一种抗呼吸道合胞病毒中药组合物及其制备方法与流程

文档序号:13012416阅读:551来源:国知局
技术领域
本发明涉及中药组合物及其制造技术领域,特别是涉及一种抗呼吸道合胞病毒中药组合
物及其制备方法。


背景技术:

呼吸道合胞病毒(respiratorysyncytialvirus,RSV)为副粘病毒科、肺炎病毒属的负链RNA
病毒,其感染遍及全世界。RSV是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎的主要病原体之一,感
染后易遗留长期肺功能异常,可诱发过敏症和哮喘。目前,对RSV感染尚无特效治疗和预防
方案(实用儿科临床杂志,2001,16(13);176.),临床上多采用特异性抗体进行支持疗法,或是
被动免疫治疗如采用干扰素(IFN)等,也有采用广谱抗病毒药如利巴韦林进行治疗。利巴韦
林虽被证明可以用于治疗RSV感染,但由于其毒性较大,近年来对其疗效存在较大争议。中
药是中国乃至世界的医学宝库,中药治疗病毒性感染的疾病已经有几千年的历史。中药抗病
毒疗效显著,抗病毒谱广,全身用药无明显组织细胞毒性、致畸、致突变、免疫抑制或骨髓
抑制,一般无耐药性产生,对持续性和整和性感染有效。因此,很有必要在现有技术的基础
之上,寻找开发一种抗呼吸道合胞病毒作用强、不良反应小的本发明提供的中药组合物及
其制备方法。


技术实现要素:

本发明的目的是提供一种抗呼吸道合胞病毒中药组合物及其制备方法。
本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的:
一种抗呼吸道合胞病毒中药组合物,其特征在于,由以下中药原药材制备而成:柳叶菜
风毛菊,甘青青兰,甘草,黄芩和败酱草。
进一步,所述抗呼吸道合胞病毒中药组合物,其特征在于,由以下重量配比的原药材制
备而成:柳叶菜风毛菊10-30份,甘青青兰10-30份,甘草10-20份,黄芩5-15份,败酱草
5-15份。
进一步,所述抗呼吸道合胞病毒中药组合物,其特征在于,其最佳配比为按以下重量份
的原药材制备而成:柳叶菜风毛菊20份,甘青青兰20份,甘草15份,黄芩10份,败酱草
10份。
一种抗呼吸道合胞病毒中药组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)按重量份配比取所述原药材中的柳叶菜风毛菊和甘青青兰,粉碎至60-120目,加
入10倍体积的95%的乙醇,在60℃的水浴中回流提取2小时,滤渣重复处理两次,合并滤

液,将滤液浓缩、干燥得醇提物;
(2)按重量份配比取所述原药材中的甘草,黄芩和败酱草,粉碎至60-120目,加人10
倍体积的水浸泡10小时,煎煮1小时后再用8倍水煎煮30分钟,负压抽滤后合并滤液,减
压蒸发浓缩、干燥得水提物;
(3)将步骤(1)所得醇提物和步骤(2)所得水提物粉碎并混合均匀制成药物学上常用
剂型。
所述药物学上常用剂型为颗粒、片剂或者胶囊。
本发明提供的抗呼吸道合胞病毒中药组合物具有以下优点:
抗呼吸道合胞病毒活性强,并且经毒性实验结果表明,本发明提供的有效剂量较小,毒
性小,无不良反应,使用更安全,并且原材料易得,成本较低,可持续开发,应用前景广泛。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容,但并不以此限定本发明保护范围。尽
管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明
的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
实施例1
分别取原药材柳叶菜风毛菊20克,甘青青兰20克,甘草15克,黄芩10克,败酱草10
克;
(1)将所取得原药材柳叶菜风毛菊20克和甘青青兰克混合,粉碎至60-120目,加入10
倍体积的95%的乙醇,在60℃的水浴中回流提取2小时,滤渣重复处理两次,合并滤液,将
滤液浓缩、干燥得醇提物;
(2)将所取得原药材甘草15克,黄芩10克和败酱草10克混合,粉碎至60-120目,加
人10倍体积的水浸泡10小时,煎煮1小时后再用8倍水煎煮30分钟,负压抽滤后合并滤
液,减压蒸发浓缩、干燥得水提物;
(3)将步骤(1)所得醇提物和步骤(2)所得水提物粉碎并混合均匀制成颗粒。
实验例1
1、试剂和仪器
DMEM培养基,除菌过滤后用碳酸氢钠调pH至7.0~7.2;新生牛血清,杭州四季青,
经56℃,30min灭活补体,除菌分装;维持液为含2%小牛血清的DMEM培养基;96孔培养
板;CO2培养箱;超净工作台;倒置显微镜。
人喉表皮癌细胞Hep-2细胞;呼吸道合胞病毒(RSV,Long株)分离株。
2、实验药物
将实验例1中得到的中药组合物用DMSO稀释为100μg/μL贮存液备用。
3、病毒滴度测定
将活化好的毒株作10倍系列稀释,10-1~10-9,常规方法感染致密单层Hep-2细胞,
每孔100μl,设8个复孔,同时设正常细胞对照,34.5℃,5%CO2培养箱培养4d,每天观
察细胞病变效应(CPE)情况,CPE程度可分为从“+”~“++++”。
4、药物对Hep-2细胞毒性测定
将胰酶消化后的Hep-2细胞,以5×103个/孔密度接种到96孔培养板中,37℃,5%CO2
培养24h后,弃液,用含鸡血清2.5%的DMEM培养基将药物倍比稀释成6个系列浓度(起始
浓度为500μg/ml)加入96孔板,100μl/孔,每个稀释度设3个复孔,同时设正常细胞对照
组,继续培养48h后,观察并记录药物作用于细胞的最大无毒浓度TC0。
5、药物抗病毒的药效学实验方法和结果
将100TCID50的RSV病毒液接种于已长成单层的Hep-2细胞中,每孔50μl,并在药
物无毒浓度范围内加入含不同浓度的藏药提取物及利巴韦林的维持液,每孔50μl,每个剂量
组重复3孔,于34.5℃、5%CO2培养箱继续培养。同时设正常细胞对照、病毒对照。每天在
倒置显微镜下观察细胞形态,以病毒对照组CPE达到75%,且细胞对照正常时为实验观察终
点,记录各孔CPE程度。结果如下表所示:
表1利巴韦林抗RSV药效学实验结果
样品μg·ml-1500
250
125
62.5
31.25
15.625
利巴韦林
-
-
-
-
+
+
“-”表示没有病变,0%~25%为“+”
表2中药组合物抗RSV药效学实验结果
样品μg·ml-1500
250
125
62.5
31.25
15.625
中药组合物
-
-
-
+
++
+++
“-”表示没有病变;0%~25%为“+”;26%~50%为“++”;51%~75%为“+++”;76%~100%为
“++++”;RSV对照组为“+++”;细胞对照组为“-”
在抗病毒活性实验中,Hep-2细胞对照未出现病变,阳性对照药物利巴韦林在3.125μg
/ml以上浓度时有明显抑制RSV的作用。随着实施例1中药组合物浓度的增大,Hep-2细胞
病变(指病毒引起的细胞病变;细胞变大,融合,脱落形成空斑)的程度逐渐减弱,当药物浓
度达到125μg/ml时,细胞病变被完全抑制,即中药组合物浓度在体外完全抑制RSV增殖的
有效浓度为125μg/ml以上。
实施例2
分别取原药材柳叶菜风毛菊10克,甘青青兰10克,甘草10克,黄芩5克,败酱草5克;
(1)将所取得原药材柳叶菜风毛菊20克和甘青青兰克混合,粉碎至60-120目,加入10
倍体积的95%的乙醇,在60℃的水浴中回流提取2小时,滤渣重复处理两次,合并滤液,将
滤液浓缩、干燥得醇提物;
(2)将所取得原药材甘草15克,黄芩10克和败酱草10克混合,粉碎至60-120目,加
人10倍体积的水浸泡10小时,煎煮1小时后再用8倍水煎煮30分钟,负压抽滤后合并滤
液,减压蒸发浓缩、干燥得水提物;
(3)将步骤(1)所得醇提物和步骤(2)所得水提物粉碎并混合均匀制成片剂。
实施例3
分别取原药材柳叶菜风毛菊30克,甘青青兰30克,甘草20克,黄芩15克,败酱草15
克;
(1)将所取得原药材柳叶菜风毛菊20克和甘青青兰克混合,粉碎至60-120目,加入10
倍体积的95%的乙醇,在60℃的水浴中回流提取2小时,滤渣重复处理两次,合并滤液,将
滤液浓缩、干燥得醇提物;
(2)将所取得原药材甘草15克,黄芩10克和败酱草10克混合,粉碎至60-120目,加
人10倍体积的水浸泡10小时,煎煮1小时后再用8倍水煎煮30分钟,负压抽滤后合并滤
液,减压蒸发浓缩、干燥得水提物;
(3)将步骤(1)所得醇提物和步骤(2)所得水提物粉碎并混合均匀制成片剂。
上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容,但并不以此限定本发明的保护范围。
本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱
离本发明技术方案的实质和保护范围。
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