一种利用树莓枝叶制备鞣花酸浓缩物的方法与流程

本发明属于农产品副产品高效综合利用技术领域，具体涉及通过溶剂提取树莓枝中的鞣花酸后除溶剂和提取助剂方法。

背景技术：

我国早有树莓用药的记载，《千金食治》中记载树莓“味甘，平，无毒”，“入肝、肾二经”具有补肝肾、缩小便，助阳，固精，明目，治阳痿，遗精，遗弱，虚劳，目暗的作用，是苗族的传统民间用药。其根、莲、叶皆可入药，根性味略苦，具有祛风活血、解毒敛拖功效，主治铜疾、蛇咬、闭经痛经、湿疫、风湿腰痛等症。截至到2012年我国树莓的种植面积已经达到18万亩，并且近三年树莓种植面积迅速增加。根据2012年树莓种植面积每年树莓平茬后废弃的树莓枝叶达到3万多吨，并且逐年递增，到目前为止仅有少量的树莓叶被收购用于树莓茶的制作，大部分被废弃于田野或焚烧而造成环境的污染。根据本课题组研究发现树莓含有多种功能性成分，主要有花青素、鞣花酸和黄酮类等酚类物质、水杨酸、抗坏血酸和树莓苷等，这些功能性成分具有特殊的生理功能和生物学活性，其中树枝中鞣花酸的含量是果实中的50多倍。因此，对树莓枝叶进行功能性成分的提取，对于提高树莓种植的经济效益具有非常重要的意义。

目前，我国的树莓加工品全部依赖进口，只有在大城市的超市才能买到，例如北京燕莎、赛特所出售的树莓饮料、果酱、酸奶等产品全部是进口货，价格昂贵，被称之为“贵族消费”品。国外关于树莓加工的报导也不是很多，但对树莓中的功效成分的研究比较活跃，做了大量的基础研究工作，为树莓的深层次开发奠定了基础。中央电视台报道，日本从树莓籽中提取树莓类黄酮，用于替代辣椒素作消脂剂，减肥消脂功效是辣椒素的十倍。日本已利用树莓为原料开发出全天然高级护肤用品。我国只是在近几年，黑龙江、吉林、天津、江苏、广东等省市先后进行了果酒、饮料、浓缩汁、果酱、罐头及速冻食品的研究与利用；广东与日本合作从甜叶悬钩中提取出了比蔗糖甜300多倍的悬钩酐。另外在医药利用方面也取得了一些进展，如对茅莓、掌叶覆盆子等开展了药理、药物及成分方面的研究，开发出了有一定疗效的中成药，中山大学和广州中药总厂合作研制了有较好疗效的“止血灵”注射液。开展树莓枝果叶中活性成分的分离、提取和浓缩将有利于我国树莓深加工产品的发展。

技术实现要素：

为了实现树莓枝叶得到充分利用，提高树莓产业的经济效益，本发明解决的技术问题通过如下方案实现。

（1）树莓枝的处理：平茬后的树莓枝风干处理后，水分含量控制在7%以上后，用高速万能粉碎机将干燥的树莓枝粉碎，盛装在塑封袋里置于阴凉干燥处，备用。

（2）鞣花酸的提取：对步骤（1）处理的树莓枝，在盐酸浓度1.2-2.0mol/l，乙醇浓度为50%，料液比1:55-60（m/v），85℃条件下回流时间120-160min，获得鞣花酸粗提液。

（3）浓缩沉淀：将步骤（2）获得粗提液在0.1mpa，75-90℃真空浓缩至提取液1/3后，测得提取液中的酒精含量为零，常温冷却至20-25℃后放入3.5-4.5℃冷藏12小时后大量沉淀产生，然后滤纸过滤，得到树莓枝提取沉淀物。

（4）水洗至中性：对步骤（3）获得树莓枝提取沉淀物用蒸馏水进行水洗，洗至水呈中性后干燥至水分含量6%以下，即为树莓枝提取获得的鞣花酸浓缩物。

鞣花酸的测定：

液相色谱条件。色谱柱为symmetryc18柱(4.6×250mm，5μm)；流动相为ch3cn－0.1%磷酸(体积比21：79)；流速为1ml/min；柱温为35℃；检测波长为253nm；

标准品溶液的制备。准确称取5.00mg鞣花酸标准品，至于50ml容量瓶中，用二甲基亚砜溶解定容至刻度线，得到浓度为100ppm的鞣花酸标准溶液。再以此溶液为母液，用二甲基亚砜分别稀释配成浓度为80ppm、60ppm、40ppm、20ppm、5ppm的标准溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，备用；

标准曲线建立。将上述制备的不同浓度的鞣花酸标准品上液相色谱仪，得到相对应的色谱图（见附图1），以浓度x（ppm）为横坐标，峰面积y为纵坐标，作标准曲线，得到鞣花酸标准曲线回归方程为y=151.69x-1003（r²=0.9998）。该曲线方程表明鞣花酸标准溶液浓度在0.005~0.3mg/ml范围内线性关系良好，可用于分析样品中的鞣花酸含量；

供试品溶液的制备。准确称取0.5g步骤（4）的鞣花酸浓缩物用二甲基亚砜溶解定容至50ml，用注射器吸取1~2ml过0.45μm微孔滤膜，上液相色谱仪测定（见附图2）。

鞣花酸浓缩物的含量：经液相测定树莓枝鞣花酸浓缩物含量在16.9%~20.7%之间。

本发明的优势在于：

（1）已有文献发明报道主要以树莓果实为原料提取鞣花酸为主的产品，而本发明以树莓枝叶为原料，成本低，并有利于农产品废弃物的利用；

（2）鞣花酸浓缩物制备后的初步净化采用最为原始的沉淀清洗的方式获得鞣花酸含量在16%以上的粉末制品，生产工艺简单，投资成本低，易于规模化生产；

（3）所制的鞣花酸浓缩物参照qb/t2489-2007食品原料用芦荟制品相关卫生标准，经检验砷、铅、六六六、滴滴涕、菌落总数、大肠杆菌、霉菌和酵母菌、致病菌（沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌）检验均低于芦荟粉。因此，该制品可以作为一种新型食品原料的备选和医药原料。

附图说明

图1本发明实验条件下鞣花酸标准品的液相色谱图。

图2本发明制的鞣花酸浓缩物的液相测定图。

具体实施方式

下面结合具体事例对发明做详细介绍：

本发明所用树莓枝为夏秋两季结果型树莓品种海尔特兹（heritage）平茬枝叶，该品种辽宁省果树科学研究所2003年从中国林业科学院引进，原产美国。

如无特殊说明，本发明所用材料均为市售可得。食用级盐酸，购于中山市高达化工有限公司；食用酒精，购于河南天冠企业集团有限公司；鞣花酸标准品，购于成都曼思特生物科技有限公司，批号：must-14110807；二甲基亚砜（分析纯），天津市富起化工有限公司；乙腈（色谱纯，购买xingmakechemicals；磷酸，购于天津市进丰化工有限公司；哇哈哈纯净水购于杭州娃哈哈集团有限公司；

仪器设备：agilent-1100高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂，型号re-52a；电热恒温水浴锅，北京市长风仪器仪表公司，型号hwsy11-k；电子天平，余姚市金诺天平仪器有限公司，型号jf1004；高速万能粉碎机，北京中兴伟业仪器有限公司，型号fw100；回流提取装置。

实施例1

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为6.8%，粉碎至40目，取20g树莓枝粉末，加入1000ml的50%乙醇（含盐酸1.2mol）溶液，于85℃提取150min后，0.1mpa，75℃浓缩至350ml，冷却到23℃后放入4.8℃冰箱冷藏室中冷却14小时后，用200目过滤后的沉淀物用30ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在53℃干燥至水分含量为6.8%，得到1.28g固体粉末，测得鞣花酸含量为16.9%。

实施例2

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为7.0%，粉碎至40目，取10g树莓枝粉末，加入550ml的50%乙醇（含盐酸0.82mol）溶液，于85℃提取140min后，0.1mpa，70℃浓缩至170ml，冷却到20℃后放入4.3℃冰箱冷藏室中冷却15小时后，用200目过滤后的沉淀物用18ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在53℃干燥至水分含量为7.2%，得到0.65g固体粉末，测得鞣花酸含量为17.2%。

实施例3

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为7.0%，粉碎至40目，取20g树莓枝粉末，加入1200ml的50%乙醇（含盐酸2.2mol）溶液，于84℃提取140min后，0.1mpa，70℃浓缩至380ml，冷却到25℃后放入3.8℃冰箱冷藏室中冷却16小时后，用200目过滤后的沉淀物用36ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在58℃干燥至水分含量为7.8%，得到1.4g固体粉末，测得鞣花酸含量为18.7%。

实施例4

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为7.0%，粉碎至40目，取15g树莓枝粉末，加入800ml的50%乙醇（含盐酸1.5mol）溶液，于83℃提取160min后，0.1mpa，78℃浓缩至270ml，冷却到23℃后放入4.2℃冰箱冷藏室中冷却18小时后，用200目过滤后的沉淀物用30ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量为7.1%，得到0.94g固体粉末，测得鞣花酸含量为18.3%。

实施例5

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为6.6%，粉碎至40目，取10g树莓枝粉末，加入570ml的50%乙醇（含盐酸1.09mol）溶液，85℃条件下回流时间150min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用24ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在52℃干燥至水分含量为7.2%，得到0.64g固体粉末，测得鞣花酸含量为20.1%。

实施例6

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为6.6%，粉碎至40目，取5g树莓枝粉末，加入280ml的50%乙醇（含盐酸0.5mol）溶液，87℃条件下回流时间150min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用12ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在50℃干燥至水分含量为7.8%，得到0.31g固体粉末，测得鞣花酸含量为19.8%。

实施例7

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为6.6%，粉碎至40目，取30g树莓枝粉末，加入1800ml的50%乙醇（含盐酸2.7mol）溶液，85℃条件下回流时间160min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用72ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在65℃干燥至水分含量为6.8%，得到1.72g固体粉末，测得鞣花酸含量为19.5%。

实施例8

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为6.6%，粉碎至40目，取30g树莓枝粉末，加入1800ml的50%乙醇（含盐酸2.7mol）溶液，85℃条件下回流时间150min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用72ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在65℃干燥至水分含量为6.8%，得到1.72g固体粉末，测得鞣花酸含量为19.5%。

实施例9

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为7.1%，粉碎至40目，取10g树莓枝粉末，加入570ml的50%乙醇（含盐酸1.03mol）溶液，86℃条件下回流时间150min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用24ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量为6.5%，得到0.62g固体粉末，测得鞣花酸含量为18.9%。

实施例10

将平茬的树莓枝叶干燥至水分含量为7.1%，粉碎至40目，取20g树莓枝粉末，加入1200ml的50%乙醇（含盐酸1.7mol）溶液，83℃条件下回流时间150min，获得鞣花酸粗提液用200目过滤后的沉淀物用24ml蒸馏水分六次清洗至呈中性，在55℃干燥至水分含量为6.8%，得到1.3g固体粉末，测得鞣花酸含量为18.7%。