和活性a生物体的缩写名称：地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefaciens)、迟缓芽孢杆菌(Bacilluslentus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、栗疫病菌(Cryphonectriaparasitica)、六甲嗜热溶蛋白芽孢杆菌(Bacillusthermoproteolyticusrokko)b制造商数据表上指出的蛋白酶批次的活性。活性(单位为Ug-1)由不同方法测定，因此不能直接比较c通过蛋白酶测定法(英杰公司(Invitrogen)，E6638)所测定的单位量的蛋白酶制剂(g-1)的活性(每秒内的荧光增量，rfus-1)d通过蛋白酶测定法测定具有最高活性的反应缓冲液的pH。Ca，添加钙。Cys，添加半胱氨酸e通过SDS-PAGE测定的在20μL反应混合物中完全降解2.5μg天然Feld1所需的蛋白酶制剂的最小活性(通过在蛋白酶测定法中测定(单位为rfus-1))和对应量(单位为μg)(详情请见正文)。f由制造商补充的缓冲液用于蛋白酶测定法以及用于Feld1降解测试了各种丝氨酸蛋白酶候选物降解Feld1的能力。例如，测定了源自地衣芽孢杆菌(bl)的枯草杆菌蛋白酶(2.4L，丹麦巴格斯韦德的诺维信公司(NovozymesA/SBagsvaerd,Denmark))的Feld1蛋白酶解活性。将天然Feld1(1.9μg)与0.1、1或10rfus-1的bl枯草杆菌蛋白酶一起在37℃下于20μL的Tris/HCl缓冲液(200mM，pH7.8)或醋酸铵缓冲液(100mM，pH4.0)中温育过夜。使用不含Feld1的枯草杆菌蛋白酶(10rfus-1)和不含枯草杆菌蛋白酶的Feld1充当对照。根据SDS-PAGE和染色所测定，在Tris/HCl缓冲液中Feld1被10rfus-1的bl枯草杆菌蛋白酶完全降解，而在醋酸铵缓冲液条件中则没有被10rfus-1的bl枯草杆菌蛋白酶完全降解(图1)。这些实验表明，在20μLTris/HCl缓冲液中完全降解1.9μgFeld1所需的bl枯草杆菌蛋白酶的最少量为1-10rfus-1(0.04-0.42μg)。还评估了源自克劳氏芽孢杆菌(bc)的枯草杆菌蛋白酶(16.0L，16.0L，诺维信公司(Novozymes))和源自耐盐芽孢杆菌(bh)的枯草杆菌蛋白酶(8.0L，诺维信公司(Novozymes))，以测定降解Feld1所需的蛋白酶的最少量。在这些实验中，将天然Feld1(2.5μg)与100或1000rfus-1的相应枯草杆菌蛋白酶一起在37℃下于20μL磷酸钠缓冲液(100mM，pH7.8)中温育过夜。使用不含Feld1的蛋白酶(1000rfus-1)和不含蛋白酶的Feld1充当对照。在20μL中降解2.5μgFeld1所需的相应蛋白酶的最少量示于表2中。测定了分别源自可食用植物菠萝、木瓜和无花果树的植物硫醇蛋白酶菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶对Feld1的降解。对于SDS-PAGE实验，将天然Feld1(2.5μg)与不同量的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶或无花果蛋白酶一起在37℃下于包含40mM半胱氨酸的磷酸钠缓冲液(100mM，pH7.8)中温育过夜。使用仅含半胱氨酸的缓冲液、不含半胱氨酸的缓冲液中不含Feld1的酶，以及不含酶的Feld1(含和不含半胱氨酸)充当对照。根据SDS-PAGE和染色所测定，硫醇蛋白酶菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶全都能够完全降解Feld1。如表2中所示，通过蛋白酶测定法测定的菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶的最佳条件包括在存在半胱氨酸的情况下pH为7.8。具体地讲，根据蛋白酶测定法所测定，添加40mM半胱氨酸将菠萝蛋白酶、木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶每一者的活性分别提高至270、60和460倍。表2示出了在20μL含半胱氨酸的缓冲液中降解2.5μgFeld1所需这些蛋白酶的最少量。另外，源自栗疫病菌的天冬氨酸蛋白酶内座壳属胃蛋白酶(丹麦霍什奥尔姆的科汉森公司(Chr.Hansen,Denmark))和牛源凝乳酶(丹麦霍什奥尔姆的科汉森公司)在存在钙盐/钙离子(Ca2+)的情况下均在pH4.0下具有最佳活性(表2)。将天然Feld1(2.5μg)与0.1、1或10rfus-1的蛋白酶一起在37℃下于20μl包含10mM氯化钙的醋酸铵缓冲液(100mM，pH4.0)中温育过夜。使用不含Feld1的缓冲液和不含酶的Feld1在本实验中充当对照。表2示出了这两种天冬氨酸蛋白酶在20μL缓冲液中降解2.5μgFeld1最少所需的蛋白酶量。测试了一些候选蛋白酶在37℃下于20μL最佳反应缓冲液中在短温育时间点内(通过在一小时或两小时后添加蛋白酶抑制剂来终止反应)降解2.5μg天然Feld1的能力。通过SDS-PAGE、接着进行染色，使反应可视化。据发现，当使用1mM苯甲基磺酰氟(PMSF)作为抑制剂时，50rfus-1(2.1μg)的bl枯草杆菌蛋白酶(2.4L)足以在一小时温育内完全降解Feld1。此外，当使用10μME64作为抑制剂时，在一小时温育后，600rfus-1(0.93μg)的木瓜蛋白酶降解了大部分Feld1。500rfus-1(171μg)的源自地芽孢杆菌属物种的嗜热菌蛋白酶(14L，杜邦工业生物科技)足以在整夜温育后完全降解2.5μgFeld1，但当使用10mM乙二胺四乙酸(EDTA)作为抑制剂时，在两小时温育后仅发生部分降解。使用蛋白酶抑制剂的动力学研究表明，通过提高蛋白酶浓度通常可在更短时间内实现Feld1的完全降解。同样，通过提高蛋白酶浓度，可降解更大量的Feld1。总而言之，由使用32种蛋白酶候选物的组的Feld1蛋白酶解实验得出的结果表明，来自所有类别的蛋白酶都能够完全降解Feld1。如表2中所示，候选蛋白酶表现出不同程度的Feld1降解活性。大多数候选蛋白酶能够以小于100rfus-1的活性在20μL中降解2.5μgFeld1。接下来，通过ELISA测定蛋白酶解后Feld1特异性抗体识别并结合Feld1的能力。天然Feld1和Feld1特异性抗体购自威尔士卡蒂夫的室内生物技术公司(IndoorBiotechnologiesLtd(Cardiff,Wales))。ELISA条件被确定为使得可在0.3至12ngmL-1的浓度范围内可靠定量天然Feld1。将如图2所示的各种候选蛋白酶以实现完全降解Feld1的最小所需活性与Feld1(2.5μg)一起在20μL最佳缓冲液中温育过夜(参见表2中报告的优化条件)。将样品稀释成12ngmL-1最终理论Feld1浓度(初始底物浓度)，并在两个不同测定读取时间点(20和30分钟)处通过ELISA进行分析。将Feld1与候选蛋白酶一起温育后，使用涂布有抗Feld1抗体的平板捕获Feld1。然后，添加结合Feld1的酶联检测抗体，接着添加底物，该底物被酶促转化为可检测信号。在蛋白酶降解Feld1使得结合于抗Feld1抗体所需的Feld1表位不再存在和/或不再可及的情况下，抗Feld1抗体将不再结合Feld1并且ELISA不会检测到信号。作为验证蛋白酶活性不干扰ELISA测定法的对照，重复ELISA，但添加规定量的Feld1。对所有所测试蛋白酶进行上述SDS-PAGE实验，以确认Feld1降解和ELISA结果。结果示于图2中。可以看出，用以下中的几种实现了Feld1结合于Feld1特异性抗体的完全抑制：枯草杆菌蛋白酶丝氨酸蛋白酶以及胰蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶；硫醇蛋白酶木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶；天冬氨酸蛋白酶毛霉菌胃蛋白酶/凝乳酶、胃蛋白酶、曲霉胃蛋白酶、内座壳属胃蛋白酶和凝乳酶；以及锌金属蛋白酶嗜热菌蛋白酶(源自地芽孢杆菌)和内切蛋白酶Asp-N。可通过提高这些蛋白酶中几种其他蛋白酶的浓度，实现Feld1的完全降解。SDS-PAGE进一步确认这些蛋白酶降解了Feld1。ELISA和SDS-PAGE实验一起证实了抗体结合与Feld1降解相关联。对于所有所测试蛋白酶，由SDS-PAGE估计的Feld1降解的程度对应于由ELISA测定的残余Feld1浓度。虽然不希望受限于具体机理，但这些结果表明，Feld1降解产物不再包含结合于Feld1特异性抗体的表位，并且蛋白酶催化的Feld1降解使得Feld1与表位特异性Feld1抗体的结合受抑制。因此，预计蛋白酶引起的Feld1降解可抑制IgE介导的变态反应。大多数所测试蛋白酶能够完全降解Feld1，并抑制所得降解产物与表位特异性抗体的结合。来自这些实验的能够完全降解Feld1的代表性蛋白酶(下文中称为“目标”蛋白酶)包括木瓜蛋白酶、源自地衣芽孢杆菌的枯草杆菌蛋白酶(bl枯草杆菌蛋白酶，6L)、源自米曲霉的曲霉胃蛋白酶(ao曲霉胃蛋白酶，50FP)、内切蛋白酶Asp-N、菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、α-胰凝乳蛋白酶、源自栗疫病菌的内座壳属胃蛋白酶(cp内座壳属胃蛋白酶，)、胃蛋白酶以及源自地芽孢杆菌属物种的嗜热菌蛋白酶(14L)。表3汇总了这些“目标”蛋白酶的特性，详情提供于以下实施例中。表3：“目标”蛋白酶性能汇总aa在所有测试中，在最适条件下使用最少所需蛋白酶浓度，以降解125μgmL-1的Feld1(参见表2)并在37℃下温育过夜。b蛋白酶对角蛋白的水解作用通过如下两种方法测定：以苯胺蓝角蛋白作为替代底物，或直接作用于角蛋白，而水解产物通过TNBS测定法测定(数据提取自图12)。作用于苯胺蓝角蛋白的活性测定为最大可水解底物量的百分比。TNBS测定法中的活性通过所形成的偶联产物在405nm下的吸光度来确定。实验详情参见正文。c在存在蛋白酶的情况下角质细胞的活力按照正文中所述来测定。应用两种不同的celltox染色方法(WST-1和磺酰罗丹明B)，并且将活力测定为未用蛋白酶温育的角质细胞活力的百分比。d蛋白酶对纤维素的水解作用以苯胺蓝纤维素作为替代底物来测定。该测定一式两份地进行，并且按制造商建议进行(详情参见正文)。纤维素水解活性对应于苯胺蓝染料的释放，该释放采用分光光度计法于575nm下测定。作为阳性对照，提供了2.5单位来自黑曲霉(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldric)，C1184)的纤维素，其产生的吸光度为2.28±0.01。e异丙醇和引起的蛋白酶失活由浓度范围的估计确定，在该范围由蛋白酶引起的Feld1降解下降超过50％(LD50)。实验详情参见正文。f仅以单个实验确定gn.d.，未确定实施例2在所有采用蛋白酶介导Feld1降解的应用中，猫和使用者将会暴露于蛋白酶活性中。角蛋白纤维在人类和猫类的表皮(皮肤)角质层的角质细胞中含量丰富，在毛发和指甲中也是一样。因此，鉴定出一种对角蛋白的蛋白酶解活性降低的候选Feld1蛋白酶，将有助于解决人兽用产品开发过程中的安全性问题。为表征具有活性的候选蛋白酶对于生理上相关蛋白的底物特异性，测定了候选Feld1目标蛋白酶水解角蛋白的能力。苯胺蓝角蛋白(西格玛-奥德里奇(Sigma-Aldrich)，K8500)由苯胺蓝染料浸染的羊毛角蛋白构成，并且用作定量检测蛋白酶活性的角蛋白底物。苯胺蓝角蛋白用目标蛋白酶在最适条件(如通过蛋白酶测定法确定)和经发现可完全降解125μgmL-1Feld1(表2)的蛋白酶浓度下温育过夜。然后测定苯胺蓝角蛋白的降解程度。在三个重复中，仅硫醇蛋白酶类的菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶经本测定法测定具有可重复的显著的降解活性，分别将所使用的苯胺蓝角蛋白降解了43.2％±23.3％和33.1±8.5％(表3)。天冬氨酰蛋白酶类，即来自米曲霉的曲霉胃蛋白酶(ao曲霉胃蛋白酶，50FP)、来自寄生隐丛赤壳菌的内座壳属胃蛋白酶(cp内座壳属胃蛋白酶，)和胃蛋白酶没有活性，因为它们降解了平均少于1％的苯胺蓝角蛋白(表3)。为进一步表征目标蛋白酶的角蛋白降解活性，进行了如下测定法：利用与三硝基苯磺酸(TNBS)试剂的偶联反应、通过比色法检测角蛋白降解产物。该测定法允许使用来自羊毛的角蛋白粉作为底物测定所有被测酶的水解活性。木瓜蛋白酶和胃蛋白酶没有表现出角蛋白降解活性。所有其他目标蛋白酶对角蛋白底物具有活性。地芽孢杆菌属嗜热菌蛋白酶的角蛋白降解活性至少为所有其他被测蛋白酶的两倍(图3)。上述苯胺蓝角蛋白测定法所得结果与基于TNBS的角蛋白测定法所得结果相对应，但是两种天冬氨酸蛋白酶ao曲霉胃蛋白酶和cp内座壳属胃蛋白酶除外(表3)。对于这两种天冬氨酸蛋白酶和内切蛋白酶Asp-N，缓冲液条件可能影响了通过该TNBS测定法测定的角蛋白降解活性。这是因为醋酸铵缓冲液(100mM，pH4.0)以及内切蛋白酶Asp-N缓冲液(由制造商增补)在不存在蛋白酶的测定中显示出基础水平的角蛋白降解活性。此外，基于TNBS的测定法确定直接作用于角蛋白的蛋白酶解，而苯胺蓝角蛋白测定法则利用衍生的角蛋白底物，这也许可进一步解释一些被测目标蛋白酶在两种测定法中结果的不一致性。作为活体皮肤细胞的模型，测试了目标蛋白酶对角质细胞的细胞毒性效应。将人角质细胞的原代细胞系在微板中培养至融合，并且在用被发现可完全降解125μgmL-1Feld1的最低浓度下的目标蛋白酶温育过夜后测试细胞活力(表2)。因为培养的哺乳动物细胞对细胞培养基的成分和pH变化高度敏感，所以蛋白酶被直接稀释于该细胞培养基中。在用蛋白酶温育过夜后，将水溶性四唑WST-1加入细胞培养物(融合的层和培养基)(细胞增殖检测试剂WST-1，罗氏诊断公司(RocheDiagnostics))。由于活细胞中线粒体脱氢酶催化的电子转移，无色的WST-1被还原成黄色染料(甲臜)。因此，黄色染料的形成表明了贴壁细胞和脱落细胞的细胞活力。在用蛋白酶温育过夜后，通过用磺酰罗丹明B染色，测定单独的贴壁细胞的细胞活力。红色颜色的形成是蛋白浓度的一项指标，其与贴壁细胞的浓度相关联。将没有用蛋白酶温育的细胞作为对照。对于所有被测蛋白酶，两种测定法均得到类似的结果(图4，表3)。可以看出，菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、地芽孢杆菌属嗜热菌蛋白酶和内切蛋白酶Asp-N经测定具有相对高的细胞毒性效应(低剩余细胞活力)。与未处理细胞(其细胞活力相当于100％)相比，所有其他目标蛋白酶(木瓜蛋白酶、ao曲霉胃蛋白酶、胃蛋白酶、cp内座壳属胃蛋白酶、bl枯草杆菌蛋白酶和α-胰凝乳蛋白酶)对细胞活力没有显著影响。对于那些在角质细胞中激起细胞毒性效应的蛋白酶，无法肯定地预测皮肤刺激效应，因为皮肤的角质细胞被数层角蛋白保护。然而，对于那些不激起细胞毒性效应的蛋白酶，皮肤刺激效应不太可能发生。与TNBS角蛋白降解测定法结果(图3)相比，细胞毒性测定法的结果(图4)之间缺少渐变。蛋白酶要么具有显著的细胞毒性效应，要么不能引起细胞毒性。然而，这两种测定法的结果之间存在相关性。例如，木瓜蛋白酶和胃蛋白酶在任一测定法中都显示没有效果。另一方面，菠萝蛋白酶、无花果蛋白酶、地芽孢杆菌属嗜热菌蛋白酶和内切蛋白酶Asp-N对角质细胞的细胞毒性效应通过TNBS测定法得到确认。为进一步评估木瓜蛋白酶的活性，将角质细胞用浓度为表2所示最低所需蛋白酶浓度的1000倍的木瓜蛋白酶在细胞培养基中温育过夜。这导致显著的细胞毒性效应，分别具有WST-1测定法所测定的31％细胞活力和磺酰罗丹明B测定法所测定的8％细胞活力。大多数化妆品应用不要求过夜温育。显微镜检查表明，在温育的第一个小时后，没有发生显著的细胞脱落，即使是在1000倍的增加的浓度的木瓜蛋白酶存在的情况下，这表明在这个较早的时间点，并没有出现细胞毒性效应。用苯胺蓝纤维素(密苏里州圣路易斯的西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich,St.Louis,MO))测定了蛋白酶制剂对纤维素纤维的效应，苯胺蓝纤维素为类似于苯胺蓝角蛋白的底物。进行这个实验来评估目标蛋白酶制剂对棉纺织物的影响。使用苯胺蓝纤维素作为替代底物来测定纤维素蛋白水解反应。该测定一式两份地进行，并且按制造商建议进行。纤维素水解活性对应于苯胺蓝染料的释放，该释放采用分光光度计法于575nm下测定。作为阳性对照，测定2.5单位的来自黑曲霉(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldric)，C1184)的纤维素，其产生的吸光度为0.28±0.01。在10种目标蛋白酶中，仅有ao曲霉胃蛋白酶(50FP)在最适Feld1降解缓冲液(表2)中经过夜温育后表现出显著的活性，对应于阳性对照活性的28％±2％(表3)。这个(或任何)蛋白酶的纤维素酶活性是出乎意外的，因为蛋白酶通常不接受多糖作为底物。据推测，该蛋白酶制剂是米曲霉蛋白酶高产株的粗提物，因此包含该表达宿主产生的其他酶，比如纤维素酶。大多数目标蛋白酶不表现或仅表现出少许角蛋白酶解活性或细胞毒性效应(图3和图4以及表3)。除ao曲霉胃蛋白酶制剂(50FP)以外，没有目标蛋白酶对苯胺蓝纤维素有活性，表明它们不能降解棉纺织物。另外，化妆产品中高浓度蛋白酶比如木瓜蛋白酶的使用表明将它们用于多种应用中来降解Feld1，对于使用者和猫来说，都会是安全的。实施例3可能的应用包括清洁剂或擦拭巾，例如用于清洁被Feld1污染的家具或其他表面。典型的清洁剂含有溶剂，比如变性乙醇或异丙醇，作为消毒剂以及用于溶解油脂。典型的浴缸清洁剂中异丙醇的浓度为10％至15％。然而，如异丙醇等的溶剂会使蛋白酶等酶类失活。因此，测试了目标蛋白酶在含异丙醇的培养基中的活性。因为清洁剂通常用水稀释，所以在存在浓度介于0％和12.5％之间的异丙醇的情况下测试目标蛋白酶的Feld1降解活性。在Feld1降解的最适浓度和反应条件下，将目标蛋白酶与浓度为0、2.5％、5.0％、7.5％、10.0％和12.5％的异丙醇温育过夜(表2)。稀释样品并通过ELISA分析，测定读取时间点为20分钟。如图5所示，残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1与相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比，所述对照含有最高浓度的异丙醇但不含蛋白酶。图5示出了三次独立重复测定的平均值和标准差。除了菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶外，在12.5％异丙醇存在下，所有蛋白酶的活性均减少了至少50％。硫醇蛋白酶类对异丙醇最不敏感。甚至在12.5％异丙醇存在下，木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶降解了约40％至70％的所添加的Feld1(图5)。在采用25％异丙醇的附加实验中，菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶降解了多于50％的Feld1。相比之下，天冬氨酸蛋白酶类对异丙醇最敏感。Ao曲霉胃蛋白酶(50FP)、胃蛋白酶和cp内座壳属胃蛋白酶在12.5％异丙醇存在下失活高于90％。作为对照，ELISA实验表明，未发现单独的异丙醇显著降低Feld1浓度。鉴于此，菠萝蛋白酶或无花果蛋白酶看来是特别适合于使用含有异丙醇的清洁剂来降解存在于灰尘中或表面上的Feld1的蛋白酶。这些蛋白酶有效地降解了Feld1，甚至在异丙醇的浓度超过了典型清洁应用中的浓度的情况下。因为与皮肤、毛发和毛皮的接触是最小限度的且短暂的，相比其他被测蛋白酶，预计菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶所具有的较高的角蛋白酶解活性将不会产生损害。此外，当用于化妆品(参见上文)或营养品加工(例如，作为嫩肉剂)时，菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶通常被认为是安全的。实施例4用于降低猫毛皮上Feld1浓度的可能应用包括除其他组合物外的含蛋白酶的香波或干粉、泡沫/摩丝。估计每只猫的Feld1总量为67mg。尽管该变应原仅有一小部分变为空气传播的，但在猫身上存在的大量Feld1却意味着减少猫的毛皮和/或皮肤内或表面的Feld1的量所带来的显著益处。已有报道，给猫使用传统宠物香波减少了毛皮中的Feld1浓度，以及猫所在的屋子中空气传播的Feld1浓度。传统香波的该功效可通过添加本文所述的蛋白酶而被增强。大多数香波制剂含有不同表面活性剂的混合物，其中阴离子表面活性剂是最大的一类。非离子表面活性剂是第二大类表面活性剂，其具有多醚或多羟基作为极性基团以增加水溶性。非离子表面活性剂广泛用于局部应用中，因为相比阴离子表面活性剂，它们造成刺激的能力较低。这一特性使非离子表面活性剂对含有蛋白酶的宠物香波而言具有吸引力。20(聚山梨醇酯20)作为非离子表面活性剂常用于营养品和化妆品。在欧盟，它被登记为一种被批准的食品添加剂(E-432)，也登记于INCI索引(国际化妆品成分命名法)中。因为20是一种被批准的食品添加剂，所以可被用作香波成分，而且如果猫在洗浴过程中误食，不会造成安全性问题。在表2所示的降解Feld1的最适蛋白酶浓度和反应条件下与0、10％、20％和30％的20温育过夜后，测试20对目标蛋白酶的Feld1降解活性的影响。稀释样品并通过ELISA分析，测定读取时间点为20分钟。所指示的残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1与具有相应20浓度但不含蛋白酶的缓冲液对照的Feld1相比的百分比。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。所有被测目标蛋白酶显示出对20的耐受性。甚至在最高测试浓度30％的20下，它们中也没有完全失活的。在10％的20下，所有蛋白酶均降解了多于50％的125μgmL-1的Feld1(图6，表3)。由于典型的香波制剂含有约40％的20而且在使用时将稀释大约20倍，所以蛋白酶必须在大约2％的20的浓度下仍具有活性以保持Feld1降解活性。因此，预计所有目标蛋白酶均适合用于香波应用。pH中性皮肤产品的pH约为5.5，与皮肤上的pH相对应。天冬氨酸蛋白酶类ao曲霉胃蛋白酶(50FP)的Feld1降解活性不受20的影响，即使在30％的最高测试浓度下也是如此(图6)。在蛋白酶测定法中，虽然已发现这种蛋白酶在pH4.0具有最高活性(参见表2)，但它在pH6.0下仍保留了46％的活性。另外，在使用苯胺蓝角蛋白作为底物时并未表现出降解活性的ao曲霉胃蛋白酶(50FP)(表3)，仅表现出对角蛋白的最小活性(图3)，并且对角质细胞没有显著的细胞毒性(图4)。这些特性表明，ao曲霉胃蛋白酶(50FP)适合用在含蛋白酶的香波中减少Feld1。木瓜蛋白酶也可在香波应用中作为ao曲霉胃蛋白酶(50FP)的合适替代物。虽然木瓜蛋白酶对于20的耐受性弱于ao曲霉胃蛋白酶(50FP)，但在应用过程中，木瓜蛋白酶在2％的20预期浓度下保持活性(图6)。在pH7.4和pH6.0下，木瓜蛋白酶显示出相当的Feld1降解活性，使它可能适用于pH中性香波。在TNBS测定中，木瓜蛋白酶对角蛋白并无活性(图3)，而且并未引起显著的针对角质细胞的细胞毒性(图4)。木瓜蛋白酶对苯胺蓝纤维素底物并无活性，因此不大可能表现出对棉纺织物的降解活性(表3)。在营养品(嫩肉剂、烧烤酱)和化妆品(含酶面膜)中，木瓜蛋白酶也以高浓度使用而并未要求在使用前加热灭活。木瓜蛋白酶可能适合用作香波成分，因为即使猫在洗浴过程中误食该香波也不会造成安全性问题。实施例5另一项应用是用于猫口腔中的含蛋白酶产品，包括洁齿剂、漱口液、饮料、食物或零食、条状物或薄膜物。这样的产品可减少猫口腔中的Feld1浓度，而口腔是该变应原的一个主要源头。为测试在应用类似条件下的蛋白酶活性，建立了猫唾液模型。人工猫唾液的制备基于已发表的人工人唾液制备方法(McKnight-Hanes&Whitford,1992,CariesRes.26:345-350(McKnight-Hanes和Whitford，1992年，《龋齿研究》，第26卷，第345-350页))(表4)。表4：人工猫唾液组成a将这些组分溶于水中，并用KOH溶液将pH调整至7.5b极端条件和正常条件为参照变应原浓度和蛋白浓度的基准，分别为超过预期的水平和平均水平(详见正文)将pH调整至7.5，其为猫唾液的pH。猫唾液中Feld1的浓度经测定介于0.3μg/mL至45μg/mL之间(整个猫群体)，而对于中间组则介于2.2μg/mL至12.4μg/mL之间，中间组表示为整个群体的三分之一。将人工猫唾液中Feld1的最大浓度限定为125μgmL-1，这是因为在之前所有实验中均采用了该浓度，尽管它超过了猫唾液中的预期最大Feld1浓度的2-3倍。将含有大约35％的蛋白质的脱脂奶用于模拟唾液中的蛋白质含量。脱脂奶还含有其他组分比如碳水化合物，这些组分与真实唾液的复杂组成相关，因而预期其将使该模型更真实。据报道，来自不同个体的人唾液含有介于0.67mgmL-1和2.37mgmL-1之间的蛋白质(如以牛血清白蛋白为标准物通过不同技术测定)。此估计值被用作猫唾液中蛋白质含量的近似值。将2.5mgmL-1限定为人工猫唾液中的最大蛋白质含量，其表示为7.14mgmL-1的脱脂奶。如上文所讨论，已发现半胱氨酸能激活用于降解Feld1的某些蛋白酶。对于硫醇蛋白酶类而言，比如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶和无花果蛋白酶，该效应最为明显(参见上文)。在人工唾液中，通过使用目标蛋白酶木瓜蛋白酶于37℃温育过夜，测试不同浓度的Feld1和脱脂奶的影响，以及降解Feld1所需的半胱氨酸(图7)。使用可在最适条件下，即pH7.8的磷酸钠缓冲液中，完全降解125μgmL-1Feld1所需的最低浓度的木瓜蛋白酶(表2)。与之前在缓冲液中进行的实验相似，结果表明，在人工猫唾液中，40mM的L-半胱氨酸对于木瓜蛋白酶有效降解Feld1是必须的(图6)；但是，这个要求可通过制剂中的其他组分满足，特别是可食用组合物，比如食物、饮料或零食。虽然，人工猫唾液中的反应条件与表2所报道的最适反应条件有显著的差别，但是在高达714μgmL-1脱脂奶浓度下，经过夜温育(存在半胱氨酸)，添加的125μgmL-1Feld1大部分被降解(图7)。然而，Feld1降解活性随着脱脂奶浓度的升高而降低，这可能是由于增加的蛋白质浓度。脱脂奶蛋白质主要由酪蛋白组成，并且经蛋白酶测定发现，酪蛋白可被木瓜蛋白酶水解，所述测定使用标记的酪蛋白作为底物(表2)。酪蛋白和Feld1因此表现为木瓜蛋白酶降解反应的竞争性底物。因此，在最高脱脂奶浓度下(并且存在半胱氨酸)，需要增加木瓜蛋白酶的浓度以完全降解Feld1。另外，增加的木瓜蛋白酶浓度将可能造成Feld1更快降解，该更快降解是优选的，以在猫取食含该蛋白酶的宠物食物或饮料或以其他方式使猫的口腔暴露于含该蛋白酶的制剂的时间范围内降解Feld1。开发出两种类型的人工猫唾液以供进一步测试(表4)。第一种类型代表“极端条件”，该类型含有125μgmL-1的Feld1(相比所测定的猫唾液中最大浓度2至3倍高的浓度)及7140μgmL-1的脱脂奶(对应于所测定人唾液中的最高蛋白质含量)。这些变应原和蛋白质浓度高于预期水平，并被提供用于评估宠物食品应用中蛋白酶的多余活性。第二种类型代表“正常条件”，该类型含有12.5μgmL-1的Feld1(代表所测定的猫中间组中Feld1浓度的上限值)及4.5μgmL-1的脱脂奶(对应于人唾液中的平均蛋白质浓度1.6μgmL-1)。这些应变原和蛋白质浓度代表大多数猫唾液中的期望平均水平。为鉴定在相对较短的时间内(正常条件和极端条件下)降解人工猫唾液中Feld1所需的蛋白酶活性，在较高的酶活性下，通过额外的动力学分析对目标蛋白酶木瓜蛋白酶、bl枯草杆菌蛋白酶(6L)、ao曲霉胃蛋白酶(50FP)和内切蛋白酶Asp-N进行了评估。初步实验表明，如需在1小时的温育时间和极端条件下完全降解人工猫唾液中的Feld1，木瓜蛋白酶需要提高到多达1000倍，从4.5μgmL-1(对应于表2中理想条件下过夜温育后，Feld1完全降解所需的最小浓度)提高到4500μgmL-1。因此，对于bl枯草杆菌蛋白酶，选用9.5μgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶(表2中理想条件下过夜温育后，125μgmL-1的Feld1完全降解所需的蛋白酶最小浓度)的10倍、100倍和1000倍用量，在极端条件和37℃下在人工猫唾液中温育1小时和20小时后进行测试(图8)。因此，将125μgmL-1天然Feld1与0、9.5、95、950和9500μgmL-1的枯草杆菌蛋白酶一起在37℃下于人工猫唾液(极端条件)中温育0分钟、1小时或20小时(过夜，见表4)。通过添加1mMPMSF来终止反应。稀释样品并通过ELISA分析，测定读取时间点为30分钟。考虑到稀释效应，预期(即不考虑降解的可能性)的Feld1最高浓度为12ngmL-1。根据两次独立重复来测定平均值和标准偏差。与木瓜蛋白酶的初步试验相似，在1小时内完全降解极端条件下人工猫唾液中的Feld1，需要1000倍高浓度的bl枯草杆菌蛋白酶(图8)。为进一步测定1000倍蛋白酶的效力，对在较短温育时间内正常和极端条件下人工猫唾液中木瓜蛋白酶和bl枯草杆菌蛋白酶降解Feld1进行了动力学分析(图9)。木瓜蛋白酶和9.5mgmL-1的bl枯草杆菌蛋白酶在37℃于正常和极端条件下与人工猫唾液中的Feld1温育0、5、10、15和60分钟(表4)。通过添加100μME64(就木瓜蛋白酶而言)和1mMPMSF(就bl枯草杆菌蛋白酶而言)终止反应。稀释样品并通过ELISA分析，测定读取时间点为30分钟。残余Feld1浓度表示所测定样品的Feld1的与不含蛋白酶的相应缓冲液对照的Feld1相比的百分比。由三次独立重复测定得出平均值和标准差。在正常和极端两种条件下的人工猫唾液中，大部分Feld1在5分钟后就被bl枯草杆菌蛋白酶(9.5mgmL-1)降解。该实验表明bl枯草杆菌蛋白酶在某种程度上比木瓜蛋白酶更有效。然而，在对应于猫唾液的平均组成的正常条件下，超过80％的Feld1在5分钟内被木瓜蛋白酶(4.5mgmL-1)降解(图9)。在0分钟时，这些条件下Feld1的明显降解活性可能可解释为，尽管立即添加了E64抑制剂终止反应，但仍残留有活性。通过添加两种抑制剂，E64和PMSF，终止木瓜蛋白酶和bl枯草杆菌蛋白酶组合的活性，在后续实验中避免了该影响(图10-12)。在宠物食品应用的情形中，唾液中具有平均Feld1和蛋白浓度的猫用五至十分钟进食，木瓜蛋白酶和bl枯草杆菌蛋白酶两种酶在测试浓度下，均预期在5分钟内降解超过80％的变应原。两种测试浓度，分别为4.5mgmL-1木瓜蛋白酶和9.5mgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶，都以远超过采用的Feld1(125μgmL-1)所需浓度存在。然而，这些过量的酶促进了Feld1的加速降解，使其大部分在数分钟内被降解。测试了木瓜蛋白酶和bl枯草杆菌蛋白酶的不同组合，以鉴定对Feld1降解的协同效应，该协同效应将允许蛋白酶的总浓度降低，同时在最终的猫食物应用中维持与单一蛋白酶相当的变应原降解效力。硫醇蛋白酶木瓜蛋白酶和bl枯草杆菌蛋白酶属于具有不同机理的蛋白酶家族，因此具有不同的底物特异性。虽然不希望受限于具体机理，但据信这两种蛋白酶可通过在Feld1多肽链上相互暴露新裂解位点而协同发挥作用，相比仅使用单一蛋白酶实现的降解，得到更快、更有效的降解。在人工猫唾液中，在之前各蛋白酶单独测试的浓度(4500μgmL-1的木瓜蛋白酶和9500μgmL-1的bl枯草杆菌蛋白酶，图9)下，测试了这两种蛋白酶组合协同降解Feld1的能力。另外，测试了在降低10倍、100倍和1000倍蛋白酶浓度条件下的Feld1的降解。450μgmL-1木瓜蛋白酶和950μgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶是在一小时内完全降解Feld1所需的最低浓度(图10)。在最高测试蛋白酶浓度组合(4500μgmL-1木瓜蛋白酶和9500μgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶)的条件下，10分钟后实现Feld1的完全降解(图10)。这一效果与单独的9500μgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶的效果相当(图9)。为评估bl枯草杆菌蛋白酶的贡献，其浓度在1188至9500μgmL-1之间变化，同时保持木瓜蛋白酶的浓度不变(4500μgmL-1)(图11)。当4500μgmL-1木瓜蛋白酶与9500或4750μgmL-1的bl枯草杆菌蛋白酶组合时，观察到Feld1的降解仅有微小变化。因此，4500μgmL-1木瓜蛋白酶和4750μgmL-1的bl枯草杆菌蛋白酶的组合足以在10分钟内降解大部分猫唾液中的Feld1，即使是在极端条件下。在正常条件下，即大多数猫的情况，与最低bl枯草杆菌蛋白酶浓度(1188μgmL-1)的组合足以在10分钟内降解约90％的Feld1。为评估木瓜蛋白酶的贡献，其浓度从565至4500μgmL-1变化，且保持之前测试的最低bl枯草杆菌蛋白酶浓度不变(1188μgmL-1)(图12)。在极端条件下，只有当与4500μgmL-1木瓜蛋白酶组合时，可实现于10分钟内减少80％Feld1的效果(图12)。与之相比，正常条件下温育10分钟后，被测木瓜蛋白酶浓度并不显著影响Feld1的降解。因此，例如当猫在食用宠物食品或零食时，或饮用含蛋白酶的饮料时，或使其口腔暴露于含蛋白酶的制剂时，565μgmL-1木瓜蛋白酶和1188μgmL-1bl枯草杆菌蛋白酶最少蛋白酶组合足以在10分钟温育时间内使平均水平的猫唾液中Feld1的含量有效降低约80％。实施例6开发出了一种包含功能性蛋白酶的擦拭物试样，并测试其对Feld1的失活作用。制造了一批含活性6L的棉质擦拭物(20cm×20cm)，并测试其对Feld1的失活作用。该擦拭物成功地降解了Feld1。其细节在下文中作详细讨论。首先，确定用于擦拭物的6L的浓度。所需酶浓度取决于要被该试样灭活的Feld1的量。基于雀巢普瑞纳公司(NestléPurina)提供的数据，环境中应被该擦拭物试样消化(digest)的Feld1的量为大约25ng/cm2(＝0.25mg/m2)。对于擦拭物试样，由于酶的结合能力可能会被固体材料的可用结合/交联位点所限制，所以不可能简单地设定所需的酶浓度。因此，目的在于将固定的6L的量最大化。基于来自表3的数据，表5汇总了本文分析的目标蛋白酶的应用相关特性和安全相关特性。发现蛋白酶6L结合了开发应用试样所需的所有特性，包括实施例6-10所述的特性：其仅表现出微弱的角蛋白水解作用，对角质细胞活性没有影响，不具纤维素活性，但是对非离子清洁剂的耐受性高。因此，6L被用于本发明试样(擦拭物、猫砂、香波、清洁液)的开发。表5：目标蛋白酶性能汇总n.d.：未测定6L在棉质擦拭物上的固定制造棉质擦拭物在多种类型的棉织物中，选择拉绒棉织物(molton)来制造该擦拭物。拉绒棉织物由100％棉纤维构成。其粗糙表面及其高吸水性使其成为通用的清洁用薄织物。最终擦拭物的尺寸为大约20cm×20cm。用于固定6L的交联体系理论上来讲，可通过化学反应使酶共价偶联来实现酶在固体材料上的固定。然而，尚没有被广泛接受的描述6L与棉纤维偶联的方案。由于载体材料(棉)不具有易于形成共价键的基团，因此第一轮筛选6L固定条件时不仅使用了酶和载体(棉质擦拭物)，还使用了两种交联剂。所用的交联剂为两组分体系：二元胺(五乙烯六胺，PEHA)和二醛(戊二醛，GA)。这两种组分以固定比例混合，并且多以戊二醛浓度作为参考，来表示其与酶成比例的用量。该两组分交联体系必须与蛋白质的量匹配。据发现，如果交联剂量过少将无法交联所有的酶，或者将导致制剂不稳定，而交联剂量过高将发生过交联现象而使构象自由度降低，继而减弱酶的活性，因此使用与6L成比例的量至关重要。用于测定固定效率的酶分析法为监控不同交联条件和方案的成败，测定交联和清洗后的酶活性。在此阶段，直接通过ELISA测定交联的6L的Feld1降解活性麻烦且耗时。为了更快速地筛选交联条件，选用了两种其他的酶分析法：NPA分析或ELU测试，其中NPA分析基于蛋白酶对底物对硝基苯基乙酸酯的水解作用，ELU测试基于乳酸乙酯的水解作用。在建立了6L在小型棉质擦拭物上的最终交联方案后，将在全部擦拭物上实施大规模固定。然后将通过ELISA在目标底物Feld1上直接测试降解Feld1的能力和酶稳定性。将6L固定于棉质擦拭物的最终制备操作通过实验确定交联剂的量和条件，以及酶加载量和条件。之后，实施大规模反应以使6L交联于完整的擦拭物(20cm×20cm)上。具体来讲，将液态6L(9.24mL的4600ELU/mL6L)与83.2mL磷酸缓冲液(100mM，pH6.5)相混合，并加入戊二醛(终浓度为133mM)。室温下将擦拭物于反应混合物中温育过夜，以使酶发生交联。用水清洗擦拭物，挤出液体，再用水和3％的PEG清洗。最后，用空气流(21℃)将擦拭物干燥5h。概括地说，将6L固定于10张棉质擦拭物上，并以同样方式(除了不向反应混合物中添加酶之外)制备另外10张对照擦拭物。随后对擦拭物进行应用测试。测定了使Feld1失活的能力并示于实施例10(表6)中。实施例7开发出包含功能性蛋白酶的猫砂试样，并测试其对Feld1的失活作用。具体来讲，制造了260g包含活性6L的猫砂(珍珠岩)，并测试其对Feld1的失活作用。该猫砂成功地降解了Feld1。其细节在下文中作详细讨论。首先，确定该试样需要的6L浓度。所需酶浓度取决于要被该试样失活的Feld1的量。基于雀巢普瑞纳公司(NestléPurina)提供的数据，应被该猫砂失活的Feld1的量为大约250mg。对猫砂来说，由于酶的结合能力可能会被固体材料的可用结合/交联位点所限制，所以不可能简单地设定所需的酶浓度。因此，目的在于将固定的6L的量最大化。6L在猫砂上的固定固定于膨润土上采用普瑞纳TidyCats不结块速效猫砂(“PurinaTidyCatsnonclumpingcatlitterInstantAction”)进行6L的固定测试。该猫砂基于粘土矿物膨润土。将6L稀释于水中，并加至膨润土，以检查可能的固定情况和对酶的吸收。然而，向6L中加水会稀释这种酶混合物中存在的50％甘油，并使膨润土破碎。以最小液体用量来进行另一膨润土固定测试。为此目的，直接将少量的可易于被吸收的6L加入到膨润土中。由于该载体材料不具有易于形成共价键的基团，因此除了酶和载体外，还添加了两种交联剂。所用的交联剂为两组分体系：二元胺(五乙撑六胺，PEHA)和二醛(戊二醛，GA)，这两种组分以某一固定比例混合。结果表明最大加载量为每克膨润土加载150μL至200μL液体。液体须单独地施用至每个颗粒。由于存在颗粒破碎的现象，在固定后无法进行后处理(work-up)。这虽不是即刻产生的缺陷，但在该膨润土被润湿并再次干燥后，含酶的尘土将随空气散播。但是，在此载体上的6L在几天后会完全丧失活性，即使在干燥时。总之，被测猫砂不适合用于固定6L。固定于砂石上使用原则上可与膨润土混合的粒度为1.2mm的砂石作为另一个载体进行测试。同样，除酶外使用两种交联剂。使用砂石来证明该方案的可行性，其中将酶固定在第二载体(砂石)上，之后可将此砂石与另外的猫砂颗粒相混合。对每克砂石采用200μL6L的最大加载量。然而，很有可能是因为砂石缺少孔隙且表面积小，其活性和回收相对较低。酶的浸出程度低，因此砂石原则上是一种合适的用于共价连接的材料。固定于珍珠岩上选用珍珠岩作为第三载体。由于其粒度为2.8mm至6mm，其原则上也可与膨润土混合。同样，除酶外使用两种交联剂(GA和PEHA)以诱导共价连接。第一固定实验显示，对于较低范围中的酶加载，回收率以及酶6L的浸出情况相对更好。加载量高于500μL/g给珍珠岩颗粒带来明显的着色，而对于较低范围的加载量，珍珠岩颗粒保持了亮白色。将6L固定于珍珠岩的最终制备操作可清楚地看出，对于在猫砂材料上固定6L来说，珍珠岩优于砂石和膨润土。珍珠岩可允许加载较高酶量，同时保持酶的低浸出。另外，其粒度允许该材料与其他猫砂材料均匀混合。因此，发现珍珠岩是用于交联6L的绝佳材料，并最终制备了260g含6L的珍珠岩。具体来说，将液态6L(60mL的4600ELU/mL6L)与472.8mL冷水混合，添加PEHA(调节pH至7.0，终浓度为20mM，4℃)及戊二醛(终浓度133为mM)，混合均匀并添加至300g珍珠岩。通过室温下将珍珠岩颗粒于反应混合物中温育过夜，酶发生交联。用水、5mM磷酸缓冲液以及含3％PEG的水清洗珍珠岩。最终，在室温下将珍珠岩颗粒过夜干燥。概括地说，将6L固定于260g珍珠岩上，并以同样方式(除了不向反应混合物中添加酶之外)制备另一个小对照样品(1g珍珠岩)。随后对珍珠岩进行应用测试。测定了使Feld1失活的能力并示于实施例10(表6)中。实施例8开发出包含功能性蛋白酶的清洁液试样，并测试其对Feld1的失活作用。具体来讲，制造了包含活性6L的1升清洁液和50mL酶浓缩物，并测试其对Feld1的失活作用。这两种试样成功地降解了Feld1。其细节在下文中作详细讨论。首先，确定用于每种试样的6L浓度。所需酶浓度取决于要分别被每种试样去活的Feld1的量。基于雀巢普瑞纳公司(NestléPurina)提供的数据，环境中应被该试样消化的Feld1的量为大约25ng/cm2(＝0.25mg/m2)。为确定完全消化Feld1所需的6L浓度，通过ELISA分析6L稀释系列的活性。在最适反应条件下(Tris-HCl缓冲液，pH7.8)，3.8U/mL的6L(单位基于乙基-L-乳酸乙酯检测(ELU)，由生产商杰能科公司(Genencor)测定)能够完全消化2.5μg的Feld1。基于这些计算，包括实施例9中对香波所做的初步计算，针对该清洁液对6L的浓度作相应调整。开发包含6L的表面清洁剂基于硬质表面上Feld1的浓度，确定所需6L的量，并加入基础清洁液制剂(KAR-001)。具体来讲，在玻璃烧杯中加入水(960g)，之后加入10g苯氧乙醇(防腐剂)，随后加入30gZusolat1008/85(脂肪醇，购自德国司马化学有限公司(Zschimmer&SchwarzGmbH&CoKG))和10gPE9010，并进行搅拌。若有必要，须使用NaOH调节pH至8.0。向此基础制剂(KAR-001)中，加入6L(9mL的4600ELU/mL的6L)，即得KAR-001+E。最终，制备出1升包含6L的表面清洁剂KAR-001(KAR-001+E)，以及两份1升的不含6L的表面清洁剂(KAR-001-E)，并针对应用进行测试。测定了使Feld1失活的能力并示于实施例10(表6)中。开发包含6L的酶浓缩物除了已包含6L的即用型表面清洁剂外，可以想到另一种应用，其基于在使用前将酶和液体表面清洁剂混合。这种应用的优点在于酶可与由消费者提供的任何其他表面清洁剂混合。另外，使酶保存于优化的液体制剂中而非保存于表面清洁剂制剂中，可使该酶稳定，进而提升酶稳定性。因此，开发了一种酶浓缩物，其由20倍高的浓缩6L(相比于即用型表面清洁剂KAR-001+E)以及酶稳定剂丙二醇组成。测定了使Feld1失活(将20倍的KAK-001+E稀释于1倍的清洁剂后)的能力并示于实施例10(表6)中。实施例9开发出包含功能性蛋白酶的香波试样，并测试其对Feld1的失活作用。具体来讲，制造了两种包含活性6L的猫用香波(免洗型制剂，每种1升)，并测试其对Feld1的失活作用。这两种试样都成功地降解了Feld1。每种试样的细节在下文中作详细讨论。首先，确定用于该试样的6L浓度。所需酶浓度取决于要被该试样去活的Feld1的量。猫身上的Feld1的量为大约2μg/mg猫毛(雀巢普瑞纳公司(NestléPurina)提供的数据)。由于每只猫的毛发重量平均为121g(AvnerDBetal.,JAllergyClinImmunol,1997(AvnerDB等人，《变态反应与临床免疫学杂志》，1997年))，因此猫身上应由香波去活的Feld1总量为大约250mg。为确定完全消化Feld1所需的6L浓度，通过ELISA分析6L稀释系列的活性。在最适反应条件下(Tris-HCl缓冲液，pH7.8)，3.8U/mL的6L(单位基于乙基-L-乳酸乙酯检测(ELU)，由生产商杰能科公司(Genencor)测定)能够完全消化2.5μg的Feld1。随后，分析猫香波KFS-002(见下文)中6L的活性，以确定6L在香波制剂中的活性。选取KFS-002作为模型用于液体制剂中6L活性的初始计算。经ELISA测定，在KFS-002中，要使Feld1全部失活需要38.4U/mL的6L(为最佳反应缓冲液中的大约10倍高)。开发包含6L香波测试了若干种起泡制剂，这些制剂基于两性罗马柑橘提取物(甜菜碱)、阳离子十二烷醚硫酸钠(SLE)、阳离子月桂酰肌氨酸钠(SLS)、阳离子椰油酰谷氨酸/椰油酰谷氨酸钠和非离子烷基聚葡萄糖苷，但并非每种制剂都能得出可接受的结果。基于猫身上的Feld1浓度，确定所需6L的量，并加入到两种基础洗发液制剂(KFS-002和KFS-004a)中。具体来讲，在烧杯中加入水(980g)，之后加入10g苯氧乙醇(防腐剂)，随后加入10g甜菜碱(KFS-002)或10gSLS(KFS-004a)和10gL30，并进行搅拌。若有必要，须使用NaOH调节pH至5.5(KFS-002)或7.5(KFS-004a)。向此基础制剂(KFS-002/004a)中，加入9mL的6L(4600ELU/mL的6L)，即得KAR-002/004a+E。最终，制备出1升包含6L的香波KFS-002和1升包含6L的香波KFS-004a(KAR-002/004a+E)，以及2份1升的不含6L的香波(KFS-002/004a-E)，并针对应用进行测试。测定了使Feld1失活的能力并示于实施例10(表6)中。实施例10研究了实施例6-9的试样对Feld1的失活作用。数据示于表6中。可清楚地看出，所有开发的产品都能够使应用相关量的Feld1失活。表6试样使Feld1失活的能力KAK-001酶浓度～57-71mgFeld1/10mlKAR-001表面清洁剂～150-203mgFeld1/10mlKFS-002香波～105-156mgFeld1/10mlKFS-004a香波～18-23mgFeld1/10ml擦拭物～1.09mgFeld1/擦拭物/使用猫砂～9.3mgFeld1/100mg本说明书中，已公开了本发明的典型优选实施方案，并且虽然采用了特定术语，但这些术语仅以一般性和描述性意义使用，而非为限制目的，本发明的范围由权利要求书限定。按照以上教导内容，本发明的许多修改形式和变型形式皆是可能的。因此，应当理解，在所附权利要求书的范围内可以不同于具体描述的其它形式实施本发明。