含大星芹提取物的用于美白肌肤的组合物的制作方法

本发明涉及到含有大星芹(masterwort)(Peucedanumostruthium)提取物的组合物
背景技术：
：黑色素是决定人类皮肤颜色的颜料。皮肤颜色系由黑色素的量和分布决定。产生黑色素的细胞衍生自位于表皮的底部层的黑素细胞，而皮肤新陈代谢的结果，朝向角质层移动而丢失。不管肤色，黑素细胞的数量几乎是恒定的，但所产生黑色素的量、类型及分布的差异，形成不同的皮肤颜色。在皮肤中，藉由所谓「酪氨酸酶」的酶，通过一系列的氧化过程，将酪氨酸转化为多巴(二羟基丙氨酸)，最后变成棕黑色聚合物黑色素。黑色素是由位于皮肤的基底层的黑素细胞产生的。已知紫外线、炎症等可刺激黑色素生成。因此，通过减少外部刺激，中断信号转导，抑制黑色素目前，已知的是曲菌酸、对苯二酚、熊果苷、壬二酸、芦荟苦素、4-丁基间苯二酚、白藜芦醇、神经酰胺、鞘氨醇-1-磷酸酯、神经鞘氨醇磷酸胆碱等可通过促进酪氨酸酶的降解或调节糖基化，以控制黑色素的生成。然而，由于不理想的皮肤美白效果、稳定性低、且皮肤过敏，其效用没有那么高。因此，有必要开发皮肤美白效果优越且副作用少的物质。技术实现要素：技术问题本发明提供具有优异的皮肤美白效果的组合物。技术方案在一方面，本发明提供用于皮肤美白的组合物，其中包含作为活性成分属于伞形科的大星芹提取物(以下略为大星芹提取物)。有益效果在本发明中用于皮肤美白的组合物，其中包含作为活性成分的大星芹提取物，通过减少黑色素生成和抑制酪氨酸酶活性，来表现出皮肤美白效果，同时具有稳定性，不会对细胞产生负面影响。因此，它可以广泛地应用于皮肤外用组合物、化妆品组合物和药物组合物。附图说明图1显示测量使用本发明大星芹提取物后，对照使用前拍摄的照片，所得黑色素含量降低的结果图表。图2显示藉由本发明大星芹提取物测试酪氨酸酶活性的降低结果。具体实施方式2014年6月30日提交的韩国专利申请号10-2014-0080477的全部内容并入本发明中。此外，本申请主张韩国专利申请号10-2014-0080477的优先权，其全部内容通过引用并入本文。在下文中，将详细描述本发明的具体实施例，使得本发明本领域技术人员可以容易地实施本发明。在下文中，详细地描述本发明的具体实施方式，以便使对所属
技术领域：
中具有通常知识者能够容易地实施本发明。在一方面，本发明涉及含有大星芹提取物作为活性成分的组合物。在本发明的一方面中，该组合物可以是用于皮肤美白的组合物。在本发明的一方面中，根据本发明的组合物可以是药物、食品或化妆品组合物。具体而言，在本发明的一方面中，本发明的组合物可以是外用到皮肤的组合物。在一方面，本发明可以涉及皮肤美白的方法，其中包括对需要皮肤美白的个体给予大星芹提取物。具体而言，所述给药可以通过本发明中所描述的给药方法来实现。在一方面，本发明可以涉及藉由大星芹的提取物使皮肤美白。在一方面，本发明可以涉及应用于皮肤美白的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于减少黑色素的组合物，其中包含作为活性成分的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及一种用于减少黑色素的方法，其包括向需要减少黑色素的受试者给药大星芹提取物。具体而言，所述给药可以通过本发明中所描述的给药方法来实现。在一方面，本发明可以涉及大星芹提取物在减少黑色素中的应用。在一方面，本发明可以涉及应用于减少黑色素的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于抑制黑色素生成的组合物，其中包含作为活性成分的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于抑制黑色素生成的方法，其包括：向需要抑制黑色素生成的受试者给药大星芹提取物。具体而言，所述给药可以通过本发明中所描述的给药方法来实现。在一方面，本发明可以涉及大星芹提取物在抑制黑色素产生中的应用。在一方面，本发明可以涉及应用于抑制黑色素产生的大星芹提取物。在本发明中，“黑色素减少”可指减少已经存在于细胞等中的黑色素含量，而“抑制黑色素生成”可指在细胞中的抑制新黑色素的产生等。在一方面，本发明可以涉及用于抑制酪氨酸酶活性的组合物，其含有作为活性成分的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于抑制酪氨酸酶活性的方法，其包括向需要抑制酪氨酸酶活性的受试者给药大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及大星芹提取物在抑制酪氨酸酶活性中的应用。在一方面，本发明可以涉及应用于抑制酪氨酸酶活性的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于抑制色素沉着的组合物，其中包含作为活性成分的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及用于抑制色素沉着的方法，其包括向需要抑制酪氨酸酶活性的受试者给药大星芹提取物。具体而言，所述给药可以通过本发明中所描述的给药方法来实现。在一方面，本发明可以涉及大星芹提取物在抑制色素沉着中的应用。在一方面，本发明可以涉及应用于抑制色素沉着的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及一种用于治疗、改善或预防色素沉着紊乱(pigmentationdisorder)的组合物，其包含作为活性成分的大星芹提取物。具体而言，在一方面，本发明可以涉及一种用于治疗或预防色素沉着紊乱的药物组合物、或用于改善或预防色素沉着紊乱的食品组合物，这些组合物包含作为活性成分的大星芹提取物。在一方面，本发明可以涉及一种用于治疗、改善或预防色素沉着紊乱的方法，其包括：向需要治疗、改善或预防色素沉着紊乱的受试者给药大星芹提取物。具体而言，所述给药可以通过本发明中所描述的给药方法来实现。在一方面，本发明可以涉及大星芹提取物在治疗、改善或预防色素沉着紊乱中的应用。在一方面，本发明可以涉及应用于治疗、改善或预防色素沉着紊乱的大星芹提取物。在本发明的一方面，术语“色素沉着紊乱”用在一种广泛的概念上，包括的各种原因引起的所有色素沉着紊乱。具体而言，它可以指发生在皮肤内的色素沉着紊乱，但不限于此。具体而言，在本发明的一方面，所述色素沉着紊乱可包括老年斑、炎性色素沉着紊乱、雀斑、后天真皮黑变病(acquireddermalmelanosis)、色素沉着过度等，但并不限于此。在本发明中，术语“色素”或“过度色素沉着”是指皮肤损伤，特征在于实际或觉察到的、过暗的肤色。皮肤损伤可以是实际的，而由于老化、过度暴露于阳光或疾病的条件下也会出现暗色的皮肤区域。暗皮肤区域可呈现斑点、红斑点或比较大的暗区的形式。对皮肤的伤害也可能是一个希望有浅色皮肤的人的认知。因此，本发明的组合物可用于各种类型的皮肤色素病症，例如黑色素瘤，藉由例如在面部或身体的其他部分去除着色暗斑，或诱导色素沉着皮肤的自发美白。通常情况下，黝黑的皮肤损伤是由黑色素增加而造成。根据本发明的组合物可被用于治疗过度色素沉着，例如，减轻深色皮肤或防止色素沉着，或藉由降低或防止过多黑色素生成以防止皮肤变黑。在本发明的一方面中，在组合物中所述大星芹提取物的浓度系占所述组合物总重量的0.1-10ppm(w/w)，尽管并不限于此。具体而言，在本发明的一方面中，所述组合物中的大星芹提取物的浓度可以占所述组合物总重量的0.01ppm或以上、0.1ppm或以上、0.5ppm或以上、0.6ppm或以上、0.7ppm或以上、0.8ppm或以上、0.9ppm或以上、1.0ppm或以上、1.1ppm或以上、1.2ppm或以上、1.3ppm或以上、1.4ppm或以上、1.5ppm或以上、1.6ppm或以上、1.7ppm或以上、1.8ppm或以上、1.9ppm或以上、2.0ppm或以上、2.1ppm或以上、2.2ppm或以上、2.3ppm或以上、2.4ppm或以上、2.5ppm或以上、2.6ppm或以上、2.7ppm或以上、2.8ppm或以上、2.9ppm或以上、3ppm或以上、3.2ppm或以上、3.4ppm或以上、3.6ppm或以上、3.8ppm或以上、4.0ppm或以上、4.5ppm或以上、5.0ppm或以上、5.5ppm或以上、6.0ppm或以上、7.0ppm或以上、8.0ppm或以上、9.0ppm或以上、10.0ppm或以上、50ppm或以上、100ppm或以上、500ppm或以上、或1,000ppm或以上，但不限于此，并且可以是占所述组合物总重量的2,000ppm或以下、1,000ppm更低，500ppm或以下、100ppm或以下、50ppm或以下、15.0ppm或以下、10.0ppm或以下、8.0ppm或以下、6.0ppm或以下、5.5ppm或以下、5.0ppm或以下、4.5ppm或以下、4.0ppm或以下、3.8ppm或以下、3.6ppm或以下、3.4ppm或以下、3.2ppm或以下、3.0ppm或以下、2.8ppm或以下、2.6ppm或以下、2.4ppm或以下、2.2ppm或以下、2.0ppm或以下、1.8ppm或以下、1.6ppm或以下、1.4ppm或以下、1.2ppm或以下、1.0ppm或以下、0.8ppm或以下、0.6ppm或以下、0.4ppm或更低或0.2ppm或以下。所述提取物的浓度单位是ppm(w/w)。在本发明的一方面，所述大星芹可以是选自大星芹植物的叶、花、茎和根中的一个或多个部分。具体而言，它可以是植物大星芹的叶。在本发明的一方面，所述大星芹提取物的制备方法包括：(1)利用水、有机溶剂或其混合物提取大星芹的步骤。在本发明的一方面，先于步骤(1)，所述制备方法可以进一步包括：对大星芹进行加工的步骤。具体而言，该加工可以是干燥和粉碎大星芹。然而，并不限于此，可以包括促进提取的任何加工。具体而言，干燥可以是阳光干燥、热空气干燥、蒸发干燥、喷雾干燥或冷冻干燥，更具体而言是热风干燥。另一方面，在本发明的一方面，不经任何处理，可提取生的大星芹。在本发明的一方面中，待提取后，所述制备方法可以进一步包括：在提取后通过蒸馏除去所述溶剂的步骤。具体而言，该蒸馏可以是真空蒸馏。在本发明的一方面，在蒸馏后，所述制备方法可以进一步包括：在所得浓缩物中添加甘油和防腐剂中的一种或多种物质的步骤。在本发明的一方面，在除去溶剂或在加入甘油和防腐剂中的一种或多种物质之后，所述制备方法可以进一步包括过滤的步骤。在本发明的一方面，所述大星芹提取物可以是选自水、有机溶剂及其混合物中的一种或多种的提取物。具体而言，在本发明的一方面，所述有机溶剂可以是选自C1-C6低级醇、丁二醇和丙二醇中的一种或多种物质。更具体而言，所述低级醇可以是乙醇。用于本发明的黑素细胞可以是PCT/KR2012/007815或韩国专利申请10-2011-0099728(角质形成细胞适应性黑素细胞，KaMC)中公开的黑素细胞。本发明中使用的黑素细胞可以是根据所述参考文献中公开的方法和程序获得的那些，并且还可以根据所述参考文献中公开的方法进行培养。黑色素细胞在布达佩斯条约下于2011年9月14日保藏于韩国生物科学和生物技术研究所的韩国典型培养物保藏中心(KCTC)，保藏号为KCTC12015BP。在本发明中，“皮肤”是指覆盖生物体表面的器官。它由表皮、真皮和皮下脂肪层组成，并且以最广泛的概念使用，不仅包括覆盖身体的面部或整个外部部分的组织，而且包括头皮和头发。在本发明中，“大星芹”是指伞形科伞形目的双子叶开花植物。这是常见于中欧和南欧的山脉，并经常被用来调味各种烈酒和苦啤酒。在本发明中，“提取物”是指从天然产物提取的物质，不论提取方法、提取溶剂、提取的组分或提取物的类型如何。所述提取物在广义上使用，包括任何物质，其通过加工或处理从天然产物中提取的物质而获得。具体地，所述加工或处理可以是对所述提取物进行发酵或酶处理。因此，在本发明中，所述提取物以广义概念使用，包括发酵产物、浓缩物和干燥产物。具体地，在本发明中，所述提取物可以是发酵产物。在本发明中，“大星芹提取物”包括通过提取大星芹而获得的任何物质，不论其提取方法、提取溶剂、提取的组分或提取物的类型如何。它包括通过包括用热、酸、碱、酶等处理的提取方法来获得的物质，并且以广泛的概念使用，包括可以从大星芹中通过加工或处理从大星芹中提取的物质而获得的任何物质。具体地，加工或处理可以是对大星芹提取物进行发酵或酶处理。因此，本发明的大星芹提取物可以是发酵产物。在本发明的一个方面，“大星芹”可以是提取物，生的大星芹、生的大星芹的粉碎产物、生的大星芹的干燥产物、生的大星芹的干燥粉碎产物或大星芹的发酵产物，但不限于此。此外，本发明中使用的大星芹的获取途径是不受限制的。它可以是栽培的或商购的。此外，可以使用大星芹的地面上的部分或根部分的全部或部分。更具体地，可以使用选自植物大星芹的叶、果实、茎、根和花中的一个或多个部分。本发明的大星芹不一定需要干燥，只要可以充分提取大星芹的活性成分就可以采取任何形式。在本发明的一个方面，水包括蒸馏水或纯净水，并且有机溶剂包括选自如C1-C5低级醇、丙酮、醚、乙酸乙酯、二乙醚、乙基甲基酮和氯仿中的一种或多种，但不限于此。在本发明的一方面，所述大星芹提取物可以包含大星芹的C1-C6醇提取物。具体地，所述醇可以是甲醇或乙醇。在本发明的一个方面，所述大星芹提取物可以根据包括通过用水、有机溶剂或其混合物提取大星芹的步骤的方法而获得。在本发明的一个方面，所述大星芹提取物可以是选自水、有机溶剂及其组合中的溶剂的粗提取物。有机溶剂可以是C1-C6醇。具体地，所述C1-C6醇可以是甲醇或乙醇。在本发明的一个方面，当用溶剂提取所述大星芹时，所加入的溶剂的量可以是大星芹的量的约5-15倍。具体地，所述溶剂的加入量可以为大星芹的10倍，但不限于此。在本发明的一个方面，所述提取可以通过热水提取、乙醇提取、加热提取、冷提取、回流提取、回流冷凝提取、超声波提取等来进行。本领域技术人员已知的任何提取方法可无限制地使用。具体地，可以通过热水提取或乙醇提取进行提取。在本发明的一个方面，提取可以在室温下进行。然而，为了更有效的提取，其可以在高温下进行。具体地，所述提取可以在约40-100℃，更具体地在约80℃进行，但不限于此。所诉提取可进行约2-14小时，具体为约8-14小时，更具体为约11-13小时，最具体为12小时。然而，提取时间不限于此，可以根据诸如提取溶剂、提取温度等条件而有所不同。所述提取可以进行多于一次，以获得更大量的活性成分。所述提取可以连续进行1-5次，更具体地连续进行3次，并且所得提取物可以组合在一起用于下次使用。在本发明的一个方面，所述大星芹提取物可以包含如上所述的大星芹的粗提取物，并且还可以包含具有低极性的有机溶剂的可溶性馏分，其通过用有机溶剂进一步提取粗提取物而获得。在本发明的一方面，有机溶剂可以是己烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇等，但不限于此。所述提取物或所述提取物的可溶性馏分可以直接使用，过滤然后浓缩来使用，或者在浓缩并干燥后使用。在本发明的一方面，所述干燥可以是蒸发干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。具体地，冷冻干燥可以在-50至-70℃进行3-4天。根据本发明的一方面的化妆品组合物的剂型没有特别限制，但可以根据目的适当地选择。例如，所述组合物可被制备成选自化妆水、柔肤水、爽肤水、收敛水、乳液、保湿乳液、滋养乳液、按摩霜、滋养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华液、滋养精华液、面膜、香皂、清洁泡沫、清洁洗剂、清洁霜、身体乳液和身体清洁剂中的一种或多种剂型，但不限于此。当根据本发明的化妆品组合物被制备成糊剂、霜剂或凝胶时，可将动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅氧烷、膨润土、二氧化硅、滑石、氧化锌等用作载体组分。当根据本发明的化妆品组合物被制备成粉末或喷雾剂时，可将乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末用作载体组分。特别地，当被它制成喷雾剂时，其可以进一步包含推进剂，例如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚。当根据本发明的化妆品组合物被制成溶液或乳液时，可将溶剂、增溶剂或乳化剂用作载体组分。例如，可以使用水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、或聚乙二醇或脱水山梨醇的脂肪酸酯。当根据本发明的化妆品组合物被制成悬浮液时，作为载体成分可以使用如水、乙醇或丙二醇的稀释剂、如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯和聚氧乙烯脱水山梨醇酯的悬浮剂、微晶纤维素、铝金属氢氧化物(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂，黄蓍胶等。当根据本发明的化妆品组合物被制成含表面活性剂的清洁剂时，可将脂肪醇硫酸盐、脂肪醇醚硫酸盐、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸盐、咪唑啉衍生物、甲基牛磺酸盐、肌氨酸盐、脂肪酸酰胺醚硫酸盐、烷基酰胺基甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、羊毛脂衍生物、乙氧基化甘油脂肪酸酯等用作载体成分。除了大星芹提取物之外，根据本发明的化妆品组合物还可以包含功能性添加剂和常用于化妆品组合物中的成分。功能性添加剂可以包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、多肽、多糖、鞘脂和海藻提取物中的物质。如有需要，本发明的化妆品组合物除了包含功能性添加剂之外还可以包含常用于化妆品组合物中的成分。进一步所包含的成分的例子可以包括油、脂肪、湿润剂、润肤剂、表面活性剂、有机或无机颜料、有机粉末、UV吸收剂、防腐剂、灭菌剂、抗氧化剂、植物提取物、pH调节剂、醇、着色剂、香料、血液循环促进剂、清凉剂、止汗剂、纯净水等。本发明还涉及皮肤外用组合物，其包含作为活性成分的大星芹提取物。皮肤外用组合物是指可以从皮肤外部涂抹的任何类型的组合物，其中可以包括各种类型的化妆品。根据本发明的药物组合物可以是各种口服或肠胃外剂型的形式。当将所述组合物制成剂型时，使用常用的稀释剂或赋形剂，例如填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等。用于口服给药的固体剂型包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、软或硬胶囊等，并且这些固体剂型可以通过与至少一种赋形剂如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等混合制备。除了简单赋形剂之外，还可以使用润滑剂如硬脂酸镁、滑石等。用于口服给药的液体剂型的例子包含悬浮液、内部使用的液体、乳剂、糖浆等。除了通常使用的简单稀释剂如水和液体石蜡之外，还可以包含各种赋形剂，例如保湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。用于肠胃外给药的剂型包括灭菌水溶液、非水溶液、悬浮液、乳液、冻干产品和栓剂。非水溶液或悬浮液可以包含丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄榄油、可注射的酯如油酸乙酯等。作为栓剂的基质，可以使用witepsol、聚乙二醇、吐温61、可可脂、月桂油、甘油明胶等。本发明的组合物可以包含所述活性成分的药学上可接受的盐，并且可以单独使用或与另一种药学活性化合物组合使用。所述盐没有特别限制，只要其是药学上可接受的盐即可。例如，可以使用盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氟酸、氢溴酸、甲酸、乙酸、酒石酸、乳酸、柠檬酸、富马酸、马来酸、琥珀酸、甲磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘磺酸等的盐。本发明的组合物可以根据所期望的目的进行胃肠外或口服给药。每日给药剂量可以为0.1-500mg/kg/体重，特别是1-100mg/kg/体重，每天给药一次或几次。特定患者的给药剂量可以根据患者的体重、年龄、性别和健康状况、饮食、给药时间、给药方法、排泄率、疾病的严重程度等而有所不同。根据常用方法，本发明的药物组合物可以配制成任何药学上合适的形式，可包括：口服剂型，例如粉末、颗粒剂、片剂、软或硬胶囊、悬浮剂、乳剂、糖浆、气溶胶等；皮肤外用剂型，例如软膏、霜剂等；栓剂、注射剂、注射用无菌溶液等。具体地，本发明的药物组合物可以被制成施用于皮肤外部的注射剂或剂型。本发明的组合物可以经由包括胃肠外途径和口服途径等各种途径给包括大鼠、小鼠、牛、人等的哺乳动物进行给药。可以预期所有类型的给药。例如，其可以口服给药、经皮给药、直肠给药、静脉内给药、肌内给药、皮下给药、子宫内给药或脑室内给药。根据本发明的组合物可以通过本领域技术人员容易选择的多种途径进行给药。特别地，根据本发明的药物组合物可作为皮肤外用剂型施用于皮肤上。在本发明的一个方面，所述食品组合物可以是保健功能性食品组合物。根据本发明的食品组合物的剂型没有特别限制。例如，其可以配制成片剂、颗粒剂、粉末、液体如饮料、焦糖、凝胶、棒剂等。每种剂型的食品组合物除了包含活性成分外，还包含本领域中通常使用的成分，这些成分的可以由本领域的技术人员毫无困难地进行选择。在这种情况下，可以实现协同效应。在根据本发明的食品组合物中，在本领域技术人员的水平内可以确定活性成分的给药剂量。例如，每日剂量可以是0.1-5000mg/kg/天，更具体为50-500mg/kg/天。然而，不限于此，施用剂量可以根据各种因素而变化，例如受试者的年龄和健康状况，并发症的存在等。例如，根据本发明的食品组合物可以是各种食品，例如口香糖、焦糖、糖果、冰棒、糖果等、饮料如软饮料、矿泉水、酒精饮料、或包含维生素、矿物质等的健康功能性食品。此外，根据本发明的食品组合物可以包含各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、包含合成和天然香料的风味剂、着色剂、增量剂(干酪，巧克力等)、果胶酸及其盐、藻酸及其盐、有机酸、保护性胶体增稠剂、pH调节剂、稳定剂、防腐剂，甘油、醇、碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。此外，本发明的功能性食品组合物可包含用于制备天然果汁、果汁饮料和蔬菜饮料的果肉。这些成分可以单独使用或组合使用。这些添加剂的含量不是很重要。通常，将本发明的组合物按100重量份计，它们的含量在约0-20重量份的范围内。以下，藉由实施例和测试实施例详细说明本发明。但是，下列实施例和测试实施例仅用于说明的目的，并且对所属
技术领域：
中具有通常知识者即了解本发明的范围不是限制于实施例和测试实施例。【实施例1】大星芹(Peucedanumostruthium)提取物的制备收割大星芹的叶子，热风干燥，并粉碎成粉末。用乙醇/水溶液提取而获得粉末，然后通过真空蒸馏除去乙醇。在所获浓缩物中，添加甘油和防腐剂后，通过过滤得到大星芹提取物。根据上述方法制备的大星芹提取物(ImperatoriaAO)亦可从DSM营养制品有限公司(4002Basel,Switzerland)购买，并使用于以下的测试实施例。【测试实施例1】黑色素的测量(1)细胞培养在37℃的5％CO2培养箱中，在6孔板中的人黑素细胞生长补充剂(HMGS；GibcoBRL，NY，USA)的M-254培养基(GibcoBRL，NY，USA)内，培养被保藏在韩国典型培养物保藏中心中的黑素细胞(KaMC；KCTC12015BP)，每隔一天更换培养基，直到细胞占据板面积的95％(95％融合)。(2)用提取物的处理当在6孔板的黑素细胞的密度达到约80％(融合)，用10nM色素诱导物质(人内皮素1，EDN1；美国，ProSpec生物有限公司)和不同浓度(0、0.1、1和2ppm)的实施例1的大星芹提取物分别培养5天。将未用色素诱导物质和实施例1大星芹提取物处理的细胞作为对照组。色素诱导物质(EDN1)是一种由人类EDN1基因所编码的蛋白质。(3)细胞的回收和蛋白质的定量将在6孔板中培养黑素细胞(KaMC)加入到400μL的阿古特酶溶液(美国，加利福尼亚州，Millipore公司)。搅拌1分钟后，加入600μLM-254培养基，总共回收1mL含细胞的培养基。接着，以12,000rpm离心分离15分钟后，丢弃上层清液，并在剩余的颗粒中加入20μL的MCL裂解缓冲液(美国，圣路易斯，Sigma-Aldrich公司)。充分混合后，并再次以12,000rpm离心分离15分钟后，将上层清液与细胞碎片分离。加入1μL分离的上层清液到96孔板后，加入蒸馏水，使最终体积为25μL。然后，使用BCA蛋白质试剂盒(美国，伊里诺州，Thermo科技公司)，在562nm下对蛋白质进行定量。结果列于表1。【表1】(4)黑色素测定加入70μL的1N氢氧化钠NaOH(美国，圣路易斯，Sigma-Aldrich公司)后，使测试实施例例1(3)分离的细胞碎片在55℃溶解15分钟，转移到两个96孔板中，每个孔板加入30μL后，并以475nm光线测量吸光度。图1显示测量前的照片，并由根据式1定量的蛋白质量，计算黑色素含量。【式1】黑色素含量(％)＝(吸光度/总蛋白)×100如从图1看到的，当用本发明大星芹提取物处理细胞时，已被色素诱导物质(EDN1)增加的黑色素含量降低。特别是，若用2ppm大星芹提取物处理，则和对照组比较起来，黑色素含量减少到102％。在测定吸光度的前，也可以用视觉感知这一结果。亦即，当大星芹提取物的浓度增加时，试管的颜色更亮。当浓度为2ppm时，试管与对照组一样的清澈。因此，可以确认的是，本发明的大星芹提取物显示出细胞中黑色素含量减少的作用，因此它可表现出皮肤美白或有治疗色素沉着的效果。【测试实施例2】酪氨酸酶活性的抑制基于测试实施例例1(3)中的蛋白质定量的结果，将包含在上层清液的20μg蛋白质加入到96孔板，并加入PBS(磷酸盐缓冲盐水，无氯化钙&氯化镁-韩国，Welgene公司)，使最终体积为100μL。然后，又加入100μL的2mg/ml溶解于PBS中的L-DOPA(L-3,4-二羟基苯丙氨酸)(美国，圣路易，Sigma-Aldrich公司)。由于酪氨酸酶的作用下，从L-DOPA生成多巴色素的量是通过测定吸光度进行比较。在加入L-DOPA后，在37℃下培养，并且每10分钟测定在475nm下的吸光度。图2显示根据式2，从测试实施例1(3)中定量的蛋白质量计算酪氨酸酶的含量。【式2】酪氨酸酶含量(％)＝(吸光度/总蛋白)×100如从图2看到，当细胞用本发明的大星芹提取物处理时，原先由色素诱导物质引起的酪氨酸酶的活性已下降。特别是，和对照组比较起来，当用1ppm大星芹提取物处理时，酪氨酸酶的活性降低至约106％。并且，当浓度为2ppm时，酪氨酸酶活性比对照组甚至降低至更低的约87％。因此，可以确认的是，本发明的大星芹提取物表现出显著降低酪氨酸酶活性的效果，因此它可发挥减少黑色素生成、美白皮肤或治疗色素沉着的效果。以下，将描述根据本发明的一方面的组合物的剂型实施例。然而，也可以制成其他剂型，因此本发明的范围不限于这些剂型实施例。【剂型实施例1】软胶囊根据常用方法，混合8mg实施例1的大星芹提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、2mg棕榈油、8mg氢化植物油、4mg黄蜂蜡和9mg卵磷脂，然后通过每个胶囊填充400mg混合物来制备软胶囊。与此同时，用66重量份明胶、24重量份甘油和10重量份山梨醇制备软胶囊片，然后被所述混合物所填充，来制备包含400mg的本发明的组合物的软胶囊。【剂型实施例2】片剂将8mg实施例1的大星芹提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖进行混合并使用流化床烘干机。然后，在加入6mg糖酯后，根据常用方法将混合物制备成包含500mg组合物的片剂。【剂型实施例3】饮剂将8mg实施例1的大星芹提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g寡糖糖浆进行混合，并加入300mL纯净水。将200mL混合物装入瓶中。然后，通过在130℃下灭菌4-5秒来制备饮剂。【剂型实施例4】颗粒剂将8mg实施例1的大星芹提取物、9mg维生素E、9mg维生素C、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉进行混合并使用流化床制粒机造粒。将所得颗粒填充在袋中。【剂型实施例5】注射剂根据常用方法，用表2所述的组合物制备注射剂。【表2】成分含量实施例1的大星芹提取物10-50mg灭菌注射用蒸馏水适量pH调节剂适量【剂型实施例6】保健功能性食品根据常用方法，用表3所述的组合物制备保健功能性食品。【表3】虽然上面描述了适用于保健功能性食品的维生素和矿物质混合物的具体组合物，但是这些组合可以根据需要进行调整。【剂型实施例7】健康饮料根据常用方法，用表4中所述的组合物制备健康饮料。【表4】成分含量实施例1的大星芹提取物1000mg柠檬酸1000mg寡糖100g牛磺酸1g纯净水余量根据常用的保健饮料制备方法，将上述成分混合并在搅拌的同时在85℃下加热约1小时。将所得溶液过滤并灭菌。【剂型实施例8】柔肤水(化妆水)根据常用方法，用表5中所述的组合物制备柔肤水。【表5】【剂型实施例9】滋养乳液(乳液)根据常用方法，用表6中所述的组合物制备滋养乳液。【表6】成分含量(wt％)实施例1的大星芹提取物1.0甘油3.0丁二醇3.0丙二醇3.0羧基乙烯基聚合物0.1蜂蜡4.0聚山梨醇酯601.5辛酸/癸酸甘油三酯5.0角鲨烷5.0脱水山梨醇倍半油酸酯1.5液体石蜡0.5十六烷醇1.0三乙醇胺0.2防腐剂、颜料和香料适量纯净水余量【剂型实施例10】滋养霜根据常用方法，用表7中所述的组合物制备滋养霜。【表7】【剂型实施例11】按摩霜根据常用方法，用表8中所述的组合物制备按摩霜。【表8】成分含量(wt％)实施例1的大星芹提取物2.0甘油8.0丁二醇4.0液体石蜡45.0β-葡聚糖7.0卡波姆0.1辛酸/癸酸甘油三酯3.0蜂蜡4.0十六烷基葡糖苷1.5脱水山梨醇倍半油酸酯0.9凡士林3.0石蜡1.5防腐剂、颜料和香料适量纯净水余量【剂型实施例12】面膜根据常用方法，用表9中所述的组合物制备面膜。【表9】成分含量(wt％)实施例1的大星芹提取物0.2甘油4.0聚乙烯醇15.0透明质酸提取物5.0β-葡聚糖7.0尿囊素0.1壬基苯基醚0.4聚山梨醇酯601.2乙醇6.0防腐剂、颜料和香料适量纯净水余量尽管已经示出和描述了示例性实施例，但是本领域技术人员将理解，在不脱离由所附权利要求限定的本发明的精神和范围的情况下，可以对其进行形式和细节上的各种改变。因此，应当理解的是，本发明的实质范围由所附权利要求及其等同物限定。【保藏编号】保藏机构：韩国生物科学和生物技术研究所保藏编号：KCTC12015BP保藏日期：2011年9月14。当前第1页1 2 3