本申请是申请日为2010年10月27日，发明名称为“一种含番茄红素、白藜芦醇或褪黑素的肠溶固体制剂及其制备方法”的中国发明专利申请No.201010528511.2的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种含番茄红素、白藜芦醇和/或褪黑素作为活性成分的肠溶固体制剂及其制备方法。具体而言，本发明的肠溶固体制剂通过结合使用固体分散体和肠溶释放载体，使上述含有番茄红素、白藜芦醇和/或褪黑素的制剂增加了活性成分的溶解度和/或吸收度，提高了活性成分的生物利用度。
背景技术：
随着自动化合成、组合化学及高通量筛选技术的发展，越来越多的新活性药物同时也是难溶性药物摆在了制药工程的流水线上。据估计有大于40％的市售药物是难溶性药物，而在制药工业实验室中的难溶性药物约占总量的60％以上。对于低溶解度高通透性的药物，其吸收限速步骤是药物的低溶出速率。传统普通片剂很难提高这类药物的生物利用度，适当的工艺及剂型改造是该类药物产品成功开发的关键，因此工艺及剂型对于这类药物在胃肠道中的吸收起着决定性作用。近年来国内外针对难溶性药物给药策略的研究技术有许多，如微粉化技术、纳米技术、微乳技术、分子包合技术、脂质体技术、固体分散技术、嵌段共聚物胶束等，其中固体分散体技术由于增溶效果明显、工艺相对简单、成本低在工业界比较受青睐。目前的上市产品、研究论文或专利在固体分散体技术应用上主要偏重于解决药物的溶解度，以此来增加药物体内的吸收从而提高药物的生物利用度。
中国专利申请CN 1981742A公开了HPMCAS作为难溶性药物的固体分散体载体的应用，但是该申请也列举了若干现有技术文献，显示当HPMCAS和某些难溶性药物制成固体分散体时，溶解度的提高效果并不好，如Yakuzaigaku，53(4)，221-228(1993)中T.Yamaguchi的关于MAT和HPMCAS或CMEC制成固体分散体时，CMEC的效果更好的描述。
此外，PCT专利申请WO 2003/063831中还公开了一种含有固体药物分散体的即刻释放剂型，其含有至少30wt％的固体药物分散体、至少5wt％的崩解剂和porosigen，但是根据中国专利申请CN 101057834A中的评述，该固体药物分散体的即刻释放剂型即使使所述片剂在胃中崩解，但由于固体分散体长时间处于消化液中而将使药物重结晶，造成药物溶解度降低。
番茄红素(Lycopene，分子式C40H56，分子量536.85，纯品为深红色针状结晶)是一种非环状的类胡萝卜素，最早是从番茄中分离提取制得，人体内不能自行合成，必须从外界摄入。在所有的类胡萝卜素中，番茄红素具有最强的消除单线态氧的功能和消除自由基的功能，属于强抗氧化剂，其对单线态氧的消除能力是胡萝卜素的2倍，维生素E的100倍；番茄红素能够减缓低密度脂蛋白的氧化，降低血浆中的胆固醇，防止心血管病；它能够有效抑制癌细胞繁殖，具有抗癌防癌作用，特别对前列腺癌具有很好的治疗作用。另外它具有活化免疫细胞的功能，可增强机体免疫力和抗衰老，具有重要的应用价值和广泛的市场前景。
番茄红素是具有11个碳-碳共轭双键和2个非共轭双键的不饱和脂肪族烯烃。天然食物原料中的番茄红素以全反式构型为主，数量占番茄红素总量的95％以上，只有少量为顺式构型(主要是5-顺、9-顺、13-顺和15-顺式构型)；在哺乳动物的器官、血液和组织中番茄红素以各种顺式异构体为主，顺式番茄红素易溶于胆酸微粒和乳糜微粒，口服后更易被人体吸收，因此其生物利用率明显高于全反式番茄红素。
番茄红素脂溶性强，熔点为174℃，几乎不溶于水，在水中的溶解度只有大约0.002μg/ml，溶解度低限制了番茄红素在胃肠道内的吸收，导致口服生物利用度低。此外，番茄红素在空气中光、热、氧、金属离子的作用下极不稳定，易氧化降解和异构化，从而使其功能降低或失效。现有的市售番茄红素制剂主要是填装成软胶囊的油混悬液，没有解决番茄红素在胃肠道中溶解度低的问题。
目前，已公开的增加番茄红素溶解度的口服固体药物组合物专利申请包括：
(1)Basf公司的授权专利CN 1125601C公开了“粉状番茄红素制剂、其制法和其应用”，涉及水可分散的粉状番茄红素制剂的制备方法。
(2)DSM公司的授权专利CN 1173637C公开了“细粉状类胡萝卜素制剂的制备”，制备易溶于水的番茄红素细粉末。
(3)以色列Lycoret公司申请的WO 03045167公开了“类胡萝卜素制剂”。
(4)中国专利ZL 200610037859.5公开了“β-环糊精和羟丙基-β-环糊精混合包合番茄红素的组合物及其制备方法”，该方法用混合环糊精包合药物，使番茄红素溶解度增加为14μg/ml。
(5)中国专利申请CN 101439030公开了“一种含番茄红素的药物组合物及其制备方法”，该方法采用泊洛沙姆188作为载体制备固体分散体，或将它们与环糊精制备成三元包合物，提高番茄红素在固体制剂中的溶出度。
(6)中国专利申请CN 1485028公开了“番茄红素滴丸”，用水溶性基质(PEG4000、PEG6000、明胶、硬脂酸)将番茄红素油树脂制成了口服固态分散体的滴丸以提高其溶解度。
上述专利申请有一个共性就是虽然增加了番茄红素溶解度的，但由于番茄红素是在胃中大量快速释放，由于胃中吸收面积小易造成番茄红素反析出，从而导致生物利用度利用仍然很低；另一方面如Basf公司的授权专利CN1125601C专利报道的工艺存在生产成本高、工业化难度大等缺点。
白藜芦醇(Resveratrol)属于非黄酮类多酚化合物，结构类似雌激素己烯雌酚，为白色结晶粉末，化学名称为(E)-5-[2-(4-羟苯基)-乙烯基]-1，3-苯二酚，分子式C14H12O3，分子量228.25，熔点256-257℃，脂溶性强，难溶于水，据报道在水中饱和溶解度约为30μg/ml，易溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂。白藜芦醇是植物为抵抗外界刺激如紫外线、真菌、病毒感染或机械损伤而产生的一种植物抗毒素，它主要存在于虎杖、葡萄、花生、桑椹、松树等70多种植物中，在葡萄中的含量尤为丰富，具有抗氧化性、抗自由基活性、保护心血管、抗癌、抗衰老等多项保健功能。白藜芦醇对光、热、氧不稳定，具有顺式、反式两种同分异构体，白藜芦醇反式异构体的生物活性强于顺式异构体，在紫外光照射下反式白藜芦醇能够转化成顺式异构体。白藜芦醇口服吸收良好，但由于快速代谢和排泄导致生物利用度低，消除半衰期短，主要是发生II相代谢反应，经肝脏和小肠迅速代谢为两大相关的代谢物：白藜芦醇葡糖苷酸和硫酸白藜芦醇。研究发现，十二指肠和空肠是反式白藜芦醇口服吸收的主要部位，多药耐药相关蛋白(Mrp-2)参与反式白藜芦醇的肠道外排过程，外排转运蛋白P-糖蛋白不参与反式白藜芦醇的吸收转运。
有关白藜芦醇及其苷化合物的文献和专利较多，但绝大多数集中在提取、制备、用途方面，很少涉及提高生物利用度及提高溶解度方面，寻找和研究改善白藜芦醇水溶性，并提高其在小肠的吸收具有非常重要的意义。中国专利CN 100453071C公开了一种白藜芦醇口服多相脂质体。中国专利CN 100493497C公开了一种白藜芦醇固体自微乳制剂。中国专利申请CN 1951369A公开了一种白藜芦醇包衣纳米脂质体。中国专利申请CN 101317832A公开了一种由于白藜芦醇和载体材料小麦醇溶蛋白制成的口服纳米给药系统，利用在载体材料的生物粘附特性和高度分散特性提高白藜芦醇的溶出速度和程度，增加药物在小肠的吸收。中国公开专利申请CN 101292966A公开了一种白藜芦醇及其固体分散体及其制备方法，以Poloxamer、高分子量聚乙二醇为载体，用溶剂法和熔融法制备分散体，改善药物水溶性。中国授权专利CN 1220486C提供了白藜芦醇及其甙和衍生物的羟丙基-β-环糊精包合物以及制备方法，提高药物水溶性和稳定性。
上述专利申请虽然部分涉及到使白藜芦醇溶解度提高的方法，但这些发明增加白藜芦醇溶解度的程度依旧很小，脂质体、固体自微乳、包衣纳米脂质体等纳米制剂还存在稳定性差、对辅料和设备要求较高、生产成本高、难以工业化生产等缺点。
褪黑素(Melatonin，MT)，又名脑白金或松果体素，是哺乳动物和人类的松果体分泌的一种具有广泛生理和药理作用的神经内分泌激素，具有调整人体生物钟、镇静催眠和免疫调节等生理作用。褪黑素为白色结晶粉末，化学名称为5-甲氧基-N-乙酰色胺，分子式C13H16N2O2，分子量232.27，熔点116-118℃，在水中溶解度不到1mg/ml(25℃)，属于两亲性化合物，油水分配系数Log P为1.19，略溶于水，易溶于热水和丙二醇，可溶于含水乙醇、酸、碱中。健康志愿者口服MT绝对生物利用度仅15％且个体差异大，其在人体的吸收也很不稳定，首过效应明显，同一剂量的MT在不同个体中可有10-20倍的差异。口服MT后，MT经被动扩散吸收入血，仅与血浆白蛋白结合，结合率约33％，但其结合非常疏松且不饱和。另有文献报道褪黑素口服吸收具有部位特异性，在大鼠直肠的吸收药量＞回肠＞十二指肠＝空肠＝结肠＞胃。也有研究表明其生物利用度与剂量有关，Yeleswarown、Krishnaswamy、Melaughlin Lee G等研究了MT不同给药途径的生物利用度。给大鼠灌胃后，利用度为53.5％；给狗灌胃MT 10mg/kg时，利用度几乎为100％，但当1mg/kg时，则降至16.9％。
技术实现要素：
本发明一方面提供了一种肠溶固体制剂，其含有选自番茄红素、白藜芦醇和褪黑素中的一种或多种活性成分和肠溶性载体，其中所述肠溶性载体与所述活性成分以肠溶固体分散体形式存在于制剂中。
在一个实施方案中，所述的活性成分是白藜芦醇，所述的肠溶性载体是乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)和/或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)。
在又一个实施方案中，所述的活性成分是褪黑素，所述的肠溶性载体是乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)和/或甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯共聚物如Eudragit L100-55和/或邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)。
在又一个实施方案中，所述的活性成分是番茄红素，所述的肠溶性载体是邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)。
另一方面，本发明提供所述含有肠溶固体分散体的肠溶固体制剂的制备方法，其包括将所述的活性成分和肠溶性载体溶于溶剂中，干燥除去溶剂以得到肠溶固体分散体。
在一个实施方案中，所述肠溶固体制剂的制备方法包括将所述的活性成分和肠溶性载体混匀后加热至熔融，然后将其冷冻干燥或热熔挤出制得肠溶固体分散体。
又一方面，本发明提供一种肠溶固体制剂，其含有选自番茄红素、白藜芦醇和褪黑素中的一种或多种活性成分，以及肠溶性载体和水溶性载体，其中所述水溶性载体与所述活性成分以水溶固体分散体形式存在于制剂中，并且在该固体制剂外层包覆含有肠溶性载体的肠溶包衣层。
在一个实施方案中，所述的活性成分是番茄红素，所述的水溶性载体是Soluplus和/或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer)，所述的肠溶性载体是乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)。
在又一个实施方案中，所述的水溶固体分散体活性成分番茄红素在pH6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度不低于10μg/ml，优选不低于20μg/ml。
在又一个方面，本发明提供所述含有水溶固体分散体的肠溶固体制剂的制备方法，其包括将所述的活性成分和水溶性载体溶于溶剂中，干燥除去溶剂以得到水溶性固体分散体，并对所得的水溶性固体分散体进一步包肠溶衣。
在又一个实施方案中，所述的制备方法包括将所述的活性成分和水溶性载体混匀后加热至熔融，然后将其冷冻干燥或热熔挤出制得水溶性固体分散体，并对所得的水溶性固体分散体进一步包肠溶衣。
在又一个实施方案中，所述的包含肠溶固体分散体或水溶固体分散体的肠溶固体制剂中还可以进一步含有表面活性剂，优选Cremophor EL和/或Cremophor RH40。
在一个优选的实施方案中，所述活性成分总重与所述表面活性剂的重量比为1∶2-1∶4。
在又一个实施方案中，本发明提供含有肠溶性或水溶固体分散体的肠溶固体制剂，其还可进一步含有一种或多种选自下述的成分：花青素、姜黄素、叶黄素、β-胡萝卜素、胡萝卜素、石榴提取水不溶物如鞣花酸和熊果酸、脂溶性维生素如维生素A、维生素D、维生素K和维生素E。
在又一个方面，本发明还提供一种保健组合物，其含有如上所述的肠溶固体制剂。
发明详述
不希望被任何理论所束缚，本发明通过采用固体分散体技术和定位释放原理相结合，即通过采用固体分散体技术解决了药物的难溶性问题，同时通过对载体材料性质的选择，即采用在肠中才能溶解的肠溶性载体制备固体分散体或先制备成水溶性固体分散体，再进行包覆肠溶衣膜以控制药物在胃中少量释放或不释放。在肠中由于吸收表面积大，载体或衣膜迅速溶解，药物大量释放并迅速吸收，从而提高了生物利用度。
根据本发明的肠溶固体制剂，作为活性成分可以依据要求含有选自番茄红素、白藜芦醇和褪黑素中的一种或多种活性成分。
其中，番茄红素分子式为C40H56，具有下述式所示的结构，
本发明的番茄红素包括所有番茄红素的顺反异构体。
白藜芦醇的化学名称为(E)-5-[2-(4-羟苯基)-乙烯基]-1，3-苯二酚，分子式为C14H12O3。
褪黑素化学名称为5-甲氧基-N-乙酰色胺，分子式C13H16N2O2。
用于本发明的番茄红素、白藜芦醇和褪黑素均可商购得到。
除上述三种活性组分外，本发明提供的包含肠溶或水溶固体分散体的肠溶固体制剂，还可含有一种或多种其他适宜的活性组分，例如：花青素、姜黄素、叶黄素、β-胡萝卜素、胡萝卜素、石榴提取水不溶物如鞣花酸和熊果酸、和脂溶性维生素如维生素A、维生素D、维生素K、维生素E，优选花青素、姜黄素、叶黄素、β-胡萝卜素、鞣花酸和/或胡萝卜素。
当使用肠溶性载体与所述活性成分形成肠溶固体分散体或者肠溶包衣时，所述肠溶性载体对于控制活性成分在胃中少量释放或者不释放是十分有利的。并且肠溶固体分散体和肠溶包衣内的水溶固体分散体的应用，进一步使药物活性成分在吸收表面积大的肠中得以被大量释放并吸收。
本发明中，肠溶性载体是指一种水溶pH依赖型载体，其溶解具有pH依赖性，在人体肠液环境(约pH≥5.5)中才能溶解，故称在人体肠液环境中才能溶解的载体为肠溶性载体。
为提高溶解度，包含肠溶固体分散体或水溶固体分散体的肠溶固体制剂中还可以进一步含有表面活性剂。表面活性剂既可以添加在固体分散体中也可以和其他载体辅料一起在固体分散体外添加。适宜的表面活性剂选自一种或多种以下组中的物质：十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer)、吐温类、司盘类、聚乙二醇类、聚氧乙烯蓖麻油类如Cremophor EL、聚氧乙烯氢化蓖麻油类如Cremophor 40，优选Cremophor EL和/或Cremophor 40。表面活性的添加量可根据需要调节，一个优选的比例范围是，所述活性成分重量与所述表面活性剂的重量比为1∶2-1∶4。
根据本发明的一个实施方案，肠溶固体制剂中含有肠溶性载体与一种或多种所述活性成分形成的肠溶固体分散体。
作为用于所述肠溶固体分散体的肠溶性载体，一个优选的实施方案是所述的肠溶性载体为一种或多种选自以下组中的肠溶性聚合物：乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、乙酸琥珀酸纤维素(CAS)、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸乙基羟甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)、乙酸马来酸羟丙基甲基纤维素、偏苯三酸羟丙基甲基纤维素(HPMCT)、羧甲基乙基纤维素、聚丁酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚乙酸乙烯醇邻苯二甲酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯共聚物和甲基丙烯酸/甲基丙烯酸甲酯共聚物。更优选肠溶性载体为HPMCAS和/或甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯共聚物如Eudragit L100-55和/或HPMCP。
用于肠溶固体分散体制剂的肠溶性载体和活性成分的比例没有特殊限制，可以根据本领域的常规要求添加。优选地，所述活性成分总重量与所述肠溶性载体的重量比为1∶1-1∶20。
由以上讨论可知，本发明的包含肠溶固体分散体的肠溶固体制剂可以使含有的活性成分在胃中少量释放或不释放。优选地，所述的活性成分白藜芦醇在0.1M盐酸中的45分钟溶出度不大于20％，优选不大于10％，在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的60分钟溶出度各不低于75％，优选不低于80％；褪黑素在0.1M盐酸中的60分钟溶出度不大于25％，优选不大于15％，在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的30分钟溶出度各不低于80％，优选不低于90％。在本发明中，所述包含肠溶固体分散体的肠溶固体制剂溶出度实验依据中国药典附录XD释放度测定第二法(用于肠溶制剂)测定，具体的测试方法参见试验例1-3。
根据需要，本发明的包含肠溶固体分散体的肠溶固体制剂还可以进一步包含其它药用辅料以制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂或微丸等剂型。其中，所述的其它药用辅料包括稀释剂、崩解剂、润滑剂、抗氧剂中的一种或多种。所述的稀释剂，其可以是微晶纤维素、淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、磷酸氢钙中的一种或多种；崩解剂，其可以是低取代纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；润滑剂，其可以是硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、硬脂酸、氢化植物油中的一种或多种；和抗氧剂，其可以是抗坏血酸、抗坏血酸钠、维生素C棕榈酸酯、维生素E、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS)中的一种或多种。
根据本发明的又一个实施方案，肠溶固体制剂中含有选自番茄红素、白藜芦醇和褪黑素中的一种或多种活性成分，以及肠溶性载体和水溶性载体，其中所述水溶性载体与所述活性成分以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层。
其中，所述的水溶性载体是指在水中能溶解的载体，它包括非pH依赖型和pH依赖型两种。其中非pH依赖型载体的溶解不受环境中溶液pH值的影响，在任何pH值溶液中均能溶解；pH依赖型载体的溶解取决于环境中溶液的pH值，当溶液的pH值大于该溶解pH值时，载体才能溶解。本发明中涉及的另一种肠溶固体制剂即活性成分先制成水溶性固体分散体再在该固体制剂外层包覆含有肠溶性载体的肠溶包衣制剂中的水溶性载体优选水溶性非pH依赖型载体。
一个优选的实施方案中，所述水溶性非pH依赖型载体为一种或多种选自以下组中的物质：甲基纤维素、羟丙甲基纤维素(HPMC)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚氧乙烯(PEO)、共聚维酮(Copovidone)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇类、Soluplus、糖类、甘露醇和木糖醇，更优选Poloxamer和/或Soluplus。
所述的水溶性载体和活性成分的比例没有特殊限定，可以根据需要调整。优选地，所述活性成分总重与所述水溶性载体的重量比为1∶1-1∶20。
根据需要，所述的肠溶固体制剂还可包括其它药用辅料以制成包肠溶衣的肠溶片、胶囊、颗粒剂、散剂或微丸等成品供口服给药。其中，所述的其它药用辅料包括稀释剂、崩解剂、润滑剂、抗氧剂中的一种或多种。所述的稀释剂，其可以是微晶纤维素、淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、磷酸氢钙中的一种或多种；崩解剂，其可以是低取代纤维素、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮中的一种或多种；润滑剂，其可以是硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、硬脂酸、氢化植物油中的一种或多种；和抗氧剂，其可以是抗坏血酸、抗坏血酸钠、维生素C棕榈酸酯、维生素E、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS)中的一种或多种。
对于所述的肠溶包衣层中含有的肠溶性载体，其优选为一种或多种选自以下组中的肠溶性聚合物：乙酸邻苯二甲酸纤维素(CAP)、乙酸偏苯三酸纤维素(CAT)、乙酸琥珀酸纤维素(CAS)、邻苯二甲酸甲基纤维素、邻苯二甲酸乙基羟甲基纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素(HPMCP)、乙酸琥珀酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS)、乙酸马来酸羟丙基甲基纤维素、偏苯三酸羟丙基甲基纤维素(HPMCT)、羧甲基乙基纤维素、聚丁酸乙烯邻苯二甲酸酯、聚乙酸乙烯醇邻苯二甲酸酯(PVAP)、甲基丙烯酸/丙烯酸乙酯共聚物和甲基丙烯酸/甲基丙烯酸甲酯共聚物，更优选HPMCAS。
所述的肠溶包衣层中还可以进一步含有选自增塑剂、抗粘剂和稳定剂中的一种或多种载体。其中，增塑剂可选自一种或多种以下组中的物质：邻苯二甲酸二乙酯(DEP)、癸二酸二丁酯(DBS)、柠檬酸三丁酯(TBC)、柠檬酸三乙酯(TEC)、蓖麻油、三醋酸甘油酯(TA)、丙二醇、甘油、聚乙二醇、精制椰子油、油酸、烯基琥珀酸酐和聚乳酸(PLA)，优选TEC；抗粘剂可选自一种或多种以下组中的物质：滑石粉、微粉硅胶、单硬脂酸甘油酯，优选滑石粉和微粉硅胶；稳定剂包括十二烷基硫酸钠。
对于所述的肠溶包衣层中含有各种成分的比例没有特殊限制，可以根据需要调整。优选地，所述的肠溶性载体为所述肠溶包衣层固含量的60-90重量％；所述的增塑剂为所述肠溶包衣层固含量的10-30重量％；所述的抗粘剂为所述肠溶包衣层固含量的10-30重量％；所述的稳定剂为所述肠溶包衣层固含量重量的0.5-5重量％。更优选所述的肠溶性载体为所述肠溶包衣层固含量的70-80重量％；所述的增塑剂为所述肠溶包衣层固含量的10-15重量％；所述的抗粘剂为所述肠溶包衣层固含量的15-20重量％；所述的稳定剂为所述肠溶包衣层固含量的3-5重量％。
相对于包衣层中包覆的成分总重量，优选所述的肠溶包衣层重量为10-50重量％，更优选为15-25重量％。
本发明的水溶/肠溶固体分散体的制备方法可采用常用的制备固体分散体的方法，包括熔融法、溶剂法、溶剂-熔融法、研磨法、溶剂-冷冻干燥法、溶剂-喷雾干燥法和热熔挤出法等，具体可参见化学工业出版社出版、朱盛山主编的《药物新剂型》第1版第26-29页。
作为一个优选的实施方案，本发明提供了一种肠溶固体制剂，其含有番茄红素作为活性成分，肠溶性载体和/或水溶性载体；其中所述肠溶性载体与番茄红素以肠溶固体分散体形式存在于制剂中，或者所述水溶性载体与所述番茄红素以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆含有肠溶性载体的肠溶包衣层。该肠溶固体制剂能够提高番茄红素的水溶性和稳定性，使药物在胃内少量释放或不释放，而在肠道大量释放，增加番茄红素生物利用度。
在本优选实施方案中，除有以下特殊说明，其适用对于前述实施方案的讨论。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述肠溶性载体与番茄红素以肠溶固体分散体形式存在于制剂中时，优选的肠溶性载体是HPMCP。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述水溶性载体与所述番茄红素以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层时，优选的水溶性载体是Soluplus和/或Poloxamer，更优选Poloxamer，优选的肠溶性载体是HPMCAS，更优选HPMCAS AS-LF。
为提高溶解度，可在番茄红素固体肠溶制剂中添加表面活性剂。适宜的表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物(Poloxamer)、吐温类、司盘类、聚乙二醇类、聚氧乙烯蓖麻油类如Cremophor EL、聚氧乙烯氢化蓖麻油类如Cremophor 40或其组合，优选Cremophor EL和/或Cremophor 40。表面活性的添加量可跟据需要调节，一个优选的比例范围是，所述活性成分重量与所述表面活性剂的重量比为1∶2-1∶4。
优选地，所述的水溶固体分散体活性成分番茄红素在添加表面活性剂后在pH 6.8磷酸盐缓冲液中的溶解度不低于10μg/ml，优选不低于20μg/ml。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，在番茄红素水溶或肠溶固体分散体中，番茄红素与所述肠溶性或水溶性载体的重量比优选为1∶1-1∶20，更优选1∶8-1∶16。
番茄红素属于脂肪族烯烃，具有强还原性，易氧化降解，为了提高制剂稳定性，在处方中优选添加一定量的抗氧化剂，例如抗坏血酸、抗坏血酸钠、维生素C棕榈酸酯、维生素E、维生素E琥珀酸聚乙二醇酯(TPGS)中的一种或多种。
所述番茄红素水溶性/肠溶固体分散体可以与其它药用辅料混合，进一步加工制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、微丸或包肠溶衣的肠溶片、胶囊、颗粒剂、散剂或微丸等成品供口服给药，制剂规格优选1mg-20mg。
本优选实施方式的番茄红素固体分散体的制备方法优选溶剂-喷雾干燥法。由于番茄红素的熔点高，为174℃，且不稳定，用热熔挤出法制备固体分散体时易出现载体发生分解和番茄红素发生降解现象，因此制备番茄红素固体分散体一般优选采用溶剂-喷雾干燥法。
作为一个具体的实施方案，溶剂-喷雾干燥法可选取肠溶或水溶性载体辅料和/或表面活性剂与番茄红素，将其加入可溶解上述物质且对上述物质惰性的有机溶剂中，如二氯甲烷或乙酸乙酯。然后，搅拌，溶解，采用喷雾干燥法除去有机溶剂，若有需要可置真空干燥箱中进一步干燥10-30h，即得本实施方案的水溶性/肠溶性载体固体分散体。
对于所得到的水溶性载体固体分散体，进一步对其肠溶包衣，以得到肠溶固体制剂。
作为又一优选的实施方案，本发明提供了一种肠溶固体制剂，其含有白藜芦醇作为活性成分，肠溶性载体和/或水溶性载体；其中所述肠溶性载体与白藜芦醇以肠溶固体分散体形式存在于制剂中，或者所述水溶性载体与白藜芦醇以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层。该固体制剂能够提高白藜芦醇的水溶性和稳定性，使药物在胃内少量释放或不释放，而在肠道大量释放，增加白藜芦醇的生物利用度。
在本优选实施方案中，除有以下特殊说明，其适用对于前述实施方案的讨论。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述肠溶性载体与白藜芦醇以肠溶固体分散体形式存在于制剂中时，优选的肠溶性载体是HPMCAS和/或HPMCP。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述水溶性载体与白藜芦醇以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层时，优选的水溶性载体是Soluplus和/或Poloxamer，更优选Poloxamer，优选的肠溶性载体是HPMCAS，更优选HPMCAS AS-LF。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，在白藜芦醇水溶或肠溶固体分散体中白藜芦醇与所述肠溶性或水溶性载体的重量比优选为1∶1-1∶20，更优选1∶2-1∶8。
白藜芦醇固体分散体与其它辅料混合，可进一步加工制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、微丸或包肠溶衣的肠溶片、胶囊、颗粒剂、散剂或微丸等成品供口服给药，制剂规格20mg-500mg。
本优选实施方式的白藜芦醇固体分散体的制备方法优选溶剂-喷雾干燥法或热熔挤出法。
作为一个具体的实施方案，溶剂-喷雾干燥法可选取肠溶或水溶性载体辅料和/或表面活性剂与白藜芦醇，将其加入可溶解上述物质且对上述物质惰性的有机溶剂中，如二氯甲烷或乙酸乙酯。然后搅拌，溶解，采用喷雾干燥法除去有机溶剂，若有需要可置真空干燥箱中进一步干燥10-30h，即得本实施方案的水溶性/肠溶性载体固体分散体。
作为又一具体的实施方案，热熔挤出法是将药物与载体混合加入热熔挤出机中，经加热使药物和载体迅速达到熔融状态，再经螺杆混合元件和剪切元件的混合、剪切与挤压将物料输出，使药物颗粒更加均匀地分散。
作为又一优选的实施方案，本发明提供了一种肠溶固体制剂，其含有褪黑素作为活性成分，肠溶性载体和/或水溶性载体；其中所述肠溶性载体与褪黑素以肠溶固体分散体形式存在于制剂中，或者所述水溶性载体与褪黑素以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层。
在本优选实施方案中，除有以下特殊说明，其适用对于前述实施方案的讨论。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述肠溶性载体与褪黑素以肠溶固体分散体形式存在于制剂中时，优选的肠溶性载体是HPMCAS、Eudragit L100-55和/或HPMCP。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，当其中所述水溶性载体与所述褪黑素以水溶固体分散体形式存在于该固体制剂中，并且在该固体制剂外层包覆有含有肠溶性载体的肠溶包衣层时，优选的水溶性载体是Soluplus和/或Poloxamer，更优选Poloxamer，优选的肠溶性载体是HPMCAS。
根据本优选实施方案的肠溶固体制剂，在褪黑素水溶或肠溶固体分散体中，褪黑素与所述肠溶性或水溶性载体的重量比优选为1∶1-1∶20，更优选1∶2-1∶10。
本发明的褪黑素固体分散体与其它辅料混合，可进一步加工制备成片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、微丸或包肠溶衣的肠溶片、胶囊、颗粒剂、散剂或微丸等成品供口服给药，控制褪黑素主要在小肠中释放，增加褪黑素的口服吸收，提高生物利用度。制剂规格1mg-10mg。
本优选实施方案的褪黑素固体分散体的制备方法优选溶剂-喷雾干燥法或热熔挤出法。具体方法可参见上述白藜芦醇固体分散体的制备方法。
本发明的特点是用简单的方法实现了难溶性药物的增溶和释放性能的调控。采用肠溶聚合物作载体制备的肠溶固体分散体或水溶性载体制备水溶固体分散体并进一步包肠溶衣，使药物以无定形状态或/和分子状态存在于固体分散体中，同时又可具备肠溶特征。制剂工艺简单、自动化程度高，省时高效，是一种可工业化大生产的技术。
另外，采用热熔挤出法时整个过程无溶剂参与，因此无溶剂残留问题及溶剂干燥过程。热熔挤出技术和传统的熔融法都是在物料达到熔融状态的情况下制备固体分散体，但前者通过螺杆混合元件和剪切元件的有机组合，实现了强烈的混合、剪切与挤压作用的协同，使药物更均匀、紧密地分散在载体中，更大程度地提高了药物的溶出度。通过优选载体，使药物以无定形状态分散在载体中或者分子状态溶解在载体中。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但并不意图对本发明进行限制。
实施例1-1
称取HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55、Kollidone VA64、Poloxamer188、Soluplus各10g分别溶于1000g二氯甲烷中，再向上述溶液分别加入0.05g维生素C搅拌至全部溶解，然后分别加入番茄红素(长沙惠瑞生物科技有限公司生产)1g，形成均一溶液。用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到番茄红素固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
实施例1-2
分别称取Soluplus 20g、16g分别溶于1000g二氯甲烷中，再向上述溶液分别加入0.05g维生素C搅拌至全部溶解，然后分别加入番茄红素(长沙惠瑞生物科技有限公司生产)1g，形成均一溶液。用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到番茄红素固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
实施例1-3
称取Cremophor RH40、Cremophor EL各4g，分别溶于含有16g Soluplus、0.05g维生素C的1000g二氯甲烷溶液中，再向上述溶液分别加入1g番茄红素(长沙惠瑞生物科技有限公司生产)，搅拌至全部溶解。用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到番茄红素固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
实施例1-4
称取HPMCP HP-55、Soluplus各8g，分别溶于含有0.05g维生素C、2g Cremophor RH40的1000g二氯甲烷溶液中，再向上述溶液分别加入1g番茄红素(长沙惠瑞生物科技有限公司生产)，搅拌至全部溶解。用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到番茄红素固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
实施例2-1
取琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)10g和15g分别溶于含1g维生素C的2份丙酮溶液中，形成均一溶液；分别各称取5g白藜芦醇溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂分别得到白色粉末即为白藜芦醇∶HPMCAS AS-LF为1∶2和1∶3的肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
分别取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例2-2
取琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)15g、白藜芦醇5g、维生素C棕榈酸酯1g，研磨混匀，投入到同向双螺杆挤出机(赛默飞世尔科技公司MiniLab)加料斗内，螺杆挤出区段温度已预热至230℃，螺杆转速为30rpm，物料由机头模孔挤出，挤出物室温冷却，粉碎后过180μm孔径筛网即得肠溶固体分散体。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例2-3
取琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)25g和40g分别溶于1g含维生素C的2份丙酮溶液中，形成均一溶液；分别称取5g白藜芦醇溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂分别得到白色粉末即为白藜芦醇∶HPMCAS AS-LF为1∶5和1∶8的肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
分别取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例2-4
取羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP-55(HPMCP HP-55)25g和40g，分别溶于1g含维生素C的2份丙酮溶液中，形成均一溶液；分别称取5g白藜芦醇溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂分别得到白色粉末即白藜芦醇∶HPMCP HP-55为1∶5和1∶8的肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
分别取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例2-5
取40g Poloxamer 188、1g维生素C充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g白藜芦醇溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为水溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的水溶性非pH依赖型固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)，用含HPMCAS AS-LF的肠溶包衣溶液包衣(OHARA实验型高效包衣机)，包衣增重为15重量％，得肠溶包衣片剂。其中肠溶包衣溶液中HPMCAS AS-LF、柠檬酸三乙酯(TEC)、滑石粉、十二烷基硫酸钠分别占包衣溶液固含量重量的72％、11％、15％、2％。
实施例2-6
取40g HPMC E5、1g维生素C充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g白藜芦醇溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为水溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的水溶性非pH依赖型固体分散体适量，按重量比白藜芦醇∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶0.5的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)，用含HPMCAS AS-LF的肠溶包衣溶液包衣(OHARA实验型高效包衣机)，包衣增重为15重量％，得肠溶包衣片剂。其中肠溶包衣溶液中HPMCAS AS-LF、TEC、滑石粉、十二烷基硫酸钠分别占包衣溶液固含量重量的72％、11％、15％、2％。
实施例3-1
取10g琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-2
取15g琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-3
取25g琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-4
取25g琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)、5g褪黑素，研磨混匀，投入到同向双螺杆挤出机(赛默飞世尔科技公司MiniLab)加料斗内，螺杆挤出区段温度已预热至150℃，螺杆转速为30rpm，物料由机头模孔以透明条状物挤出，盛接于不锈钢盘中，室温冷却，粉碎后过180μm孔径筛网即得固体分散体。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-5
取50g琥珀酸乙酸羟丙基甲基纤维素(HPMCAS AS-LF)充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-6
取25g Eudragit L100-55充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-7
取25g羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯HP-55(HPMCP HP-55)充分分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为肠溶固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的肠溶固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)。
实施例3-8
取25g PEG4000分散、溶解于丙酮中，形成均一溶液，称取5g褪黑素溶解于上述溶液中，用Buchi mini spray dryer B-290喷雾干燥除去有机溶剂得到白色粉末即为水溶性非pH依赖型固体分散体，喷雾干燥过程中，物料温度控制在50-55℃。
取本例中的水溶性非pH依赖型固体分散体适量，按重量比褪黑素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶20∶1∶1的比例混合均匀，压制成片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)，用含HPMCAS AS-LF的肠溶包衣溶液包衣(OHARA实验型高效包衣机)，包衣增重为15重量％，得肠溶包衣片剂。其中肠溶包衣溶液中HPMCAS AS-LF、TEC、滑石粉、十二烷基硫酸钠分别占包衣溶液固含量重量的72％、11％、15％、2％。
试验例1
由于番茄红素在0.1M盐酸、水、pH 6.8磷酸盐缓冲液介质中几乎不溶解，首先测定其固体分散体的水溶解度。
实验方法如下：取过量的番茄红素固体分散体置于10ml 0.1M盐酸或pH 6.8磷酸盐缓冲液，于37℃水浴超声30min，用0.45μm孔径尼龙滤膜滤头过滤，续滤液HPLC(Agilent 1200高效液相色谱仪)进样测定。
含量和溶解度测定方法采用高效液相色谱法，流动相为100％乙腈，检测波长为472nm，流速2.0ml/min，柱温30℃，色谱柱是C18柱(150×4.6mm，5μm)，番茄红素色谱保留时间为13min。采用外标法计算。测定结果见表1-1。
表1-1 不同的肠溶固体制剂中番茄红素在pH6.8磷酸盐缓冲液的溶解度(HPLC法测定)
由表1-1的溶解度结果可知，固体分散体技术对番茄红素具有增溶作用，由于载体的不同，增溶效果也不一样，HPMCAS AS-LF对番茄红素的增溶作用较差，而载体Soluplus、HPMCP HP-55的增溶效果较好；加入表面活性剂后增溶效果更明显。
分别取表1-1中实施例1-4的2个固体分散体样品，按番茄红素∶微晶纤维素∶低取代羟丙基纤维素∶硬脂酸镁＝5∶2∶1∶0.5的比例混合压片(旋转式压片机ZP-5，上海天和制药机械有限公司)，用含HPMCAS AS-LF的肠溶包衣溶液包衣(OHARA实验型高效包衣机)，包衣增重为15重量％，得到样品1和样品2，待测溶出度。其中肠溶包衣溶液中HPMCAS AS-LF、TEC、滑石粉、十二烷基硫酸钠分别占包衣溶液固含量重量的72％、11％、15％、2％。
本发明采用体外溶出度实验模拟药物在胃肠道内的溶出过程，实验方法如下：参照中国药典附录2005版XD释放度测定第二法(用于肠溶制剂)测定，溶出介质为750ml 0.1M盐酸，转速为100r/min，温度为37℃±0.5℃，于溶出45分钟时取样5ml，过滤弃去1ml初滤液，取续滤液，HPLC法进样测定在0.1M盐酸的溶出度(Agilent 1200高效液相色谱仪)，并迅速补充同温等体积溶出介质，同时加入250ml 0.2M磷酸钠溶液，用2M氢氧化钠溶液调节pH至6.8±0.05，于60min时间点取样5ml并迅速补充同温同体积pH 6.8磷酸盐缓冲液，测定在pH 6.8磷酸盐缓冲液的溶出度。结果见表1-2。
表1-2 番茄红素肠溶固体制剂的累积溶出度标示百分含量(％)测定结果表
试验例2
本发明采用体外溶出度实验模拟白藜芦醇在胃肠道内的溶出过程，实验方法如下：参照中国药典附录XD释放度测定第二法(用于肠溶制剂)测定，溶出介质为750ml 0.1M盐酸，转速为100r/min，温度为37℃±0.5℃，于溶出45分钟时取样5ml，过滤弃去1ml初滤液，取续滤液，HPLC法进样测定在0.1M盐酸的溶出度(Agilent 1200高效液相色谱仪)，并迅速补充同温等体积溶出介质，同时加入250ml 0.2M磷酸钠溶液，用2M氢氧化钠溶液调节pH到6.8±0.05，分别于0.5h、1h时间点取样5ml并迅速补充同温同体积pH 6.8磷酸盐缓冲液，测定在pH6.8磷酸盐缓冲液的溶出度。结果见表2-1。
白藜芦醇的含量和溶出度测定方法采用高效液相色谱法，流动相为27/73(v/v)乙腈/水，检测波长为303nm，流速1.0ml/min，柱温30℃，色谱柱是C18柱(250×4.6mm，5μm)，白藜芦醇色谱保留时间为10.356min。采用外标法计算。
表2-1 白藜芦醇肠溶固体制剂的累积溶出度标示百分含量(％)测定结果表
由表2-1的溶出度结果可知：相同载体和相同比例下不同制备方法即喷雾干燥法与热熔法制备增溶效果相似，如见实施例2-1和2-2的溶出结果；当载体为HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55、Poloxamer 188时，白藜芦醇的肠溶固体制剂既能增溶又能控制白藜芦醇在酸中少量释放；药物与肠溶载体HPMCAS AS-LF重量比在1∶2至1∶8均能很好地达到对白藜芦醇增溶的作用；HPMC E5作为载体有增溶作用但增溶效果不明显。
表2-2 白藜芦醇肠溶固体制剂的稳定性考察有关物质测定结果表
由表2-2考察数据可看出，白藜芦醇与载体HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55、Poloxamer 188制备的肠溶固体制剂稳定性好，同时也表明白藜芦醇与载体HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55、Poloxamer 188相容性均很好。
试验例3
本发明采用体外溶出度实验模拟药物在胃肠道内的溶出度，实验方法如下：
本发明采用体外溶出度实验模拟褪黑素在胃肠道内的溶出过程，实验方法如下：参照中国药典附录XD释放度测定第二法(用于肠溶制剂)测定，溶出介质为750ml 0.1M盐酸，转速为100r/min，温度为37℃±0.5℃，于溶出60分钟时取样5ml，过滤弃去1ml初滤液，取续滤液，HPLC法进样测定在0.1M盐酸的溶出度(Agilent 1200高效液相色谱仪)，并迅速补充同温等体积溶出介质，同时加入250ml 0.2M磷酸钠溶液，用2M氢氧化钠溶液调节pH到6.8±0.05，分别于30分钟、60分钟时间点取样5ml并迅速补充同温同体积pH6.8磷酸盐缓冲液，测定在pH 6.8磷酸盐缓冲液的溶出度。实验结果见表3-1。
表3-1 褪黑素固体分散体累积溶出度标示百分含量(％)测定结果表
由表3-1的溶出度结果可知：相同载体和相同比例(实施例3-3与3-4)下不同制备方法即喷雾干燥法与热熔法制备增溶效果一样；当载体为HPMCAS AS-LF、Eudragit L100-55、HPMCP HP-55、Poloxamer 188时，褪黑素的肠溶固体制剂既能增溶又能控制褪黑素在酸中少量释放；药物与肠溶载体HPMCAS AS-LF重量比在1∶2到1∶10均能很好地达到对褪黑素增溶的作用。
表3-2 褪黑素肠溶固体制剂的稳定性考察有关物质测定结果表
由表3-2考察数据可看出，褪黑素与载体HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55制备的肠溶固体制剂稳定性好，同时也表明白藜芦醇与载体HPMCAS AS-LF、HPMCP HP-55相容性均很好。
本发明实施例和试验例中所使用的药物、载体辅料和其它辅料均是市售可得的，其中番茄红素原料购自华北制药有限公司的产品(批号100503)、白藜芦醇原料购自长沙惠瑞生物科技有限公司的产品(批号100125)、褪黑素原料为浙江黄岩延年褪黑素有限公司生产的赠送样品(批号100920)；Eudragit L100 55是Degussa公司生产的赠送样品(批号B060904025)；HPMCAS AS-LF购自日本信越化学工业株式会社生产的产品HPMCAS AS-LF(批号9013010)，HPMCP HP-55购自日本信越化学工业株式会社生产的产品HPMCP HP-55(批号7091249)，Kollidone VA64为BASF公司生产的赠送样品Kollidone VA64，PEG4000购自国药集团化学试剂有限公司的产品PEG4000(批号T20090312)，Poloxamer188为BASF公司生产的赠送样品Poloxamer188(批号WPMD507C)、Soluplus、Cremophor RH40、Cremophor EL均为BASF公司生产的赠送样品(批号分别为20777268E0、89689075L0、92273309T0)，微晶纤维素购自山东曲阜天利药用辅料有限公司生产的产品(批号080904)，低取代羟丙基纤维素为湖州展望药业有限公司赠送的产品(批号20100221)，硬脂酸镁购自安徽山河药用辅料有限公司生产的产品(批号090401)，其它所使用的辅料也是本领域技术人员已知的。