包含OX40结合激动剂和PD‑1轴结合拮抗剂的组合疗法的制作方法

对相关申请的交叉引用本申请要求2014年11月17日提交的流水号62/080,991的美国临时申请和2014年12月17日提交的流水号62/093,400的美国临时申请的优先权，通过援引将其每一篇完整收入本文。序列表通过援引将ascii文本文件上的下述提交的内容完整收入本文：计算机可读形式(crf)的序列表(文件名称：146392630640seqlist.txt，记录日期：2015年11月12日，大小：73kb)。发明领域本发明涉及通过施用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂来治疗癌症的方法。发明背景对t细胞提供两种截然不同的信号是一种关于抗原呈递细胞(apc)对静息t淋巴细胞的淋巴细胞活化的广泛接受的模型。laffertyetal.,aust.j.exp.biol.med.sci53:27-42(1975)。此模型进一步提供了自身与非自身的辨别和免疫耐受。bretscheretal.,science169:1042-1049(1970)；bretscher,p.a.,proc.nat.acad.sci.usa96:185-190(1999)；jenkinsetal.,j.exp.med.165:302-319(1987)。在主要组织相容性复合体(mhc)的背景中呈递的外来抗原肽的识别后，第一信号或抗原特异性信号经由t细胞受体(tcr)转导。第二或共刺激信号通过抗原呈递细胞(apc)上表达的共刺激分子投递至t细胞，诱导t细胞以促进克隆扩充，细胞因子分泌和效应器功能。lenschowetal.,ann.rev.immunol.14:233(1996)。在共刺激缺失下，t细胞能对抗原刺激变得不应，不发起有效的免疫应答，并且进一步可以导致对外来抗原的耐受或耗竭。在两信号模型中，t细胞接受正和负第二共刺激信号二者。此类正和负信号的调节对于在维持免疫耐受和防止自身免疫的同时使宿主的保护性免疫应答最大化是至关重要的。负第二信号对于诱导t细胞耐受似乎是必需的，而正信号促进t细胞活化。虽然简单的两信号模型仍然为幼稚淋巴细胞提供有效解释，但是宿主的免疫应答是一个动态过程，并且也可以对抗原暴露的t细胞提供共刺激信号。共刺激的机制是治疗学方面感兴趣的，因为已经显示了共刺激信号的操作提供一种增强或终止基于细胞的免疫应答的手段。最近，已经发现了t细胞功能障碍或无反应性与抑制性受体(编程性死亡1多肽(pd-1))的诱导且持续的表达并行发生。因此，靶向pd-1和经由与pd-1的相互作用发信号的其它分子，诸如编程性死亡配体1(pd-ll)和编程性死亡配体2(pd-l2)的治疗剂是一个强烈感兴趣的领域。pd-l1在许多癌症中过表达，而且常常与不良预后有关(okazakitetal.,intern.immun.2007,19(7):813)(thompsonrhetal.,cancerres2006,66(7):3381)。有趣的是，与正常组织中的t淋巴细胞和外周血t淋巴细胞形成对比，大多数肿瘤浸润性t淋巴细胞主要表达pd-1，这指示肿瘤反应性t细胞上pd-1的上调可以促成受损的抗肿瘤免疫应答(blood2009114(8):1537)。这可以是由于利用由与pd-1表达t细胞相互作用的pd-l1表达肿瘤细胞介导的pd-l1信号传导以导致t细胞活化的减弱及逃避免疫监视(sharpeetal.,natrev2002)(keirmeetal.,2008annu.rev.immunol.26:677)。因此，对pd-l1/pd-1相互作用的抑制可以增强cd8+t细胞介导的肿瘤杀伤。靶向pd-1和经由与pd-1的相互作用发信号的其它分子，诸如编程性死亡配体1(pd-l1)和编程性死亡配体2(pd-l2)的治疗剂是一个强烈感兴趣的领域。已经提出抑制pd-l1信号传导作为一种增强t细胞免疫以治疗癌症(例如肿瘤免疫)和感染(包括急性和慢性(例如持久的)感染二者)的手段。一种最佳的治疗性处理可组合pd-1受体/配体相互作用的阻断与直接抑制肿瘤生长的药剂。仍然需要用于治疗各种癌症，稳定各种癌症，预防各种癌症，和/或延迟各种癌症形成的最佳疗法。共刺激的机制是治疗上感兴趣的，因为操作共刺激信号已经显示出提供一种增强或终止基于细胞的免疫应答的手段。ox40(也称作cd34，tnfrsf4，或act35抗原)，肿瘤坏死因子受体超家族的一个成员，能给cd4+和cd8+t细胞提供共刺激信号，引起增强的细胞增殖，存活，效应器功能，和迁移。ox40信号传导还增强记忆t细胞发育和功能。ox40不在幼稚t细胞上组成性表达，但是在t细胞受体(tcr)卷入后诱导。ox40的配体ox40l主要在抗原呈递细胞上表达。ox40由活化后的cd4+t细胞，活化后的cd8+t细胞，记忆t细胞，和调节t(treg)细胞高表达。组合ox40信号传导与在肿瘤细胞中失调的其它信号传导途径可以进一步增强治疗功效。如此，仍然需要用于治疗各种癌症，免疫相关疾病，和t细胞功能障碍性病症，或延迟其形成的此类最佳疗法。通过援引将本文中引用的所有参考文献(包括专利申请，专利公开文本，和uniprotkb/swiss-prot登录号)完整收入本文，就像明确且单独指出通过援引来收录每一篇个别参考文献。发明概述一方面，本文中提供的是一种用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对该个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。另一方面，本文中提供的是一种用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对该个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂，其中该个体具有癌症或已经诊断有癌症，且其中来自该个体的癌症的肿瘤样品中的细胞不表达pd-l1。另一方面，本文中提供的是一种用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对该个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂，其中该个体具有癌症或已经诊断有癌症，且其中来自该个体的癌症的肿瘤样品中的细胞表达pd-l1。另一方面，本文中提供的是一种在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。另一方面，本文中提供的是一种用于在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括对该个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂，其中该个体已经诊断有癌症，且其中来自该个体的癌症的肿瘤样品中的细胞不表达pd-l1。另一方面，本文中提供的是一种用于在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括对该个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂，其中该个体已经诊断有癌症，且其中来自该个体的癌症的肿瘤样品中的细胞表达pd-l1。又一些方面，本文中提供的是治疗感染(例如细菌或病毒或其它病原体的)的方法。在一些实施方案中，该感染是病毒和/或细菌的。在一些实施方案中，该感染是病原体的。在一些实施方案中，该感染是急性感染.在一些实施方案中，该感染是慢性感染。另一方面，本文中提供的是人pd-1轴结合拮抗剂在制备用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)的药物中的用途，其中该药物包含该人pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂，且其中该治疗包括与包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂的组合物组合施用该药物。另一方面，本文中提供的是ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)在制备用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)的药物中的用途，其中该药物包含该ox40结合激动剂和任选的药学可接受载剂，且其中该治疗包括与包含人pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂的组合物组合施用该药物。另一方面，本文中提供的是包含人pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂的组合物，其用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)，其中该治疗包括与第二组合物组合施用所述组合物，其中该第二组合物包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂。另一方面，本文中提供的是包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂的组合物，其用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)，其中该治疗包括与第二组合物组合施用所述组合物，其中该第二组合物包含人pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂。另一方面，本文中提供的是一种试剂盒，其包含包含pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂的药物，和包含说明书的包装插页，该说明书关于与包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂的组合物组合施用该药物用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)。另一方面，本文中提供的是一种试剂盒，其包含包含pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂的第一药物，和包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂的第二药物。在一些实施方案中，该试剂盒进一步包含包含说明书的包装插页，该说明书关于施用该第一药物和该第二药物用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)。另一方面，本文中提供的是一种试剂盒，其包含包含ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和任选的药学可接受载剂的药物，和包含说明书的包装插页，该说明书关于与包含pd-1轴结合拮抗剂和任选的药学可接受载剂的组合物组合施用该药物用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展(或者，在一些实施方案中，治疗感染)。在一些实施方案中，该癌症是乳腺癌，肺癌，卵巢癌，胃癌，膀胱癌，胰腺癌，子宫内膜癌，结肠癌，肾癌，食道癌，前列腺癌，结直肠癌，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，或肝细胞癌。在一些实施方案中，该个体具有癌症或已经诊断有癌症。在一些实施方案中，癌细胞(来自个体的癌症的样品中)不表达pd-l1。在一些实施方案中，当它构成0％的样品时，样品中缺失pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过蛋白质表达(例如通过免疫组织化学(ihc)方法)来测定pd-l1生物标志物表达。在一些实施方案中，癌细胞(来自个体的癌症的样品中)表达pd-l1。在一些实施方案中，当它构成超过0％的样品时，样品中存在pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过蛋白质表达来检测样品中的pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过免疫组织化学(ihc)来测定蛋白质表达。在一些实施方案中，使用抗pd-l1抗体来检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，pd-l1生物标志物检测为通过ihc的弱染色强度，通过ihc的中等染色强度，或通过ihc的强染色强度。在一些实施方案中，使用抗pd-l1抗体来检测pd-l1生物标志物，且其中pd-l1生物标志物检测为通过ihc的中等染色强度，或通过ihc的强染色强度。在一些实施方案中，该个体具有对pd-1轴结合拮抗剂有抗性的癌症。在一些实施方案中，该个体对pd-1轴结合拮抗剂不应。在一些实施方案中，该患者对pd-1轴结合拮抗剂没有有效响应。在一些实施方案中，该个体具有伴有高t细胞浸润物(例如如使用诊断测试测定的)的癌症。在一些实施方案中，该个体具有伴有低或基本上检测不到的t细胞浸润物(例如如使用诊断测试测定的)的癌症。在上文和本文中描述的方法，用途，组合物，和试剂盒的一些实施方案中，该治疗或施用该人pd-1轴结合拮抗剂和该ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)在该治疗停止后在该个体中导致持久响应。在一些实施方案中，ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和pd-1轴结合拮抗剂(例如抗pd-1或抗pdl1抗体)的组合治疗是协同性的，由此ox40结合剂(例如抗人ox40激动性抗体)在该组合中的有效剂量相对于该ox40结合剂(例如抗人ox40激动性抗体)作为单一药剂的有效剂量降低。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂在该pd-1轴结合拮抗剂之前，与该pd-1轴结合拮抗剂同时，或在该pd-1轴结合拮抗剂之后施用。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂和该ox40结合激动剂在同一组合物中。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂和该ox40结合激动剂在分开的组合物中。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂选自下组：pd-1结合拮抗剂，pdl1结合拮抗剂和pdl2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂是pd-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂抑制pd-1结合其配体结合配偶。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂抑制pd-1结合pdl1。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂抑制pd-1结合pdl2。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂抑制pd-1结合pdl1和pdl2二者。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂是nivolumab。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂是pembrolizumab。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂是ct-011。在一些实施方案中，该pd-1结合拮抗剂是amp-224。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂是pdl1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该pdl1结合拮抗剂抑制pdl1结合pd-1。在一些实施方案中，pdl1结合拮抗剂抑制pdl1结合b7-1。在一些实施方案中，pdl1结合拮抗剂抑制pdl1结合pd-1和b7-1二者。在一些实施方案中，pdl1结合拮抗剂是抗pdl1抗体。在一些实施方案中，该抗pdl1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，该抗pdl1抗体是选自下组的抗体片段：fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段。在一些实施方案中，该抗pdl1抗体是人源化抗体或人抗体。在一些实施方案中，该pdl1结合拮抗剂选自下组：yw243.55.s70，mpdl3280a，mdx-1105，和medi4736。在一些实施方案中，该抗体包含重链和轻链，该重链包含gftfsdswih(seqidno:1)的hvr-h1序列，awispyggstyyadsvkg(seqidno:2)的hvr-h2序列，和rhwpggfdy(seqidno:3)的hvr-h3序列，该轻链包含rasqdvstava(seqidno:4)的hvr-l1序列，sasflys(seqidno:5)的hvr-l2序列，和qqylyhpat(seqidno:6)的hvr-l3序列。在一些实施方案中，该抗体包含包含evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvss(seqidno:7)或evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvssastk(seqidno:8)的氨基酸序列的重链可变区和包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:9)的氨基酸序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂是pdl2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该pdl2结合拮抗剂是抗体。在一些实施方案中，该pdl2结合拮抗剂是免疫粘附素。在一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂是包含一个或多个无糖基化位点突变(例如替代)的抗体(例如抗pd1抗体，抗pdl1抗体，或抗pdl2抗体)。在一些实施方案中，该替代突变包括氨基酸位置n297，l234，l235，和d265(eu编号方式)处的一处或多处替代。在一些实施方案中，该替代突变选自下组：n297g，n297a，l234a，l235a，和d265a(eu编号方式)。在一些实施方案中，该抗体是人igg1。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂选自下组：ox40激动性抗体，ox40l激动性片段，ox40寡聚受体，和ox40免疫粘附素。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体结合人ox40。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是本文中(例如段落198-226中)公开的抗人ox40激动性抗体任一。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是medi6469，medi0562，或medi6383。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是全长igg1抗体。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂是三聚ox40l-fc蛋白。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂是美国专利no.7,959,925中描述的三聚ox40l融合蛋白。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂包含一个或多个ox40l胞外域。在可以与任何其它实施方案组合的一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)不是medi6383。在可以与任何其它实施方案组合的一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)不是medi0562。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)是人和/或人源化抗体。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)是消减性抗人ox40抗体(例如消减表达人ox40的细胞)。在一些实施方案中，该表达人ox40的细胞是cd4+效应t细胞。在一些实施方案中，该表达人ox40的细胞是treg细胞。在一些实施方案中，消减是通过adcc和/或吞噬作用。在一些实施方案中，该抗体通过结合由人效应细胞表达的fcγr并激活该人效应细胞功能来介导adcc。在一些实施方案中，该抗体通过结合由人效应细胞表达的fcγr并激活该人效应细胞功能来介导吞噬作用。在一些实施方案中，该人效应细胞选自巨噬细胞，天然杀伤(nk)细胞，单核细胞，和嗜中性细胞。在一些实施方案中，该人效应细胞是巨噬细胞。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)具有功能性fc区。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是adcc。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是吞噬作用。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是adcc和吞噬作用。在一些实施方案中，该fc区是人igg1。在一些实施方案中，该fc区是人igg4。在上文和本文中描述的方法，用途，组合物，和试剂盒的一些实施方案中，该pd-1轴结合拮抗剂和/或该ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眼窝内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用。在上文和本文中描述的方法，用途，组合物，和试剂盒的一些实施方案中，该治疗进一步包括施用化疗剂用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展。在一些实施方案中，该个体在该pd-1轴结合拮抗剂和该ox40结合激动剂的组合治疗之前已经用化疗剂治疗。在一些实施方案中，用该pd-1轴结合拮抗剂和/或该ox40结合激动剂的组合治疗的个体对化疗剂治疗不应。贯穿本申请描述的方法，用途，组合物，和试剂盒的一些实施方案进一步包括施用化疗剂用于治疗癌症或延迟癌症进展。在上文和本文中描述的方法，用途，组合物和试剂盒的一些实施方案中，该个体中的cd8t细胞相对于施用该组合之前具有增强的引发，活化，增殖和/或溶胞活性。在一些实施方案中，cd8t细胞的数目相对于施用该组合之前升高。在一些实施方案中，该cd8t细胞是抗原特异性cd8t细胞。在一些实施方案中，treg功能相对于施用该组合之前遏制。在一些实施方案中，t细胞耗竭相对于施用该组合之前降低。在一些实施方案中，treg细胞数目相对于施用该组合之前降低。在一些实施方案中，血浆干扰素γ相对于施用该组合之前升高。在一些实施方案中，记忆t效应细胞数目相对于施用该组合之前升高。在一些实施方案中，记忆t效应细胞活化和/或增殖相对于施用该组合之前升高。在一些实施方案中，在外周血中检测记忆t效应细胞。在一些实施方案中，记忆t效应细胞的检测是通过检测cxcr3。本文中提供的是用于监测ox40激动剂治疗的药效学活性的方法，其通过在自受试者获得的包含白细胞的样品(例如外周血)中测量一种或多种标志物基因，蛋白质(例如细胞因子，例如γ干扰素)和/或细胞组成(例如treg的百分比和/或treg的绝对数；例如cd8+效应t细胞的数目)的表达水平，其中该受试者已经用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)治疗，且其中该一种或多种标志物基因选自t细胞标志物基因，或记忆t细胞标志物基因(例如t效应记忆细胞的标志物)；并基于与参照相比自受试者获得的样品中一种或多种标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平确定该治疗为展现药效学活性，其中一种或多种标志物基因的表达水平与参照相比升高指示ox40激动剂治疗的药效学活性。标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平可以通过一种或多种本文所述方法来测量。在一些实施方案中，本文中提供的是用于ox40激动剂治疗和pd-1轴结合拮抗剂组合治疗的监测药效学活性的方法，其包括在来自个体的样品(例如外周血样品)中测量增殖中的cd8+t细胞的水平(例如ki67+/总cd8+t细胞的百分比)，其中样品中增殖中的cd8+t细胞的水平与参照(例如组合治疗之前的水平)相比升高指示该组合治疗的药效学活性。在一些实施方案中，本文中提供的是用于监测ox40激动剂治疗和pd-1轴结合拮抗剂组合治疗的药效学活性的方法，其包括在来自个体的样品(例如外周血样品)中测量活化后的cd8+t细胞的水平(例如cxcr3+/总cd8+t细胞的百分比)，其中样品中活化后的cd8+t细胞的水平与参照(例如组合治疗之前的水平)相比升高指示该组合治疗的药效学活性。本文中提供的是用于监测受试者对ox40激动剂治疗的响应性的方法，其通过在自受试者获得的包含白细胞的样品(例如外周血)中测量一种或多种标志物基因，蛋白质(例如细胞因子，例如γ干扰素)和/或细胞组成(例如treg的百分比和/或treg的绝对数；例如cd8+效应t细胞的数目，外周血样品中)的表达水平，其中该受试者已经用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)治疗，且其中该一种或多种标志物基因选自t细胞标志物基因，或记忆t细胞标志物基因(例如t效应记忆细胞的标志物)；并基于与参照相比自受试者获得的样品中一种或多种标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平将受试者归类为对治疗响应性的或非响应性的，其中一种或多种标志物基因的表达水平与参照相比升高指示对ox40激动剂治疗的响应性或缺失响应性。标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平可以通过一种或多种本文所述方法来测量。在一些实施方案中，本文中提供的是用于监测对ox40激动剂治疗和pd-1轴结合拮抗剂组合治疗的响应性的方法，其包括在来自个体的样品(例如外周血样品)中测量增殖中的cd8+t细胞的水平(例如ki67+/总cd8+t细胞的百分比)，其中样品中增殖中的cd8+t细胞的水平与参照(例如组合治疗之前的水平)相比升高指示对该组合治疗的响应性。在一些实施方案中，本文中提供的是用于监测对ox40激动剂治疗和pd-1轴结合拮抗剂组合治疗的响应性的方法，其包括在来自个体的样品(例如外周血样品)中测量活化后的cd8+t细胞的水平(例如cxcr3+/总cd8+t细胞的百分比)，其中样品中活化后的cd8+t细胞的水平与参照(例如组合治疗之前的水平)相比升高指示对该组合治疗的响应性。要理解，可以组合本文所述各个实施方案的一个，一些，或所有特性以形成本发明的其它实施方案。本发明的这些和其它方面对本领域技术人员会变得显而易见。通过下面的详述进一步描述本发明的这些和其它实施方案。附图简述图1：在ct26结直肠同基因肿瘤模型(对照处理小鼠)中肿瘤浸润性cd8+t细胞表达高水平的pd-1抑制性受体。大约一半表达pd-1的cd8+til还表达ox40。来自5只中的一只小鼠的代表性流式细胞术点图，用对照抗体处理开始后第2天。图2a和2b：(图2a)用抗ox40激动性抗体单独处理和抗ox40激动性抗体与抗pdl1拮抗性抗体组合处理显著降低肿瘤内foxp3+t调节细胞的比例(相对于cd45+细胞总数)。(图2b)在ct26结直肠肿瘤模型中，用抗ox40激动性抗体单独处理和抗ox40激动性抗体与抗pdl1拮抗性抗体组合处理显著降低肿瘤内foxp3+t调节细胞的绝对数。对于(图2a)和(图2b)二者：数据来自处理开始后第9天，每个符号代表一只个体小鼠。给小鼠服用对照抗体或抗pdl1抗体，第1天第一剂10mg/kgiv，接着是biw(一周两次)5mg/kgip。抗ox40激动性抗体的给药为第1天第一剂0.1mg/kgiv，接着是tiw(一周三次)0.1mg/kgip。图3a和3b：在ct26结直肠同基因肿瘤模型中，用抗ox40激动性抗体处理提升(图3a)肿瘤内髓样(cd11b+gr-1低/中等)细胞和(图3b)肿瘤细胞上的pdl1表达。数据来自开始处理后第9天。每个点/正方形代表一只个体小鼠。通过流式细胞术通过几何均值萦光强度(geomfi)测量pdl1表达。**p<0.01，*p<0.05，如通过不配对t检测计算的。对于对照抗体，这项实验中的剂量给药为第1天第一剂10mg/kgiv，接着是biw5mg/kgip。抗ox40激动性抗体的给药为第1天第一剂0.1mg/kgiv，接着是tiw0.1mg/kgip。图4a，4b：在c57bl/6小鼠中的mc38结直肠癌同基因肿瘤模型中，用抗ox40激动性抗体和抗pdl1拮抗性抗体处理展现出协同组合功效。(图4a)依照处理组，随时间(天)测量的平均肿瘤体积(mm3)，n＝10/组。(图4b)依照处理组，随时间测量的个体肿瘤体积。黑色线指示组的平均值。蓝色虚线指示对照组的平均值。灰色线是个体动物。红色线指示由于溃疡性肿瘤或过度肿瘤尺寸退出研究的个体动物。对照抗体，抗pdl1抗体，或抗ox40激动性抗体的给药为第1天第一剂10mg/kgiv，接着是3周tiw10mg/kgip。图5a，5b：在balb/c小鼠中的ct26结直肠同基因肿瘤模型中，用抗ox40激动性抗体和抗pdl1拮抗性抗体处理展现出协同组合功效。(图5a)依照处理组，随时间(天)测量的平均肿瘤体积(mm3)，n＝10/组。(图5b)依照处理组，随时间测量的个体肿瘤体积。对照抗体或抗pdl1的给药为第1天第一剂10mg/kgiv，接着是3周tiw5mg/kgip。抗ox40激动性抗体作为单剂在第1天以1mg/kgiv施用。黑色线指示组的平均值。蓝色虚线指示对照组的平均值。灰色线是个体动物。红色线指示由于溃疡性肿瘤或过度肿瘤尺寸退出研究的个体动物。图6a，6b：在balb/c小鼠中的ct26结直肠癌同基因肿瘤模型中，抗ox40激动性抗体单一药剂处理显示剂量响应性。(图6a)依照处理组，随时间(天)测量的平均肿瘤体积(mm3)，n＝10/组。(图6b)依照处理组，随时间测量的个体肿瘤体积。黑色线指示组的平均值。蓝色虚线指示对照组的平均值。灰色线是个体动物。红色线指示由于溃疡性肿瘤或过度肿瘤尺寸退出研究的个体动物。对照抗体的给药为第1天第一剂1mg/kgiv，接着是3周tiw1mg/kgip。抗ox40激动性抗体的给药为第1天第一剂0.01mg/kg，0.1mg/kg，或1mg/kgiv，接着是3周tiwip。图7a，7b：在balb/c小鼠中的ct26结直肠癌同基因肿瘤模型中，亚最大剂量的抗ox40激动性抗体加抗pdl1拮抗性抗体的组合治疗展现出协同组合功效。(图7a)依照处理组，随时间(天)测量的平均肿瘤体积(mm3)，n＝10/组。(图7b)依照处理组，随时间测量的个体肿瘤体积。黑色线指示组的平均值。蓝色虚线指示对照组的平均值。灰色线是个体动物。红色线指示由于溃疡性肿瘤或过度肿瘤尺寸退出研究的个体动物。对照抗体或抗pdl1的给药为第1天第一剂10mg/kgiv，接着是3周tiw10mg/kgip。抗ox40激动性抗体的给予为第1天第一剂0.1mg/kgiv，后续给药为3周tiw0.1mg/kgip。图8a，8b：在一项分开的实验中，在balb/c小鼠中的ct26结直肠同基因肿瘤模型中，以亚最大有效剂量的单次0.1mg/kgiv注射给药的抗ox40激动性抗体加抗pdl1展现出协同组合功效。(图8a)依照处理组，随时间(天)测量的平均肿瘤体积(mm3)，n＝10/组。(图8b)依照处理组，随时间测量的个体肿瘤体积。黑色线指示组的平均值。蓝色虚线指示对照组的平均值。灰色线是个体动物。红色线指示由于溃疡性肿瘤或过度肿瘤尺寸退出研究的个体动物。对照抗体或抗pdl1的给药为第1天第一剂10mg/kgiv，接着是3周tiw5mg/kgip。抗ox40抗体的给予为第1天第一剂或单剂0.1mg/kgiv，后续给药为3周tiw0.1mg/kgip。图9a-9d：ox40激动性抗体和pdl1拮抗剂(抗pdl1拮抗性抗体)组合处理对外周血中增殖中的t细胞，treg细胞，血浆干扰素-γ，和活化后的t细胞的水平的影响。分析自组合处理ct26小鼠采集的外周血揭示了效应细胞增殖和炎性t细胞标志物的升高。检测cd8+t细胞增殖(图9a)，treg细胞(图9b)，血浆干扰素γ水平(图9c)和活化后的t细胞(图9d)的水平。(图9a)用ox40激动性抗体和pdl1拮抗剂组合处理的动物中增殖中的cd8+t细胞的水平(以ki67+/总cd8+t细胞的百分比表示)与用ox40激动性抗体或pdl1拮抗性抗体单独处理相比显著升高。(图9b)对ox40激动性抗体单一药剂处理和用ox40激动性抗体和pdl1拮抗剂组合处理观察到降低的外周血treg。(图9c)对ox40激动剂和pdl1拮抗剂组合处理观察到升高的血浆γ干扰素(ifng)。(图9d)用ox40激动性抗体和pdl1拮抗剂组合处理的动物中活化后的t细胞(具体而言，活化后的记忆teff细胞)的水平与用ox40激动性或pdl1拮抗剂单独处理相比显著升高。图10显示来自具有尿道上皮膀胱癌(ubc；图10a)和非小细胞肺癌(nsclc；图10b)的人患者的癌症样品中ox40表达与pdl1诊断状态的关联。组织样品来自参与抗pdl1抗体mpdl3280a的1期临床试验的患者。如本文中公开的，使用ihc测定肿瘤浸润性免疫细胞(ic)的pd-l1生物标志物状态。使用rtpcr分析(fluidigm)测定ox40表达水平。三角形表示患者具有部分或完全临床响应；圆形表示患者显示稳定的疾病；正方形表示患者具有渐进性疾病。图11a-11f：显示对照细胞样品的例示性ihc分析。(图11a)亲本hek-293细胞的阴性对照ihc染色；(图11b)经重组人pd-l1转染的hek-293细胞的ihc染色，具有弱染色强度；(图11c)经重组人pd-l1转染的hek-293细胞的ihc染色，具有中等染色强度；(图11d)经重组人pd-l1转染的hek-293细胞的ihc染色，具有强染色强度；(图11e)胎盘组织样品的阳性组织对照ihc染色；(图11f)扁桃体组织样品的阳性组织对照ihc染色。所有ihc染色是使用一种专有抗pdl1抗体实施的。图12a-12c：显示来自(图12a)三重阴性乳腺癌；(图12b)恶性黑素瘤；(图12c)nsclc，腺癌的肿瘤样品的例示性pdl1阳性ihc染色。发明详述本申请的发明人证明，抗人ox40激动性抗体与抗pdl1免疫疗法的组合导致对肿瘤生长的协同抑制，及升高的响应率。一方面，本文中提供的是用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，组合物和用途，其包括施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。另一方面，本文中提供的是用于在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，组合物和用途，其包括施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。另一方面，本文中提供的是用于在具有癌症的个体中治疗感染(例如细菌或病毒或其它病原体的)的方法，组合物和用途，其包括施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。i.定义在详细描述本发明之前，应当理解本发明不限于特定组合物或生物学系统，它们当然可以有所变化。还应理解本文中所使用的术语仅出于描述特定实施方案的目的，并非意图对其进行限制。如本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个”，“一种”和“该”包括复数所指物，除非另有明确说明。如此，例如，提及“一个/种分子”任选包括两个/种或更多个/种此类分子的组合，诸如此类。如本文中使用的，术语“约”指
技术领域：
技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。本文中提到“约”数值或参数包括(且描述)涉及该数值或参数本身的实施方案。理解的是，本文所述发明的各个方面和实施方案包括“包含”，“由……组成”，和“基本上由……组成”方面和实施方案。如本文中使用的，术语“ox40”指来自任何脊椎动物来源，包括哺乳动物诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠)的任何天然ox40，除非另有说明。该术语涵盖“全长”，未加工的ox40以及因细胞中的加工所致的任何形式的ox40。该术语还涵盖ox40的天然发生变体，例如剪接变体或等位变体。一种例示性的缺少信号肽的人ox40的氨基酸序列显示于seqidno:60(lhcvgdtypsndrcchecrpgngmvsrcsrsqntvcrpcgpgfyndvvsskpckpctwcnlrsgserkqlctatqdtvcrcragtqpldsykpgvdcapcppghfspgdnqackpwtnctlagkhtlqpasnssdaicedrdppatqpqetqgpparpitvqpteawprtsqgpstrpvevpggravaailglglvlgllgplaillalyllrrdqrlppdahkppgggsfrtpiqeeqadahstlaki)。“ox40活化”指ox40受体的活化。通常，ox40活化导致信号转导。术语“抗ox40抗体”和“结合ox40的抗体”指能够以足够亲和力结合ox40，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向ox40的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(ria)的测量，抗ox40抗体结合无关非ox40蛋白的程度小于该抗体对ox40的结合的约10％。在某些实施方案中，结合ox40的抗体具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如10-8m或更少，例如10-8m至10-13m，例如10-9m至10-13m)的解离常数(kd)。在某些实施方案中，抗ox40抗体结合在来自不同物种的ox40中保守的ox40表位。术语“pd-1轴结合拮抗剂”是指如下的分子，其抑制pd-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自pd-1信号传导轴上的信号传导的t细胞功能障碍–一项结果是恢复或增强t细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)。如本文中使用的，pd-1轴结合拮抗剂包括pd-1结合拮抗剂，pd-l1结合拮抗剂和pd-l2结合拮抗剂。术语“pd-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-1与一种或多种它的结合配偶(诸如pd-l1，pd-l2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抑制pd-1结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，pd-1结合拮抗剂抑制pd-1结合pd-l1和/或pd-l2。例如，pd-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-1与pd-l1和/或pd-l2相互作用的信号转导的抗pd-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，pd-1结合拮抗剂降低由或经由t淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由pd-1介导信号传导)，从而使得功能障碍性t细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抗pd-1抗体。在一个具体实施方案中，pd-1结合拮抗剂是本文所述mdx-1106(nivolumab)。在另一个具体实施方案中，pd-1结合拮抗剂是本文所述mk-3475(pembrolizumab)。在另一个具体实施方案中，pd-1结合拮抗剂是本文所述ct-011(pidilizumab)。在另一个具体方面，pd-1结合拮抗剂是本文所述amp-224。术语“pd-l1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-l1与一种或多种它的结合配偶(诸如pd-1，b7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，pd-l1结合拮抗剂是抑制pd-l1结合它的结合配偶的分子。在一个特定方面，pd-l1结合拮抗剂抑制pd-l1结合pd-1和/或b7-1。在一些实施方案中，pd-l1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-l1与一种或多种它的结合配偶(诸如pd-1，b7-1)相互作用的信号转导的抗pd-l1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，pd-l1结合拮抗剂降低由或经由t淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由pd-l1介导信号传导)，从而使得功能障碍性t细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，pd-l1结合拮抗剂是抗pd-l1抗体。在一个具体方面，抗pd-l1抗体是本文所述yw243.55.s70。在另一个具体方面，抗pd-l1抗体是本文所述mdx-1105。在仍有另一个具体方面，抗pd-l1抗体是本文所述mpdl3280a。在仍有另一个具体方面，抗pd-l1抗体是本文所述medi4736。术语“pd-l2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-l2与一种或多种它的结合配偶(诸如pd-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，pd-l2结合拮抗剂是抑制pd-l2结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定方面，pd-l2结合拮抗剂抑制pd-l2结合pd-1。在一些实施方案中，pd-l2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自pd-l2与一种或多种它的结合配偶(诸如pd-1)相互作用的信号转导的抗pd-l2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，pd-l2结合拮抗剂降低由或经由t淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由pd-l2介导信号传导)，从而使得功能障碍性t细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，pd-l2结合拮抗剂是免疫粘附素。术语“功能障碍”在免疫功能障碍的背景中指降低的对抗原性刺激的免疫响应性的状态。该术语包括可以发生抗原识别，但是随后的免疫应答对于控制感染或肿瘤生长无效的耗竭和/或无反应性二者的共同要件。如本文中使用的，术语“功能障碍性”还包括对抗原识别的不感受或不响应，特别地，将抗原识别转化成下游t细胞效应器功能，诸如增殖，细胞因子生成(例如il-2)和/或靶细胞杀伤的能力受损。术语“无反应性”指源自经由t细胞受体投递的不完全或不充分信号(例如在缺乏ras活化的情况中胞内ca+2增加)的对抗原刺激的无响应性状态。t细胞无反应性也可以在缺乏共刺激的情况中在用抗原刺激后发生，生成即使在共刺激的背景中对抗原的随后活化变得不感受的细胞。无响应性状态经常可以被白介素-2的存在超越。无反应性t细胞不经历克隆扩充和/或获得效应器功能。术语“耗竭”指作为源自在许多慢性感染和癌症期间发生的持续tcr信号传导的t细胞功能障碍状态的t细胞耗竭。它与无反应性的区别在于它不经由不完全或缺乏的信号传导，而是由于持续信号传导而发生。它以较差的效应器功能，持续的抑制性受体表达和与功能性效应或记忆t细胞的转录状态不同的转录状态限定。耗竭阻止感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可以源自外在负调节途径(例如免疫调节细胞因子)及细胞固有负调节(共刺激)途径(pd-1，b7-h3，b7-h4，等等)二者。“增强t细胞功能”意指诱导，引起或刺激t细胞具有持续或放大的生物学功能，或者恢复或再活化耗竭的或无活性的t细胞。增强t细胞功能的例子包括：相对于干预前的此类水平，升高的来自cd8+t细胞的γ-干扰素分泌，升高的增殖，升高的抗原响应性(例如病毒，病原体，或肿瘤清除)。在一个实施方案中，增强的水平是至少50％，或者60％，70％，80％，90％，100％，120％，150％，200％。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。“t细胞功能障碍性病症”是以降低的对抗原性刺激的响应性为特征的t细胞病症或状况。在一个具体的实施方案中，t细胞功能障碍性病症是明确与经由pd-1的不适当升高的信号传导有关的病症。在另一个实施方案中，t细胞功能障碍性病症是如下的病症，其中t细胞是无反应性的或者具有降低的分泌细胞因子，增殖，或者执行细胞裂解活性的能力。在一个具体的方面，降低的响应性导致对表达免疫原的病原体或肿瘤的无效控制。以t细胞功能障碍为特征的t细胞功能障碍性病症的例子包括未分辨的急性感染，慢性感染和肿瘤免疫。“肿瘤免疫”指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。如此，作为治疗概念，肿瘤免疫在此类逃避减弱时得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并攻击。肿瘤识别的例子包括肿瘤结合，肿瘤收缩和肿瘤清除。“免疫原性”指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。增强肿瘤免疫原性的例子包括用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂处理。“持续应答”指在停止处理后对降低肿瘤生长的持续影响。例如，与施用阶段开始时的大小相比，肿瘤大小可以保持为相同或更小。在一些实施方案中，持续应答具有与处理持续时间至少相同的持续时间，处理持续时间的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍长度。术语“药物配制剂”指如下形式的制备物，使得允许活性组分的生物学活性有效，且不含别的对会施用配制剂的受试者有不可接受的毒性的成分。此类配制剂是无菌的。“药学可接受”赋形剂(媒介，添加剂)为那些可合理施用于受试哺乳动物以提供有效剂量的所采用的活性组分。如本文中使用的，术语“治疗/处理”指设计用于改变临床病理学过程期间所治疗个体或细胞的自然进程的临床干预。治疗的期望效果包括降低疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和消退或改善的预后。例如，若一种或多种与癌症有关的症状是减轻或消除的，包括但不限于对癌性细胞的降低增殖(或破坏)，减少源自疾病的症状，提高那些患有疾病的个体的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，和/或延长个体存活，则个体得到成功“治疗”。如本文中使用的，“延迟疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病(诸如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的个体，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为个体不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。“有效量”至少是实现特定病症的可测量改善或预防需要的最小量。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现期望的结果或者实现了期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。如本文中使用的，“与……联合/组合/一起”指在一种治疗形态外施用另一种治疗形态。因而，“与……联合/组合/一起”指在对个体施用一种治疗形态之前，期间，或者之后施用另一种治疗形态。“病症”为会受益于治疗/处理的任何状况，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所讨论病症的病理状况。术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症是肿瘤。“肿瘤”在用于本文时指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体例子包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌，和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌(包括胃肠癌和胃肠基质癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，尿道癌，肝瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌，肛门癌，阴茎癌，黑素瘤，浅表扩散性黑素瘤，恶性雀斑样痣黑素瘤，肢端黑素瘤，结节性黑素瘤，多发性骨髓瘤和b细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金氏淋巴瘤(nhl)，小淋巴细胞性(sl)nhl，中级/滤泡性nhl，中级弥漫性nhl，高级成免疫细胞性nhl，高级成淋巴细胞性nhl，高级小无核裂细胞性nhl，贮积病(bulkydisease)nhl，套细胞淋巴瘤，aids相关淋巴瘤，和瓦尔登斯特伦氏(waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴细胞性白血病(cll)，急性成淋巴细胞性白血病(all)，毛细胞性白血病，慢性成髓细胞性白血病，和移植后淋巴增殖性病症(ptld)，以及与瘢痣病(phakomatoses)，水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(meigs)综合征有关的异常血管增殖，脑瘤和脑癌，以及头颈癌，及相关转移。在某些实施方案中，适合于通过本发明的抗体来治疗的癌症包括乳腺癌，结肠直肠癌，直肠癌，非小细胞肺癌，成胶质细胞瘤，非何杰金氏淋巴瘤(nhl)，肾细胞癌，前列腺癌，肝癌，胰腺癌，软组织肉瘤，卡波西(kaposi)氏肉瘤，类癌癌(carcinoidcarcinoma)，头颈癌，卵巢癌，间皮瘤，和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症选自：小细胞肺癌，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，乳腺癌，胃癌，结肠直肠癌(crc)，和肝细胞癌。还有，在一些实施方案中，癌症选自：非小细胞肺癌，结肠直肠癌，成胶质细胞瘤和乳腺癌，包括那些癌症的转移性形式。如本文中使用的，术语“细胞毒剂”指任何对细胞有害(例如引起细胞死亡，抑制增殖，或以其它方式阻碍细胞功能)的药剂。细胞毒剂包括但不限于放射性同位素(例如at211，i131，i125，y90，re186，re188，sm153，bi212，p32，pb212和lu的放射性同位素)；化疗剂；生长抑制剂；酶及其片段诸如溶核酶；和毒素诸如小分子毒素或细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体。例示性的细胞毒剂可选自抗微管剂，铂配位复合物，烷化剂，抗生剂，拓扑异构酶ii抑制剂，抗代谢物，拓扑异构酶i抑制剂，激素和激素类似物，信号转导途径抑制剂，非受体酪氨酸激酶血管发生抑制剂，免疫治疗剂，促凋亡剂，ldh-a的抑制剂，脂肪酸生物合成的抑制剂，细胞周期信号传导抑制剂，hdac抑制剂，蛋白酶体抑制剂，和癌代谢的抑制剂。在一个实施方案中，细胞毒剂是紫杉烷(taxane)。在一个实施方案中，紫杉烷是帕利他赛(paclitaxel)或多西他赛(docetaxel)。在一个实施方案中，细胞毒剂是铂剂。在一个实施方案中，细胞毒剂是egfr的拮抗剂。在一个实施方案中，egfr的拮抗剂是n-(3-乙炔基苯基)-6,7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉-4-胺(例如厄洛替尼(erlotinib))。在一个实施方案中，细胞毒剂是raf抑制剂。在一个实施方案中，raf抑制剂是braf和/或craf抑制剂。在一个实施方案中，raf抑制剂维罗非尼(vemurafenib)。在一个实施方案中，细胞毒剂是pi3k抑制剂。“化疗剂”包括在治疗癌症中有用的化合物。化疗剂的例子包括厄洛替尼(erlotinib)(genentech/osipharm.)，硼替佐米(bortezomib)(millenniumpharm.)，双硫仑(disulfiram)，没食子酸表没食子儿茶精(epigallocatechingallate)，salinosporamidea，carfilzomib，17-aag(格尔德霉素(geldanamycin))，根赤壳菌素(radicicol)，乳酸脱氢酶a(ldh-a)，氟维司群(fulvestrant)(astrazeneca)，舒尼替尼(sunitib)(pfizer/sugen)，来曲唑(letrozole)(novartis)，甲磺酸伊马替尼(imatinibmesylate)(novartis)，finasunate(novartis)，奥沙利铂(oxaliplatin)(sanofi)，5-fu(5-氟尿嘧啶)，甲酰四氢叶酸(leucovorin)，雷帕霉素(rapamycin)(西罗莫司(sirolimus)，wyeth)，拉帕替尼(lapatinib)(gsk572016，glaxosmithkline)，lonafamib(sch66336)，索拉非尼(sorafenib)(bayerlabs)，吉非替尼(gefitinib)(astrazeneca)，ag1478，烷化剂类(alkylatingagents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯类(alkylsulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)，和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括托泊替康(topotecan)和伊立替康(irinotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；cc-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；肾上腺皮质类固醇类(adrenocorticosteroids)，包括泼尼松(prednisone)和泼尼松龙(prednisolone)；醋酸环丙孕酮(cyproteroneacetate)；5α-还原酶，包括非那雄胺(finasteride)和度他雄胺(dutasteride)；vorinostat,romidepsin,panobinostat,丙戊酸(valproicacid),mocetinostat多拉司他汀(dolastatin)；阿地白介素(aldesleukin),滑石(talc)duocarmycin(包括合成类似物，kw-2189和cb1-tm1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogenmustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlomaphazine)，胆磷酰胺(chlorophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracilmustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)，和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1i和加利车霉素ω1i(angewchem.intl.ed.engl.1994,33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicina；二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysins)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素c(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(caminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放线菌素d(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-l-正亮氨酸，(多柔比星(doxorubicin))，吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素(mitomycin)诸如丝裂霉素c，霉酚酸(mycophenolicacid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(porfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-fu)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)，丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)，表硫雄醇(epitiostanol)，美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinicacid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfomithine；依利醋铵(elliptiniumacetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidamnol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(jhsnaturalproducts,eugene,oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonicacid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2′,2″-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是t-2毒素，疣孢菌素(verracurin)a，杆孢菌素(roridin)a和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“ara-c”)；环磷酰胺(cyclophosphamide)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如泰素(taxol)(帕利他塞(paclitaxel)；bristol-myerssquibboncology,princeton,n.j.)，(无克列莫佛(cremophor)的)，帕利他塞的清蛋白改造的纳米颗粒剂型(americanpharmaceuticalpartners,schaumberg,ill.)和泰索帝(多西他塞(docetaxel，doxetaxel)；sanofi-aventis)；苯丁酸氮芥(chloranmbucil)；(吉西他滨(gemcitabine))；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；依托泊苷(etoposide)(vp-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)；(长春瑞滨(vinorelbine))；能灭瘤(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；卡培他滨(capecitabine)伊本膦酸盐(ibandronate)；cpt-11；拓扑异构酶抑制剂rfs2000；二氟甲基鸟氨酸(dmfo)；类视黄酸(retinoids)，诸如视黄酸(retinoicacid)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物。化疗剂还包括(i)起调节或抑制激素对肿瘤作用的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(serm)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括柠檬酸他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，iodoxyfene，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，ly117018，奥那司酮(onapristone)，和(柠檬酸托瑞米芬(toremifinecitrate))；(ii)抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，(醋酸甲地孕酮(megestrolacetate))，(依西美坦(exemestane)；pfizer)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，(伏罗唑(vorozole))，(来曲唑(letrozole)；novartis)，和(阿那曲唑(anastrozole)；astrazeneca)；(iii)抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡米特(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)；布舍瑞林(buserelin)，曲普瑞林(tripterelin)，醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesteroneacetate)，己烯雌酚(diethylstilbestrol)，倍美力(premarin)，氟甲睾酮(fluoxymesterone)，全反式视黄酸，芬维a胺(fenretinide)，以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白质激酶抑制剂；(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如pkc-α，ralf和h-ras；(vii)核酶，诸如vegf表达抑制剂(例如)和her2表达抑制剂；(viii)疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如和ril-2；拓扑异构酶1抑制剂，诸如rmrh；和(ix)及任何上述药剂的药学可接受盐，酸和衍生物。化疗剂还包括抗体，诸如阿仑珠单抗(alemtuzumab)(campath)，贝伐珠单抗(bevacizumab)(genentech)；西妥昔单抗(cetuximab)(imclone)；帕尼单抗(panitumumab)(amgen)，利妥昔单抗(rituximab)(genentech/biogenidec)，帕妥珠单抗(pertuzumab)(2c4，genentech)，曲妥珠单抗(trastuzumab)(genentech)，托西莫单抗(tositumomab)(bexxar，corixia)，和抗体药物缀合物，吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)(wyeth)。具有作为与本发明化合物组合的药剂的治疗潜力的别的人源化单克隆抗体包括：阿泊珠单抗(apolizumab)，阿塞珠单抗(aselizumab)，atlizumab，巴匹珠单抗(bapineuzumab)，bivatuzumabmertansine，莫坎妥珠单抗(cantuzumabmertansine)，西利珠单抗(cedelizumab)，培舍珠单抗(certolizumabpegol)，cidfusituzumab，cidtuzumab，达克珠单抗(daclizumab)，依库珠单抗(eculizumab)，依法珠单抗(efalizumab)，依帕珠单抗(epratuzumab)，厄利珠单抗(erlizumab)，非维珠单抗(felvizumab)，芳妥珠单抗(fontolizumab)，吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumabozogamicin)，英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumabozogamicin)，伊匹木单抗(ipilimumab)，拉贝珠单抗(labetuzumab)，林妥珠单抗(lintuzumab)，马妥珠单抗(matuzumab)，美泊利单抗(mepolizumab)，莫维珠单抗(motavizumab)，motovizumab，那他珠单抗(natalizumab)，尼妥珠单抗(nimotuzumab)，nolovizumab，numavizumab，ocrelizumab，奥马珠单抗(omalizumab)，帕利珠单抗(palivizumab)，帕考珠单抗(pascolizumab)，pecfusituzumab，pectuzumab，培克珠单抗(pexelizumab)，ralivizumab，雷珠单抗(ranibizumab)，reslivizumab，瑞利珠单抗(reslizumab)，resyvizumab，罗维珠单抗(rovelizumab)，卢利珠单抗(ruplizumab)，西罗珠单抗(sibrotuzumab)，西利珠单抗(siplizumab)，索土珠单抗(sontuzumab)，tacatuzumabtetraxetan，tadocizumab，他利珠单抗(talizumab)，特非珠单抗(tefibazumab)，托珠单抗(tocilizumab)，托利珠单抗(toralizumab)，tucotuzumab西莫白介素(celmoleukin)，tucusituzumab，umavizumab，乌珠单抗(urtoxazumab)，优特克单抗(ustekinumab)，维西珠单抗(visilizumab)，和抗白介素-12(abt-874/j695，wyethresearchandabbottlaboratories)，其为经遗传修饰以识别白介素-12p40蛋白的重组专有人序列全长igg1λ抗体。化疗剂还包括“egfr抑制剂”，其指结合egfr或以其它方式直接与egfr相互作用并阻止或降低其信号传导活性的化合物，其另外还称作“egfr拮抗剂”。此类药剂的例子包括结合egfr的抗体和小分子。结合egfr的抗体的例子包括mab579(atcccrlhb8506)，mab455(atcccrlhb8507)，mab225(atcccrl8508)，mab528(atcccrl8509)(参见美国专利no.4,943,533，mendelsohn等人)及其变体，诸如嵌合化的225(c225或西妥昔单抗；)和重构的人225(h225)(参见wo96/40210，imclonesystermsinc.)；imc-11f8，一种完全人的egfr靶向抗体(imclone)；结合ii型突变体egfr的抗体(美国专利no.5,212,290)；结合egfr的人源化和嵌合抗体，如美国专利no.5,891,996中所述；和结合egfr的人抗体，诸如abx-egf或帕尼单抗(panitumumab)(参见wo98/50433，abgenix/amgen)；emd55900(stragliottoetal.,eur.j.cancer32a:636-640(1996))；emd7200(matuzumab)，一种针对egfr且与egf和tgf-α二者竞争egfr结合的人源化egfr抗体(emd/merck)；人egfr抗体，humax-egfr(genmab)；称作e1.1，e2.4，e2.5，e6.2，e6.4，e2.11，e6.3和e7.6.3且描述在us6,235,883中的完全人抗体；mdx-447(medarexinc)；和mab806或人源化mab806(johnsetal.,j.biol.chem.279(29):30375-30384(2004))。抗egfr抗体可与细胞毒剂缀合，由此产生免疫缀合物(参见例如ep659,439a2，merckpatentgmbh)。egfr拮抗剂包括小分子，诸如美国专利no.5,616,582，5,457,105，5,475,001，5,654,307，5,679,683，6,084,095，6,265,410，6,455,534，6,521,620，6,596,726，6,713,484，5,770,599，6,140,332，5,866,572，6,399,602，6,344,459，6,602,863，6,391,874，6,344,455，5,760,041，6,002,008，和5,747,498，以及pct公开文本wo98/14451，wo98/50038，wo99/09016，和wo99/24037中描述的化合物。具体的小分子egfr拮抗剂包括osi-774(cp-358774，厄洛替尼(erlotinib)，genentech/osipharmaceuticals)；pd183805(ci1033，2-丙烯酰胺，n-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-，二氢氯化物，pfizerinc.)；zd1839，吉非替尼(gefitinib)4-(3’-氯-4’-氟苯胺基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉，astrazeneca)；zm105180((6-氨基-4-(3-甲基苯基-氨基)-喹唑啉，zeneca)；bibx-1382(n8-(3-氯-4-氟-苯基)-n2-(1-甲基-哌啶-4-基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺，boehringeringelheim)；pki-166((r)-4-[4-[(1-苯基乙基)氨基]-1h-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚)；(r)-6-(4-羟基苯基)-4-[(1-苯基乙基)氨基]-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶)；cl-387785(n-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-丁炔酰胺)；ekb-569(n-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(wyeth)；ag1478(pfizer)；ag1571(su5271；pfizer)；双重egfr/her2酪氨酸激酶抑制剂，诸如拉帕替尼(lapatinib)(gsk572016或n-[3-氯4-[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺)。化疗剂还包括“酪氨酸激酶抑制剂”，包括前一段中提到的egfr靶向药物；小分子her2酪氨酸激酶抑制剂，诸如可从takeda获得的tak165；cp-724,714，一种口服erbb2受体酪氨酸激酶选择性抑制剂(pfizer和osi)；优先结合egfr但抑制her2和egfr过表达细胞二者的双重her抑制剂，诸如ekb-569(可从wyeth获得)；拉帕替尼(lapatinib)(gsk572016；可从glaxo-smithkline获得)，一种口服her2和egfr酪氨酸激酶抑制剂；pki-166(可从novartis获得)；泛her抑制剂，诸如卡奈替尼(canertinib)(ci-1033；pharmacia)；raf-1抑制剂，诸如可从isispharmaceutica1s获得的，抑制raf-1信号传导的反义药剂isis-5132；非her靶向tk抑制剂，诸如甲磺酸伊马替尼(，可从glaxosmithkline获得)；多靶向酪氨酸激酶抑制剂，诸如舒尼替尼(sunitinib)(可从pfizer获得)；vegf受体酪氨酸激酶抑制剂，诸如瓦他拉尼(vatalanib)(ptk787/zk222584，可从novartis/scheringag获得)；mapk胞外调控激酶i抑制剂ci-1040(可从pharmacia获得)；喹唑啉类，诸如pd153035，4-(3-氯苯胺基)喹唑啉；吡啶并嘧啶类；嘧啶并嘧啶类；吡咯并嘧啶类，诸如cgp59326，cgp60261和cgp62706；吡唑并嘧啶类，4-(苯基氨基)-7h-吡咯并[2,3-d]嘧啶类；姜黄素(二阿魏酰甲烷，4,5-双(4-氟苯胺基)-酞酰亚胺)；含有硝基噻吩模块的tyrphostine；pd-0183805(warner-lamber)；反义分子(例如那些与编码her的核酸结合的反义分子)；喹喔啉类(美国专利no.5,804,396)；tryphostins(美国专利no.5,804,396)；zd6474(astrazeneca)；ptk-787(novartis/scheringag)；泛her抑制剂，诸如ci-1033(pfizer)；affinitac(isis3521；isis/lilly)；甲磺酸伊马替尼pki166(novartis)；gw2016(glaxosmithkline)；ci-1033(pfizer)；ekb-569(wyeth)；semaxinib(pfizer)；zd6474(astrazeneca)；ptk-787(novartis/scheringag)；inc-1c11(imclone)，雷帕霉素(西罗莫司，)；或任何下列专利公开文本中描述的：美国专利no.5,804,396；wo1999/09016(americancyanamid)；wo1998/43960(americancyanamid)；wo1997/38983(warnerlambert)；wo1999/06378(warnerlambert)；wo1999/06396(warnerlambert)；wo1996/30347(pfizer,inc)；wo1996/33978(zeneca)；wo1996/3397(zeneca)和wo1996/33980(zeneca)。化疗剂还包括地塞米松(dexamethasone)，干扰素，秋水仙素(colchicine)，氯苯氨啶(metoprine)，环孢霉素(cyclosporine)，两性霉素(amphotericin)，甲硝唑(metronidazole)，阿仑单抗(alemtuzumab)，阿利维a酸(alitretinoin)，别嘌醇(allopurinol)，氨磷汀(amifostine)，三氧化二砷(arsenictrioxide)，天冬酰胺酶(asparaginase)，活的bcg，贝伐珠单抗(bevacuzimab)，贝沙罗汀(bexarotene)，克拉屈滨(cladribine)，里本灵(clofarabine)，darbepoetinalfa，地尼白介素(denileukin)，右雷佐生(dexrazoxane)，阿法依伯汀(epoetinalfa)，厄洛替尼(elotinib)，非格司亭(filgrastim)，醋酸组氨瑞林(histrelinacetate)，ibritumomab，干扰素α-2a，干扰素α-2b，lenalidomide，左旋咪唑(levamisole)，美司钠(mesna)，甲氧沙林(methoxsalen)，诺龙(nandrolone)，奈拉滨(nelarabine)，诺非单抗(nofetumomab)，奥普瑞白介素(oprelvekin)，palifermin，帕米膦酸盐(pamidronate)，培加酶(pegademase)，培门冬酶(pegaspargase)，peg非格司亭(pegfilgrastim)，培美曲塞二钠(pemetrexeddisodium)，普卡霉素(plicamycin)，卟吩姆钠(porfimersodium)，喹纳克林(quinacrine)，拉布立酶(rasburicase)，沙格司亭(sargramostim)，替莫唑胺(temozolomide)，vm-26，6-tg，托瑞米芬(toremifene)，tretinoin，atra，戊柔比星(valrubicin)，唑来膦酸盐(zoledronate)，和唑来膦酸(zoledronicacid)，及其药学可接受盐。化疗剂还包括氢化可的松(hydrocortisone)，醋酸氢化可的松(hydrocortisoneacetate)，醋酸可的松(cortisoneacetate)，替可的松匹伐酯(tixocortolpivalate)，曲安奈德(triamcinoloneacetonide)，曲安西龙醇(triamcinolonealcohol)，莫米松(mometasone)，安西奈德(amcinonide)，布地奈德(budesonide)，地奈德(desonide)，fluocinonide，fluocinoloneacetonide，倍他米松(betamethasone)，倍他米松磷酸钠(betamethasonesodiumphosphate)，地塞米松(dexamethasone)，地塞米松磷酸钠(dexamethasonesodiumphosphate)，氟可龙(fluocortolone)，氢化可的松-17-丁酸盐(hydrocortisone-17-butyrate)，氢化可的松-17-戊酸盐(hydrocortisone-17-valerate)，aclometasonedipropionate，戊酸倍他米松(betamethasonevalerate)，二丙酸倍他米松(betamethasonedipropionate)，泼尼卡酯(prednicarbate)，氯倍他松-17-丁酸盐(clobetasone-17-butyrate)，氯倍他松-17-丙酸盐(clobetasol-17-propionate)，己酸氟考龙(fluocortolonecaproate)，特戊酸氟考龙(fluocortolonepivalate)和醋酸氟甲叉龙(fluprednideneacetate)；免疫选择性抗炎肽(imsaid)，诸如苯丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(feg)及其d-异构体形式(feg)(imulanbiotherapeutics,llc)；抗风湿药物，诸如硫唑嘌呤(azathioprine)，环孢素(ciclosporin)(环孢霉素(cyclosporine)a)，d-青霉胺，金盐，羟氯喹，来氟米特(leflunomide)米诺环素(minocycline)，柳氮磺吡啶(sulfasalazine)，肿瘤坏死因子α(tnfα)阻断剂，诸如依那西普(etanercept)(enbrel)，英夫利昔单抗(infliximab)(remicade)，阿达木单抗(adalimumab)(humira)，certolizumabpegol(cimzia)，golimumab(simponi)，白介素-1(il-1)阻断剂，诸如阿那白滞素(anakinra)(kineret)，t细胞共刺激阻断剂，诸如abatacept(orencia)，白介素-6(il-6)阻断剂，诸如tocilizumab白介素-13(il-13)阻断剂，诸如lebrikizumab；干扰素α(ifn)阻断剂，诸如rontalizumab；β7-整联蛋白阻断剂，诸如rhumabbeta7；ige途径阻断剂，诸如抗m1prime；分泌型同三聚lta3和膜结合型异三聚lta1/β2阻断剂，诸如抗淋巴毒素α(lta)；放射性同位素，例如at211，i131，i125，y90，re186，re188，sm153，bi212，p32，pb212和lu放射性同位素；混杂调查性药剂，诸如thioplatin，ps-341，丁酸苯酯，et-18-och3，或法尼基转移酶抑制剂(l-739749，l-744832；多酚，诸如槲皮素(quercetin)，白藜芦醇(resveratrol)，piceatannol，没食子酸表没食子儿茶精(epigallocatechinegallate)，茶黄素(theaflavin)，黄烷醇(flavanol)，原花青素(procyanidins)，白桦脂酸(betulinicacid)及其衍生物；自噬抑制剂，诸如氯喹；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)，和9-氨基喜树碱)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；替加氟(tegafur)贝沙罗汀(bexarotene)二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如或)，依替膦酸钠(etidronate)ne-58095，唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronicacid/zoledronate)阿伦膦酸盐(alendronate)帕米膦酸盐(pamidronate)替鲁膦酸盐(tiludronate)或利塞膦酸盐(risedronate)和表皮生长因子受体(egf-r)；疫苗，诸如疫苗；哌立福辛(perifosine)，cox-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如ps341)；cci-779；tipifarnib(r11577)；orafenib，abt510；bcl-2抑制剂，诸如oblimersensodiumpixantrone；法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafarnib(sch6636,sarasartm)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如chop(环磷酰胺，多柔比星，长春新碱，和泼尼松龙联合疗法的缩写)和folfox(奥沙利铂(eloxatintm)联合5-fu和亚叶酸的治疗方案的缩写)。化疗剂还包括具有止痛，退热和消炎效果的非类固醇消炎药。nsaid包括酶环氧合酶的非选择性抑制剂。nsaid的具体例子包括阿司匹林(aspirin)，丙酸衍生物诸如布洛芬(ibuprofen)，非诺洛芬(fenoprofen)，酮洛芬(ketoprofen)，氟比洛芬(flurbiprofen)，奥沙普秦(oxaprozin)和荼普生(naproxen)，乙酸衍生物诸如吲哚美辛(indomethacin)，舒林酸(sulindac)，依托度酸(etodolac)，双氯芬酸(diclofenac)，烯醇酸衍生物诸如吡罗昔康(piroxicam)，美洛昔康(meloxicam)，替诺昔康(tenoxicam)，屈恶昔康(droxicam)，氯诺昔康(lornoxicam)和伊索昔康(isoxicam)，灭酸衍生物诸如甲灭酸(mefenamicacid)，甲氯芬那酸(meclofenamicacid)，氟芬那酸(flufenamicacid)，托芬那酸(tolfenamicacid)，和cox-2抑制剂诸如塞来考昔(celecoxib)，依托考昔(etoricoxib)，罗美考昔(lumiracoxib)，帕瑞考昔(parecoxib)，罗非考昔(rofecoxib)，罗非昔布(rofecoxib)，和伐地考昔(valdecoxib)。nsaid可被指示用于诸如类风湿性关节炎，骨关节炎，炎性关节病，强直性脊柱炎，银屑病关节炎，莱特尔氏综合征，急性痛风，痛经，骨转移疼痛，头痛和偏头痛，手术后疼痛，由于炎症和组织损伤引起的轻至中度疼痛，发热，肠梗阻，和肾绞痛等疾患的症状缓解。“生长抑制剂”在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个实施方案中，生长抑制剂是阻止或降低表达抗体所结合的抗原的细胞增殖的生长抑制性抗体。在另一个实施方案中，生长抑制剂可以是显著降低处于s期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于s期以外的位置)的药剂，诸如诱导g1停滞和m期停滞的药剂。经典的m期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))，紫杉烷类(taxanes)，和拓扑异构酶ii抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞g1的药剂也溢出进入s期停滞，例如dna烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)，泼尼松(prednisone)，达卡巴嗪(dacarbazine)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，顺铂(cisplatin)，甲氨蝶呤(methotrexate)，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-c。更多信息可参见mendelsohn和israel编，《themolecularbasisofcancer》，第1章，题为“cellcycleregulation,oncogenes,andantineoplasticdrugs”，murakami等人，wbsaunders，philadelphia，1995，例如第13页。紫杉烷类(帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(rhone-poulencrorer)是帕利他赛(bristol-myerssquibb)的半合成类似物。帕利他赛和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。“放射疗法”或“放疗”指使用定向伽马射线或贝塔射线来诱发对细胞的足够损伤，以限制细胞正常发挥功能的能力或全然破坏细胞。应当领会，本领域知道许多方式来确定治疗的剂量和持续时间。典型的治疗作为一次施用来给予，而典型的剂量范围为每天10-200个单位(戈瑞(gray))。用于治疗目的的“受试者”或“个体”指归入哺乳类的任何动物，包括人，家畜和牲畜，及动物园动物，体育运动用动物，或宠物动物，诸如犬，马，猫，牛等。优选地，哺乳动物为人。本文中术语“抗体”以最广义使用，明确覆盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，及抗体片段，只要它们展现出期望的生物学活性。“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的成分分开和/或回收的抗体。其天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的研究，诊断或治疗用途的物质，可包括酶，激素，和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在有些实施方案中，将抗体纯化至(1)根据例如lowry法的测定，抗体重量超过95％，而在有些实施方案中，重量超过99％，(2)足以通过使用例如转杯式测序仪获得至少15个残基的n-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的sds-page及使用例如考马斯蓝或银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。“天然抗体”指通常由两条相同的轻(l)链和两条相同的重(h)链构成的约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白。每条轻链通过一个共价二硫键与重链连接，而二硫键的数目在不同免疫球蛋白同种型的重链间有变化。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在一端具有一个可变域(vh)，接着是多个恒定域。每条轻链在一端具有一个可变域(vl)，而另一端是一个恒定域；轻链的恒定域与重链的第一恒定域排列在一起，而轻链的可变域与重链的可变域排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链与重链可变域之间形成界面。术语“恒定域”指免疫球蛋白分子中的如下部分，其相对于免疫球蛋白的其它部分，即含有抗原结合位点的可变域，具有更加保守的氨基酸序列。恒定域含有重链的ch1，ch2和ch3域(合称ch)及轻链的chl(或cl)域。抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变域可以称为“vh”。轻链的可变域可以称为“vl”。这些结构域一般是抗体的最易变部分且包含抗原结合位点。术语“可变的”指可变域中的某些部分在抗体间序列差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作高变区(hvr)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(fr)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个fr区，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个hvr连接。每条链中的hvr通过fr区非常接近的保持在一起，并与另一条链的hvr一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,第5版,nationalinstituteofhealth,bethesda,md.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何哺乳动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕(“κ”)和拉姆达(“λ”)。如本文中使用的，术语igg“同种型”或“亚类”意指由其恒定区的化学和抗原特征定义的任何免疫球蛋白亚类。根据其重链恒定域的氨基酸序列，抗体(免疫球蛋白)可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类：iga，igd，ige，igg和igm，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如igg1，igg2，igg3，igg4，iga1和iga2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α，δ，ε，γ和μ。不同类别免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的，一般性描述于例如abbasetal.,cellularandmol.immunology,4thed.(w.b.saunders,co.,2000)。抗体可以是抗体与一种或多种其它蛋白质或肽共价或非共价连接而形成的更大融合分子的一部分。术语“全长抗体”和“完整抗体”在本文中可互换使用，指基本上完整形式的抗体，而非下文定义的抗体片段。该术语具体指重链包含fc区的抗体。“裸抗体(裸露的抗体)”为本发明目的指未缀合细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。“抗体片段”包含完整抗体的一部分，优选包含其抗原结合区。在一些实施方案中，本文所述抗体片段是抗原结合片段。抗体片段的例子包括fab，fab′，f(ab′)2和fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“fab”片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的“fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个f(ab′)2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。“fv”是包含完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链fv种类由紧密，非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链fv(scfv)种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连接，使得轻链和重链可以在与双链fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。正是在这种构造中，每个可变域的三个hvr相互作用而在vh-vl二聚体表面上限定了一个抗原结合位点。六个hvr一起赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或是只包含对抗原特异性的三个hvr的半个fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。fab片段包含重链和轻链可变域，而且还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(ch1)。fab′片段与fab片段的不同之处在于重链ch1结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。fab′-sh是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的fab′的称谓。f(ab′)2抗体片段最初是作为在fab′片段之间有铰链半胱氨酸的成对fab′片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。“单链fv”或“scfv”抗体片段包含抗体的vh和vl结构域，其中这些结构域存在于一条多肽链上。一般而言，scfv多肽在vh与vl结构域之间进一步包含多肽接头，其使得scfv能够形成结合抗原的期望结构。关于scfv的综述参见例如plückthun，于《thepharmacologyofmonoclonalantibodies》，第113卷，rosenburg和moore编，springer-verlag，newyork，1994，第269-315页。术语“双抗体”指具有两个抗原结合位点的抗体片段，该片段在同一条多肽链(vh-vl)中包含相连的重链可变域(vh)和轻链可变域(vl)。通过使用过短的接头使得同一条链上的两个结构域之间不能配对，迫使这些结构域与另一条链的互补结构域配对，从而产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更完整的记载于例如ep404,097；wo1993/01161；hudsonetal.,nat.med.9:129-134(2003)；及hollingeretal.,proc.natl.acad.sci.usa90:6444-6448(1993)。三抗体(triabody)和四抗体(tetrabody)也记载于hudsonetal.,nat.med.9:129-134(2003)。术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，例如构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的突变，例如天然存在的突变。如此，修饰语“单克隆”表明抗体不是分立的抗体的混合物的特征。在某些实施方案中，此类单克隆抗体典型的包括包含结合靶物的多肽序列的抗体，其中靶物结合多肽序列是通过包括从众多多肽序列中选择单一靶物结合多肽序列在内的过程得到的。例如，选择过程可以是从众多克隆诸如杂交瘤克隆，噬菌体克隆或重组dna克隆的集合中选择独特克隆。应当理解，所选择的靶物结合序列可进一步改变，例如为了提高对靶物的亲和力，将靶物结合序列人源化，提高其在细胞培养物中的产量，降低其在体内的免疫原性，创建多特异性抗体等，而且包含改变后的靶物结合序列的抗体也是本发明的单克隆抗体。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性外，单克隆抗体制备物的优势在于它们通常未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”表明抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生产抗体。例如，依照本发明使用的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如kohlerandmilstein,nature,256:495-97(1975)；hongoetal.,hybridoma,14(3):253-260(1995),harlowetal.,antibodies:alaboratorymanual,(coldspringharborlaboratorypress,第2版1988)；hammerlingetal.,in:monoclonalantibodiesandt-cellhybridomas563-681(elsevier,n.y.,1981))，重组dna法(参见例如美国专利no.4,816,567)，噬菌体展示技术(参见例如clacksonetal.,nature352:624-628(1991)；marksetal.,j.mol.biol.222:581-597(1992)；sidhuetal.,j.mol.biol.338(2):299-310(2004)；leeetal.,j.mol.biol.340(5):1073-1093(2004)；fellouse,proc.natl.acad.sci.usa101(34):12467-12472(2004)；leeetal.,j.immunol.methods284(1-2):119-132(2004))，及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如wo1998/24893；wo1996/34096；wo1996/33735；wo1991/10741；jakobovitsetal.,proc.natl.acad.sci.usa90:2551(1993)；jakobovitsetal.,nature362:255-258(1993)；bruggemannetal.,yearinimmuno.7:33(1993)；美国专利no.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016；marksetal.,bio/technology10:779-783(1992)；lonbergetal.,nature368:856-859(1994)；morrison,nature368:812-813(1994)；fishwildetal.,naturebiotechnol.14:845-851(1996)；neuberger,naturebiotechnol.14:826(1996)；lonbergandhuszar,intern.rev.immunol.13:65-93(1995))。单克隆抗体在本文中明确包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(参见例如美国专利no.4,816,567；morrisonetal.,proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855(1984))。嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过例如用感兴趣抗原免疫猕猴而生成的抗体。非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的hvr残基用具有期望特异性，亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)诸如小鼠，大鼠，家兔，或非人灵长类动物的hvr残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的fr残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或供体抗体中没有找到的残基。可以进行这些修饰来进一步改进抗体的性能。一般而言，人源化抗体将包含至少一个，通常两个基本上整个如下可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或基本上所有fr是人免疫球蛋白序列的fr。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如jonesetal.,nature321:522-525(1986)；riechmannetal.,nature332:323-329(1988)；和presta,curr.op.struct.biol.2:593-596(1992)。还可参见例如vaswaniandhamilton,ann.allergy,asthma&immunol.1:105-115(1998)；harris,biochem.soc.transactions23:1035-1038(1995)；hurleandgross,curr.op.biotech.5:428-433(1994)；及美国专利no.6,982,321和7,087,409。“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(hoogenboomandwinter,j.mol.biol.227:381(1991)；marksetal.,j.mol.biol.222:581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：coleetal.,monoclonalantibodiesandcancertherapy,alanr.liss,p.77(1985)；boerneretal.,j.immunol.147(1):86-95(1991)。还可参见vandijkandvandewinkel,curr.opin.pharmacol.,5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因组已经失能的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利6,075,181和6,150,584，关于xenomousetm技术)。还可参见例如lietal.,proc.natl.acad.sci.usa,103:3557-3562(2006)，关于经人b-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。“物种依赖性抗体”指对来自第一哺乳动物物种的抗原的结合亲和力强于对来自第二哺乳动物物种的该抗原同系物的亲和力的抗体。通常，物种依赖性抗体“特异性结合”人抗原(例如结合亲和力(kd)数值不超过大约1x10-7m，优选不超过大约1x10-8m，且优选不超过大约1x10-9m)，但是对来自第二非人哺乳动物物种的该抗原同系物的结合亲和力比对人抗原的结合亲和力弱至少大约50倍，或至少大约500倍，或至少大约1000倍。物种依赖性抗体可以是上文所定义的各种类型抗体中的任一种，但是优选人源化抗体或人抗体。术语“高变区”，“hvr”或“hv”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个hvr：三个在vh中(h1，h2，h3)，三个在vl中(l1，l2，l3)。在天然抗体中，h3和l3展示这六个hvr的最大多样性，而且认为特别是h3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如xuetal.,immunity13:37-45(2000)；johnsonandwu,in:methodsinmolecularbiology248:1-25(lo,ed.,humanpress,totowa,nj,2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如hamers-castermanetal.nature363:446-448,(1993)；sheriffetal.naturestruct.biol.3:733-736,(1996)。本文中使用且涵盖许多hvr的叙述。kabat互补决定区(cdr)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(kabatetal.,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991))。chothia改为指结构环的位置(chothiaandleskj.mol.biol.196:901-917(1987))。abmhvr代表kabathvr与chothia结构环之间的折衷，而且得到oxfordmolecular的abm抗体建模软件的使用。“接触”hvr是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些hvr中每一个的残基。hvr可包括如下“延伸的hvr”：vl中的24-36或24-34(l1)，46-56或50-56(l2)和89-97或89-96(l3)及vh中的26-35(h1)，50-65或49-65(h2)和93-102，94-102或95-102(h3)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照kabat等，见上文编号的。“框架”或“fr”残基指可变域中除本文中所定义的hvr残基外的那些残基。术语“依照kabat的可变域残基编号方式”或“依照kabat的氨基酸位置编号方式”及其变化形式指kabatetal.,见上文中的用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变域fr或hvr的缩短或插入。例如，重链可变域可包含h2残基52后的单一氨基酸插入(依照kabat为残基52a)及重链fr残基82后的插入残基(例如依照kabat为残基82a，82b和82c等)。给定抗体的kabat残基编号方式可通过将抗体序列与“标准”kabat编号序列对比同源区来确定。kabat编号系统一般在提及可变域中的残基(大约是轻链残基1-107和重链残基1-113)时使用(例如kabatetal.,sequencesofimmunologicalinterest.5thed.publichealthservice,nationalinstitutesofhealth,bethesda,md.(1991))。“eu编号系统”或“eu索引”一般在提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时使用(例如kabatetal.，见上文中报道的eu索引)。“如kabat中的eu索引”指人igg1eu抗体的残基编号方式。表述“线性抗体”指zapataetal.(1995)proteineng,8(10):1057-1062中所描述的抗体。简言之，这些抗体包含一对串联的fd区段(vh-ch1-vh-ch1)，该区段与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线性抗体可以是双特异性的，或者是单特异性的。如本文中使用的，术语“结合”，“特异性结合”或“对…特异性的”指可测量且可再现的相互作用，诸如靶物和抗体之间的结合，其确定在存在分子(包括生物学分子)的异质群体的情况中靶物的存在。例如，结合或特异性结合靶物(其可以是表位)的抗体是以比其结合其它靶物更大的亲和力，亲合力，更容易，和/或以更大的持续时间结合此靶物的抗体。在一个实施方案中，抗体结合无关靶物的程度小于抗体结合靶物的约10％，如例如通过放射性免疫测定法(ria)测量的。在某些实施方案中，特异性结合靶物的抗体具有≤1μm，≤100nm，≤10nm，≤1nm，或≤0.1nm的解离常数(kd)。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上在来自不同物种的蛋白质间保守的表位。在另一个实施方案中，特异性结合可以包括但不需要排他结合。术语“检测”包括任何检测手段，包括直接和间接检测。如本文中使用的，术语“生物标志物”指可在样品中检测的指示物，例如预测性，诊断性和/或预后性的指示物。生物标志物可以充当由特定的分子，病理学，组织学和/或临床特征表征的特定疾病或病症(例如癌症)亚型的指示物。在一些实施方案中，生物标志物是一种基因。生物标志物包括但不限于，多核苷酸(例如dna和/或rna)，多核苷酸拷贝数目改变(例如dna拷贝数)，多肽，多肽和多核苷酸修饰(例如翻译后修饰)，碳水化合物和/或基于糖脂的分子标志物。术语“生物标志物签名”，“签名”，“生物标志物表达签名”或“表达签名”在本文中可互换使用，指其表达为指示物，例如预测性，诊断性和/或预后性指示物的一种或一组生物标志物。生物标志物签名可以充当由特定的分子，病理学，组织学和/或临床特征表征的特定疾病或病症(例如癌症)亚型的指示物。在一些实施方案中，生物标志物签名是“基因签名”。术语“基因签名”与“基因表达签名”可互换使用，指其表达为指示物，例如预测性，诊断性和/或预后性指示物的一种或一组多核苷酸。在一些实施方案中，生物标志物签名是“蛋白质签名”。术语“蛋白质签名”与“蛋白质表达签名”可互换使用，指其表达为指示物，例如预测性，诊断性和/或预后性指示物的一种或一组多肽。生物标志物与个体增加的临床益处有关的“量”或“水平”是生物学样品中的可检测水平。这些可通过本领域技术人员已知的及本文中公开的方法来测量。所评估的生物标志物的表达水平或量可用于确定对治疗的响应。术语“表达的水平”或“表达水平”一般可互换使用，一般指生物学样品中生物标志物的量。“表达”一般指信息(例如基因编码和/或表观遗传)转化成细胞中存在并运行的结构的过程。因此，如本文中使用的，“表达”可以指转录成多核苷酸，翻译成多肽，或甚至多核苷酸和/或多肽修饰(例如多肽的翻译后修饰)。转录的多核苷酸的，翻译的多肽的，或多核苷酸和/或多肽修饰(例如多肽的翻译后修饰)的片段也应视为表达的，无论它们是源自通过可变剪接生成的转录物或经过降解的转录物，或者是源自多肽的翻译后加工(例如通过蛋白水解)。“表达的基因”包括转录成多核苷酸(如mrna)，然后翻译成多肽的基因，还有转录成rna但不翻译成多肽的基因(例如转运和核糖体rna)。“升高的表达”，“升高的表达水平”或“升高的水平”指相对于对照如不患有疾病或病症(例如癌症)的个体或内部对照(例如持家型生物标志物)，个体中生物标志物的增加的表达或增加的水平。“降低的表达”，“降低的表达水平”或“降低的水平”指相对于对照诸如没有罹患疾病或病症(例如癌症)的个体或内部对照(例如持家型生物标志物)，个体中生物标志物的降低的表达或降低的水平。在一些实施方案中，降低的表达是很少或不表达。术语“持家型生物标志物”指通常相似地存在于所有细胞类型中的一种生物标志物或一组生物标志物(例如多核苷酸和/或多肽)。在一些实施方案中，持家型生物标志物是“持家基因”。“持家基因”在本文中指一种基因或一组基因，其编码活性对于细胞功能维持而言必要的蛋白质，且通常相似地存在于所有细胞类型中。如本文中使用的，“扩增”一般指生成多拷贝的期望序列的过程。“多拷贝”指至少2个拷贝。“拷贝”不必然意味着与模板序列有完全的序列互补性或同一性。例如，拷贝可以包含核苷酸类似物诸如脱氧肌苷，有意的序列变化(诸如经由包含与模板可杂交但不互补的序列的引物引入的序列变化)和/或扩增期间发生的序列错误。术语“多重pcr”指出于在单个反应中扩增两种或更多种dna序列的目的，使用超过一套引物在自单一来源(例如个体)获得的核酸上进行的单个pcr反应。杂交反应的“严格性”可以由本领域中的普通技术人员容易地确定，而且通常根据探针长度，洗涤温度和盐浓度凭经验计算。一般而言，较长的探针要求较高的温度以正确退火，而较短的探针需要较低的温度。杂交通常依赖于当互补链存在于低于其解链温度的环境中时变性dna重新退火的能力。探针与可杂交序列之间的期望同源性程度越高，可使用的相对温度也越高。结果，可推出较高相对温度将趋向于使反应条件更为严格，而较低温度也就较不严格。关于杂交反应严格性的其它细节和解释，参见ausubeletal.,currentprotocolsinmolecularbiology,wileyintersciencepublishers,(1995)。如本文中所定义的，“严格条件”或“高严格条件”可由以下鉴定：(1)对于洗涤采用低离子强度和高温，例如0.015m氯化钠/0.0015m柠檬酸钠/0.1％十二烷基硫酸钠，50℃；(2)在杂交期间使用变性剂，诸如甲酰胺，例如50％(v/v)甲酰胺及0.1％牛血清清蛋白/0.1％ficoll/0.1％聚乙烯吡咯烷酮/50mm磷酸钠缓冲液ph6.5及750mm氯化钠，75mm柠檬酸钠，42℃；或(3)在使用50％甲酰胺，5xssc(0.75mnacl，0.075m柠檬酸钠)，50mm磷酸钠(ph6.8)，0.1％焦磷酸钠，5x登哈特(denhardt)氏溶液，超声处理的鲑精dna(50μg/ml)，0.1％sds和10％硫酸右旋糖苷的溶液中在42℃过夜杂交，在42℃于0.2xssc(氯化钠/柠檬酸钠)洗涤10分钟，然后在55℃进行由含有edta的0.1xssc组成的10分钟高严格洗涤。“中等严格条件”可以如sambrooketal.,molecularcloning:alaboratorymanual,newyork:coldspringharborpress,1989所描述的来定义，而且包括使用与上文所述那些相比较不太严格的洗涤溶液和杂交条件(例如温度，离子强度和％sds)。中等严格条件的一个例子是在含：20％甲酰胺，5xssc(150mmnacl，15mm柠檬酸三钠)，50mm磷酸钠(ph7.6)，5x登哈特氏溶液，10％硫酸右旋糖苷和20mg/ml变性的剪切的鲑精dna的溶液中于37℃温育过夜，然后于约37-50℃在1xssc中洗涤滤膜。熟练技术人员会认识到如何根据适应诸如探针长度等因素的需要来调节温度，离子强度等。“聚合酶链式反应”或“pcr”技术在用于本文时一般指其中如1987年7月28日公告的美国专利第4,683,195号中所记载的，扩增微量的核酸，rna和/或dna特定片段的流程。通常，需要获知目的区域末端或以外的序列信息，从而可设计寡核苷酸引物；这些引物在序列上将与待扩增模板的相对链相同或相似。两条引物的5’末端核苷酸可与所扩增物质的末端一致。pcr可用于从总基因组dna和由总细胞rna转录的cdna，噬菌体或质粒序列等扩增特定rna序列，特定dna序列。一般参见mullis等,coldspringharborsymp.quant.biol.51:263(1987)；erliched.,pcrtechnology,stocktonpress,ny,1989。在用于本文时，pcr视为用于扩增核酸测试样品的核酸聚合酶反应方法的一个但非唯一的例子，包括使用已知核酸(dna或rna)作为引物并利用核酸聚合酶来扩增或生成特定核酸片段，或者扩增或生成与特定核酸互补的特定核酸片段。“定量实时聚合酶链式反应”或“qrt-pcr”指pcr的一种形式，其中在pcr反应的每个步骤测量pcr产物的量。这种技术已经记载于多份出版物，包括cronin等,am.j.pathol.164(1):35-42(2004)；ma等,cancercell.5:607-616(2004)。术语“微阵列”指可杂交阵列元素，优选多核苷酸探针在基片上的有序排列。术语“多核苷酸”在以单数或复数使用时一般指任何多聚核糖核苷酸或多聚脱氧核糖核苷酸，可以是未经修饰的rna或dna或者是经过修饰的rna或dna。如此，例如，本文中所定义的多核苷酸包括但不限于单链和双链dna，包含单链区和双链区的dna，单链和双链rna，及包含单链区和双链区的rna，包含dna和rna的杂合分子，它可以是单链的，或者更典型的是双链的，或者包含单链区和双链区。另外，术语“多核苷酸”在用于本文时指包含rna或dna或rna和dna二者的三链区。此类区中的链可来自相同分子或来自不同分子。所述区可包含一种或多种分子的整个，但是更典型的是只包含有些分子的一个区。三股螺旋区的分子之一常常是寡核苷酸。术语“多核苷酸”明确包括cdna。该术语包括包含一种或多种经修饰碱基的dna(包括cdna)和rna。如此，主链为稳定性或其它原因而修饰的dna或rna也是“多核苷酸”该术语在本文中的意图所在。此外，包含罕见碱基诸如肌苷或经修饰碱基诸如氚化碱基的dna或rna也包括在本文中所定义的术语“多核苷酸”内。一般而言，术语“多核苷酸”涵盖未修饰多核苷酸的所有化学，酶学和/或代谢修饰形式，以及病毒和细胞，包括简单和复杂细胞的特征性的dna和rna的化学形式。术语“寡核苷酸”指相对较短的多核苷酸，包括但不限于单链脱氧核糖核苷酸，单链或双链核糖核苷酸，rna:dna杂合物，及双链dna。寡核苷酸，诸如单链dna探针寡核苷酸，常常通过化学方法来合成，例如使用商品化的自动化寡核苷酸合成仪。然而，寡核苷酸可通过多种其它方法来制备，包括体外重组dna介导的技术和通过dna在细胞和生物体中的表达。术语“诊断”在本文中用于指对分子或病理学状态，疾病或疾患(例如癌症)的鉴定或分类。例如，“诊断”可以指特定癌症类型的鉴定。“诊断”还可以指特定癌症亚型的分类，例如通过组织病理学标准或分子特征(例如由一种或一组生物标志物(例如特定基因或由所述基因编码的蛋白质)的表达表征的亚型)。术语“帮助做出诊断”在本文中用于指帮助进行关于特定类型的疾病或病症(例如癌症)的症状或状况的存在或性质的临床确定的方法。例如，帮助做出疾病或状况(例如癌症)诊断的方法可以包括在来自个体的生物学样品中测量特定的生物标志物。术语“样品”在用于本文时指获得自或衍生自感兴趣的受试者和/或个体的组合物，其包含有待根据例如物理，生化，化学和/或生理特点来表征和/或鉴定的细胞和/或其它分子实体。例如，短语“疾病样品”或其变体指得自感兴趣的受试者的任何样品，预计或已知其包含待表征的细胞和/或分子实体。样品包括但不限于，原代或培养的细胞或细胞系，细胞上清，细胞裂解物，血小板，血清，血浆，玻璃体液，淋巴液，滑液，滤泡液(follicularfluid)，精液，羊水，乳，全血，血液衍生的细胞，尿液，脑脊髓液，唾液，痰，泪，汗液，粘液，肿瘤裂解物，和组织培养液(tissueculturemedium)，组织提取物如匀浆化的组织，肿瘤组织，细胞提取物，及其组合。“组织样品”或“细胞样品”意指从受试者或个体的组织获得的相似细胞的集合。组织或细胞样品的来源可以是实体组织如来自新鲜，冷冻和/或保存的器官，组织样品，活组织检查和/或抽吸物；血液或任何血液成分如血浆；体液如脑脊髓液，羊水，腹膜液或间隙液(interstitialfluid)；来自受试者的妊娠或发育中任意时间的细胞。组织样品还可以是原代或培养的细胞或细胞系。任选地，组织或细胞样品自患病的组织/器官获得。组织样品可以含有在自然界中不天然与组织混杂的化合物，如防腐剂，抗凝血剂，缓冲剂，固定剂，营养物，抗生素等。如本文中使用的，“参照样品”，“参照细胞”，“参照组织”，“对照样品”，“对照细胞”或“对照组织”指用于比较目的的样品，细胞，组织，标准，或水平。在一个实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织自同一受试者或个体的健康和/或无疾病身体部位(例如组织或细胞)获得。例如，临近于患病细胞或组织的健康和/或无疾病细胞或组织(例如临近肿瘤的细胞或组织)。在另一个实施方案中，参照样品自同一受试者或个体的身体的未治疗组织和/或细胞获得。在又一个实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织自不是该受试者或个体的个体的健康和/或无疾病身体部位(例如组织或细胞)获得。在再一个实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织自不是该受试者或个体的个体身体的未治疗组织和/或细胞获得。为本发明目的，组织样品的“切片”意指一块或一片组织样品，例如从组织样品上切下来的一薄片组织或细胞。应当了解，可以制作多片组织样品切片并进行分析，只要理解可以将组织样品的同一切片用于形态学和分子两个水平的分析或者针对多肽和多核苷酸二者进行分析。“关联”或“联系”意指以任何方式将第一分析或方案的性能和/或结果与第二分析或方案的性能和/或结果进行比较。例如，可以将第一分析或方案的结果用于实施第二方案，和/或，可以使用第一分析或方案的结果来决定是否应当实施第二分析或方案。就多肽分析或方案的实施方案而言，可以使用多肽表达分析或方案的结果来决定是否应当实施特定治疗方案。就多核苷酸分析或方案的实施方案而言，可以使用多核苷酸表达分析或方案的结果来决定是否应当实施特定治疗方案。词语“标记物”在用于本文时指可检测的化合物或组合物。标记物通常与试剂如多核苷酸探针或抗体直接或间接缀合或融合，而且协助对其所缀合或融合的试剂的检测。标记物可以是通过自身就可检测的(例如放射性同位素标记物或萦光标记物)，或者在酶标记物的情况中，可催化产生可检测产物的底物化合物或组合物的化学改变。患者对药物治疗的“有效响应”或“响应性”及类似用语指对处于疾病或病症(诸如癌症)风险或患有疾病或病症(诸如癌症)的患者给予的临床或治疗好处。在一个实施方案中，此类好处包括如下任何一项或多项：延长存活(包括总体存活和无进展存活)；导致客观响应(包括完全响应或部分响应)；或改善癌症体征或症状。对治疗“不具有有效响应”的患者指不具有延长存活(包括总体存活和无进展存活)；导致客观响应(包括完全响应或部分响应)；或改善癌症体征或症状中任一项的患者。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“adcc”指其中结合到某些细胞毒性细胞(例如nk细胞，嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的fc受体(fcr)上的分泌型免疫球蛋白使得这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合携带抗原的靶细胞，随后用细胞毒素杀死靶细胞的细胞毒性形式。介导adcc的主要细胞，nk细胞，只表达fcγriii，而单核细胞表达fcγri，fcγrii和fcγriii。ravetchandkinet,annu.rev.immunol.9:457-92(1991)第464页表3总结了造血细胞上的fcr表达。为了评估目的分子的adcc活性，可进行体外adcc测定法，诸如美国专利no.5,500,362或5,821,337或美国专利no.6,737,056(presta)中所记载的。可用于此类测定法的效应细胞包括pbmc和nk细胞。或者/另外，可在体内评估目的分子的adcc活性，例如在动物模型中，诸如clynesetal.,pnas(usa)95:652-656(1998)中所披露的。本文实施例中提供了用于评估adcc活性的一种例示性测定法。“补体依赖性细胞毒性”或“cdc”指存在补体时对靶细胞的溶解。经典补体途径的激活是由补体系统第一组分(c1q)结合抗体(适宜亚类的)起始的，该抗体已结合至其关联抗原。为了评估补体激活，可进行cdc测定法，例如如gazzano-santoroetal.,j.immunol.methods202:163(1996)中所记载的。具有更改的fc区氨基酸序列(具有变异fc区的多肽)及提高或降低的c1q结合能力的多肽变体记载于例如美国专利no.6,194,551b1和wo1999/51642。还可参见例如idusogieetal.,j.immunol.164:4178-4184(2000)。“消减性抗ox40抗体”指杀死或消减表达ox40的细胞的抗ox40抗体。消减表达ox40的细胞可以通过多种机制来实现，诸如抗体依赖性细胞介导的细胞毒性和/或吞噬作用。消减表达ox40的细胞可以在体外测定，而且本文中提供了体外adcc和吞噬作用测定法的例示性方法。在一些实施方案中，表达ox40的细胞是人cd4+效应t细胞。在一些实施方案中，表达ox40的细胞是表达人ox40的转基因bt474细胞。“效应器功能”指那些可归于抗体fc区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：c1q结合和补体依赖性细胞毒性(cdc)；fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(adcc)；吞噬作用；细胞表面受体(例如b细胞受体)下调；和b细胞活化。“fc受体”或“fcr”描述结合抗体fc区的受体。在一些实施方案中，fcr是天然人fcr。在一些实施方案中，fcr是结合igg抗体的fcr(γ受体)，包括fcγri，fcγrii和fcγriii亚类的受体，包括那些受体的等位变体和可变剪接形式。fcγrii受体包括fcγriia(“活化受体”)和fcγriib(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在于其胞质结构域。活化受体fcγriia在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(itam)。抑制受体fcγriib在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(itim)(参见例如annu.rev.immunol.15:203-234(1997))。fcr的综述参见例如ravetchandkinet,annu.rev.immunol.9:457-492(1991)；capeletal.,immunomethods4:25-34(1994)；及dehaasetal.,j.lab.clin.med.126:330-41(1995)。术语“fcr”在本文中涵盖其它fcr，包括那些未来将会鉴定的。术语“fc受体”或“fcr”还包括新生儿受体，fcrn，其负责将母体igg转移给胎儿(guyeretal.,j.immunol.117:587(1976)及kimetal.,j.immunol.24:249(1994))和调节免疫球蛋白的体内稳态。测量对fcrn的结合的方法是已知的(参见例如ghetieandward.,immunol.today18(12):592-598(1997)；ghetieetal.,naturebiotechnology,15(7):637-640(1997)；hintonetal.,j.biol.chem.279(8):6213-6216(2004)；wo2004/92219(hintonetal.))。可测定人fcrn高亲和力结合多肽与人fcrn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人fcrn的转基因小鼠或经转染的人细胞系中，或者在施用了具有变异fc区的多肽的灵长类动物中。wo2000/42072(presta)记载了对fcr的结合提高或降低的抗体变体。还可参见例如shieldsetal.,j.biol.chem.9(2):6591-6604(2001)。“功能性fc区”拥有天然序列fc区的“效应器功能”。例示性的“效应器功能”包括c1q结合；cdc；fc受体结合；adcc；吞噬作用；细胞表面受体(例如b细胞受体；bcr)下调等。此类效应器功能一般要求fc区与结合结构域(例如抗体可变域)联合，而且可以使用多种测定法来评估，例如本文定义中所公开的。“人效应细胞”指表达一种或多种fcr并行使效应器功能的白细胞。在某些实施方案中，该细胞至少表达fcγriii并行使adcc效应器功能。介导adcc的人白细胞的例子包括外周血单个核细胞(pbmc)，天然杀伤(nk)细胞，单核细胞，细胞毒性t细胞和嗜中性粒细胞。效应细胞可以从其天然来源分离，例如血液。“具有人效应细胞”的癌症或生物学样品是在诊断测试中在样品中有人效应细胞(例如浸润性人效应细胞)存在的癌症或生物学样品。“具有表达fcr的细胞”的癌症或生物学样品是在诊断测试中在样品中有表达fcr的细胞(例如浸润性表达fcr的细胞)存在的癌症或生物学样品。在一些实施方案中，fcr是fcγr。在一些实施方案中，fcr是活化性fcγr。ii.pd-1轴结合拮抗剂本文中提供了用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。本文中还提供了用于在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括对个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。例如，pd-1轴结合拮抗剂包括pd-1结合拮抗剂，pdl1结合拮抗剂和pdl2结合拮抗剂。“pd-1”的备选名称包括cd279和sleb2。“pdl1”的备选名称包括b7-h1，b7-4，cd274，和b7-h。“pdl2”的备选名称包括b7-dc，btdc，和cd273。在一些实施方案中，pd-1，pdl1，和pdl2是人pd-1，pdl1，和pdl2。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抑制pd-1与其配体结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，pd-1配体结合配偶是pdl1和/或pdl2。在另一个实施方案中，pdl1结合拮抗剂是抑制pdl1与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，pdl1结合配偶是pd-1和/或b7-1。在另一个实施方案中，pdl2结合拮抗剂是抑制pdl2与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，pdl2结合配偶是pd-1。拮抗剂可以是抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，或寡肽。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是抗pd-1抗体(例如人抗体，人源化抗体，或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗pd-1抗体选自下组：mdx-1106(nivolumab，opdivo)，merck3475(mk-3475，pembrolizumab，keytruda)，ct-011(pidilizumab)，medi-0680(amp-514)，pdr001，regn2810，bgb-108，和bgb-a317。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如包含融合至恒定区(例如免疫球蛋白序列的fc区)的pdl1或pdl2的胞外或pd-1结合部分的免疫粘附素)。在一些实施方案中，pd-1结合拮抗剂是amp-224。nivolumab，也称作mdx-1106-04，mdx-1106，ono-4538，bms-936558，和是一种在wo2006/121168中描述的抗pd-1抗体。pembrolizumab，也称作mk-3475，merck3475，lambrolizumab，和sch-900475，是一种在wo2009/114335中描述的抗pd-1抗体。ct-011，也称作hbat，hbat-1或pidilizumab，是一种在wo2009/101611中描述的抗pd-1抗体。amp-224，也称作b7-dcig，是一种在wo2010/027827和wo2011/066342中描述的pdl2-fc融合可溶性受体。在一些实施方案中，抗pd-1抗体是nivolumab(cas登记号：946414-94-4)。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗pd-1抗体，其包含包含来自seqidno:10的重链可变区氨基酸序列的重链可变区和/或包含来自seqidno:11的轻链可变区氨基酸序列的轻链可变区。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗pd-1抗体，其包含重链和/或轻链序列，其中：(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：qvqlvesgggvvqpgrslrldckasgitfsnsgmhwvrqapgkglewvaviwydgskryyadsvkgrftisrdnskntlflqmnslraedtavyycatnddywgqgtlvtvssastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtktytcnvdhkpsntkvdkrveskygppcppcpapeflggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvsqedpevqfnwyvdgvevhnaktkpreeqfnstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkglpssiektiskakgqprepqvytlppsqeemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflysrltvdksrwqegnvfscsvmhealhnhytqkslslslgk(seqidno:10)，或(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：eivltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliydasnratgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqssnwprtfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:11)。在一些实施方案中，抗pd-1抗体是pembrolizumab(cas登记号：1374853-91-4)。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗pd-1抗体，其包含包含来自seqidno:12的重链可变区氨基酸序列的重链可变区和/或包含来自seqidno:13的轻链可变区氨基酸序列的轻链可变区。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗pd-1抗体，其包含重链和/或轻链序列，其中：(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：eivltqspatlslspgeratlscraskgvstsgysylhwyqqkpgqaprlliylasylesgvparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqhsrdlpltfgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:13)。在一些实施方案中，pdl1结合拮抗剂是抗pdl1抗体。在一些实施方案中，pdl1结合拮抗剂选自下组：yw243.55.s70，mpdl3280a(atezolizumab)，mdx-1105，medi4736(durvalumab)，和msb0010718c(avelumab)。mdx-1105，也称作bms-936559，是一种在wo2007/005874中描述的抗pdl1抗体。抗体yw243.55.s70(重和轻链可变区序列分别显示于seqidno.20和21)是一种在wo2010/077634a1中描述的抗pdl1抗体。medi4736是一种在wo2011/066389和us2013/034559中描述的抗pdl1抗体。可用于本发明方法的抗pdl1抗体及其生成方法的例子记载于pct专利申请wo2010/077634a1和美国专利no.8,217,149，其通过援引收入本文。在一些实施方案中，pd-1轴结合拮抗剂是抗pdl1抗体。在一些实施方案中，抗pdl1抗体能够抑制pdl1和pd-1之间和/或pdl1和b7-1之间的结合。在一些实施方案中，抗pdl1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗pdl1抗体是选自下组的抗体片段：fab，fab’-sh，fv，scfv，和(fab’)2片段。在一些实施方案中，抗pdl1抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗pdl1抗体是人抗体。可用于本发明的抗pdl1抗体(包括含有此类抗体的组合物)，诸如那些记载于wo2010/077634a1的抗pdl1抗体可以与ox40结合激动剂组合使用以治疗癌症。在一些实施方案中，抗pdl1抗体包含包含seqidno:7或8的氨基酸序列的重链可变区和包含seqidno:9的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗pdl1抗体含有重链可变区多肽，其包含hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3序列，其中：(a)hvr-h1序列是gftfsx1swih(seqidno:14)；(b)hvr-h2序列是awix2pyggsx3yyadsvkg(seqidno:15)；(c)hvr-h3序列是rhwpggfdy(seqidno:3)；进一步其中：x1是d或g；x2是s或l；x3是t或s。在一个具体的方面，x1是d；x2是s且x3是t。在另一个方面，多肽进一步包含依照下式的hvr间并置的可变区重链框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在另一个方面，框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：hc-fr1是evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2是wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3是rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4是wgqgtlvtvsa(seqidno:19)。在又一个方面，重链多肽与可变区轻链进一步组合，所述可变区轻链包含hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3，其中：(a)hvr-l1序列是rasqx4x5x6tx7x8a(seqidno:20)；(b)hvr-l2序列是sasx9lx10s(seqidno:21)；(c)hvr-l3序列是qqx11x12x13x14px15t(seqidno:22)；进一步其中：x4是d或v；x5是v或i；x6是s或n；x7是a或f；x8是v或l；x9是f或t；x10是y或a；x11是y，g，f，或s；x12是l，y，f或w；x13是y，n，a，t，g，f或i；x14是h，v，p，t或i；x15是a，w，r，p或t。在又一个方面，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h；x15是a。在又一个方面，轻链进一步包含依照下式的hvr间并置的可变区轻链框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：lc-fr1是diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2是wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3是gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4是fgqgtkveikr(seqidno:26)。在另一个实施方案中，提供了分离的抗pdl1抗体或抗原结合片段，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)重链包含hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3，其中进一步：(i)hvr-h1序列是gftfsx1swih(seqidno:14)，(ii)hvr-h2序列是awix2pyggsx3yyadsvkg(seqidno:15)(iii)hvr-h3序列是rhwpggfdy(seqidno:3)，且(b)轻链包含hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3，其中进一步：(i)hvr-l1序列是rasqx4x5x6tx7x8a(seqidno:20)，(ii)hvr-l2序列是sasx9lx10s(seqidno:21)，和(iii)hvr-l3序列是qqx11x12x13x14px15t(seqidno:22)进一步其中：x1是d或g；x2是s或l；x3是t或s；x4是d或v；x5是v或i；x6是s或n；x7是a或f；x8是v或l；x9是f或t；x10是y或a；x11是y，g，f，或s；x12是l，y，f或w；x13是y，n，a，t，g，f或i；x14是h，v，p，t或i；x15是a，w，r，p或t。在一个具体的方面，x1是d；x2是s且x3是t。在另一个方面，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h；x15是a。在又一个方面，x1是d；x2是s且x3是t，x4是d；x5是v；x6是s；x7是a；x8是v；x9是f；x10是y；x11是y；x12是l；x13是y；x14是h且x15是a。在另一个方面，重链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，并且轻链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自kabat亚组i，ii，或iii序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:19)。在又一个方面，轻链框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:26)。在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在又一个具体的方面，人恒定区是igg1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在又一个方面，鼠恒定区是igg2a。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小效应器功能源自“效应器较小(effector-less)的fc突变”或无糖基化(aglycosylation)。在又一个实施方案中，效应器较小的fc突变是恒定区中的n297a或d265a/n297a替代。在又一个实施方案中，提供了抗pdl1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)重链进一步包含与gftfsdswih(seqidno:1)，awispyggstyyadsvkg(seqidno:2)和rhwpggfdy(seqidno:3)分别具有至少85％序列同一性的hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3序列，或(b)轻链进一步包含与rasqdvstava(seqidno:4)，sasflys(seqidno:5)和qqylyhpat(seqidno:6)分别具有至少85％序列同一性的hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3序列。在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且轻链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自kabat亚组i，ii，或iii序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:19)。在又一个方面，轻链框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:26)。在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在又一个具体的方面，人恒定区是igg1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在又一个方面，鼠恒定区是igg2a。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小效应器功能源自“效应器较小的fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的fc突变是恒定区中的n297a或d265a/n297a替代。在又一个实施方案中，提供了分离的抗pdl1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvsa(seqidno:28)，或(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:9)。在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且轻链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自kabat亚组i，ii，或iii序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:19)。在又一个方面，轻链框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:26)。在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在又一个具体的方面，人恒定区是igg1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在又一个方面，鼠恒定区是igg2a。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自原核细胞中的生成。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的fc突变是恒定区中的n297a或d265a/n297a替代。在另一个又一个实施方案中，提供一种分离的抗pdl1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvss(seqidno:7)，或(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:9)。在仍有又一个实施方案中，提供一种分离的抗pdl1抗体，其包含重链和轻链可变区序列，其中：(a)该重链序列与下述重链序列具有至少85％序列同一性：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvssastk(seqidno:8)，或(b)该轻链序列与下述轻链序列具有至少85％序列同一性：diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:9)。在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且轻链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在另一个方面，重链框架序列自kabat亚组i，ii，或iii序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4wgqgtlvtvss(seqidno:27)。在又一个方面，轻链框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:26)。在又一个具体的方面，抗体进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在又一个具体的方面，人恒定区是igg1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在又一个方面，鼠恒定区是igg2a。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自原核细胞中的生成。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的fc突变”或无糖基化。在又一个实施方案中，效应器较小的fc突变是恒定区中的n297a或d265a/n297a替代。在又一个实施方案中，抗pdl1抗体是mpdl3280a(cas登记号：1422185-06-5)。在又一个实施方案中，提供了分离的抗pdl1抗体，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含来自evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvss(seqidno:7)或evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvssastk(seqidno:8)的重链可变区氨基酸序列，所述轻链可变区包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikr(seqidno:9)的氨基酸序列。在又一个实施方案中，提供了分离的抗pdl1抗体，其包含重链和/或轻链序列，其中：(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsdswihwvrqapgkglewvawispyggstyyadsvkgrftisadtskntaylqmnslraedtavyycarrhwpggfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqyastyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspg(seqidno:29)，和/或(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdvstavawyqqkpgkapklliysasflysgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqylyhpatfgqgtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:30)。在又一个实施方案中，本发明提供了组合物，其包含与至少一种药学可接受载体组合的任一种上文描述的抗pdl1抗体。在又一个实施方案中，提供了分离的核酸，其编码抗pdl1抗体的轻链或重链可变区序列，其中：(a)重链进一步包含与gftfsdswih(seqidno:1)，awispyggstyyadsvkg(seqidno:2)和rhwpggfdy(seqidno:3)分别具有至少85％序列同一性的hvr-h1，hvr-h2和hvr-h3序列，和(b)轻链进一步包含与rasqdvstava(seqidno:4)，sasflys(seqidno:5)和qqylyhpat(seqidno:6)分别具有至少85％序列同一性的hvr-l1，hvr-l2和hvr-l3序列。在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在各方面，重链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(hc-fr1)-(hvr-h1)-(hc-fr2)-(hvr-h2)-(hc-fr3)-(hvr-h3)-(hc-fr4)，且轻链可变区包含如下的hvr间并置的一个或多个框架序列：(lc-fr1)-(hvr-l1)-(lc-fr2)-(hvr-l2)-(lc-fr3)-(hvr-l3)-(lc-fr4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在另一个方面，重链框架序列自kabat亚组i，ii，或iii序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是vh亚组iii共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：hc-fr1evqlvesggglvqpggslrlscaas(seqidno:16)hc-fr2wvrqapgkglewv(seqidno:17)hc-fr3rftisadtskntaylqmnslraedtavyycar(seqidno:18)hc-fr4wgqgtlvtvsa(seqidno:19)。在又一个方面，轻链框架序列自kabatκi，ii，ii或iv亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是vlκi共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：lc-fr1diqmtqspsslsasvgdrvtitc(seqidno:23)lc-fr2wyqqkpgkapklliy(seqidno:24)lc-fr3gvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyyc(seqidno:25)lc-fr4fgqgtkveikr(seqidno:26)。在又一个具体的方面，本文中描述的抗体(诸如抗pd-1抗体，抗pdl1抗体，或抗pdl2抗体)进一步包含人或鼠恒定区。在又一个方面，人恒定区选自下组：igg1，igg2，igg2，igg3，igg4。在又一个具体的方面，人恒定区是igg1。在又一个方面，鼠恒定区选自下组：igg1，igg2a，igg2b，igg3。在又一个方面，鼠恒定区是igg2a。在又一个具体的方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自原核细胞中的生成。在又一个具体的方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的fc突变”或无糖基化。在又一个方面，效应器较小的fc突变是恒定区中的n297a或d265a/n297a替代。在又一个方面，本文中提供了编码本文中描述的任何抗体的核酸。在一些实施方案中，核酸进一步包含适合于表达核酸的载体，所述核酸编码先前描述的抗pdl1，抗pd-1，或抗pdl2抗体之任一种。在又一个具体的方面，载体进一步包含适合于表达核酸的宿主细胞。在又一个具体的方面，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在又一个具体的方面，真核细胞是哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(cho)。可以使用本领域中已知的方法，例如通过如下的方法生成抗体或其抗原结合片段，所述方法包括在适合于生成此类抗体或片段的条件下培养含有核酸的宿主细胞，并回收抗体或片段，所述核酸编码适合于表达的形式的先前描述的抗pdl1，抗pd-1，或抗pdl2抗体或抗原结合片段之任一种。在一些实施方案中，分离的抗pdl1抗体是无糖基化的。抗体的糖基化通常是n连接的或o连接的。n连接指碳水化合物模块附着至天冬酰胺残基的侧链。三肽序列天冬酰胺-x-丝氨酸和天冬酰胺-x-苏氨酸(其中x是除脯氨酸以外的任何氨基酸)是碳水化合物模块酶促附着至天冬酰胺侧链的识别序列。如此，这些三肽序列任一在多肽中的存在创建潜在的糖基化位点。o连接的糖基化指糖n-乙酰基半乳糖胺，半乳糖，或木糖附着至羟基氨基酸，最常见丝氨酸或苏氨酸，尽管也可以使用5-羟基脯氨酸或5-羟基赖氨酸。通过改变氨基酸序列，使得去除上文所述三肽序列(用于n连接的糖基化位点)之一，方便地实现自抗体去除糖基化位点。可以通过将糖基化位点内的天冬酰胺，丝氨酸或苏氨酸残基用另一种氨基酸残基(例如甘氨酸，丙氨酸或保守氨基酸替代)替代来进行改变。在本文中的任何实施方案中，分离的抗pdl1抗体能结合人pdl1(例如uniprotkb/swiss-prot登录号q9nzq7.1中所示人pdl1)或其变体。在又一个实施方案中，本发明提供了组合物，其包含如本文中提供的抗pdl1，抗pd-1，或抗pdl2抗体或其抗原结合片段和至少一种药学可接受载体。在一些实施方案中，对个体施用的抗pdl1，抗pd-1，或抗pdl2抗体或其抗原结合片段是包含一种或多种药学可接受载体的组合物。可以使用本文中描述的或本领域中已知的任何药学可接受载体。在一些实施方案中，本文所述抗pdl1抗体在配制剂中，该配制剂包含量为约60mg/ml的抗体，浓度为约20mm的组氨酸乙酸酯，浓度为约120mm的蔗糖，和浓度为0.04％(w/v)的聚山梨酯(例如聚山梨酯20)，而且该配制剂具有约5.8的ph。在一些实施方案中，本文所述抗pdl1抗体在配制剂中，该配制剂包含量为约125mg/ml的抗体，浓度为约20mm的组氨酸乙酸酯，浓度为约240mm的蔗糖，和浓度为0.02％(w/v)的聚山梨酯(例如聚山梨酯20)，而且该配制剂具有约5.5的ph。iii.ox40结合激动剂本文中提供的是一种用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对该个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。本文中还提供的是一种在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括对该个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。ox40结合激动剂包括例如ox40激动性抗体(例如抗人ox40激动性抗体)，ox40l激动性片段，ox40寡聚受体，和ox40免疫粘附素。在一些实施方案中，与用该ox40激动性抗体治疗之前的增殖和/或细胞因子生成相比，该ox40激动性抗体提高cd4+效应t细胞增殖和/或提高该cd4+效应t细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该细胞因子是ifn-γ。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体提高记忆t细胞增殖和/或提高该记忆细胞的细胞因子生成。在一些实施方案中，该细胞因子是ifn-γ。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体抑制效应t细胞功能的treg遏制。在一些实施方案中，该效应t细胞功能是效应t细胞增殖和/或细胞因子生成。在一些实施方案中，该效应t细胞是cd4+效应t细胞。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体提高表达ox40的靶细胞中的ox40信号转导。在一些实施方案中，通过监测nfkb下游信号传导来检测ox40信号转导。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体是消减性抗人ox40抗体(例如消减表达人ox40的细胞)。在一些实施方案中，该表达人ox40的细胞是cd4+效应t细胞。在一些实施方案中，该表达人ox40的细胞是treg细胞。在一些实施方案中，消减是通过adcc和/或吞噬作用。在一些实施方案中，该抗体通过结合由人效应细胞表达的fcγr并激活该人效应细胞功能来介导adcc。在一些实施方案中，该抗体通过结合由人效应细胞表达的fcγr并激活该人效应细胞功能来介导吞噬作用。例示性的人效应细胞包括例如巨噬细胞，天然杀伤(nk)细胞，单核细胞，嗜中性细胞。在一些实施方案中，该人效应细胞是巨噬细胞。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体具有功能性fc区。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是adcc。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是吞噬作用。在一些实施方案中，功能性fc区的效应器功能是adcc和吞噬作用。在一些实施方案中，该fc区是人igg1。在一些实施方案中，该fc区是人igg4。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体是人或人源化抗体。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)不是medi6383。在一些实施方案中，该ox40结合激动剂(例如ox40激动性抗体)不是medi0562。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是美国专利no.7,550,140中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含下述序列的重链：evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfsnytmnwvrqapgkglewvsaisgsggstyyadsvkgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycakdrysqvhyaldywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:31)，和/或包含下述序列的轻链：divmtqspdslpvtpgepasiscrssqsllhsngynyldwylqkagqspqlliylgsnrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycqqyynhpttfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:32)。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体008的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体008的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是美国专利no.7,550,140中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含下述序列：diqmtqspdslpvtpgepasiscrssqsllhsngynyldwylqkagqspqlliylgsnrasgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycqqyynhpttfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:33)。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体sc02008的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体sc02008的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是美国专利no.7,550,140中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含下述序列的重链：evqlvesggglvhpggslrlscagsgftfssyamhwvrqapgkglewvsaigtgggtyyadsvmgrftisrdnskntlylqmnslraedtavyycarydnvmglywfdywgqgtlvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:34)，和/或包含下述序列的轻链：eivltqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliydasnratgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqrsnwppafgggtkveikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:35)。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体023的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,550,140中描述的抗体023的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是美国专利no.7,960,515中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含evqlvesggglvqpggslrlscaasgftfssysmnwvrqapgkglewvsyissssstidyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslrdedtavyycaresgwylfdywgqgtlvtvss(seqidno:36)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqgisswlawyqqkpekapksliyaasslqsgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqynsypptfgggtkveik(seqidno:37)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,960,515中描述的抗体11d4的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,960,515中描述的抗体11d4的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是美国专利no.7,960,515中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含evqlvesggglvqpgrslrlscaasgftfddyamhwvrqapgkglewvsgiswnsgsigyadsvkgrftisrdnaknslylqmnslraedtalyycakdqstadyyfyygmdvwgqgttvtvss(seqidno:38)的序列的重链可变区和/或包含eivvtqspatlslspgeratlscrasqsvssylawyqqkpgqaprlliydasnratgiparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqqrsnwptfgqgtkveik(seqidno:39)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,960,515中描述的抗体18d8的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含美国专利no.7,960,515中描述的抗体18d8的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2012/027328中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgselkkpgasvkvsckasgytftdysmhwvrqapgqglkwmgwintetgeptyaddfkgrfvfsldtsvstaylqisslkaedtavyycanpyydyvsyyamdywgqgttvtvss(seqidno:40)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvstavawyqqkpgkapklliysasylytgvpsrfsgsgsgtdftftisslqpediatyycqqhystprtfgqgtkleik(seqidno:41)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2012/027328中描述的抗体hu106-222的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2012/027328中描述的抗体hu106-222的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2012/027328中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含evqlvesggglvqpggslrlscaaseyefpshdmswvrqapgkglelvaainsdggstyypdtmerrftisrdnaknslylqmnslraedtavyycarhyddyyawfaywgqgtmvtvss(seqidno:42)的序列的重链可变区和/或包含eivltqspatlslspgeratlscrasksvstsgysymhwyqqkpgqaprlliylasnlesgvparfsgsgsgtdftltisslepedfavyycqhsrelpltfgggtkveik(seqidno:43)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2012/027328中描述的抗体hu119-122的至少一种，两种，三种，四种，五种或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2012/027328中描述的抗体hu119-122的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2013/028231中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含mylglnyvfivfllngvqsevkleesggglvqpggsmklscaasgftfsdawmdwvrqspekglewvaeirskannhatyyaesvngrftisrddskssvylqmnslraedtgiyyctwgevfyfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyitcnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk(seqidno:44)的序列的重链和/或包含mrpsiqflglllfwlhgaqcdiqmtqspsslsaslggkvtitckssqdinkyiawyqhkpgkgprllihytstlqpgipsrfsgsgsgrdysfsisnlepediatyyclqydnlltfgagtklelkrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec(seqidno:45)的序列的轻链。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含mylglnyvfivfllngvqsevkleesggglvqpggsmklscaasgftfsdawmdwvrqspekglewvaeirskannhatyyaesvngrftisrddskssvylqmnslraedtgiyyctwgevfyfdywgqgttltvss(seqidno:61)的序列的重链可变区和/或包含mrpsiqflglllfwlhgaqcdiqmtqspsslsaslggkvtitckssqdinkyiawyqhkpgkgprllihytstlqpgipsrfsgsgsgrdysfsisnlepediatyyclqydnlltfgagtklelk(seqidno:62)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/028231中描述的抗体mabch119-43-1的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/028231中描述的抗体mabch119-43-1的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2013/038191中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含evqlqqsgpelvkpgasvkmsckasgytftsyvmhwvkqkpgqglewigyinpyndgtkynekfkgkatltsdkssstaymelssltsedsavyycanyygsslsmdywgqgtsvtvss(seqidno:46)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqttsslsaslgdrvtiscrasqdisnylnwyqqkpdgtvklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdysltisnleqediatyfcqqgntlpwtfgggtkleikr(seqidno:47)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/038191中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/038191中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2013/038191中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含evqlqqsgpelvkpgasvkiscktsgytfkdytmhwvkqshgkslewiggiypnnggstynqnfkdkatltvdkssstaymefrsltsedsavyycarmgyhgphldfdvwgagttvtvsp(seqidno:48)的序列的重链可变区和/或包含divmtqshkfmstslgdrvsitckasqdvgaavawyqqkpgqspklliywastrhtgvpdrftgggsgtdftltisnvqsedltdyfcqqyinypltfgggtkleikr(seqidno:49)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/038191中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2013/038191中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体，通过援引将其完整收入本文。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewmgyinpyndgtkynekfkgrvtitsdtsastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:50)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:51)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewmgyinpyndgtkynekfkgrvtitsdtsastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:50)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkavklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyfcqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:52)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewigyinpyndgtkynekfkgratitsdtsastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:53)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:51)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewigyinpyndgtkynekfkgratitsdtsastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:53)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkavklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyfcqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:52)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewigyinpyndgtkynekfkgratltsdksastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:54)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkapklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyycqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:51)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyvmhwvrqapgqrlewigyinpyndgtkynekfkgratltsdksastaymelsslrsedtavyycanyygsslsmdywgqgtlvtvss(seqidno:54)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqdisnylnwyqqkpgkavklliyytsrlhsgvpsrfsgsgsgtdytltisslqpedfatyfcqqgntlpwtfgqgtkveikr(seqidno:52)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆20e5的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewmggiypnnggstynqnfkdrvtitadkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:55)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:56)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewmggiypnnggstynqnfkdrvtitadkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:55)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpdrfsgggsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:57)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewiggiypnnggstynqnfkdrvtltadkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:58)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:56)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewiggiypnnggstynqnfkdrvtltadkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:58)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpdrfsgggsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:57)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewiggiypnnggstynqnfkdratltvdkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:59)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:56)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是wo2014/148895a1中描述的抗人ox40激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体包含包含qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfkdytmhwvrqapgqglewiggiypnnggstynqnfkdratltvdkststaymelsslrsedtavyycarmgyhgphldfdvwgqgttvtvss(seqidno:59)的序列的重链可变区和/或包含diqmtqspsslsasvgdrvtitckasqdvgaavawyqqkpgkapklliywastrhtgvpdrfsgggsgtdftltisslqpedfatyycqqyinypltfgggtkveikr(seqidno:57)的序列的轻链可变区。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含wo2014/148895a1中描述的抗体克隆12h3的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该激动性抗人ox40抗体是l106bd(pharmingen产品号340420)。在一些实施方案中，该抗体包含抗体l106(bdpharmingen产品号340420)的至少一种，两种，三种，四种，五种或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体l106(bdpharmingen产品号340420)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该激动性抗人ox40抗体是act35(santacruzbiotechnology，目录号20073)。在一些实施方案中，该抗体包含抗体act35(santacruzbiotechnology，目录号20073)的至少一种，两种，三种，四种，五种或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体act35(santacruzbiotechnology，目录号20073)的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是medi6469。在一些实施方案中，该抗体包含抗体medi6469的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体medi6469的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是medi0562。在一些实施方案中，该抗体包含抗体medi0562的至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种高变区(hvr)序列。在一些实施方案中，该抗体包含抗体medi0562的重链可变区序列和/或轻链可变区序列。在一些实施方案中，该ox40激动性抗体是与上文所列任一ox40激动性抗体结合相同表位的激动性抗体。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体具有功能性fc区。在一些实施方案中，该fc区是人igg1。在一些实施方案中，该fc区是人igg4。在一些实施方案中，该抗人ox40激动性抗体工程化改造成提高效应器功能(例如与野生型igg1中的效应器功能相比)。在一些实施方案中，该抗体具有升高的对fcγ受体的结合。在一些实施方案中，该抗体缺乏附着(直接或间接)至fc区的岩藻糖。例如，此类抗体中岩藻糖的量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。在一些实施方案中，该fc区包含两分型寡糖，例如其中附着至抗体fc区的双触角寡糖是通过glcnac来两分的。在一些实施方案中，该抗体包含具有一处或多处改善adcc的氨基酸替代的fc区，例如fc区位置298，333，和/或334(eu残基编号方式)处的替代。对本文所述方法有用的ox40激动剂绝非意图限于抗体。涵盖非抗体ox40激动剂，而且是本领域公知的。如上所述，ox40l(也称作cd134l)充当ox40的配体。因此，呈现部分或整个ox40l的激动剂可充当ox40激动剂。在一些实施方案中，ox40激动剂可包括一个或多个ox40l胞外域。ox40l胞外域的例子可包括ox40结合域。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是可溶性形式的ox40l，其包括一个或多个ox40l胞外域但缺乏该蛋白质的其它，不溶性域，例如跨膜域。在一些实施方案中，ox40激动剂是包括能够结合ox40l的一个或多个ox40l胞外域的可溶性蛋白质。在一些实施方案中，ox40激动剂可连接至另一蛋白质域，例如为了提高其有效性，半衰期，或其它期望特征。在一些实施方案中，ox40激动剂可包括连接至免疫球蛋白fc域的一个或多个ox40l胞外域。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是美国专利no.7,696,175中描述的任一ox40激动剂。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是寡聚或多聚分子。例如，ox40激动剂可含有一个或多个容许蛋白质寡聚化的域(例如亮氨酸拉链域)。在一些实施方案中，ox40激动剂可包括连接至一个或多个亮氨酸拉链域的一个或多个ox40l胞外域。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是欧洲专利no.ep0672141b1中描述的任一ox40激动剂。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是三聚ox40l融合蛋白。例如，ox40激动剂可包括连接至免疫球蛋白fc域和三聚化域(包括但不限于异亮氨酸拉链域)的一个或多个ox40l胞外域。在一些实施方案中，ox40激动剂可以是国际公开文本no.wo2006/121810中描述的任一ox40激动剂，诸如ox40免疫粘附素。在一些实施方案中，该ox40免疫粘附素可以是三聚ox40-fc蛋白。在一些实施方案中，该ox40激动剂是medi6383。iv.抗体制备使用本领域用来生成抗体的可用技术来制备本文所述抗体，下面各节中更为详细地描述了其例示性方法。抗体针对感兴趣抗原(即pd-l1(诸如人pd-l1)，ox40(诸如人ox40))。优选地，该抗原是生物学上重要的多肽，而且对罹患病症的哺乳动物施用抗体能在该哺乳动物中导致治疗好处。在某些实施方案中，本文中提供的抗体具有≤1μm，≤150nm，≤100nm，≤50nm，≤10nm，≤1nm，≤0.1nm，≤0.01nm，或≤0.001nm(例如10-8m或更少，例如10-8m至10-13m，例如10-9m至10-13m)的解离常数(kd)。在一个实施方案中，kd是通过如下述测定法所述用fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施的放射性标记抗原结合测定法(ria)测量的。通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125i)标记抗原平衡fab，然后用抗fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如chenetal.,j.mol.biol.293:865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将多孔板(thermoscientific)用50mm碳酸钠(ph9.6)中的5μg/ml捕捉用抗fab抗体(cappellabs)包被过夜，随后用pbs中的2％(w/v)牛血清清蛋白于室温(大约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(nunc#269620)中，将100pm或26pm[125i]-抗原与连续稀释的感兴趣fab混合。然后将感兴趣fab温育过夜；然而，温育可持续更长时段(例如约65个小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用pbs中的0.1％聚山梨酯20洗板8次。板干燥后，添加150μl/孔闪烁液(microscint-20tm；packard)，然后在topcounttm伽马计数仪(packard)上对板计数10分钟。选择各fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一个实施方案，kd是使用表面等离振子共振测定法使用或(biacore,inc.，piscataway，nj)于25℃使用固定化抗原cm5芯片在约10个响应单位(ru)测量的。简言之，依照供应商的用法说明书用盐酸n-乙基-n’-(3-二甲基氨基丙基)-碳二亚胺(edc)和n-羟基琥珀酰亚胺(nhs)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(cm5,biacore,inc.)。将抗原用10mm乙酸钠ph4.8稀释至5μg/ml(约0.2μm)，然后以5μl/分钟的流速注射以获得大约10个响应单位(ru)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1m乙醇胺以封闭未反应基团。为了动力学测量，于25℃以大约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨酯20(tween-20tm)表面活性剂的pbs(pbst)中两倍连续稀释的fab(0.78nm至500nm)。使用简单一对一朗格缪尔(langmuir)结合模型(evaluation软件版本3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(kd)以比率koff/kon计算。参见例如chenetal.,j.mol.biol.293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106m-1s-1，那么可使用萦光淬灭技术来测定结合速率，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(avivinstruments)或8000系列slm-amincotm分光光度计(thermospectronic)中用搅拌比色杯进行的测量，在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量pbsph7.2中20nm抗抗原抗体(fab形式)于25℃的萦光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。(i)抗原制备可溶性抗原或其片段(任选缀合有其它分子的)可作为免疫原用于生成抗体。对于跨膜分子，诸如受体，它们的片段(例如受体的胞外结构域)可用作免疫原。或者，表达跨膜分子的细胞可用作免疫原。此类细胞可衍生自天然来源(例如癌细胞系)，或者可以是经重组技术转化而表达跨膜分子的细胞。对于制备抗体有用的其它抗原及其形式对于本领域技术人员会是显而易见的。(ii)某些基于抗体的方法多克隆抗体优选通过在动物中多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射相关抗原和佐剂来生成。使用双功能或衍生化试剂，例如马来酰亚胺苯甲酰磺基琥珀酰亚胺酯(通过半胱氨酸残基缀合)，n-羟基琥珀酰亚胺(通过赖氨酸残基)，戊二醛，琥珀酸酐，socl2或r1n＝c＝nr，其中r和r1是不同的烃基，将相关抗原与在待免疫物种中有免疫原性的蛋白质缀合可能是有用的，例如匙孔虫戚血蓝蛋白，血清清蛋白，牛甲状腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制剂。通过将例如100μg或5μg蛋白质或缀合物(分别用于兔或小鼠)与3倍体积的弗氏完全佐剂混和并将该溶液皮内注射于多个部位，将动物针对抗原，免疫原性缀合物或衍生物进行免疫。一个月后，通过多个部位的皮下注射，用弗氏完全佐剂中初始量1/5-1/10的肽或缀合物对动物进行加强免疫。7-14天后，采集动物的血液，并测定血清的抗体滴度。对动物进行加强免疫，直到滴度达到平台(plateau)。优选的是，将动物用相同抗原但与不同蛋白质和/或通过不同交联剂缀合得到的缀合物进行加强免疫。缀合物还可在重组细胞培养中作为蛋白质融合物来制备。同样，适当使用凝聚剂诸如明矾来增强免疫应答。本发明的单克隆抗体可使用杂交瘤方法来生成，其首先记载于kohleretal.,nature,256:495(1975)，并进一步记载于例如hongoetal.,hybridoma,14(3):253-260(1995),harlowetal.,antibodies:alaboratorymanual,(coldspringharborlaboratorypress,2nded.1988)；hammerlingetal.,in:monoclonalantibodiesandt-cellhybridomas563-681(elsevier,n.y.,1981),和ni,xiandaimianyixue,26(4):265-268(2006)，关于人-人杂交瘤。别的方法包括那些记载于例如u.s.pat.no.7,189,826的，其关于自杂交瘤细胞系生成单克隆人天然igm抗体。人杂交瘤技术(三元杂交瘤(trioma)技术)记载于vollmersandbrandlein,histologyandhistopathology,20(3):927-937(2005)和vollmersandbrandlein,methodsandfindingsinexperimentalandclinicalpharmacology,27(3):185-91(2005)。关于各种其它杂交瘤技术，参见例如us2006/258841；us2006/183887(完全人的抗体)；us2006/059575；us2005/287149；us2005/100546；us2005/026229；和u.s.pat.nos.7,078,492和7,153,507。一种使用杂交瘤方法来生成单克隆抗体的例示性方案记载如下。在一个实施方案中，免疫小鼠或其它适宜宿主动物(诸如仓鼠)以引发生成或能够生成会特异性结合用于免疫的蛋白质的抗体的淋巴细胞。通过多次皮下(sc)或腹膜内(ip)注射本发明的多肽或其片段和佐剂诸如单磷脂酰脂质a(mpl)/海藻糖二棒分枝菌酸酯(tdm)(ribiimmunochem.research,inc.,hamilton,mont.)，在动物中生成抗体。本发明的多肽(例如抗原)或其片段可使用本领域公知方法来制备，诸如重组方法，其中一些在本文中有进一步描述。对来自经免疫动物的血清测定抗抗原抗体，并任选施用加强免疫。自生成抗抗原抗体的动物分离淋巴细胞。或者，在体外免疫淋巴细胞。然后使用合适的融合剂诸如聚乙二醇将淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合以形成杂交瘤细胞。参见例如goding,monoclonalantibodies:principlesandpractice,pp.59-103(academicpress,1986)。可使用高效融合，支持选定的抗体生成细胞稳定地高水平生成抗体，且对培养基诸如hat培养基敏感的骨髓瘤细胞。例示性的骨髓瘤细胞包括但不限于鼠骨髓瘤系，诸如那些衍生自mopc-21和mpc-11小鼠肿瘤(可得自索尔克(salk)研究所细胞分发中心,sandiego,calif.usa)的，及sp-2或x63-ag8-653细胞(可得自美国典型培养物保藏中心,rockville,md.usa)的。人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系也记载用于生成人单克隆抗体(kozbor,j.immunol.,133:3001(1984)；brodeuretal.,monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications,pp.51-63(marceldekker,inc.,newyork,1987))。将如此制备的杂交瘤细胞在合适的培养基中接种和培养，例如含有抑制未融合的亲本骨髓瘤细胞生长或存活的一种或多种物质的培养基。例如，若亲本骨髓瘤细胞缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hgprt或hprt)，则用于杂交瘤的培养基典型的会含有次黄嘌呤，氨基喋呤和胸苷(hat培养基)，这些物质阻止hgprt缺陷细胞生长。优选地，使用无血清杂交瘤细胞培养方法来降低动物衍生血清的使用，诸如胎牛血清，如记载于例如evenetal.,trendsinbiotechnology,24(3),105-108(2006)。作为提高杂交瘤细胞培养物生产力的工具的寡肽记载于franek,trendsinmonoclonalantibodyresearch,111-122(2005)。具体地，标准培养基富含某些氨基酸(丙氨酸，丝氨酸，天冬酰胺，脯氨酸)或蛋白质水解产物级分，而且可通过由3-6个氨基酸残基构成的合成寡肽来显著遏制凋亡。所述肽以毫摩尔或更高浓度存在。可对杂交瘤细胞正在其中生长的培养液测定结合本发明抗原的单克隆抗体的生成。可通过免疫沉淀或通过体外结合测定法，诸如放射免疫测定法(ria)或酶联免疫吸附测定法(elisa)，测定由杂交瘤细胞生成的单克隆抗体的结合特异性。单克隆抗体的结合亲和力可通过例如scatchard分析来测定。参见例如munsonetal.,anal.biochem.107:220(1980)。在鉴定得到生成具有期望特异性，亲和力和/或活性的抗体的杂交瘤细胞后，该克隆可通过有限稀释规程进行亚克隆并通过标准方法进行培养(参见例如goding,见上文)。适于这一目的的培养基包括例如d-mem或rpmi-1640培养基。另外，杂交瘤细胞可以在动物中作为腹水瘤进行体内培养。可通过常规免疫球蛋白纯化规程，诸如例如蛋白a-sepharose，羟磷灰石层析，凝胶电泳，透析或亲和层析，将亚克隆分泌的单克隆抗体与培养液，腹水或血清适当分开。一种用于自杂交瘤细胞分离蛋白质的规程记载于us2005/176122和u.s.pat.no.6,919,436。该方法包括在结合过程中最低限度地使用盐，诸如易溶盐，而且优选还在洗脱过程中使用少量的有机溶剂。(iii)文库衍生的抗体可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库及对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的，诸如实施例3中描述的方法。别的方法综述于例如hoogenboometal.,inmethodsinmolecularbiology178:1-37(o’brienetal.,ed.,humanpress,totowa,nj,2001)，并且进一步记载于例如mccaffertyetal.,nature348:552-554；clacksonetal.,nature352:624-628(1991)；marksetal.,j.mol.biol.222:581-597(1992)；marksandbradbury,inmethodsinmolecularbiology248:161-175(lo,ed.,humanpress,totowa,nj,2003)；sidhuetal.,j.mol.biol.338(2):299-310(2004)；leeetal.,j.mol.biol.340(5):1073-1093(2004)；fellouse,proc.natl.acad.sci.usa101(34):12467-12472(2004)；及leeetal.,j.immunol.methods284(1-2):119-132(2004)。在某些噬菌体展示方法中，将vh和vl基因的全集分别通过聚合酶链式反应(pcr)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于winteretal.,ann.rev.immunol.12:433-455(1994)。噬菌体通常以单链fv(scfv)片段或以fab片段展示抗体片段。来自经免疫来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆未免疫全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由griffithsetal.,emboj,12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的v基因区段，并使用含有随机序列的pcr引物编码高度可变的cdr3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由hoogenboomandwinter,j.mol.biol.227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利no.5,750,373及美国专利公开文本no.2005/0079574，2005/0119455，2005/0266000，2007/0117126，2007/0160598，2007/0237764，2007/0292936和2009/0002360。认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。(iv)嵌合抗体，人源化抗体和人抗体在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利no.4,816,567；及morrisonetal.,proc.natl.acad.sci.usa81:6851-6855(1984)。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如自小鼠，大鼠，仓鼠，家兔，或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中hvr，例如cdr(或其部分)自非人抗体衍生，而fr(或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些fr残基用来自非人抗体(例如衍生hvr残基的抗体)的相应残基替代，例如为了恢复或改善抗体特异性或亲和力。人源化抗体及其生成方法综述于例如almagroandfransson,front.biosci.13:1619-1633(2008)，并且进一步记载于例如riechmannetal.,nature332:323-329(1988)；queenetal.,proc.nat’lacad.sci.usa86:10029-10033(1989)；美国专利no.5,821,337，no.7,527,791，no.6,982,321，和no.7,087,409；kashmirietal.,methods36:25-34(2005)(记载sdr(a-cdr)嫁接)；padlan,mol.immunol.28:489-498(1991)(记载“重修表面”)；dall’acquaetal.,methods36:43-60(2005)(记载“fr改组”)；及osbournetal.,methods36:61-68(2005)及klimkaetal.,br.j.cancer83:252-260(2000)(记载fr改组的“引导选择”办法)。可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(参见例如simsetal.,j.immunol.151:2296(1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(参见例如carteretal.,proc.natl.acad.sci.usa89:4285(1992)；及prestaetal.,j.immunol.151:2623(1993))；人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(参见例如almagroandfransson,front.biosci.13:1619-1633(2008))；和通过筛选fr文库衍生的框架区(参见例如bacaetal.,j.biol.chem.272:10678-10684(1997)及rosoketal.,j.biol.chem.271:22611-22618(1996))。在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于vandijkandvandewinkel,curr.opin.pharmacol.5:368-74(2001)及lonberg,curr.opin.immunol.20:450-459(2008)。可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有整个或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述参见lonberg,nat.biotech.23:1117-1125(2005)。还可参见例如美国专利no.6,075,181和no.6,150,584，其描述了xenomousetm技术；美国专利no.5,770,429，其描述了技术；美国专利no.7,041,870，其描述了技术，和美国专利申请公开文本no.us2007/0061900，其描述了技术。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异源骨髓瘤细胞系(参见例如kozbor,j.immunol.133:3001(1984)；brodeuretal.,monoclonalantibodyproductiontechniquesandapplications,pp.51-63(marceldekker,inc.,newyork,1987)；及boerneretal.,j.immunol.147:86(1991))。经由人b细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于lietal.,proc.natl.acad.sci.usa103:3557-3562(2006)。其它方法包括那些记载于例如美国专利no.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人igm抗体)及ni,xiandaimianyixue26(4):265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(trioma技术)也记载于vollmersandbrandlein,histologyandhistopathology20(3):927-937(2005)及vollmersandbrandlein,methodsandfindingsinexperimentalandclinicalpharmacology27(3):185-91(2005)。也可以如下生成人抗体，即分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的fv克隆可变域序列。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。(v)抗体片段抗体片段可以通过传统手段来生成，诸如酶促消化，或者通过重组技术来生成。在某些情况中，使用抗体片段，而不是完整抗体有优势。片段的较小尺寸容许快速清除，而且可导致更易于到达实体瘤。某些抗体片段的综述参见hudsonetal.(2003)nat.med.9:129-134。已经开发了用于生成抗体片段的多种技术。传统上，通过蛋白水解消化完整抗体来衍生这些片段(参见例如morimotoetal.,journalofbiochemicalandbiophysicalmethods24:107-117(1992)；及brennanetal.,science229:81(1985))。然而，现在可直接由重组宿主细胞生成这些片段。fab，fv和scfv抗体片段都可在大肠杆菌中表达和由大肠杆菌分泌，如此容许容易地生成大量的这些片段。可从上文讨论的噬菌体抗体库中分离抗体片段。或者，可直接从大肠杆菌回收fab′-sh片段并化学偶联以形成f(ab′)2片段(carteretal.,bio/technology10:163-167(1992))。依照另一种方法，可直接从重组宿主细胞培养物分离f(ab′)2片段。包含补救受体结合表位残基，具有延长的体内半衰期的fab和f(ab′)2片段记载于美国专利no.5,869,046。用于生成抗体片段的其它技术对于熟练从业人员会是显而易见的。在某些实施方案中，抗体是单链fv片段(scfv)。参见wo93/16185；美国专利no.5,571,894；及5,587,458。fv和scfv是具有完整结合位点，缺少恒定区的唯一类型；如此，它们可能适于在体内使用时降低非特异性结合。可构建scfv融合蛋白以生成效应器蛋白质在scfv的氨基或羧基末端的融合。参见antibodyengineering,borrebaeck编,见上文。抗体片段还可以是“线性抗体”，例如如美国专利no.5,641,870中所记载的。此类线性抗体可以是单特异性的或双特异性的。(vi)多特异性抗体多特异性抗体具有对至少两种不同表位的结合特异性，其中所述表位通常来自不同抗原。尽管此类分子通常只结合两种不同表位(即双特异性抗体，bsab)，但是此表述在用于本文时涵盖具有额外特异性的抗体，诸如三特异性抗体。可将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段(例如f(ab′)2双特异性抗体)。在一个方面，提供结合ox40和pd-1的双特异性抗体。在一个方面，提供结合ox40和pdl1的双特异性抗体。用于构建双特异性抗体的方法是本领域已知的。全长双特异性抗体的传统生产基于两对免疫球蛋白重链-轻链的共表达，其中两种链具有不同的特异性(millsteinetal.,nature,305:537-539(1983))。由于免疫球蛋白重链和轻链的随机分配，这些杂交瘤(四源杂交瘤(quadroma))生成10种不同抗体分子的潜在混合物，其中只有一种具有正确的双特异性结构。通常通过亲和层析步骤进行的正确分子的纯化相当麻烦且产物产量低。类似的规程披露于wo93/08829及trauneckeretal.,emboj.,10:3655-3659(1991)。本领域已知的用于生成双特异性抗体的一种办法是“节-入-穴”或“隆起-入-空腔”办法(参见例如美国专利no.5,731,168)。在这种办法中，两条免疫球蛋白多肽(例如重链多肽)各自包含一个界面。一条免疫球蛋白多肽的界面与另一免疫球蛋白多肽上的对应界面相互作用，由此容许两条免疫球蛋白多肽联合。可以改造这些界面，使得位于一条免疫球蛋白多肽的界面中的“节”或“隆起”(这些术语在本文中可互换使用)对应于位于另一免疫球蛋白多肽的界面中的“穴”或“空腔”(这些术语在本文中可互换使用)。在一些实施方案中，穴具有与节相同或相似的尺寸，而且位置恰当，使得当两个界面相互作用时，一个界面的节可位于另一界面的对应穴中。不希望受理论束缚，认为这稳定异二聚体且有利于异多聚体形成胜过其它种类，例如同多聚体。在一些实施方案中，这种办法可用于促进两种不同免疫球蛋白多肽的异多聚化，创建包含具有针对不同表位的结合特异性的两条免疫球蛋白多肽的双特异性抗体。在一些实施方案中，节可以通过将小氨基酸侧链用更大侧链替换来构建。在一些实施方案中，穴可以通过将大氨基酸侧链用更小侧链替换来构建。节或穴可以存在于原始界面中，或者可以合成引入。例如，可以通过改变编码界面的核酸序列，将至少一个“原始”氨基酸残基用至少一个“输入”氨基酸残基替换来合成引入节或穴。用于改变核酸序列的方法可包括本领域公知的标准分子生物学技术。下文表中显示了各种氨基酸残基的侧链体积。在一些实施方案中，原始残基具有较小侧链体积(例如丙氨酸，天冬酰胺，天冬氨酸，甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或缬氨酸)，而用于形成节的输入残基是天然发生氨基酸，而且可以包括精氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸。在一些实施方案中，原始残基具有较大侧链体积(例如精氨酸，苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸)，而用于形成穴的输入残基是天然发生氨基酸，而且可以包括丙氨酸，丝氨酸，苏氨酸，和缬氨酸。表1：氨基酸残基的特性a氨基酸的分子量减去水的分子量。数值来自handbookofchemistryandphysics,43rded.,cleveland,chemicalrubberpublishingco.,1961。b数值来自a.a.zamyatnin,prog.biophys.mol.biol.24:107-123,1972。c数值来自c.chothia,j.mol.biol.105:1-14,1975。可及表面积在此参考文献的图6-20定义。在一些实施方案中，基于异多聚体的三维结构鉴定用于形成节或穴的原始残基。本领域已知的用于获得三维结构的技术可以包括x射线结晶学和nmr。在一些实施方案中，界面是免疫球蛋白恒定域的ch3域。在这些实施方案中，人igg1的ch3/ch3界面涉及每个域上位于四条反平行β链上的16个残基。不希望受理论束缚，突变的残基优选位于两条中央反平行β链上以最小化节会被周围溶剂，而非配偶ch3域中的补充穴容纳的风险。在一些实施方案中，两条免疫球蛋白多肽中形成对应节和穴的突变对应于下文表中提供的一对或多对。表2：对应节和穴形成突变的例示性套组第一免疫球蛋白的ch3第二免疫球蛋白的ch3t366yy407tt366wy407af405at394wy407tt366yt366y:f405at394w:y407tt366w:f405wt394s:y407af405w:y407at366w:t394sf405wt394s通过原始残基，接着是使用kabat编号系统的位置，然后是输入残基来表示突变(所有残基以单字母氨基酸代码给出)。多重突变以冒号分开。在一些实施方案中，免疫球蛋白多肽包含包含一处或多处上文表2中列出的氨基酸替代的ch3域。在一些实施方案中，双特异性抗体包含第一免疫球蛋白多肽，其包含包含一处或多处表2左栏中列出的氨基酸替代的ch3域，和第二免疫球蛋白多肽，其包含包含一处或多处表2右栏中列出的对应氨基酸替代的ch3域。如上所述突变dna后，可以使用标准重组技术和本领域已知的细胞系统，表达编码具有一处或多处对应节或穴形成突变的经修饰免疫球蛋白多肽的多核苷酸，并纯化。参见例如美国专利no.5,731,168；5,807,706；5,821,333；7,642,228；7,695,936；8,216,805；美国公开文本no.2013/0089553；和spiessetal.,naturebiotechnology31:753-758,2013。可以使用原核宿主细胞，诸如大肠杆菌，或真核宿主细胞，诸如cho细胞生成经修饰免疫球蛋白多肽。可以作为异多聚体一起在共培养物中在宿主细胞中表达携带对应节和穴的免疫球蛋白多肽，并纯化，或者可以在多个单培养物中表达，分开纯化，并在体外组装。在一些实施方案中，使用本领域已知的标准细菌培养技术共培养两株细菌宿主细胞(一株表达具有节的免疫球蛋白多肽，另一株表达具有穴的免疫球蛋白多肽)。在一些实施方案中，可以以特定比例混合两种株，例如为了在培养物中实现相等的表达水平。在一些实施方案中，可以以50:50，60:40，或70:30比例混合两种株。在多肽表达后，可以一起裂解细胞，并可以提取蛋白质。本领域已知的容许测量同多聚体对异多聚体种类丰度的标准技术可以包括大小排阻层析。在一些实施方案中，使用标准重组技术分开表达每一种经修饰免疫球蛋白多肽，并可以在体外将它们组装到一起。可以例如通过纯化每一种经修饰免疫球蛋白多肽，以相等的质量将它们一起混合并温育，还原二硫化物(例如通过用二硫苏糖醇处理)，浓缩，并重氧化多肽来实现组装。可以使用标准技术(包括阳离子交换层析)来纯化形成的双特异性抗体，并使用标准技术(包括大小排阻层析)来测量。对于这些方法更加详细的描述，参见speissetal.,natbiotechnol31:753-8,2013。在一些实施方案中，可以在cho细胞中分开表达经修饰免疫球蛋白多肽，并使用上文所述方法在体外组装。依照一种不同的方法，将具有期望结合特异性(抗体-抗原结合位点)的抗体可变域与免疫球蛋白恒定域序列融合。优选的是，与包含至少部分铰链，ch2和ch3区的免疫球蛋白重链恒定域进行融合。通常在至少一种融合物中存在包含轻链结合所必需的位点的第一重链恒定区(ch1)。将编码免疫球蛋白重链融合物和，在需要时，免疫球蛋白轻链的dna插入分开的表达载体中，并共转染到合适的宿主生物体中。在用于构建的三种多肽链比例不等时提供最佳产量的实施方案中，这为调整三种多肽片段的相互比例提供了很大的灵活性。然而，在至少两种多肽链以相同比例表达导致高产量时或在该比例没有特别意义时，有可能将两种或所有三种多肽链的编码序列插入一个表达载体。在该方法的一个实施方案中，双特异性抗体由一个臂上具有第一结合特异性的杂合免疫球蛋白重链，和另一个臂上的杂合免疫球蛋白重链-轻链对(提供第二结合特异性)构成。由于免疫球蛋白轻链仅在半个双特异性分子中的存在提供了便利的分离途径，因此发现这种不对称结构便于将期望的双特异性化合物与不想要的免疫球蛋白链组合分开。该方法披露于wo94/04690。关于生成双特异性抗体的进一步详情参见例如sureshetal.,methodsinenzymology,121:210(1986)。依照wo96/27011中记载的另一种方法，可改造一对抗体分子间的界面，以将从重组细胞培养物回收的异二聚体的百分比最大化。一种界面包含抗体恒定域的至少部分ch3结构域。在该方法中，将第一抗体分子界面的一个或多个小氨基酸侧链用较大侧链(例如酪氨酸或色氨酸)替换。通过将大氨基酸侧链用较小氨基酸侧链(例如丙氨酸或苏氨酸)替换，在第二抗体分子的界面上产生与大侧链相同或相似大小的补偿性“空腔”。这提供了较之其它不想要的终产物诸如同二聚体提高异二聚体产量的机制。双特异性抗体包括交联的或“异源缀合的”抗体。例如，可以将异源缀合物中的一种抗体与亲合素偶联，而将另一种抗体与生物素偶联。此类抗体已经建议用于例如将免疫系统细胞靶向不想要的细胞(美国专利no.4,676,980)和用于治疗hiv感染(wo91/00360,wo92/200373,和ep03089)。异源缀合抗体可以使用任何方便的交联方法来制备。合适的交联剂连同许多交联技术是本领域众所周知的，而且披露于美国专利no.4,676,980。文献中还记载了由抗体片段生成双特异性抗体的技术。例如，可使用化学连接来制备双特异性抗体。brennanetal.,science,229:81(1985)记载了通过蛋白水解切割完整抗体以生成f(ab′)2片段的规程。将这些片段在存在二硫醇络合剂亚砷酸钠的情况下还原，以稳定邻近的二硫醇并防止分子间二硫键的形成。然后将产生的fab′片段转变为硫代硝基苯甲酸酯(tnb)衍生物。然后将fab′-tnb衍生物之一通过巯基乙胺的还原重新恢复成fab′-硫醇，并与等摩尔量的另一种fab′-tnb衍生物混合，以形成双特异性抗体。产生的双特异性抗体可用作酶的选择性固定化试剂。最新的进展便于从大肠杆菌直接回收fab′-sh片段，这些片段可化学偶联以形成双特异性抗体。shalabyetal.,j.exp.med.,175:217-225(1992)记载了完全人源化的双特异性抗体f(ab′)2分子的生成。由大肠杆菌分开分泌每种fab′片段，并在体外进行定向化学偶联以形成双特异性抗体。还记载了从重组细胞培养物直接生成和分离双特异性抗体片段的多种技术。例如，已使用亮氨酸拉链生成双特异性抗体。kostelnyetal.,j.immunol.,148(5):1547-1553(1992)。将来自fos和jun蛋白的亮氨酸拉链肽通过基因融合与两种不同抗体的fab′部分连接。抗体同二聚体在铰链区还原以形成单体，然后重新氧化以形成抗体异二聚体。这种方法也可用于生成抗体同二聚体。hollingeretal.,proc.natl.acad.sci.usa,90:6444-6448(1993)记载的“双抗体”技术提供了构建双特异性抗体片段的替代机制。该片段包含通过接头相连的重链可变域(vh)和轻链可变域(vl)，所述接头太短使得同一条链上的两个结构域之间不能配对。因此，迫使一个片段上的vh和vl结构域与另一个片段上的互补vl和vh结构域配对，由此形成两个抗原结合位点。还报道了通过使用单链fv(sfv)二聚体构建双特异性抗体片段的另一种策略。参见gruberetal.,j.immunol.,152:5368(1994)。设想了具有超过两个效价的抗体。例如，可制备三特异性抗体。tuftetal.,j.immunol.,147:60(1991)。(vii)单域抗体在有些实施方案中，本发明的抗体是单域抗体(single-domainantibody)。单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或者整个或部分轻链可变域的单一多肽链。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(domantis,inc.,waltham,mass.；参见例如美国专利no.6,248,516b1)。在一个实施方案中，单域抗体由抗体的整个或部分重链可变域组成。(viii)抗体变体在有些实施方案中，涵盖本文所述抗体的氨基酸序列修饰。例如，可能希望改进抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以是通过将适宜的变化引入编码抗体的核苷酸序列或通过肽合成制备的。此类修饰包括例如抗体氨基酸序列内的残基删除和/或插入和/或替代。可进行任何删除，插入和替代组合以获得最终的构建物，倘若最终的构建物具有期望的特征。可在制备序列时将氨基酸改变引入受试抗体的氨基酸序列。(ix)替代，插入，和删除变体在某些实施方案中，提供具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括hvr和fr。保守替代在表1中在“保守的替代”的标题下显示。更实质的变化在表1中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的adcc或cdc。表3：例示性替代依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：a.疏水性的：正亮氨酸，met，ala，val，leu，ile；b.中性，亲水性的：cys，ser，thr，asn，gln；c.酸性的：asp，glu；d.碱性的：his，lys，arg；e.影响链取向的残基：gly，pro；f.芳香族的：trp，tyr，phe。非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。一类替代变体牵涉替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。一种例示性替代变体是亲和力成熟抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个hvr残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。可以在hvr中做出变化(例如替代)，例如为了改善抗体亲和力。可以在hvr“热点”即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(参见例如chowdhury,methodsmol.biol.207:179-196(2008))和/或sdr(a-cdr)中做出此类变化，对所得变体vh或vl测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记载于例如hoogenboometal.,inmethodsinmolecularbiology178:1-37(o’brienetal.,ed.,humanpress,totowa,nj,(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如易错pcr，链改组，或寡核苷酸指导的诱变)任一将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉hvr指导的办法，其中将数个hvr残基(例如一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的hvr残基。特别地，经常靶向cdr-h3和cdr-l3。在某些实施方案中，可以在一个或多个hvr内发生替代，插入，或删除，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以在hvr中做出保守变化(例如保守替代，如本文中提供的)，其没有实质性降低结合亲和力。此类变化可以在hvr“热点”或sdr以外。在上文提供的变体vh和vl序列的某些实施方案中，每个hvr或是未改变的，或是含有不多于1，2或3处氨基酸替代。一种可用于鉴定抗体中可作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如记载于cunninghamandwells,science,244:1081-1085(1989)。在这种方法中，鉴定一个残基或一组靶残基(例如带电荷的残基，诸如arg，asp，his，lys，和glu)，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原之间的接触点。作为替代的候选，可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望特性。氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基末端融合，以及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有n端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的n或c端与酶(例如对于adept)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。(x)糖基化变体在某些实施方案中，改变本文中提供的抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或多个糖基化位点来方便地实现对抗体添加或删除糖基化位点。在抗体包含fc区的情况中，可以改变附着于fc区的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角寡糖，其一般通过n连接附着于fc区的ch2域的asn297。参见例如wrightetal.,tibtech15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如甘露糖，n-乙酰葡糖胺(glcnac)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的glcnac的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改良特性的抗体变体。在一个实施方案中，提供包含如下fc区的抗体变体，其中附着于fc区的碳水化合物结构具有减少的岩藻糖或缺乏岩藻糖，这可改善adcc功能。具体而言，本文中涵盖如下的抗体，其具有相对于在野生型cho细胞中生成的相同抗体上岩藻糖的量减少的岩藻糖。就是说，它们特征在于具有比如果由天然cho细胞(例如生成天然糖基化样式的cho细胞，诸如含有天然fut8基因的cho细胞)生成的话它们会具有的量降低的量的岩藻糖。在某些实施方案中，该抗体是如下的抗体，其上少于约50％，40％，30％，20％，10％，或5％的n连接的聚糖包含岩藻糖。例如，此类抗体中的岩藻糖的量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。在某些实施方案中，该抗体是如下的抗体，其上无一n连接的聚糖包含岩藻糖，即其中该抗体完全没有岩藻糖，或者没有岩藻糖或是无岩藻糖基化的。通过相对于附着于asn297的所有糖结构(例如复合的，杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过maldi-tof质谱术测量的，例如如记载于wo2008/077546的。asn297指位于fc区中的约第297位(fc区残基的eu编号方式)的天冬酰胺残基；然而，asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变体可具有改善的adcc功能。参见例如美国专利公开文本no.us2003/0157108(presta,l.)；us2004/0093621(kyowahakkokogyoco.,ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括：us2003/0157108；wo2000/61739；wo2001/29246；us2003/0115614；us2002/0164328；us2004/0093621；us2004/0132140；us2004/0110704；us2004/0110282；us2004/0109865；wo2003/085119；wo2003/084570；wo2005/035586；wo2005/035778；wo2005/053742；wo2002/031140；okazakietal.,j.mol.biol.336:1239-1249(2004)；yamane-ohnukietal.,biotech.bioeng.87:614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的lec13cho细胞(ripkaetal.,arch.biochem.biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请nous2003/0157108a1,presta,l；及wo2004/056312a1,adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因fut8敲除cho细胞(参见例如yamane-ohnukietal.,biotech.bioeng.87:614(2004)；kanda,y.etal.,biotechnol.bioeng.94(4):680-688(2006)；及wo2003/085107)。进一步提供具有两分型寡糖的抗体变体，例如其中附着于抗体fc区的双触角寡糖是通过glcnac来两分的。此类抗体变体可具有降低的岩藻糖基化和/或改善的adcc功能。此类抗体变体的例子记载于例如wo2003/011878(jean-mairet等)；美国专利no.6,602,684(umana等)；us2005/0123546(umana等)；及ferraraetal.,biotechnologyandbioengineering,93(5):851-861(2006)。还提供在附着于fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可具有改善的cdc功能。此类抗体变体记载于例如wo1997/30087(patel等)；wo1998/58964(raju,s.)；及wo1999/22764(raju,s.)。在某些实施方案中，包含本文所述fc区的抗体变体能够结合fcγriii。在某些实施方案中，包含本文所述fc区的抗体变体在人效应细胞存在下具有adcc活性或在人效应细胞存在下具有与包含人野生型igg1fc区的其它方面相同的抗体相比升高的adcc活性。(xi)fc区变体在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本文中提供的抗体的fc区中，由此生成fc区变体。fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如替代)的人fc区序列(例如人igg1，igg2，igg3或igg4fc区)。在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应器功能的抗体变体，所述效应器功能使其成为如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应器功能(诸如补体和adcc)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认cdc和/或adcc活性的降低/消减。例如，可以进行fc受体(fcr)结合测定法以确保抗体缺乏fcγr结合(因此有可能缺乏adcc活性)，但是保留fcrn结合能力。介导adcc的主要细胞nk细胞仅表达fcγriii，而单核细胞表达fcγri，fcγrii和fcγriii。在ravetchandkinet,annu.rev.immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的fcr表达。评估感兴趣分子的adcc活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利no.5,500,362(参见例如hellstrom,i.etal.,proc.nat’lacad.sci.usa83:7059-7063(1986))及hellstrom,i.etal.,proc.nat’lacad.sci.usa82:1499-1502(1985)；5,821,337(参见bruggemann,m.etal.,j.exp.med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(参见例如用于流式细胞术的actitm非放射性细胞毒性测定法(celltechnology,inc.，mountainview，ca；和非放射性细胞毒性测定法(promega，madison，wi))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(pbmc)和天然杀伤(nk)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的adcc活性，例如在动物模型中，诸如披露于clynesetal.,proc.nat’lacad.sci.usa95:652-656(1998)的。也可以实施c1q结合测定法以确认抗体不能结合c1q，并且因此缺乏cdc活性。参见例如wo2006/029879和wo2005/100402中的c1q和c3c结合elisa。为了评估补体激活，可以实施cdc测定法(参见例如gazzano-santoroetal.,j.immunol.methods202:163(1996)；cragg,m.s.etal.,blood101:1045-1052(2003)；及cragg,m.s.andm.j.glennie,blood103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来实施fcrn结合和体内清除/半衰期测定(参见例如petkova,s.b.etal.,int’l.immunol.18(12):1759-1769(2006))。具有降低的效应器功能的抗体包括那些具有fc区残基238，265，269，270，297，327和329中的一个或多个的替代的(美国专利no.6,737,056)。此类fc突变体包括在氨基酸位置265，269，270，297和327中的两处或更多处具有替代的fc突变体，包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“dana”fc突变体(美国专利no.7,332,581)。描述了具有改善的或降低的对fcr的结合的某些抗体变体(参见例如美国专利no.6,737,056；wo2004/056312；及shieldsetal.,j.biol.chem.9(2):6591-6604(2001))。在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善adcc的一处或多处氨基酸替代(例如fc区位置298，333，和/或334(eu残基编号方式)的替代)的fc区。在一个例示性实施方案中，抗体在它的fc区中包含下述氨基酸替代：s298a，e333a，和k334a。在一些实施方案中，在fc区中做出改变，其导致改变的(即改善的或降低的)c1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)，例如，如记载于美国专利no.6,194,551；wo99/51642；及idusogieetal.,j.immunol.164:4178-4184(2000)的。具有延长的半衰期和改善的对新生儿fc受体(fcrn)的结合的抗体记载于us2005/0014934a1(hinton等)，新生儿fc受体(fcrn)负责将母体igg转移至胎儿(guyeretal.,j.immunol.117:587(1976)及kimetal.,j.immunol.24:249(1994))。那些抗体包含具有改善fc区对fcrn的结合的一处或多处替代的fc区。此类fc变体包括那些在fc区残基238，256，265，272，286，303，305，307，311，312，317，340，356，360，362，376，378，380，382，413，424或434中的一处或多处具有替代(例如fc区残基434的替代)的(美国专利no.7,371,826)。还可参见duncanandwinter,nature322:738-40(1988)；美国专利no.5,648,260；美国专利no.5,624,821；及wo94/29351，其关注fc区变体的其它例子。(xii)抗体衍生物可进一步修饰本发明的抗体以包含本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。在某些实施方案中，适于抗体衍生化的模块是水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(peg)，乙二醇/丙二醇共聚物，羧甲基纤维素，右旋糖苷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1,3-二氧戊环，聚-1,3,6-三口恶烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇，及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着于抗体的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于待改进抗体的具体特性或功能，抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。(xiii)载体，宿主细胞，和重组方法也可以使用重组方法来生成抗体。为了重组生产抗抗原抗体，分离编码抗体的核酸，并将其插入可复制载体，用于进一步克隆(dna扩增)或表达。可使用常规规程容易的分离编码抗体的dna并测序(例如通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异结合的寡核苷酸探针)。可利用许多载体。载体构件通常包括但不限于下列一种或多种：信号序列，复制起点，一种或多种标志基因，增强子元件，启动子，和转录终止序列。(a)信号序列构件本发明的抗体不仅可以直接重组生产，而且可以作为与异源多肽的融合多肽重组生产，所述异源多肽优选是成熟蛋白质或多肽的n-末端处的信号序列或具有特异性切割位点的其它多肽。所选择的异源信号序列优选是受到宿主细胞识别并加工(例如受到信号肽酶切割)的。对于不识别和加工天然抗体信号序列的原核宿主细胞，所述信号序列用例如选自碱性磷酸酶，青霉素酶，lpp或热稳定肠毒素ii前导序列的原核信号序列取代。为了酵母分泌，天然信号序列可以用例如酵母转化酶前导序列，α因子前导序列(包括糖酵母属和克鲁维氏酵母属α因子前导序列)，酸性磷酸酶前导序列，白色假丝酵母葡萄糖淀粉酶前导序列，或wo90/13646中记载的信号取代。在哺乳动物细胞表达中，可以利用哺乳动物信号序列以及病毒分泌前导序列，例如单纯疱疹gd信号。(b)复制起点表达和克隆载体都包含能够使载体在一种或多种所选择的宿主细胞中复制的核酸序列。通常，在克隆载体中，这种序列是能够使载体不依赖于宿主染色体dna而复制的序列，包括复制起点或自主复制序列。众所周知多种细菌，酵母和病毒的此类序列。来自质粒pbr322的复制起点适合于大多数革兰氏阴性细菌，2μ质粒起点适合于酵母，而各种病毒起点(sv40，多瘤病毒，腺病毒，vsv或bpv)可用于哺乳动物细胞中的克隆载体。一般而言，哺乳动物表达载体不需要复制起点构件(sv40起点的使用通常可能只是因为它包含早期启动子)。(c)选择基因构件表达和克隆载体可包含选择基因，也称为选择标志。典型的选择基因编码如下蛋白质：(a)赋予抗生素或其它毒素抗性，例如氨苄青霉素，新霉素，甲氨蝶呤，或四环素；(b)补足营养缺陷；或(c)提供不能由复合培养基获得的关键营养物，例如编码芽孢杆菌d-丙氨酸消旋酶的基因。选择方案的一个实例利用药物来阻滞宿主细胞的生长。用异源基因成功转化的那些细胞生成赋予药物抗性的蛋白质，因而幸免于选择方案。此类显性选择的实例使用药物新霉素，霉酚酸和潮霉素。适于哺乳动物细胞的选择标志的另一个例子是能够鉴定有能力摄取抗体编码核酸的细胞的选择标志，诸如dhfr，谷氨酰胺合酶(gs)，胸苷激酶，金属硫蛋白-i和-ii优选灵长类金属硫蛋白基因，腺苷脱氨酶，鸟氨酸脱羧酶等。例如，通过将转化子在含有甲氨蝶呤(mtx)(dhfr的一种竞争性拮抗剂)的培养基中进行培养来鉴定经dhfr基因转化的细胞。在这些条件下，dhfr基因与任何其它共转化的核酸一起扩增。可使用内源dhfr活性缺陷的中国仓鼠卵巢(cho)细胞系(例如atcccrl-9096)。或者，通过将转化子在含有l-甲硫氨酸亚砜亚胺(msx)(l-methioninesulfoximine)(gs的一种抑制剂)的培养基中进行培养来鉴定经gs基因转化的细胞。在这些条件下，gs基因与任何其它共转化的核酸一起扩增。可以与上文描述的dhfr选择/扩增系统组合地使用gs选择/扩增系统。或者，可以通过在含有针对选择标志的选择剂诸如氨基糖苷抗生素例如卡那霉素，新霉素，或g418的培养基中的细胞生长来选择经编码感兴趣抗体，野生型dhfr基因，和另一种选择标志诸如氨基糖苷3′-磷酸转移酶(aph)的dna序列转化或共转化的宿主细胞(特别是包含内源dhfr的野生型宿主)。参阅美国专利4,965,199。适用于酵母的选择基因为存在于酵母质粒yrp7中的trp1基因(stinchcombetal.,nature282:39(1979))。trp1基因为缺乏在色氨酸中生长能力的酵母突变株，例如atccno.44076或pep4-1提供了选择标志。jones,genetics85:12(1977).酵母宿主细胞基因组中存在trp1损害随之提供了用于通过在不存在色氨酸下生长来检测转化的有效环境。类似的，用携带leu2基因的已知质粒补足leu2缺陷型酵母菌株(atcc20,622或38,626)。此外，衍生自1.6μm环状质粒pkd1的载体可用于转化克鲁维氏酵母属酵母。或者，报导了用于在乳酸克鲁维氏酵母中大规模生产重组小牛凝乳酶的表达系统。vandenberg,bio/technology8:135(1990)。还披露了适用于通过克鲁维氏酵母属的工业菌株分泌成熟重组人血清清蛋白的稳定多拷贝表达载体。fleeretal.,bio/technology9:968-975(1991)。(d)启动子构件表达和克隆载体一般包含受到宿主生物体识别的启动子，而且它与编码抗体的核酸可操作连接。适用于原核宿主的启动子包括phoa启动子，β-内酰胺酶和乳糖启动子系统，碱性磷酸酶启动子，色氨酸(trp)启动子系统，和杂合启动子诸如tac启动子。然而，其它已知的细菌启动子也是合适的。用于细菌系统的启动子还将包含与编码抗体的dna可操作连接的shine-dalgarno(s.d.)序列。已知真核细胞的启动子序列。事实上，所有真核基因都具有富含at区，它位于起始转录的位点上游大约25至30个碱基处。在许多基因的转录起点上游70至80个碱基处找到的另一种序列是cncaat区，其中n可以是任何核苷酸。在大多数真核基因的3′端是aataaa序列，它可能是向编码序列的3′端添加聚腺苷酸尾的信号。所有这些序列合适地插入真核表达载体。适用于酵母宿主的启动子序列的例子包括3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的启动子，诸如烯醇酶，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，己糖激酶，丙酮酸脱羧酶，磷酸果糖激酶，葡萄糖-6-磷酸异构酶，3-磷酸甘油酸变位酶，丙酮酸激酶，磷酸丙糖异构酶，磷酸葡萄糖异构酶和葡糖激酶。作为具有通过生长条件控制转录的额外优点的诱导型启动子的其它酵母启动子是醇脱氢酶2，异细胞色素c，酸性磷酸酶，与氮代谢有关的降解酶，金属硫蛋白，甘油醛-3-磷酸脱氢酶，及负责麦芽糖和半乳糖利用的酶的启动子区。适用于酵母表达的载体和启动子进一步记载于ep73,657。酵母增强子也可以有利的与酵母启动子一起使用。抗体在哺乳动物宿主细胞中自载体的转录可通过例如从病毒诸如多瘤病毒，禽痘病毒，腺病毒(诸如腺病毒2)，牛乳头瘤病毒，禽类肉瘤病毒，巨细胞病毒，逆转录病毒，乙肝病毒，猿猴病毒40(sv40)基因组，或从异源哺乳动物启动子例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子，及从热休克启动子获得的启动子来控制，倘若此类启动子与宿主细胞系统相容的话。方便的以sv40限制性片段的形式获得sv40病毒的早期和晚期启动子，该片段还包含sv40病毒复制起点。方便的以hindiiie限制性片段的形式获得人巨细胞病毒的立即早期启动子。美国专利no.4,419,446中披露了使用牛乳头瘤病毒作为载体在哺乳动物宿主中表达dna的系统。美国专利no.4,601,978中记载了该系统的一种改良。关于在小鼠细胞中在来自单纯疱疹病毒的胸苷激酶启动子的控制下表达人β-干扰素cdna还可参见reyesetal.,nature297:598-601(1982)。或者，可以使用劳氏肉瘤病毒长末端重复序列作为启动子。(e)增强子元件构件常常通过将增强子序列插入载体来提高高等真核细胞对编码本发明抗体的dna的转录。现在知道来自哺乳动物基因(球蛋白，弹性蛋白酶，清蛋白，甲胎蛋白和胰岛素)的许多增强子序列。然而，通常使用来自真核细胞病毒的增强子。例子包括sv40复制起点晚期一侧的增强子(bp100-270)，巨细胞病毒早期启动子增强子，多瘤病毒复制起点晚期一侧的增强子，和腺病毒增强子。关于激活真核启动子的增强元件还可参见yaniv,nature297:17-18(1982)。可以将增强子剪接到载体中，位于抗体编码序列的5′或3′位置，但是优选位于启动子的5′位点。(f)转录终止构件用于真核宿主细胞(酵母，真菌，昆虫，植物，动物，人或来自其它多细胞生物体的有核细胞)的表达载体还将包含终止转录和稳定mrna所必需的序列。此类序列通常可以从真核或病毒dna或cdna非翻译区的5′端和偶尔的3′端获得。这些区域包含在编码抗体的mrna的非翻译部分中转录成聚腺苷酸化片段的核苷酸区段。一种有用的转录终止构件是牛生长激素聚腺苷酸化区。参见wo94/11026及其中披露的表达载体。(g)宿主细胞的选择和转化适于克隆或表达本文载体中的dna的宿主细胞是上文描述的原核生物，酵母或高等真核细胞。适于此目的的原核生物包括真细菌，诸如革兰氏阴性或革兰氏阳性生物体，例如肠杆菌科，诸如埃希氏菌属(escherichia)例如大肠埃希氏菌或大肠杆菌(e.coli)，肠杆菌属(enterobacter)，欧文氏菌属(erwinia)，克雷伯氏菌属(klebsiella)，变形菌属(proteus)，沙门氏菌属(salmonella)例如鼠伤寒沙门氏菌(salmonellatyphimurium)，沙雷氏菌属(serratia)例如粘质沙雷氏菌(serratiamarcescans)，志贺氏菌属(shigella)，以及芽孢杆菌属(bacilli)诸如枯草芽孢杆菌(b.subtilis)和地衣芽孢杆菌(b.licheniformis)(例如1989年4月12日公布的dd266,710中披露的地衣芽孢杆菌41p)，假单胞菌属(pseudomonas)诸如铜绿假单胞菌(p.aeruginosa)，和链霉菌属(streptomyces)。一种优选的大肠杆菌克隆宿主是大肠杆菌294(atcc31,446)，尽管其它菌株诸如大肠杆菌b，大肠杆菌x1776(atcc31,537)和大肠杆菌w3110(atcc27,325)也是合适的。这些例子是例示性的，而不是限制性的。可以在细菌中生产全长抗体，抗体融合蛋白，和抗体片段，特别是在不需要糖基化和fc效应器功能时，诸如在将治疗性抗体缀合至自身在肿瘤细胞破坏方面显示出效力的细胞毒剂(例如毒素)时。全长抗体在循环中具有较长的半衰期。大肠杆菌中的生成是较快的且较合算的。对于在细菌中表达抗体片段和多肽，参见例如美国专利no.5,648,237(carteret.al.),美国专利no..5,789,199(jolyetal.),美国专利no.5,840,523(simmonsetal.),其描述了使表达和分泌优化的翻译起始区(tir)和信号序列。还可参见charlton,methodsinmolecularbiology,卷248(b.k.c.lo,编,humanapress,totowa,nj,2003),pp.245-254,其描述了在大肠杆菌中表达抗体片段。表达后，可以在可溶性级分中自大肠杆菌细胞浆液分离抗体，并可以通过例如蛋白a或g柱(取决于同种型)来纯化抗体。可以实施最终的纯化，其类似于用于纯化在例如cho细胞中表达的抗体的工艺。在原核生物以外，真核微生物(诸如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的合适克隆或表达宿主。啤酒糖酵母或酿酒酵母(saccharomycescerevisiae)或常用的面包酵母在最常用的低等真核宿主微生物之中。然而，通常可获得许多其它属，种和菌株且可用于本发明，诸如粟酒裂殖糖酵母(schizosaccharomycespombe)；克鲁维酵母属(kluyveromyces)宿主，诸如例如乳酸克鲁维酵母(k.lactis)，脆壁克鲁维酵母(k.fragilis)(atcc12,424)，保加利亚克鲁维酵母(k.bulgaricus)(atcc16,045)，威克克鲁维酵母(k.wickeramii)(atcc24,178)，k.waltii(atcc56,500)，果萧克鲁维酵母(k.drosophilarum)(atcc36,906)，耐热克鲁维酵母(k.thermotolerans)和马克思克鲁维酵母(k.marxianus)；亚罗酵母属(yarrowia)(ep402,226)；巴斯德毕赤酵母(pichiapastoris)(ep183,070)；假丝酵母属(candida)；瑞氏木霉(trichodermareesia)(ep244,234)；粗糙脉孢菌(neurosporacrassa)；许旺酵母属(schwanniomyces)，诸如schwanniomycesoccidentalis；和丝状真菌，诸如例如脉孢菌属(neurospora)，青霉属(penicillium)，弯颈霉属(tolypocladium)，和曲霉属(aspergillus)宿主诸如构巢曲霉(a.nidulans)和黑曲霉(a.niger)。关于讨论酵母和丝状真菌用于生产治疗性蛋白质的用途的综述参见例如gerngross,nat.biotech.22:1409-1414(2004)。可选择如下的某些真菌和酵母株，其中糖基化途径已经“人源化”，导致具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的生成。参见例如lietal.,nat.biotech.24:210-215(2006)(记载了巴斯德毕赤氏酵母中糖基化途径的人源化)；及gerngrossetal.,见上文。适于表达糖基化抗体的宿主细胞也衍生自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定了许多杆状病毒株和变体及相应的允许昆虫宿主细胞，它们来自诸如草地夜蛾(spodopterafrugiperda)(毛虫)，埃及伊蚊(aedesaegypti)(蚊子)，白纹伊蚊(aedesalbopictus)(蚊子)，黑腹果萧(drosophilamelanogaster)(果萧)和家蚕(bombyxmori)等宿主。公众可获得多种病毒株用于转染，例如苜蓿尺蠖autographacalifornicanpv的l-1变体和家蚕bombyxmorinpv的bm-5株，而且此类病毒可依照本发明用作本文中的病毒，特别是用于转染草地夜蛾细胞。还可利用棉，玉米，马铃薯，大豆，矮牵牛，番茄，浮萍(leninaceae)，苜蓿(m.truncatula)，和烟草的植物细胞培养物作为宿主。参见例如美国专利no.5,959,177；6,040,498；6,420,548；7,125,978；和6,417,429(描述用于在转基因植物中生产抗体的plantibodiestm技术)。可使用脊椎动物细胞作为宿主，而且培养(组织培养)中脊椎动物细胞的繁殖已经成为常规规程。有用哺乳动物宿主细胞系的例子是经sv40转化的猴肾cv1系(cos-7,atcccrl1651)；人胚肾系(293或为了在悬浮培养中生长而亚克隆的293细胞，grahametal.,j.genvirol.36:59(1977))；幼仓鼠肾细胞(bhk,atccccl10)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(tm4,mather,biol.reprod.23:243-251(1980))；猴肾细胞(cv1,atccccl70)；非洲绿猴肾细胞(vero-76,atcccrl-1587)；人宫颈癌细胞(hela,atccccl2)；犬肾细胞(mdck,atccccl34)；牛鼠(buffalorat)肝细胞(brl3a,atcccrl1442)；人肺细胞(w138,atccccl75)；人肝细胞(hepg2,hb8065)；小鼠乳瘤(mmt060562,atccccl51)；tri细胞(matheretal.,annalsn.y.acad.sci.383:44-68(1982)；mrc5细胞；fs4细胞；和人肝瘤系(hepg2)。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(cho)细胞，包括dhfr-cho细胞(urlaubetal.,proc.natl.acad.sci.usa77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞细胞系，诸如ns0和sp2/0。关于适合于抗体生产的某些哺乳动物宿主细胞系的综述参阅例如yazakiandwu,methodsinmolecularbiology,卷248(b.k.c.lo,编,humanapress,totowa,nj,2003),pp.255-268。用上文所述用于生产抗体的表达或克隆载体转化宿主细胞，并在为了诱导启动子，选择转化子或扩增编码期望序列的基因而适当更改的常规营养培养基中进行培养。(h)培养宿主细胞可以在多种培养基中培养用于生产本发明抗体的宿主细胞。商品化培养基诸如ham氏f10(sigma)，极限必需培养基(mem,sigma)，rpmi-1640(sigma)，和dulbecco氏改良的eagle氏培养基(dmem,sigma)适于培养宿主细胞。另外，可以使用下列文献中记载的任何培养基作为宿主细胞的培养基：hametal.,meth.enz.58:44(1979)；barnesetal.,anal.biochem.102:255(1980)；美国专利no.4,767,704；4,657,866；4,927,762；4,560,655；或5,122,469；wo90/03430；wo87/00195；或美国专利re.30,985。任何这些培养基可以根据需要补充激素和/或其它生长因子(诸如胰岛素，运铁蛋白或表皮生长因子)，盐(诸如氯化钠，钙，镁和磷酸盐)，缓冲剂(诸如hepes)，核苷酸(诸如腺苷和胸苷)，抗生素(诸如gentamycintm药物)，痕量元素(定义为通常以微摩尔范围的终浓度存在的无机化合物)，和葡萄糖或等效能源。还可以以适宜浓度包含本领域技术人员知道的任何其它必需补充物。培养条件(诸如温度，ph等)就是先前为表达而选择用于宿主细胞的，这对于普通技术人员而言是显而易见的。(xiv)抗体的纯化在使用重组技术时，可以在细胞内，在周质空间中生成抗体，或者直接分泌到培养基中。如果在细胞内生成抗体，那么作为第一步，通过例如离心或超滤除去宿主细胞或裂解片段的微粒碎片。carteretal.,bio/technology10:163-167(1992)记载了用于分离分泌到大肠杆菌周质空间的抗体的规程。简单的说，在存在乙酸钠(ph3.5)，edta和苯甲基磺酰氟(pmsf)时使细胞糊融化约30分钟。可通过离心除去细胞碎片。如果将抗体分泌到培养基中，那么一般首先使用商品化蛋白质浓缩滤器，例如amicon或milliporepellicon超滤单元浓缩来自此类表达系统的上清液。在任何上述步骤中，可以包括蛋白酶抑制剂诸如pmsf来抑制蛋白水解，而且可以包括抗生素来防止外来污染物的生长。可以使用例如羟磷灰石层析，疏水相互作用层析，凝胶电泳，透析和亲和层析来纯化由细胞制备的抗体组合物，其中亲和层析是通常优选的纯化步骤之一。蛋白a作为亲和配体的适宜性取决于抗体中存在的任何免疫球蛋白fc域的种类和同种型。蛋白a可用于纯化基于人γ1，γ2或γ4重链的抗体(lindmarketal.,j.immunol.meth.62:1-13(1983))。蛋白g推荐用于所有小鼠同种型和人γ3(gussetal.,emboj.5:1567-1575(1986))。亲和配体所附着的基质最常用的是琼脂糖，但是可以使用其它基质。物理稳定的基质诸如可控孔径玻璃或聚(苯乙烯二乙烯)苯能够获得比琼脂糖更快的流速和更短的加工时间。若抗体包含ch3结构域，则可使用bakerbondabxtm树脂(j.t.baker,phillipsburg,nj)进行纯化。根据待回收的抗体，也可使用其它蛋白质纯化技术，诸如离子交换柱上的分级，乙醇沉淀，反相hplc，硅土上的层析，肝素sepharosetm上的层析，阴离子或阳离子交换树脂(诸如聚天冬氨酸柱)上的层析，层析聚焦，sds-page，和硫酸铵沉淀。一般而言，用于制备供研究，测试，和临床中使用的抗体的各种方法学是本领域完善建立的，与上文所述方法学一致，和/或是本领域技术人员认为适合于特定的感兴趣抗体的。c.选择生物学活性抗体可以对如上文所述生成的抗体进行一项或多项“生物学活性”测定法以选择从治疗前景看具有有益特性的抗体或选择保留抗体的生物学活性的配制剂和条件。可以对抗体测试其结合抗原的能力(该抗体就是针对该抗原生成的)。例如，可以使用本领域已知的方法(诸如elisa，westernblot，等)。例如，对于抗pdl1抗体，可以在检测结合pdl1的能力的测定法中评估抗体的抗原结合特性。在一些实施方案中，例如，可以通过饱和结合；elisa；和/或竞争测定法(例如ria)来测定抗体的结合。还有，可以对抗体进行其它生物学活性测定法，例如为了评估其作为治疗剂的有效性。此类测定法是本领域已知的，而且依赖于靶抗原和抗体的预定用途。例如，可以在cd8+t细胞，淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(lcmv)小鼠模型和/或同基因肿瘤模型中评估通过抗体阻断pdl1的生物学影响，例如如美国专利8,217,149中描述的。为了筛选结合感兴趣抗原上特定表位的抗体(例如那些阻断实施例的抗pdl1抗体结合pdl1的)，可以实施常规交叉阻断测定法，诸如antibodies,alaboratorymanual,coldspringharborlaboratory,edharlowanddavidlane(1988)中描述的。或者，可以实施表位作图来测定抗体是否结合感兴趣表位，例如如champeetal.,j.biol.chem.270:1388-1394(1995)中描述的。一方面，提供用于鉴定具有生物学活性的抗ox40抗体的测定法。生物学活性可以包括例如结合ox40(例如结合人和/或食蟹猴ox40)，提高ox40介导的信号转导(例如提高nfkb介导的转录)，消减表达人ox40的细胞(例如t细胞)，增强t效应细胞功能(例如cd4+效应t细胞，cd8+效应t细胞)(例如通过提高效应t细胞增殖和/或提高效应t细胞的细胞因子生成(例如γ干扰素))，增强记忆t细胞功能(例如cd4+记忆t细胞)(例如通过提高记忆t细胞增殖和/或提高记忆t细胞的细胞因子生成(例如γ干扰素))，抑制调节t细胞功能(例如通过降低效应t细胞功能(例如cd4+效应t细胞功能，cd8+效应t细胞功能)的treg遏制)。还提供在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。在某些实施方案中，对本发明的抗体测试此类生物学活性。可以使用本领域已知的方法来测定t细胞共刺激，而且本文中公开了例示性方法。例如，可以自外周白血球获得t细胞(例如记忆或效应t细胞)(例如使用ficoll梯度离心自人全血分离)。可以使用本领域已知的方法自pbmc分离记忆t细胞(例如cd4+记忆t细胞)或效应t细胞(例如cd4+teff细胞)。例如，可以使用miltenyicd4+记忆t细胞分离试剂盒或miltenyi幼稚cd4+t细胞分离试剂盒。在抗原呈递细胞(例如经过照射的表达cd32和cd80的l细胞)存在下培养分离的t细胞，并通过在ox40激动性抗体存在或缺失下添加抗cd3抗体来活化。可以使用本领域公知的方法来测量激动性ox40抗体对t细胞增殖的影响。例如，可以使用celltiterglo试剂盒(promega)，并在多标记物读数仪(perkinelmer)上读取结果。还可以通过分析由t细胞生成的细胞因子来测定激动性ox40抗体对t细胞功能的影响。在一个实施方案中，测定cd4+t细胞的干扰素γ生成，例如通过测量细胞培养物上清液中的干扰素γ。用于测量干扰素γ的方法是本领域公知的。可以使用本领域已知的方法来测定treg细胞功能，而且本文中公开了例示性方法。在一个例子中，测定treg遏制效应t细胞增殖的能力。使用本领域已知的方法自人全血分离t细胞(例如分离记忆t细胞或幼稚t细胞)。标记纯化后的cd4+幼稚t细胞(例如用cfse)，并用不同试剂标记纯化后的treg细胞。将经过照射的抗原呈递细胞(例如表达cd32和cd80的l细胞)与经过标记的纯化后的幼稚cd4+t细胞和纯化后的treg共培养。使用抗cd3抗体活化共培养物，并在激动性ox40抗体存在或缺失下测试。合适时间(例如共培养6天)后，使用facs分析通过降低的标记物染色(例如降低的cfse标记物染色)中的染料稀释来跟踪cd4+幼稚t细胞增殖的水平。可以使用本领域公知的方法来测定ox40信号传导，而且本文中公开了例示性方法。在一个实施方案中，生成表达人ox40和报告基因(包含融合至报告基因(例如β萤光素酶)的nfkb启动子)的转基因细胞。对细胞添加ox40激动性抗体导致nfkb转录升高，这使用针对报告基因的测定法来检测。可以例如通过使用单核细胞衍生的巨噬细胞或u937细胞(一种具有成熟巨噬细胞的形态和特征的人组织细胞性淋巴瘤细胞系)来测定吞噬作用。在抗ox40激动性抗体存在或缺失下将表达ox40的细胞添加至单核细胞衍生的巨噬细胞或u937细胞。将细胞培养合适时间段后，通过检查针对1)巨噬细胞或u937细胞和2)表达ox40的细胞的标志物双重染色的细胞的百分比，并将此除以显示表达ox40的细胞的标志物(例如gfp)的细胞的总数来测定吞噬百分比。可以通过流式细胞术来进行分析。在另一个实施方案中，可以通过萦光显微术分析来进行分析。可以例如使用本领域公知的方法测定adcc。定义部分中描述了例示性方法，而且实施例中公开了例示性测定法。在一些实施方案中，表征在adcc测定法中用于测试的表达ox40的细胞上的ox40水平。将细胞用可检测标记的抗ox40抗体(例如pe标记的)染色，然后使用流式细胞术测定萦光水平，并以中值萦光强度(mfi)呈现结果。在另一个实施方案中，可以通过celltiterglo测定法试剂盒来分析adcc，而且可以通过化学发光来测定细胞存活力/细胞毒性。可以使用相应重组fcγ受体在基于elisa的配体结合测定法中测量各种抗体对fcγria，fcγriia，fcγriib，和fcγriiia的两种同种异型(f158和v158)的结合亲和力。以含有连接至c端gly/6xhis/谷胱甘肽s-转移酶(gst)多肽标签的受体γ链胞外域的融合蛋白表达纯化后的人fcγ受体。如下测定抗体对那些人fcγ受体的结合亲和力。对于低亲和力受体，即fcγriia(cd32a)，fcγriib(cd32b)，和fcγriiia(cd16)的两种同种异型，f-158和v-158，可以通过用山羊抗人卡帕链的f(ab’)2片段(icnbiomedical；irvine，ca)交联(以近似摩尔比1:3抗体:交联用f(ab’)2)作为多聚体测试抗体。将板用抗gst抗体(genentech)包被，并用牛血清清蛋白(bsa)封闭。用含有0.05％tween-20的磷酸盐缓冲盐水(pbs)及elx405tm洗板仪(biotekinstruments；winooski，vt)清洗后，以25ng/孔将fcγ受体添加至板，并于室温温育1小时。清洗板后，作为多聚体复合物添加测试抗体的系列稀释液，并将板于室温温育2小时。清洗板以去除未结合的抗体后，用辣根过氧化物酶(hrp)缀合的山羊抗人f(ab’)2的f(ab’)2片段(jacksonimmunoresearchlaboratories；westgrove，pa)检测结合至fcγ受体的抗体，接着添加底物，四甲基联苯胺(tmb)(kirkegaardandperrylaboratories；gaithersburg，md)。取决于所测试的fcγ受体，将板于室温温育5-20分钟以容许显色。用1mh3po4终止反应，并用微量板读数仪(moleculardevices；sunnyvale，ca)测量450nm处的吸光度。通过将来自一式两份抗体稀释液的均值吸光值针对抗体浓度绘图，生成剂量-响应结合曲线。使用softmaxpro(moleculardevices)用四参数方程拟合结合曲线后确定检测到来自结合fcγ受体的最大响应50％时的有效抗体浓度的值(ec50)。供任何上述体外测定法使用的细胞包括天然表达ox40或经改造而表达ox40的细胞或细胞系。此类细胞包括天然表达ox40的活化后的t细胞，treg细胞和活化后的记忆t细胞。此类细胞还包括表达ox40的细胞系和并非正常情况下表达ox40但已经用编码ox40的核酸转染的细胞系。本文中提供的供任何上述体外测定法使用的例示性细胞系包括表达人ox40的转基因bt474细胞(一种人乳腺癌细胞系)。理解的是，可以使用本发明的免疫缀合物替换或补充抗ox40抗体来进行任何上述测定法。理解的是，可以使用抗ox40抗体和别的治疗剂(例如pd-1轴结合剂(例如抗pd-1或抗pdl1抗体))来进行任何上述测定法。d.药物组合物和配制剂本文中还提供包含本文所述pd-1轴结合拮抗剂和/或抗体诸如抗pdl1抗体，或抗人ox40激动性抗体，和药学可接受载剂的药物组合物和配制剂。可以通过混合具有期望纯度的活性组分(诸如抗体或多肽)与一种或多种任选的药学可接受载体(remington’spharmaceuticalsciences，第16版，osol，a.编(1980))以冻干配制剂或水性溶液形式制备如本文中所描述的药物组合物和配制剂。一般地，药学可接受载体在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苯索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如edta；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(peg)。本文中的例示性的药学可接受载体进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(shasegp)，例如人可溶性ph-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rhuph20(baxterinternational，inc.)。某些例示性的shasegp和使用方法，包括rhuph20记载于美国专利公开文本no.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，将shasegp与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。例示性的冻干抗体配制剂记载于美国专利no.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些记载于美国专利no.6,171,586和wo2006/044908的，后一种配制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。本文中的组合物和配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性组分，优选那些活性互补且彼此没有不利影响的。合适地，此类活性组分以对于意图的目的有效的量组合存在。活性成分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。此类技术披露于例如remington′spharmaceuticalsciences，第16版，osol,a.编(1980)。可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。iv.治疗方法本文中提供用于在个体中治疗癌症或延迟癌症进展的方法，其包括对该个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。在一些实施方案中，治疗在该治疗停止后在个体中导致持久响应。本文所述方法可用于治疗期望增强免疫原性的状况，诸如为了治疗癌症提高肿瘤免疫原性。本文中还提供在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括对该个体施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。又一些方面，本文中提供治疗感染(例如细菌或病毒或其它病原体感染)的方法。在一些实施方案中，感染是病毒和/或细菌感染。在一些实施方案中，感染是病原体感染。在一些实施方案中，感染是急性感染。在一些实施方案中，感染是慢性感染。方法中可以使用本领域已知的或本文中描述的任何pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。在一些实施方案中，个体是人。在一些实施方案中，个体在pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)组合治疗之前已经用ox40结合激动剂疗法治疗。在一些实施方案中，个体具有对一种或多种pd-1轴拮抗剂有抗性的(已经证明是有抗性的)癌症。在一些实施方案中，对pd-1轴拮抗剂的抗性包括癌症复发或顽固性癌症。复发可以指治疗后癌症在原始部位或新部位的再出现。在一些实施方案中，对pd-1轴拮抗剂的抗性包括用pd-1轴拮抗剂治疗期间癌症的进展。在一些实施方案中，对pd-1轴拮抗剂的抗性包括不响应治疗的癌症。癌症可以是在开始治疗时有抗性的，或者可以在治疗期间变成有抗性的。在一些实施方案中，癌症处于早期阶段或晚期阶段。另一方面，个体具有表达(已经显示表达，例如在诊断测试中)pd-l1生物标志物的癌症。在一些实施方案中，患者的癌症表达低pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，患者的癌症表达高pd-l1生物标志物。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，当它包含0％的样品时，样品中缺失pd-l1生物标志物。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，当它包含超过0％的样品时，样品中存在pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，至少1％的样品中存在pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，至少5％的样品中存在pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，至少10％的样品中存在pd-l1生物标志物。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，使用选自下组的方法在样品中检测pd-l1生物标志物：facs，western印迹，elisa，免疫沉淀，免疫组织化学，免疫萦光，放射免疫测定法，点印迹，免疫检测方法，hplc，表面等离振子共振，光谱术，质谱术，hplc，qpcr，rt-qpcr，多重qpcr或rt-qpcr，rna-seq，微阵列分析，sage，massarray技术，和fish，及其组合。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，通过蛋白质表达在样品中检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过免疫组织化学(ihc)测定蛋白质表达。在一些实施方案中，使用抗pd-l1抗体检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过ihc检测pd-l1生物标志物为弱染色强度。在一些实施方案中，通过ihc检测pd-l1生物标志物为中等染色强度。在一些实施方案中，通过ihc检测pd-l1生物标志物为强染色强度。在一些实施方案中，在肿瘤细胞，肿瘤浸润性免疫细胞，基质细胞及其任意组合上检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，染色为膜染色，胞质染色或其组合。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，以样品中缺失或无染色来检测pd-l1生物标志物的缺失。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，以样品中的任何染色来检测pd-l1生物标志物的存在。在一些实施方案中，本发明的组合疗法包括施用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。可以以本领域已知的任何合适方式施用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。例如，可以序贯(在不同时间)或并行(在相同时间)施用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。在一些实施方案中，pd-1轴结合拮抗剂与ox40结合激动剂在分开的组合物中。在一些实施方案中，pd-1轴结合拮抗剂与ox40结合激动剂在相同的组合物中。可以通过相同施用路径或通过不同施用路径来施用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)。在一些实施方案中，静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眼窝内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用pd-1轴结合拮抗剂。在一些实施方案中，静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眼窝内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，或鼻内施用ox40结合激动剂。可以施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂来预防或治疗疾病。可以基于要治疗的疾病的类型，pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂的类型，疾病的严重程度和过程，个体的临床状况，个体的临床史和对治疗的响应，和主治医师的斟酌来确定pd-1轴结合拮抗剂和/或ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)的适宜剂量。在一些实施方案中，ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)和pd-1轴结合拮抗剂(例如抗pd-1或抗pd-l1抗体)的组合治疗是协同性的，由此ox40结合剂(例如抗人ox40激动性抗体)在组合中的有效剂量相对于ox40结合剂(例如抗人ox40激动性抗体)作为单一药剂的有效剂量降低。作为一般性建议，施用于人的抗体的治疗有效量会在约0.01至约50mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，使用的抗体是例如每天施用约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg。在一些实施方案中，以15mg/kg施用抗体。然而，其它剂量方案可能是有用的。在一个实施方案中，在21天周期的第1天以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg或约1400mg的剂量将本文所述抗pdl1抗体施用于人。可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用剂量，诸如输注。抗体在组合治疗中施用的剂量可以与单一治疗相比降低。此疗法的进展易于通过常规技术来监测。在一些实施方案中，方法可以进一步包括别的疗法。别的疗法可以是放射疗法，手术(例如乳房肿瘤切除术和乳房切除术)，化学疗法，基因疗法，dna疗法，病毒疗法，rna疗法，免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法，单克隆抗体疗法，或前述的组合。别的疗法可以是辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，别的疗法是施用小分子酶抑制剂或抗代谢剂。在一些实施方案中，别的疗法是施用副作用限制剂(例如意图减少治疗副作用的发生和/或减轻治疗副作用的严重程度的药剂，诸如治恶心药等)。在一些实施方案中，别的疗法是放射疗法。在一些实施方案中，别的疗法是手术。在一些实施方案中，别的疗法是放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，别的疗法是γ照射。在一些实施方案中，别的疗法是靶向pi3k/akt/mtor途径的疗法，hsp90抑制剂，微管蛋白抑制剂，凋亡抑制剂，和/或化学预防剂。在一些实施方案中，别的疗法是ctla-4(也称作cd152)，例如阻断性抗体，ipilimumab(也称作mdx-010，mdx-101，或)，tremelimumab(也称作ticilimumab或cp-675,206)，针对b7-h3(也称作cd276)的拮抗剂，例如阻断性抗体，mga271，针对tgfβ的拮抗剂，例如metelimumab(也称作cat-192)，fresolimumab(也称作gc1008)，或ly2157299，包含过继转移表达嵌合抗原受体(car)的t细胞(例如细胞毒性t细胞或ctl)的治疗，包含过继转移包含显性阴性tgfβ受体，例如显性阴性tgfβ类型ii受体的t细胞的治疗，包含hercreem方案的治疗(参见例如clinicaltrials.govidentifiernct00889954)，针对cd137(也称作tnfrsf9，4-1bb，或ila)的激动剂，例如活化性抗体，urelumab(也称作bms-663513)，针对cd40的激动剂，例如活化性抗体，cp-870893，针对ox40(也称作cd134)的激动剂，例如活化性抗体，与不同的抗ox40抗体(例如agonox)联合施用，针对cd27的激动剂，例如活化性抗体，cdx-1127，吲哚胺-2,3-双加氧酶(ido)，1-甲基-d-色氨酸(也称作1-d-mt)，抗体-药物缀合物(在一些实施方案中，包含米他齐(mertansine)或单甲基奥瑞司他汀(auristatin)e(mmae))，抗napi2b抗体-mmae缀合物(也称作dnib0600a或rg7599)，trastuzumabemtansine(也称作t-dm1，ado-trastuzumabemtansine，或genentech)，dmuc5754a，靶向内皮缩血管肽b受体(ednbr)的抗体-药物缀合物，例如与mmae缀合的针对ednbr的抗体，血管发生抑制剂，针对vegf，例如vegf-a的抗体，贝伐珠单抗(也称作genentech)，针对血管生成素2(也称作ang2)的抗体，medi3617，抗肿瘤剂，靶向csf-1r(也称作m-csfr或cd115)的药剂，抗csf-1r(也称作imc-cs4)，干扰素，例如干扰素α或干扰素γ，roferon-a，gm-csf(也称作重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，rhugm-csf，沙格司亭(sargramostim)，或)，il-2(也称作阿地白介素(aldesleukin)或)，il-12，靶向cd20的抗体(在一些实施方案中，靶向cd20的抗体是obinutuzumab(也称作ga101或)或利妥昔单抗(rituximab))，靶向gitr的抗体(在一些实施方案中，靶向gitr的抗体是trx518)，与癌症疫苗(在一些实施方案中，癌症疫苗是肽癌症疫苗，其在一些实施方案中是个人化肽疫苗；在一些实施方案中，肽癌症疫苗是多价长肽，多重肽，肽混合物，杂合肽，或经肽脉冲的树突细胞疫苗(参见例如yamadaetal.,cancersci,104:14-21,2013))，联合辅助剂，tlr激动剂，例如poly-iclc(也称作)，lps，mpl，或cpgodn，肿瘤坏死因子(tnf)α，il-1，hmgb1，il-10拮抗剂，il-4拮抗剂，il-13拮抗剂，hvem拮抗剂，icos激动剂，例如通过施用icos-l，或针对icos的激动性抗体，靶向cx3cl1的治疗，靶向cxcl10的治疗，靶向ccl5的治疗，lfa-1或icam1激动剂，选择蛋白激动剂，靶向疗法，b-raf的抑制剂，vemurafenib(也称作dabrafenib(也称作)，厄洛替尼(erlotinib)(也称作)，mek的抑制剂，诸如mek1(也称作map2k1)或mek2(也称作map2k2)，cobimetinib(也称作gdc-0973或xl-518)，trametinib(也称作)，k-ras的抑制剂，c-met的抑制剂，onartuzumab(也称作metmab)，alk的抑制剂，af802(也称作ch5424802或alectinib)，磷脂酰肌醇3-激酶(pi3k)的抑制剂，bkm120，idelalisib(也称作gs-1101或cal-101)，哌立福辛(perifosine)(也称作krx-0401)，akt，mk2206，gsk690693，gdc-0941，mtor的抑制剂，西罗莫司(sirolimus)(也称作雷帕霉素(rapamycin))，坦西莫司(temsirolimus)(也称作cci-779或)，依维莫司(everolimus)(也称作rad001)，地磷莫司(ridaforolimus)(也称作ap-23573，mk-8669，或deforolimus)，osi-027，azd8055，ink128，双重pi3k/mtor抑制剂，xl765，gdc-0980，bez235(也称作nvp-bez235)，bgt226，gsk2126458，pf-04691502，pf-05212384(也称作pki-587)。别的疗法可以是一种或多种本文所述化疗剂。可以在本领域已知的各种模型(诸如临床或临床前模型)中测试本文所述任何方法(例如包括施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂的组合的组合治疗)的功效。合适的临床前模型在本文中有例示，而且可进一步包括但不限于id8卵巢癌，gem模型，b16黑素瘤，renca肾细胞癌，ct26结直肠癌，mc38结直肠癌，和cloudman黑素瘤癌症模型。可以在形成肿瘤的gem模型(包括但不限于非小细胞肺癌，胰腺导管腺癌，或黑素瘤的gem模型)中测试本文所述任何方法(例如包括施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂的组合的组合治疗)的功效。例如，可以使用如jackson,e.l.,etal.(2001)genesdev.15(24):3243-8(描述krasg12d)和lee,c.l.,etal.(2012)dis.modelmech.5(3):397-402(frt介导的p53缺无等位基因)中描述的，在腺病毒重组酶处理后之后在p53缺无背景中表达krasg12d的小鼠作为非小细胞肺癌的临床前模型。又例如，可以使用如jackson,e.l.,etal.(2001)genesdev.15(24):3243-8(描述krasg12d)和aguirre,a.j.,etal.(2003)genesdev.17(24):3112-26(p16/p19缺无等位基因)中描述的，在p16/p19缺无背景中表达krasg12d的小鼠作为胰腺导管腺癌(pdac)的临床前模型。再例如，可以使用如dankort,d.,etal.(2007)genesdev.21(4):379-84(描述brafv600e)和trotman,l.c.,etal.(2003)plosbiol.1(3):e59(pten缺无等位基因)中描述的，具有在诱导型(例如4-oht处理)重组酶处理之后在黑素细胞特异性pten缺无背景中表达brafv600e的黑素细胞的小鼠作为黑素瘤的临床前模型。对于任何这些例示性模型，在形成肿瘤之后，将小鼠随机募集入接受组合抗pdl1和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)处理或对照处理的处理组。在处理过程期间测量肿瘤尺寸(例如肿瘤体积)，并且还监测总体存活率。另一方面，本文中提供用于在具有癌症的个体中增强免疫功能的方法，其包括施用有效量的pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂的组合。在本公开文本的方法的一些实施方案中，癌症(在一些实施方案中，使用诊断测试检查的患者的癌症的样品)具有升高水平的t细胞浸润。如本文中使用的，癌症的t细胞浸润可以指癌症组织内或其它相关部位存在t细胞，诸如肿瘤浸润性淋巴细胞(til)。本领域已知，t细胞浸润可能与某些癌症中改善的临床结局有关(参见例如zhangetal.,n.engl.j.med.348(3):203-213(2003))。然而，t细胞耗竭也是癌症的一项主要免疫学特征，其中许多肿瘤浸润性淋巴细胞(til)表达高水平的抑制性共受体且缺乏生成效应器细胞因子的能力(wherry,e.j.natureimmunology12:492-499(2011)；rabinovich,g.a.,etal.,annualreviewofimmunology25:267-296(2007))。在本公开文本的方法的一些实施方案中，个体具有t细胞功能障碍性病症。在本公开文本的方法的一些实施方案中，t细胞功能障碍性病症特征在于t细胞无反应性或分泌细胞因子，增殖或执行溶胞活性的能力降低。在本公开文本的方法的一些实施方案中，t细胞功能障碍性病症特征在于t细胞耗竭。在本公开文本的方法的一些实施方案中，t细胞是cd4+和cd8+t细胞。不受理论束缚，ox40结合激动剂治疗可相对于施用组合之前提高t细胞(例如cd4+t细胞，cd8+t细胞，记忆t细胞)引发，活化和/或增殖。在一些实施方案中，t细胞是cd4+和/或cd8+t细胞。在本公开文本的方法的一些实施方案中，癌症(在一些实施方案中，使用诊断测试检查患者的癌症的样品)具有低水平的t细胞浸润。在一些实施方案中，癌症(在一些实施方案中，使用诊断测试检查患者的癌症的样品)没有可检测的t细胞浸润物。在一些实施方案中，癌症是非免疫原性癌症(例如非免疫原性结直肠癌和/或卵巢癌)。不受理论束缚，ox40结合激动剂治疗可相对于施用组合之前提高t细胞(例如cd4+t细胞，cd8+t细胞，记忆t细胞)引发，活化和/或增殖。在本公开文本的方法的一些实施方案中，个体中活化后的cd4和/或cd8t细胞特征在于相对于施用组合之前γ-ifn+生成cd4和/或cd8t细胞和/或增强的溶胞活性。可以通过本领域已知的任何手段来测量γ-ifn+，包括例如细胞内细胞因子染色(ics)，其牵涉细胞固定，透化，和用针对γ-ifn的抗体染色。可以通过本领域已知的任何手段来测量溶胞活性，例如使用用混合效应和靶细胞进行的细胞杀伤测定法。在一些实施方案中，cd8+t细胞特征在于例如存在cd8b表达(例如通过rtpcr，使用例如fluidigm)(cd8b也称作t细胞表面糖蛋白cd8β链；cd8抗原，α多肽p37；登录号为nm_172213)。在一些实施方案中，cd8+t细胞来自外周血。在一些实施方案中，cd8+t细胞来自肿瘤。在一些实施方案中，treg细胞特征在于例如存在fox3p表达(例如通过rtpcr，例如使用fluidigm)(foxp3也称作叉头盒蛋白p3；scurfin；foxp3δ7；免疫缺陷，多内分泌病，肠病，x连锁；登录号为nm_014009)。在一些实施方案中，treg来自外周血。在一些实施方案中，treg细胞来自肿瘤。在一些实施方案中，炎性t细胞特征在于例如存在tbet和/或cxcr3表达(例如通过rtpcr，使用例如fluidigm)。在一些实施方案中，炎性t细胞来自外周血。在一些实施方案中，炎性t细胞来自肿瘤。在本公开文本的方法的一些实施方案中，cd4和/或cd8t细胞展现升高的选自下组的细胞因子的释放：ifn-γ，tnf-α和白介素。可以通过本领域已知的任何手段来测量细胞因子释放，例如使用western印迹，elisa，或免疫组织化学测定法检测含有cd4和/或cd8t细胞的样品中释放的细胞因子的存在。在本公开文本的方法的一些实施方案中，cd4和/或cd8t细胞是效应记忆t细胞。在本公开文本的方法的一些实施方案中，cd4和/或cd8效应记忆t细胞特征在于具有cd44高cd62l低的表达。可以通过本领域已知的任何手段来检测cd44高cd62l低的表达，例如通过制备组织(例如癌症组织)的单细胞悬浮液并使用针对cd44和cd62l的商品化抗体实施表面染色和流式细胞术。在本公开文本的方法的一些实施方案中，cd4和/或cd8效应记忆t细胞特征在于具有cxcr3(也称作c-x-c趋化因子受体类型3；mig受体；ip10受体；g蛋白偶联受体9；干扰素可诱导蛋白10受体；登录号为nm_001504)的表达。在一些实施方案中，cd4和/或cd8效应记忆t细胞来自外周血。在一些实施方案中，cd4和/或cd8效应记忆t细胞来自肿瘤。在本公开文本的方法的一些实施方案中，对个体施用有效量的人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂特征在于相对于施用人pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂之前cd8t细胞上升高的炎性标志物(例如cxcr3)。可以通过任何本领域已知的手段和实施例中描述的方法来测量cxcr3/cd8t细胞。在一些实施方案中，cxcr3/cd8t细胞来自外周血。在一些实施方案中，cxcr3/cd8t细胞来自肿瘤。在本发明的方法的一些实施方案中，treg功能相对于施用组合之前受到遏制。在一些实施方案中，t细胞耗竭相对于施用组合之前降低。在一些实施方案中，treg的数目相对于施用组合之前减少。在一些实施方案中，血浆干扰素γ相对于施用组合之前升高。可以例如通过测定cd4+fox3p+cd45+细胞的百分比(例如通过facs分析)来评估treg数目。在一些实施方案中，测定例如样品中treg的绝对数。在一些实施方案中，treg来自外周血。在一些实施方案中，treg来自肿瘤。在一些实施方案中，t细胞引发，活化和/或增殖相对于施用组合之前升高。在一些实施方案中，t细胞是cd4+和/或cd8+t细胞。在一些实施方案中，通过测定ki67+cd8+t细胞的百分比(例如通过facs分析)来检测t细胞增殖。在一些实施方案中，通过测定ki67+cd4+t细胞的百分比(例如通过facs分析)来检测t细胞增殖。在一些实施方案中，t细胞来自外周血。在一些实施方案中，t细胞来自肿瘤。可以在本公开文本的方法中使用本领域已知的或本文中描述的任何pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂。vi.检测和诊断方法在一些实施方案中，样品是在pdl1轴结合拮抗剂治疗之前(在一些实施方案中，在ox40结合激动剂，例如抗人ox40激动性抗体治疗，例如与pd-1轴结合拮抗剂组合治疗之前)获得的。在一些实施方案中，组织样品是福尔马林固定和石蜡包埋的，存档的，新鲜的或冷冻的。在一些实施方案中，样品是全血。在一些实施方案中，全血包含免疫细胞，循环肿瘤细胞及其任意组合。可以基于本领域中已知的任何适宜标准定性和/或定量地测定生物标志物(例如pd-l1)的存在和/或表达水平/量，所述标准包括但不限于dna，mrna，cdna，蛋白质，蛋白质片段和/或基因拷贝数。在某些实施方案中，第一样品中生物标志物的存在和/或表达水平/量相比于第二样品中的存在/缺失和/或表达水平/量增加或升高。在某些实施方案中，第一样品中生物标志物的存在/缺失和/或表达水平/量相比于第二样品中的存在和/或表达水平/量减少或降低。在某些实施方案中，第二样品是参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织。本文中描述了用于测定基因的存在/缺失和/或表达水平/量的其他公开内容。在任何方法的一些实施方案中，升高的表达指生物标志物(例如蛋白质或核酸(例如基因或mrna))水平中相比于参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织的任意的约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或更高的总体增加，其通过标准的本领域已知方法诸如本文中描述的那些检测。在某些实施方案中，升高的表达指样品中生物标志物的表达水平/量的增加，其中所述增加是参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织中相应生物标志物表达水平/量的任意的至少约1.5倍，1.75倍，2倍，3倍，4倍，5倍，6倍，7倍，8倍，9倍，10倍，25倍，50倍，75倍或100倍。在一些实施方案中，升高的表达指相比参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞，对照组织或内部对照(例如持家基因)高约1.5倍，约1.75倍，约2倍，约2.25倍，约2.5倍，约2.75倍，约3.0倍或约3.25倍的总体增加。在任何方法的一些实施方案中，降低的表达指生物标志物(例如蛋白质或核酸(例如基因或mrna))水平中相比于参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织的任意的约10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或更高的总体降低，其通过标准的本领域已知方法诸如本文中描述的那些检测。在某些实施方案中，降低的表达指样品中生物标志物的表达水平/量的降低，其中所述降低是参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织中相应生物标志物表达水平/量的任意的至少约0.9倍，0.8倍，0.7倍，0.6倍，0.5倍，0.4倍，0.3倍，0.2倍，0.1倍，0.05倍或0.01倍。可通过许多方法学来分析样品中各种生物标志物的存在和/或表达水平/量，其中许多是本领域中已知且熟练技术人员理解的，包括但不限于免疫组织化学(“ihc”)，western印迹分析，免疫沉淀，分子结合测定法，elisa，elifa，萦光激活细胞分选(“facs”)，massarray，蛋白组学，基于血液的定量测定法(如例如血清elisa)，生化酶活性测定法，原位杂交，southern分析，northern分析，全基因组测序，聚合酶链式反应(“pcr”)(包括定量实时pcr(“qrt-pcr”)和其他扩增类型检测方法，如例如分支的dna，sisba，tma等)，rna-seq，fish，微阵列分析，基因表达概况分析，和/或基因表达系列分析(“sage”)，以及可通过蛋白质，基因和/或组织阵列分析实施的许多种测定法中的任一种。用于评估基因和基因产物状态的典型方案见于例如ausubeletal.,eds.,1995,currentprotocolsinmolecularbiology，units2(northernblotting),4(southernblotting),15(immunoblotting)和18(pcranalysis)。还可使用多重免疫测定法如那些可从rulesbasedmedicine或mesoscalediscovery(“msd”)获得的。在一些实施方案中，使用包括以下的方法测定生物标志物的存在和/或表达水平/量：(a)在样品(如受试者癌症样品)上实施基因表达概况分析，pcr(诸如rtpcr或qrt-pcr)，rna-seq，微阵列分析，sage，massarray技术，或fish；并(b)测定生物标志物在样品中的存在和/或表达水平/量。在一些实施方案中，微阵列方法包括使用微阵列芯片，其具有一种或多种能在严格条件下与编码上文所述基因的核酸分子杂交的核酸分子或具有一种或多种能与一种或多种由上文所述基因编码的蛋白质结合的多肽(诸如肽或抗体)。在一个实施方案中，pcr方法是qrt-pcr。在一个实施方案中，pcr方法是多重pcr。在一些实施方案中，通过微阵列测量基因表达。在一些实施方案中，通过qrt-pcr测量基因表达。在一些实施方案中，通过多重pcr来测量表达。用于评估细胞中mrna的方法是众所周知的，包括例如使用互补dna探针的杂交测定法(诸如使用经标记的特异于一种或多种基因的核糖核酸探针的原位杂交，northern印迹和相关技术)和各种核酸扩增测定法(诸如使用特异于一种或多种基因的互补引物的rt-pcr，及其它扩增型检测方法，诸如例如分支dna，sisba，tma等)。可以使用northern，点印迹或pcr分析方便地对来自哺乳动物的样品测定mrna。另外，此类方法可以包括一个或多个如下步骤，其容许测定生物学样品中靶mrna的水平(例如通过同时检查“持家”基因诸如肌动蛋白家族成员的比较性对照mrna序列的水平)。任选的是，可以测定所扩增靶cdna的序列。任选方法包括通过微阵列技术在组织或细胞样品中检查或检测mrna如靶mrna的方案。使用核酸微阵列，将来自测试和对照组织样品的测试和对照mrna样品逆转录并标记以生成cdna探针。然后，将探针与固定化于固体支持物上的核酸阵列杂交。阵列配置为使得阵列每个成员的序列和位置是已知的。例如，可将其表达与抗血管生成疗法的增加或降低的临床益处相关的基因选择集在固体支持物上呈阵列。经标记探针与特定阵列成员的杂交指示得到该探针的样品表达该基因。依照一些实施方案，通过观察前述基因的蛋白质表达水平来测量存在和/或表达水平/量。在某些实施方案中，所述方法包括使生物学样品与针对本文所述生物标志物的抗体(例如抗pd-l1抗体)在允许生物标志物结合的条件下接触，并检测抗体与生物标志物之间是否形成复合物。这类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方案中，使用抗体来选择符合使用pd-l1轴结合拮抗剂疗法的资格的受试者，例如用于选择患者的生物标志物。在某些实施方案中，使用ihc和染色方案来检查样品中生物标志物蛋白质的存在和/或表达水平/量。已显示对组织切片的ihc染色是一种测定或检测样品中蛋白质的存在的可靠方法。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，pd-l1生物标志物为pd-l1。在一些实施方案中，通过免疫组织化学来检测pd-l1。在一些实施方案中，来自个体的样品中升高的pd-l1生物标志物表达为升高的蛋白质表达，而且在又一些实施方案中，是使用ihc测定的。在一个实施方案中，使用包括下述的方法来测定生物标志物的表达水平：(a)用抗体对样品(诸如受试者癌症样品)实施ihc分析；和(b)测定样品中生物标志物的表达水平。在一些实施方案中，ihc染色强度是相对于参照确定的。在一些实施方案中，参照为参照值。在一些实施方案中，参照为参照样品(例如对照细胞系染色样品或来自非癌症患者的组织样品)。ihc可与另外的技术如形态学染色和/或萦光原位杂交组合实施。ihc有两种一般性方法；直接和间接测定法。依照第一种测定法，直接测定抗体对靶抗原的结合。该直接测定法使用经标记的试剂，如萦光标签或酶标记的一抗，其可以在没有别的抗体相互作用的情况下可视化。在典型的间接测定法中，未缀合的一抗结合抗原，然后经标记的二抗结合该一抗。在二抗缀合于酶标记物的情况下，添加生色或产萦光底物以提供抗原的可视化。发生信号扩增，因为几个二抗可以与一抗上的不同表位反应。用于ihc的一抗和/或二抗通常用可检测模块标记。存在大量标记物，其一般可分组成以下类别：(a)放射性同位素，如35s，14c，125i，3h和131i；(b)胶体金颗粒；(c)萦光标记物，包括但不限于稀土螯合物(铕螯合物)，texasred，罗丹明，萦光素，丹酰，丽丝胺(lissamine)，伞形酮(umbelliferone)，藻红蛋白(phycocrytherin)，藻蓝蛋白，或商品化的萦光团如spectrumorange7和spectrumgreen7和/或上述任意一种或多种的衍生物；(d)存在各种酶-底物标记物，且美国专利no.4,275,149提供了对其中一些的综述。酶标记物的例子包括萤光素酶(例如萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶；美国专利no.4,737,456)，萤光素，2,3-二氢酞嗪二酮(dihydrophthalazinedione)，苹果酸脱氢酶，脲酶，过氧化物酶如辣根过氧化物酶(hrpo)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶)，杂环氧化酶(如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶)，乳过氧化物酶(lactoperoxidase)，微过氧化物酶(microperoxidase)等。酶-底物组合的例子包括，例如辣根过氧化物酶(hrpo)和作为底物的过氧化氢酶；碱性磷酸酶(ap)和作为生色底物的对硝基苯基磷酸；和β-d-半乳糖苷酶(β-d-gal)与生色底物(例如对硝基苯基-β-d-半乳糖苷酶)或产萦光底物(例如4-甲基伞形基(methylumbelliferyl)-β-d-半乳糖苷酶)。对于这些的一般性综述，参见美国专利no.4,275,149和4,318,980。在任何方法的一些实施方案中，使用抗pd-l1诊断性抗体(即一抗)通过免疫组织化学来检测pd-l1。在一些实施方案中，pd-l1诊断性抗体特异性结合人pd-l1。在一些实施方案中，pd-l1诊断性抗体为非人抗体。在一些实施方案中，pd-l1诊断性抗体为大鼠，小鼠，或家兔抗体。在一些实施方案中，pd-l1诊断性抗体为单克隆抗体。在一些实施方案中，pd-l1诊断性抗体是直接标记的。可将如此制备的标本封固并盖上盖玻片。然后确定载玻片评估，例如使用显微镜，并可采用本领域中常规使用的染色强度标准。在一个实施方案中，理解当使用ihc检查来自肿瘤的细胞和/或组织时，通常在肿瘤细胞和/或组织中测定或评估染色(相对于可能存在于样品中的基质或周围组织)。在一些实施方案中，理解的是，当使用ihc检查来自肿瘤的细胞和/或组织时，染色包括肿瘤浸润性免疫细胞，包括肿瘤内或肿瘤周围的免疫细胞中的测定或评估。在一些实施方案中，如下文表4中所述，在>0％的样品中，在至少1％的样品中，在至少5％的样品中，或在至少10％的样品中通过ihc检测pd-l1生物标志物的存在。在一些实施方案中，在<5％的细胞中通过ihc检测pd-l1生物标志物的存在。在一些实施方案中，在<1％的细胞中通过ihc检测pd-l1生物标志物的存在。在一些实施方案中，在0％的细胞中通过ihc检测pd-l1生物标志物的存在。在任何方法，测定法和/或试剂盒的一些实施方案中，通过ihc以任何强度的pd-l1染色检测pd-l1生物标志物的存在。在一些实施方案中，通过ihc以弱染色强度检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过ihc以中等染色强度检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过ihc以强染色强度检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，通过ihc在肿瘤细胞，肿瘤浸润性免疫细胞及其组合中检测pd-l1生物标志物。适合在ihc中使用的抗pd-l1抗体是本领域公知的。普通技术人员理解，可以使用例如本文中公开的ihc方案通过与抗pd-l1抗体比较来鉴定和表征别的合适的抗pd-l1抗体。使用胎盘和扁桃体组织(强pd-l1染色强度)；经重组人pd-l1转染的hek-293细胞(不同程度的pd-l1染色强度，弱，中等和强强度)例示阳性组织对照。对于例示性的pd-l1ihc标准，可以见下文。表4在一些实施方案中，依照上文表4中提供的指导方针来诊断pd-l1状态。在一些实施方案中，下文提供pd-l1ihc诊断性评估的标准：表5在一些实施方案中，依照上文表5中提供的指导方针来诊断pdl1状态。在一些实施方案中，得分为ihc0和/或ihc1的样品可认为是pdl1生物标志物阴性的。在一些实施方案中，得分为ihc2和/或ihc3的样品可认为是pdl1生物标志物阳性的。在一些实施方案中，样品诊断为ihc0，ihc0和/或1，ihc1，ihc1和/或2，ihc2，ihc2和/或3，或ihc3。在一些实施方案中，对肿瘤或肿瘤样品评估pdl1表达。如本文中使用的，肿瘤或肿瘤样品可涵盖部分或整个由肿瘤细胞占据的肿瘤区域。在一些实施方案中，肿瘤或肿瘤样品可进一步涵盖由肿瘤相关肿瘤内细胞和/或肿瘤相关基质(例如毗邻的肿瘤周围促结缔组织增生性基质)占据的肿瘤区域。肿瘤相关肿瘤内细胞和/或肿瘤相关基质可包括与主要肿瘤块紧邻和/或毗邻的免疫浸润物(例如本文所述肿瘤浸润性免疫细胞)的区域。在一些实施方案中，对肿瘤细胞评估pdl1表达。在一些实施方案中，对如上所述肿瘤区域内的免疫细胞(诸如肿瘤浸润性免疫细胞)评估pdl1表达。在备选的方法中，可使样品与特异于所述生物标志物的抗体在足以形成抗体-生物标志物复合物的条件下接触，然后检测该复合物。可以许多途径来检测生物标志物的存在，如通过western印迹和elisa规程，其用于测定很多种组织和样品，包括血浆或血清。有大量使用这类测定形式的免疫测定技术，参见例如美国专利no.4,016,043，4,424,279和4,018,653。这些包括非竞争型的单位点和双位点二者或“三明治式”测定法，以及传统的竞争性结合测定法。这些测定法还包括经标记抗体对靶生物标志物的直接结合。选定的生物标志物在组织或细胞样品中的存在和/或表达水平/量还可经由功能性或基于活性的测定法来检查。例如，如果生物标志物是酶，可以进行本领域中已知的测定法来测定或检测给定的酶活性在组织或细胞样品中的存在。在某些实施方案中，针对测定的生物标志物的量中的差异和使用的样品质量中的可变性，以及测定轮数之间的变异性二者将样品标准化。这类标准化可通过检测并纳入特定标准化生物标志物(包括公知的看家基因)表达来实现。或者，标准化可基于所有测定基因或其较大子集的均值或中值信号(全局标准化办法)。在一个基因接一个基因的基础上，将受试者肿瘤mrna或蛋白质的测量的经标准化的量与在参照集中发现的量比较。每种mrna或蛋白质每份测试肿瘤每位受试者的经标准化表达水平可表示为在参照集中测量的表达水平的百分数。在要分析的特定受试者样品中测量的存在和/或表达水平/量将落在该范围内的某个百分数处，这可通过本领域中公知的方法来测定。在一个实施方案中，所述样品是临床样品。在另一个实施方案中，所述样品用在诊断性测定法中。在一些实施方案中，所述样品从原发性或转移性肿瘤获得。经常使用组织活组织检查(biopsy)来获得肿瘤组织的代表性的片/块。或者，可以以已知或认为含有感兴趣肿瘤细胞的组织或流体的形式间接获得肿瘤细胞。例如，可通过切除，支气管镜检，细针抽吸，支气管刷检，或从痰，胸膜液或血液获得肺癌损伤的样品。可从癌症或肿瘤组织或从其他身体样品如尿液，痰，血清或血浆检测基因或基因产物。上文论述的用于检测癌性样品中靶基因或基因产物的相同技术可应用于其他身体样品。癌细胞可能从癌损伤脱落并出现在这类身体样品中。通过筛选这类身体样品，可实现对这些癌症的简单的早期诊断。另外，通过测试这类身体样品中的靶基因或基因产物能更容易地监测治疗的进展。在某些实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织是来自同一受试者或个体的单一样品或组合的多重样品，其在不同于获得测试样品时的一个或多个时间点获得。例如，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织在早于获得测试样品时的时间点从同一受试者或个体获得。如果参照样品在癌症的初始诊断期间获得而测试样品在癌症变成转移性时的更晚时候获得，那么这类参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织可以是有用的。在某些实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织是来自一个或多个并非该受试者或个体的健康个体的组合的多重样品。在某些实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织是来自患有疾病或病症(例如癌症)的，并非该受试者或个体的一个或多个个体的组合的多重样品。在某些实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织是来自并非该受试者或个体的一个或多个个体的正常组织的合并rna样品或合并的血浆或血清样品。在某些实施方案中，参照样品，参照细胞，参照组织，对照样品，对照细胞或对照组织是来自患有疾病或病症(例如癌症)的，并非该受试者或个体的一个或多个个体的肿瘤组织的合并rna样品或合并的血浆或血清样品。在一些实施方案中，样品为来自个体的组织样品。在一些实施方案中，组织样品为肿瘤组织样品(例如活检组织)。在一些实施方案中，组织样品为肺组织。在一些实施方案中，组织样品为肾组织。在一些实施方案中，组织样品为皮肤组织。在一些实施方案中，组织样品为胰腺组织。在一些实施方案中，组织样品为胃组织。在一些实施方案中，组织样品为膀胱组织。在一些实施方案中，组织样品为食道组织。在一些实施方案中，组织样品为间皮组织。在一些实施方案中，组织样品为乳腺组织。在一些实施方案中，组织样品为甲状腺组织。在一些实施方案中，组织样品为结肠直肠组织。在一些实施方案中，组织样品为头和颈组织。在一些实施方案中，组织样品为骨肉瘤组织。在一些实施方案中，组织样品为前列腺组织。在一些实施方案中，组织样品为卵巢组织，hcc(肝)，血细胞，淋巴结，和/或骨/骨髓组织。在一些实施方案中，组织样品为结肠组织。在一些实施方案中，组织样品为子宫内膜样品。在一些实施方案中，组织样品为脑组织(例如成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，诸如此类)。在一些实施方案中，肿瘤组织样品(术语“肿瘤样品”在本文中可互换使用)可涵盖部分或整个由肿瘤细胞占据的肿瘤区域。在一些实施方案中，肿瘤或肿瘤样品可进一步涵盖由肿瘤相关肿瘤内细胞和/或肿瘤相关基质(例如毗邻的肿瘤周围促结缔组织增生性基质)占据的肿瘤区域。肿瘤相关肿瘤内细胞和/或肿瘤相关基质可包括与主要肿瘤块紧邻和/或毗邻的免疫浸润物(例如本文所述肿瘤浸润性免疫细胞)的区域。在一些实施方案中，肿瘤细胞染色表述为显示任何强度的膜染色的所有肿瘤细胞的百分比。浸润性免疫细胞染色可以表述为被显示任何强度的染色的免疫细胞占据的总肿瘤面积的百分比。总肿瘤面积涵盖恶性细胞以及肿瘤相关基质，包括紧邻和毗邻主要肿瘤块的免疫浸润物的面积。另外，浸润性免疫细胞染色可以表述为所有肿瘤浸润性免疫细胞的百分比。在任何方法的一些实施方案中，疾病或病症为肿瘤。在一些实施方案中，肿瘤为恶性癌性肿瘤(即癌症)。在一些实施方案中，肿瘤和/或癌症为实体瘤或非实体或软组织肿瘤。软组织肿瘤的例子包括白血病(例如慢性髓性白血病，急性髓性白血病，成人急性成淋巴细胞性白血病，急性髓性白血病，成熟b-细胞急性成淋巴细胞性白血病，慢性淋巴细胞性白血病，多形细胞性(polymphocytic)白血病，或毛细胞性白血病)或淋巴瘤(例如非何杰金(hodgkin)氏淋巴瘤，皮肤t-细胞淋巴瘤，或何杰金氏病)。实体瘤包括除血液，骨髓，或淋巴系统以外的身体组织的任何癌症。实体瘤可进一步分成上皮细胞起源的和非上皮细胞起源的。上皮细胞实体瘤的例子包括胃肠道，结肠，结直肠(例如基样(basaloid)结直肠癌)，乳腺，前列腺，肺，肾，肝，胰腺，卵巢(例如子宫内膜样(endometrioid)卵巢癌)，头和颈，口腔，胃，十二指肠，小肠，大肠，肛门，胆囊，阴唇，鼻咽，皮肤，子宫，男性生殖器官，泌尿器官(例如尿路上皮癌，发育异常尿路上皮癌，移行细胞癌)，膀胱，和皮肤的肿瘤。非上皮起源的实体瘤包括肉瘤，脑瘤，和骨瘤。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(nsclc)。在一些实施方案中，癌症为二线或三线局部晚期或转移性非小细胞肺癌。在一些实施方案中，癌症为腺癌。在一些实施方案中，癌症为鳞状细胞癌。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(nsclc)，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)，胃癌，结直肠癌(crc)，或肝细胞癌。在一些实施方案中，癌症为原发性肿瘤。在一些实施方案中，癌症为第二部位处自任何上述类型癌症衍生的转移性肿瘤。在任何方法的一些实施方案中，癌症展示人效应细胞(例如受到人效应细胞浸润)。用于检测人效应细胞的方法是本领域公知的，包括例如通过ihc。在一些实施方案中，癌症展示高水平的人效应细胞。在一些实施方案中，人效应细胞是nk细胞，巨噬细胞，单核细胞中的一项或多项。在一些实施方案中，癌症为本文中描述的任何癌症。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(nsclc)，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)，胃癌，结直肠癌(crc)，或肝细胞癌。在任何方法的一些实施方案中，癌症展示表达fcr的细胞(例如受到表达fcr的细胞浸润)。用于检测fcr的方法是本领域公知的，包括例如通过ihc。在一些实施方案中，癌症展示高水平的表达fcr的细胞。在一些实施方案中，fcr为fcγr。在一些实施方案中，fcr为活化性fcγr。在一些实施方案中，癌症为非小细胞肺癌(nsclc)，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌)，胃癌，结直肠癌(crc)，或肝细胞癌。在一些实施方案中，使用选自下组的方法在样品中检测pd-l1生物标志物：facs，western印迹，elisa，免疫沉淀，免疫组织化学，免疫萦光，放射免疫测定法，点印迹，免疫检测方法，hplc，表面等离振子共振，光谱术，质谱术，hplc，qpcr，rt-qpcr，多重qpcr或rt-qpcr，rna-seq，微阵列分析，sage，massarray技术，和fish，及其组合。在一些实施方案中，使用facs分析检测pd-l1生物标志物。在一些实施方案中，pd-l1生物标志物为pd-l1。在一些实施方案中，在血液样品中检测pd-l1表达。在一些实施方案中，在血液样品中的循环免疫细胞上检测pd-l1表达。在一些实施方案中，循环免疫细胞为cd3+/cd8+t细胞。在一些实施方案中，在分析之前，自血液样品分离免疫细胞。可以使用分离/富集此类细胞群体的任何合适方法，包括但不限于细胞分选。在一些实施方案中，来自个体的样品中的pd-l1表达响应pd-l1/pd-1轴途径的抑制剂(诸如抗pd-l1抗体)治疗而升高。在一些实施方案中，血液样品中的循环免疫细胞(诸如cd3+/cd8+t细胞)上的pd-l1表达升高。本文中提供的是用于监测ox40激动剂治疗的药效学活性的方法，其通过在自受试者获得的包含白细胞的样品中测量一种或多种标志物基因，蛋白质(例如细胞因子，例如γ干扰素)和/或细胞组成(例如treg的百分比和/或treg的绝对数；例如cd8+效应t细胞的数目)的表达水平，其中该受试者已经用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)治疗，且其中该一种或多种标志物基因选自t细胞标志物基因，或记忆t细胞标志物基因(例如t效应记忆细胞的标志物)；并基于与参照相比自受试者获得的样品中一种或多种标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平确定该治疗为展现药效学活性，其中一种或多种标志物基因的表达水平与参照相比升高指示ox40激动剂治疗的药效学活性。标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平可以通过一种或多种本文所述方法来测量。如本文中使用的，“药效学(pd)活性”可以指治疗(例如与pd-1轴拮抗剂治疗组合的ox40激动剂)对受试者的效果。pd活性的一个例子可以包括调控一种或多种基因的表达水平。不希望受理论束缚，认为监测pd活性(诸如通过测量基因标志物的表达)在检查ox40激动剂和pd-1轴拮抗剂的临床试验期间可能是有利的。例如，可以使用监测pd活性来监测对治疗的响应，毒性，诸如此类。在一些实施方案中，可以将一种或多种标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平与参照比较，参照可以包括来自未接受治疗(例如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)的受试者的样品。在一些实施方案中，参照可以包括在接受治疗(例如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)之前来自同一受试者的样品。在一些实施方案中，参照可以包括来自接受治疗(例如与pd-1轴拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)的其他受试者的一份或多份样品的参照值。例如，可以治疗一个患者群体，并可以作为整体自该群体生成一种或多种基因的表达水平的均值，平均值，或中值。可以研究来自一个群体的自具有共享特征(例如相同的癌症类型和/或阶段，或暴露于共同的治疗，诸如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂)的癌症获得的一个样品套组，诸如以临床结局研究。可以使用这个套组来推导参照，例如可以与受试者的样品比较的参照数。可以使用本文所述任何参照作为监测pd活性的参照。本文中提供的是用于监测受试者对ox40激动剂治疗的响应性的方法，其通过在自受试者获得的包含白细胞的样品中测量一种或多种标志物基因，蛋白质(例如细胞因子，例如γ干扰素)和/或细胞组成(例如treg的百分比和/或treg的绝对数；例如cd8+效应t细胞的数目，外周血样品中)的表达水平，其中该受试者已经用pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)治疗，且其中该一种或多种标志物基因选自t细胞标志物基因，或记忆t细胞标志物基因(例如t效应记忆细胞的标志物)；并基于与参照相比自受试者获得的样品中一种或多种标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平将受试者归类为对治疗响应性的或非响应性的，其中一种或多种标志物基因的表达水平与参照相比升高指示对ox40激动剂治疗的响应性或缺失响应性。标志物基因，蛋白质和/或细胞组成的表达水平可以通过一种或多种本文所述方法来测量。在一些实施方案中，用于监测响应性的参照可以包括来自未接受治疗(例如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)的受试者的样品。在一些实施方案中，用于监测响应性的参照可以包括在接受治疗(例如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)之前来自同一受试者的样品。在一些实施方案中，用于监测响应性的参照可以包括来自接受治疗(例如与pd-1轴结合拮抗剂组合的ox40激动剂治疗)的其他患者的一份或多份样品的参照值。例如，可以治疗一个患者群体，并可以作为整体自该群体生成一种或多种基因的表达水平的均值，平均值，或中值。可以研究来自一个群体的自具有共享特征(例如相同的癌症类型和/或阶段，或暴露于共同的治疗，诸如ox40激动剂)的癌症获得的一个样品套组，诸如以临床结局研究。可以使用这个套组来推导参照，例如可以与受试者的样品比较的参照数。可以使用本文所述任何参照作为监测pd活性的参照。本公开文本的某些方面涉及测量样品中一种或多种基因或一种或多种蛋白质的表达水平。在一些实施方案中，样品可以包括白细胞。在一些实施方案中，样品可以是外周血样品(例如来自具有肿瘤的患者)。在一些实施方案中，样品是肿瘤样品。肿瘤样品可以包括癌细胞，淋巴细胞，白细胞，基质，血管，结缔组织，基板(basallamina)，和与肿瘤有关的任何其它细胞类型。在一些实施方案中，样品是含有肿瘤浸润性白细胞的肿瘤组织样品。在一些实施方案中，可以加工样品以分出或分离一种或多种细胞类型(例如白细胞)。在一些实施方案中，可以在没有分出或分离细胞类型的情况下使用样品。可以通过任何本领域已知方法自受试者获得肿瘤样品，包括但不限于活检，内窥镜检查，或手术规程。在一些实施方案中，可以通过诸如冷冻，固定(例如通过使用福尔马林或类似固定剂)，和/或在石蜡中包埋等方法来制备肿瘤样品。在一些实施方案中，可以将肿瘤样品切片。在一些实施方案中，可以使用新鲜肿瘤样品(即尚未通过上文所述方法制备的)。在一些实施方案中，可以通过在溶液中温育以保持mrna和/或蛋白质完整性来制备肿瘤样品。在一些实施方案中，样品可以是外周血样品。外周血样品可以包括白血球，pbmc，诸如此类。可以使用任何本领域已知技术自外周血样品分离白细胞。例如，可以采集血液样品，可以裂解红血球，并且可以分离白血球团粒，用作样品。在另一个例子中，使用密度梯度分离将白细胞(例如pbmc)与红血球分开。在一些实施方案中，可以使用新鲜外周血样品(即尚未通过上文所述方法制备的)。在一些实施方案中，可以通过在溶液中温育以保持mrna和/或蛋白质完整性来制备外周血样品。在一些实施方案中，对治疗的响应性可以指下述任一项或多项：延长存活(包括总体存活和无进展存活)；导致客观响应(包括完全响应或部分响应)；或改善癌症的体征或症状。在一些实施方案中，响应性可以指依照recist指导方针用于测定癌症患者中的肿瘤的状态(即响应，稳定，或进展)的已发表套组的一项或多项因素的改善。关于这些指导方针的更加详细的讨论，参见eisenhaueretal.,eurjcancer2009,45:228-47；topalianetal.,nengljmed2012,366:2443-54；wolchoketal.,clincanres2009,15:7412-20；和therasse,p.etal.,j.natl.cancerinst.92:205-16(2000)。响应性受试者可以指其癌症显示改善的受试者，例如依照一项或多项基于recist标准的因素。非响应性受试者可以指其癌症不显示改善的受试者，例如依照一项或多项基于recist标准的因素。常规响应标准可能不适合表征免疫治疗剂的抗肿瘤活性，免疫治疗剂能产生延迟的响应，之前可以有初始明显放射学进展，包括出现新损害。因此，已经开发了改良的响应标准，其考虑了可能出现新损害且容许在后续评估时确认放射学进展。因而，在一些实施方案中，响应性可以指依照免疫相关响应标准2(irrc)的一项或多项因素的改善。参见例如wolchoketal.,clincanres2009,15:7412-20。在一些实施方案中，将新损害添加入限定的肿瘤负荷中，并且在后续评估时跟踪例如放射学进展。在一些实施方案中，非靶损害的存在包括在完全响应的评估中，而且不包括在放射学进展的评估中。在一些实施方案中，放射学进展可以只在可测量疾病的基础上测定，和/或可以通过自第一次记录日起≥4周的连贯评估来确认。在一些实施方案中，响应性可以包括免疫激活。在一些实施方案中，响应性可以包括治疗功效。在一些实施方案中，响应性可以包括免疫激活和治疗功效。vi.制品或试剂盒在本发明的另一个实施方案中，提供包含pd-1轴结合拮抗剂和/或ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)的制品或试剂盒。在一些实施方案中，该制品或试剂盒进一步包含包含说明书的包装插页，该说明书关于与ox40结合激动剂联合使用该pd-1轴结合拮抗剂来在个体中治疗癌症或延迟癌症进展或增强具有癌症的个体的免疫功能。该制品或试剂盒中可以包括本文所述任何pd-1轴结合拮抗剂和/或ox40结合激动剂。在一些实施方案中，pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)在同一容器中或在分开的容器中。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，袋和注射器。容器可用各种材料制成，诸如玻璃，塑料(诸如聚氯乙烯或聚烯烃)，或金属合金(诸如不锈钢或hastelloy)。在一些实施方案中，容器装有配制剂，而且该容器上或关联的标签可指示使用说明。制品或试剂盒可进一步包括从商业和用户立场看想要的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针头，注射器，和印有使用说明的包装插页。在一些实施方案中，制品进一步包括一种或多种别的药剂(例如化疗剂和抗肿瘤剂)。对于所述一种或多种别的药剂合适的容器包括例如瓶，管形瓶，袋和注射器。认为本说明书足以使得本领域技术人员实施本发明。根据上述描述，在本文所示和所述之外对本发明的各种更改对本领域技术人员会变得显然，且落在所附权利要求的范围之内。通过述及将本文中引用的所有出版物，专利，和专利申请完整收入本文，用于所有目的。实施例通过参考下述实施例，会更加全面地理解本发明。然而，它们不应解释为限制本发明的范围。要理解，本文中描述的实施例和实施方案只是出于例示目的，而且根据它们，本领域技术人员会想到各种变更和变化，而且它们被包括在本申请的精神和范围及所附权利要求的范围内。材料和方法体内肿瘤模型：在genentech维持ct26和mc38结直肠细胞系。对于ct26研究，给8-10周龄雌性balb/c小鼠(charlesriverlaboratories；hollister，ca)在右体侧中单侧皮下接种0.1x106个ct26细胞。对于mc38研究，8-10周龄雌性c57bl/6小鼠(charlesriverlaboratories)在右体侧中单侧接种皮下0.1x106个mc38细胞。当肿瘤达到大约150mm3的均值肿瘤体积时，征募小鼠，随机化分入各处理组，并在接下来的第1天开始抗体处理。所有动物研究是依照动物福利法案和实验动物护理和使用指南和iacuc指导方针中规定的指导方针和规章制度进行的。处理组如下：1)对照抗体，10mg/kgiv第一剂，接着是5mg/kgip，biwx2，n＝5；2)鼠抗小鼠ox40激动性单克隆抗体(一种具有自ox86抗体衍生的大鼠抗小鼠ox40可变区和小鼠igg2afc的嵌合抗体。因而，此鼠抗体能够实现效应器功能，包括但不限于adcc)，0.1mg/kgiv第一剂，接着是ip，tiwx2，n＝5；3)鼠抗pd-l1，10mg/kgiv第一剂，接着是5mg/kgip，tiwx2，n＝5；和4)鼠抗小鼠ox40单克隆抗体，0.1mg/kgiv第一剂，接着是ip，tiwx2和鼠抗pd-l1，10mg/kgiv第一剂，接着是5mg/kgiptiwx2，n＝5。在第一剂后的第9天处死小鼠并收获外周血。抗体：所有处理抗体是在genentech生成的。对照抗体是抗gp120小鼠igg1，克隆10e7.1d2。抗ox40抗体是克隆ox-86小鼠-igg2a(通过将大鼠抗小鼠ox40激动性抗体ox-86克隆到鼠igg2a主链上生成)，而抗pd-l1是克隆6e11.1.9小鼠igg1。剂量给药进度表如图例上指示的，第一剂或单剂静脉内(iv)施用，而后续剂腹膜内(ip)给予。在pbs或20mm组氨酸乙酸酯，240mm蔗糖，0.02％聚山梨酯20，ph5.5中稀释抗体。tiw指示一周施用三次，biw指示一周施用两次。肿瘤加工和流式细胞术：收获肿瘤，并用剃须刀片切碎，之后在含5％胎牛血清加0.25mg/ml胶原酶d(roche；indianapolis，in)和0.1mg/mldna酶i(roche)的rpmi-1640培养基中在c管(miltenyibiotec；sandiego，ca)中在摇动平台上于37℃消化15分钟。温育后，在gentlemacs(miltenyibiotec)上加工肿瘤，过滤，并清洗以生成单细胞悬浮液。在vi-cell计数器(beckmancoulter；brea，ca)上对细胞计数。通过流式细胞术对外周血评估t细胞的活化和增殖。用针对cd45，cd3，cd4，cd8，cxcr3(都是bdbiosciences)和ki67(ebiosciences)的商品化抗体遵照制造商的说明书对50ul血液染色。首先将细胞用生/死近红外存活力染料(lifetechnologies；grandisland，ny)在pbs中在冰上染色30分钟，然后清洗。然后用纯化后的抗cd16/-cd32(bdbiosciences；sanjose，ca)对细胞封闭fc受体，之后在冰上在pbs+0.5％bsa+2mmedta缓冲液中后续表面染色30分钟。为了评估t细胞的pd-1和ox40表达，如下对细胞染色：pd1-fitc，cd3-percp.cy5.5，cd4-pe-cy7，cd8pacificblue，cd45v500，(bdbiosciences)；ox40alexafluor647(genentech，克隆1h1)。为了评估各种细胞类型的pd-l1表达，如下染色：cd11b-fitc，gr-1pe-cy7，cd8alexa700，cd45v500，cd4-percp.cy5.5(bdbiosciences)；pdl1-生物素(genentech，克隆6f8.2.5)，接着是链霉亲合素-pe(bdbioscience)。为了评估foxp3+t调节细胞群，首先用cd45-pe-cy7，cd4percp-cy5.5(bdbiosciences)对细胞表面染色，然后在1xfoxp3固定/透化缓冲液(ebioscience；sandiego，ca)中于4℃固定过夜。然后将细胞在1xfoxp3透化缓冲液(ebioscience)中透化，并用foxp3-fitc(ebioscience)染色。在fortessa或facscantoii(bdbiosciences)上使用facsdiva软件获取染色后的细胞，接着在flowjo软件上分析。肿瘤解剖和fluidigm表达分析：如描述的那样(powles,t.etal.(2014)nature515:558-62；herbst,r.s.etal.(2014)nature515:563-7)，自ubc或nsclc的ffpe衍生存档肿瘤提取rna。简言之，宏观解剖肿瘤ffpe切片以富集赘生组织，并使用肿瘤裂解缓冲液和蛋白酶k裂解组织以容许完全消化和释放核酸。使用高纯ffperna微量试剂盒(rocheappliedsciences，indianapolis，in)依照制造商的方案分离rna。如先前描述的那样(shames,d.s.etal.(2013)plosone8:e56765)，使用biomarkhd实时pcr平台(fluidigm)实施基因表达分析。表达小组中的所有taq-man测定法是fam-mgb且经由lifetechnologies定制的，或是依订单制作的或是客户设计的，包括四种参照基因：sp2，gusb，tmem55b和vps33b。为每份样品计算四种参照基因(sp2，gusb，tmem55b和vps33b)的ct值的几何中值，并如下使用δct(dct)方法测定表达水平：ct(靶基因)2几何中值ct(参照基因)。使用研究中的患者间的中值mrna表达水平(如通过免疫芯片(ichip)测定的)作为截留来推导高对低表达分类。通过t检验来确定p值。pd-l1免疫组织化学(ihc)：分析癌细胞系或肿瘤样品的福尔马林固定，石蜡包埋的(ffpe)切片。在抗原修复之前，将福尔马林固定，石蜡包埋的组织切片脱石蜡，封闭，并与抗pd-l1抗体一起温育。与二抗一起温育和酶促显色之后，将切片复染色并在系列醇和二甲苯中脱水，之后盖上盖玻片。使用下述方案进行ihc。对于4mm厚的福尔马林固定，石蜡包埋的(ffpe)组织切片，使用4.3mg/ml的浓度在自动化染色平台上用抗人pd-l1家兔单克隆抗体对pd-l1染色，通过二氨基联苯胺显现信号；将切片用苏木精复染色。使用下面的打分方案评估肿瘤浸润性免疫细胞上的pd-l1表达：使用下述试剂和材料，使用ventanabenchmarkxt或benchmarkultra系统实施pd-l1ihc染色：一抗：抗pd-l1家兔单克隆一抗标本类型：不同染色强度的组织样品和对照细胞团粒的福尔马林固定，石蜡包埋(ffpe)切片规程物种：人仪器：benchmarkxt或benchmarkultra表位恢复条件：细胞条件化，标准1(cc1，ventana，产品目录#950-124)一抗条件：1/100，6.5μg/ml/于36℃16分钟稀释剂：抗体稀释缓冲液(含有载体蛋白和brig-35的tris缓冲盐水)阴性对照：未免疫家兔igg，6.5μg/ml(cellsignaling)或单独的稀释剂检测：依照制造商的说明书(ventana)使用optiview或ultraview通用dab检测试剂盒(ventana)和扩增试剂盒(如果适用的话)。复染色：ventana苏木精ii(产品目录#790-2208)/带发蓝试剂(产品目录#760-2037)(分别为4分钟和4分钟)benchmark方案如下：1.石蜡(选择)2.脱石蜡(选择)3.细胞条件化(选择)4.调节器#1(选择)5.标准cc1(选择)6.抗体温育温度(选择)7.36℃抗体温育(选择)8.滴定(选择)9.自动分发(一抗)，并温育(16分钟)10.复染色(选择)11.应用一滴(苏木精ii)(复染色)，应用盖玻片，并温育(4分钟)12.后复染色(选择)13.应用一滴(发蓝试剂)(后复染色)，应用盖玻片，并温育(4分钟)14.在肥皂水中清洗载玻片以去除油15.用水漂洗载玻片16.经由95％乙醇，100％乙醇至二甲苯使载玻片脱水(leica自动染色机程序#9)17.盖上盖玻片。结果已知ox40是在活化的cd4t效应(teff)细胞和t调节(treg)细胞上表达的一种共刺激分子。ox40不在幼稚t细胞上组成性表达，但是在t细胞受体(tcr)卷入后诱导。已知在tcr刺激存在下ox40的连接经强化teff细胞活化和抑制treg细胞的双重机制增强t效应细胞功能。发现抗ox40处理在体外treg遏制测定法中降低treg活性。这些结果表明ox40激动剂处理能够调控数种关键t细胞功能。已经提出抑制pd-l1信号传导作为增强t细胞免疫来治疗癌症(例如肿瘤免疫)和感染(包括急性和慢性(例如持久)感染二者)的一种手段。我们检查了肿瘤内t细胞是否表达pd-1和ox40。如图1所示，肿瘤内cd8+t细胞表达抑制性受体诸如pd-1，但是较大比例的这些细胞还表达ox40。这个结果提示teff细胞的ox40刺激可能抵消t细胞上表达的pd-1和其它抑制性受体的作用。用抗ox40激动性抗体(单一药剂)处理显著降低肿瘤内foxp3+调节t细胞相对于cd45+细胞总数的比例(cd45定义所有造血细胞，诸如白细胞；图2a)，并且显著降低肿瘤内foxp3+treg的绝对数(图2b)。另外，用抗ox40激动性抗体和抗pd-l1拮抗性抗体的组合处理显著降低肿瘤内foxp3+调节t细胞相对于cd45+细胞总数的比例(图2a)以及肿瘤内foxp3+treg的绝对数(图2b)。这些结果表明ox40激动剂介导的肿瘤内foxp3+treg减少在与抗pd-l1拮抗剂组合施用ox40激动剂时得到维持。我们检查了ox40激动性处理对pd-l1表达的影响。抗ox40激动剂处理显著提高肿瘤细胞和肿瘤内髓样细胞中的pd-l1表达，提示pd-l1能以负反馈方式限制抗ox40功效(图3a和b)。不受理论束缚，这些结果提示ox40激动剂处理可增强pd-1轴抑制剂处理，因为ox40激动剂处理提高pd-l1表达。临床数据将升高的pd-l1表达关联为强化对pd1轴拮抗剂(例如抗pd-l1拮抗性抗体)的响应。抗ox40激动性抗体和抗pd-l1拮抗性抗体处理在ct26和mc38结直肠癌同基因肿瘤模型中展现出协同性组合功效(图4a和b，5a和b)。分析个体肿瘤体积测量(来自每个实验的个体小鼠；图4b，5b)揭示了组合处理动物以与用任一药剂(ox40激动剂，pd-l1拮抗剂)单独处理的动物相比更高的频率显示出显著的肿瘤尺寸缩小。换言之，组合处理动物中具有部分和完全响应的动物的频率与用任一药剂单独处理的动物相比显著更高。分析自组合处理ct26小鼠采集的外周血揭示了效应细胞增殖和炎性t细胞标志物的升高(图9a，b，c，和d)。检测了cd8+t细胞增殖(图9a)，treg细胞(图9b)，血浆干扰素γ水平(图9c)和活化后的t细胞(图9d)的水平。组合分支中(相对于任一单一药剂分支)增殖(ki67)，血浆干扰素γ，和炎性标志物(tbet，cxcr3)的升高揭示了抗pd-l1(检查点阻断)和抗ox40(共刺激)行动的协同作用。具体而言，用ox40激动剂和pd-l1拮抗剂组合处理的动物中增殖中的cd8+t细胞的水平(以ki67+/总cd8+t细胞的百分比表示)与用ox40激动性或pd-l1拮抗剂单独处理相比显著升高(图9a)。组合处理的动物中增殖中的cd8+t细胞的水平大于单一药剂处理群的加合效应，表明ox40激动剂处理与pd-1轴抑制组合的协同效应能通过分析外周血标志物和细胞来检测。另外，对ox40激动剂单一药剂处理观察到降低的外周血treg，而且外周血treg的降低在(ox40激动剂和pd-l1拮抗剂)组合疗法分支中得到维持(图9b)。对ox40激动剂和pd-l1拮抗剂组合观察到升高的血浆γ干扰素(图9c)。趋化因子受体cxcr3是cxc趋化因子受体家族中的一种gαi蛋白偶联受体。cxcr3有两种不同变体：cxcr3-a结合cxc趋化因子cxcl9(mig)，cxcl10(ip-10)，和cxcl11(i-tac)，而cxcr3-b在cxcl9，cxcl10，和cxcl11以外还能结合cxcl4(clark-lewis,i.etal.(2003)j.biol.chem.278(1):289-95)。cxcr3主要在活化后的t淋巴细胞和nk细胞，和一些上皮细胞上表达。cxcr3和ccr5优先在th1细胞上表达，而且在效应记忆cd8t细胞上上调(groom,j.r.andluster,a.d.(2011)exp.cellres.317(5):620-31)。cxcr3能够调节白细胞交通。趋化因子结合cxcr3诱导多种细胞应答，最值得注意的是整联蛋白活化，细胞骨架变化和炎性细胞的趋化迁移(groom,j.r.andluster,a.d.(2011)exp.cellres.317(5):620-31)。用ox40激动剂和pd-l1拮抗剂组合处理的动物中活化后的t细胞(具体而言，活化后的记忆teff细胞，使用cxcr3标志物测定)的水平与用ox40激动性或pd-l1拮抗剂单独处理相比显著升高(图9d)。组合处理动物中t记忆效应细胞(cxcr3+)的水平大于单一药剂处理群的加合效应，表明ox40激动剂处理与pd-1轴抑制组合的协同效应能通过分析外周血标志物和细胞来检测。组合处理分支中cd8t细胞上增殖(ki67)和炎性标志物(cxcr3)的升高可提示细胞毒性经由抗pd-l1(检查点阻断)和抗ox40(共刺激)行动的协同作用而增强。另外，通过所分析的组合处理肿瘤样品中效应和炎性t细胞标志物(例如通过rtpcr(fluidigm))与用任一药剂单独处理的样品相比的升高来检测组合处理效果。例如，可以分析treg(fox3p)，cd8+teffs(cd8b)，和活化后的t细胞(例如tbet，cxcr3，例如干扰素γ应答相关基因)的标志物。在ct26结直肠癌同基因肿瘤模型中进行了实验来检查ox40激动性抗体处理的剂量-响应效应。抗ox40激动性抗体单一药剂处理显示剂量响应性(图6a，b)。0.1mg/ml剂量显示出亚最大功效，选择它用于进一步组合处理实验。图7a和b显示用亚治疗剂量的抗ox40激动性抗体与抗pd-l1拮抗性抗体组合处理的结果，与用任一药剂单独处理比较。观察到协同性组合功效，提示该ox40激动性抗体最大有效剂量可能在与pd-1轴拮抗剂组合处理时更低。图8a和b显示用单剂亚治疗水平的抗ox40激动性抗体与抗pd-l1拮抗性抗体组合处理的结果，与用任一药剂单独处理比较。观察到协同性组合功效，提示该ox40激动性抗体最大有效剂量可能在与pd-1轴拮抗剂组合提供ox40激动性抗体时更低。图10显示在来自具有尿道上皮膀胱癌(ubc)和非小细胞肺癌(nsclc)的人患者的癌症样品中ox40表达与pd-l1诊断状态的关联。组织样品来自参与抗pd-l1抗体mpdl3280a的1期临床试验的患者。如本文中公开的，使用ihc测定肿瘤浸润性免疫细胞(ic)的pd-l1生物标志物状态。使用rtpcr分析(fluidigm)测定ox40表达水平。在ubc中，在具有0或1的pd-l1ihc状态的患者中观察到ox40表达。ox40表达的水平与pd-l1ihc状态有关联，其中升高的pd-l1表达与升高的ox40表达有关联。在nsclc中，在具有低或无pd-l1表达(通过ihc)的患者中(以及在具有2和3的pd-l1ihc状态的样品中)观察到ox40表达。这些结果提示(a)pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)组合治疗在具有pd-l1ihc0和/或1状态的患者中改善的响应的潜力；(b)pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)组合治疗在不响应在先pd-1轴结合拮抗剂治疗的患者中改善的响应的潜力；和(c)pd-1轴结合拮抗剂和ox40结合激动剂(例如抗人ox40激动性抗体)组合治疗在具有pd-l1ihc2和/或3状态的患者中改善的响应的潜力。评估抗pd-l1抗体mpdl3280a用于治疗癌症的一项临床研究的结果提示pd-l1表达与对mpdl3280a的临床响应有关。发现了肿瘤浸润性免疫细胞pd-l1表达与治疗响应的关联表现出比肿瘤细胞pd-l1表达的关联更强。肿瘤浸润性免疫细胞可能对ifng表达更加敏感，而且可能优先起作用来阻抑治疗前预先存在的t细胞应答(herbst,r.s.etal(2014)nature515:563-7)。不希望受理论束缚，认为ox40激动剂处理可能提高ifng表达，引起肿瘤浸润性免疫细胞中增强的pd-l1表达和伴随的升高的对pd-1轴结合拮抗剂处理的响应性。包括ox40结合激动剂和pd-1轴结合拮抗剂的组合处理可能因此在治疗具有较低pd-l1生物标志物状态的患者中是有用的。通过ihc对pd-l1表达打分：通过ihc在人福尔马林固定，石蜡包埋(ffpe)组织中使用能检测pd-l1的抗pd-l1特异性抗体评估肿瘤标本中pd-l1表达的存在或缺失。为了测量和量化肿瘤样品中pd-l1的相对表达，开发了一种pd-l1ihc打分系统来测量肿瘤细胞和肿瘤浸润性免疫细胞中的pd-l1特异性信号。免疫细胞定义为具有淋巴样和/或巨噬细胞/组织细胞形态的细胞。肿瘤细胞染色表述为显示任何强度的膜染色的所有肿瘤细胞的百分比。浸润性免疫细胞染色定义为被显示任何强度的染色的免疫细胞占据的总肿瘤面积的百分比。总肿瘤面积涵盖恶性细胞以及肿瘤相关基质，包括紧邻和毗邻主要肿瘤块的免疫浸润物的面积。另外，浸润性免疫细胞染色定义为所有肿瘤浸润性免疫细胞的百分比。pd-l1染色强度在肿瘤组织中有较宽的动态范围。不管亚细胞定位，还将信号分类为强，中等，弱，或阴性染色。如图11所示，阴性信号强度特征在于缺失任何可检测信号，如使用hek-293细胞例示的(图11a)。比较而言，阳性信号强度特征在于金色至深褐色膜染色，如使用用重组人pd-l1转染的hek-293细胞例示的(图11b-d)。最后，阳性信号强度还通过胎盘滋养层的染色(图11e)和扁桃体隐窝区域中的强染色(图11f)来例示，而且常常是膜样式，特征为金色至深褐色染色。在肿瘤组织中，pd-l1阴性样品限定为使用20倍物镜评估时没有可检测信号或只有弱胞质背景染色。比较而言，pd-l1阳性样品主要呈现肿瘤细胞和/或浸润性免疫细胞中的膜染色。以不同强度观察pd-l1染色，从弱(纤细，浅褐色膜)到强(深褐色厚膜，在低放大率轻易认出)。图12显示三种代表性pd-l1阳性肿瘤样品：对于三重阴性乳腺癌，观察到大多数肿瘤细胞是pd-l1强阳性的，显示膜和胞质染色的组合(100倍放大率)(图12a)。对于恶性黑素瘤，观察到一簇免疫细胞，它们中的一些具有pd-l1膜染色，以及罕见的肿瘤细胞(箭)，它们具有pd-l1膜染色(400倍放大率)(图12b)。对于nsclc，腺癌，观察到一簇免疫细胞具有强pd-l1染色，数个肿瘤细胞(箭)具有膜和/或胞质pd-l1染色(400倍放大率)(图12c)。阳性案例中的染色趋向于就空间分布和强度而言集中。目测估算显示任何强度的染色的肿瘤或免疫细胞的百分比并用于确定pd-l1状态。使用同种型阴性对照来评估测试样品中背景的存在情况。染色要求一系列组织切片用于h&e，第二系列组织切片用于抗pd-l1，和第三系列组织切片用于同种型阴性对照抗体。使用经pd-l1转染的hek-293细胞系对照或扁桃体载玻片作为测定法特异性的参照和运行对照。pdl-1状态标准上文所示表格描述使用pd-l1染色标准来测定pd-l1状态的一个实施方案。在另一个实施方案中，具有ihc0和/或1的ihc得分的样品可认为是pd-l1阴性的，而具有ihc2和/或3的ihc得分的样品可认为是pd-l1阳性的。在一些实施方案中，评估肿瘤自身的pd-l1表达(例如pd-l1染色)。在一些情况中，pd-l1阳性状态可包含肿瘤细胞或肿瘤浸润性免疫细胞中存在任何强度的可辨别的pd-l1染色，直至50％的被肿瘤细胞，相关肿瘤内，和连续肿瘤周围促结缔组织生成性基质占据的肿瘤面积。如此，pd-l1阳性染色包括高至50％的肿瘤细胞或肿瘤浸润性免疫细胞显示任何强度的染色。如上所述评估用抗pd-l1染色的可评估载玻片。阴性染色强度特征在于缺失任何可检测信号或表现为浅灰色至蓝色(而非褐色或棕色)的信号且缺失膜增强。如果没有(例如缺失)膜染色，那么该案例为阴性。尽管为了清楚理解的目的已经通过举例说明的方式较为详细地描述了上述发明，说明书和实施例不应解释为限制发明范围。通过述及明确收录本文中引用的所有专利和科学文献的完整公开内容。序列表<110>基因泰克公司（genentech,inc.）j·张（cheung,jeanne）m·侯赛尼（huseni,mahrukh）j·金姆（kim,jeong）<120>包含ox40结合激动剂和pd-1轴结合拮抗剂的组合疗法<130>146392630640<140>未指派<141>随本文<150>us62/093,400<151>2014-12-17<150>us62/080,991<151>2014-11-17<160>62<170>fastseqforwindowsversion4.0<210>1<211>10<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>1glyphethrpheseraspsertrpilehis1510<210>2<211>18<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>2alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval151015lysgly<210>3<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>3arghistrpproglyglypheasptyr15<210>4<211>11<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>4argalaserglnaspvalserthralavalala1510<210>5<211>7<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>5seralaserpheleutyrser15<210>6<211>9<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>6glnglntyrleutyrhisproalathr15<210>7<211>118<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>7gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheseraspser202530trpilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval505560lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargarghistrpproglyglypheasptyrtrpglyglnglythr100105110leuvalthrvalserser115<210>8<211>122<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>8gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalglnproglygly151015serleuargleusercysalaalaserglyphethrpheseraspser202530trpilehistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alatrpileserprotyrglyglyserthrtyrtyralaaspserval505560lysglyargphethrileseralaaspthrserlysasnthralatyr65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alaargarghistrpproglyglypheasptyrtrpglyglnglythr100105110leuvalthrvalserseralaserthrlys115120<210>9<211>108<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>9aspileglnmetthrglnserproserserleuseralaservalgly151015aspargvalthrilethrcysargalaserglnaspvalserthrala202530valalatrptyrglnglnlysproglylysalaprolysleuleuile354045tyrseralaserpheleutyrserglyvalproserargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglnpro65707580gluaspphealathrtyrtyrcysglnglntyrleutyrhisproala859095thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysarg100105<210>10<211>440<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>10glnvalglnleuvalgluserglyglyglyvalvalglnproglyarg151015serleuargleuaspcyslysalaserglyilethrpheserasnser202530glymethistrpvalargglnalaproglylysglyleuglutrpval354045alavaliletrptyraspglyserlysargtyrtyralaaspserval505560lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleuphe65707580leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys859095alathrasnaspasptyrtrpglyglnglythrleuvalthrvalser100105110seralaserthrlysglyproservalpheproleualaprocysser115120125argserthrsergluserthralaalaleuglycysleuvallysasp130135140tyrpheprogluprovalthrvalsertrpasnserglyalaleuthr145150155160serglyvalhisthrpheproalavalleuglnserserglyleutyr165170175serleuserservalvalthrvalproserserserleuglythrlys180185190thrtyrthrcysasnvalasphislysproserasnthrlysvalasp195200205lysargvalgluserlystyrglyproprocysproprocysproala210215220proglupheleuglyglyproservalpheleupheproprolyspro225230235240lysaspthrleumetileserargthrprogluvalthrcysvalval245250255valaspvalserglngluaspprogluvalglnpheasntrptyrval260265270aspglyvalgluvalhisasnalalysthrlysproarggluglugln275280285pheasnserthrtyrargvalvalservalleuthrvalleuhisgln290295300asptrpleuasnglylysglutyrlyscyslysvalserasnlysgly305310315320leuproserserileglulysthrileserlysalalysglyglnpro325330335arggluproglnvaltyrthrleuproproserglngluglumetthr340345350lysasnglnvalserleuthrcysleuvallysglyphetyrproser355360365aspilealavalglutrpgluserasnglyglnprogluasnasntyr370375380lysthrthrproprovalleuaspseraspglyserphepheleutyr385390395400serargleuthrvalasplysserargtrpglngluglyasnvalphe405410415sercysservalmethisglualaleuhisasnhistyrthrglnlys420425430serleuserleuserleuglylys435440<210>11<211>214<212>prt<213>人工序列<220><223>合成的构建物<400>11gluilevalleuthrglnserproalathrleuserleuserprogly151015gluargalathrleusercysargalaserglnservalsersertyr202530leualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleuile354045tyraspalaserasnargalathrglyileproalaargphesergly505560serglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglupro65707580gluaspphealavaltyrtyrcysglnglnserserasntrpproarg859095thrpheglyglnglythrlysvalgluilelysargthrvalalaala100105110pros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