枸橼酸喷托维林抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用的制作方法

本发明涉及一种药物新的抗肿瘤作用。具体地说，本发明涉及一种非临床抗肿瘤药物，被发现具有抗肿瘤作用，主要是能够显著抑制肝癌hepg2细胞的增殖。

背景技术：

临床试验是新药研制的最后一环，它需要花费巨资资金。老药新用，特别是发现经过长期临床实践应用的“老药”具有新用途的意义十分巨大，其价值绝不低于发现一种新药。目前几乎没有一种药物能达到完全治愈肝癌患者的功能，因此，寻找一种有效的、特异的、毒副作用小的新型抗肿瘤药物是至关重要的。

很多老药的新用途都是临床医生在临床实践中发现的，具有较大的偶然性。如果有意识，有计划地检测一些临床用药的新用途，就可能更快地，更多地发现它们的新用途，应用于临床，会缓解甚至解除患者的病痛，会产生很大的社会效益和经济效益。这是一种有效的和节俭的发现新药的途径。

枸橼酸喷托维林是非临床抗肿瘤药物，利用肝癌hepg2细胞筛选一些临床用药，可能发现它们抗肿瘤作用的新用途。

技术实现要素：

在本发明中在国际上首次发现枸橼酸喷托维林这种非临床抗肿瘤药物，具有抗肿瘤作用。具体说，枸橼酸喷托维林都能够显著抑制肝癌hepg2细胞的增殖。

枸橼酸喷托维林对肝癌hepg2细胞生存率的抑制作用。使用浓度为60μm至90μm的枸橼酸喷托维林，处理肝癌hepg2细胞48h，应用mtt方法检测细胞存活率，结果显示，枸橼酸喷托维林能够以浓度依赖的方式显著抑制肝癌hepg2细胞的生存率(图1)。

枸橼酸喷托维林对肝癌hepg2细胞形态的影响。当使用浓度大于75μm的枸橼酸喷托维林处理肝癌hepg2细胞48h后，应用倒置显微镜观察，与对照组相比，细胞数量明显减少，出现细胞变圆，破碎等现象(图2)。

枸橼酸喷托维林对肝癌hepg2细胞ldh活性的影响。使用浓度为75μm的枸橼酸喷托维林处理肝癌hepg2细胞48h，以生理盐水处理组作为对照组，检测各实验组以及对照组的ldh值。通过对各实验组与对照组的ldh值进行统计学分析比较，结果显示各组间无显著性差异，表明这些药物抑制这些肿瘤细胞的增殖，不是通过化学刺激等促进细胞坏死的途径发挥作用的(图3)。

枸橼酸喷托维林能够诱导肝癌hepg2细胞的凋亡。当使用浓度75μm或者更高浓度的枸橼酸喷托维林处理肝癌hepg2细胞48h后，应用hoechst33258检测细胞凋亡。结果显示，枸橼酸喷托维林能够显著促进肝癌hepg2细胞的凋亡(图4)。说明枸橼酸喷托维林主要是通过促进细胞凋亡，发挥抑制肝癌hepg2细胞增殖的作用。

本发明使医疗界首次认识到，枸橼酸喷托维林这种药物都能够以浓度依赖的方式显著抑制肝癌hepg2细胞的增殖。枸橼酸喷托维林能够以浓度依赖的方式显著抑制肝癌hepg2细胞的增殖。

本发明的有益结果是，临床肝癌患者进行常规抗肿瘤药物治疗的同时，服用枸橼酸喷托维林，可以在一定程度上抑制肿瘤的进展，缓解患者的病情。临床肝癌患者进行常规抗肿瘤药物治疗的同时，服用枸橼酸喷托维林所允许的最高剂量，可以在一定程度上抑制肿瘤的进展，缓解患者的病情。可能会产生很大的社会效益和经济效益。

本发明可能促使化学家对枸橼酸喷托维林结构改造，研制出更有效的副作用更小的抗肿瘤药物。

本发明会使更多的医疗卫生工作者认识到，有计划地检测一些临床用药的新用途，就可能更快地，更多地发现它们的新用途，这是一种有效的和节俭的发现新药的途径。

附图说明

图1枸橼酸喷托维林对hepg2细胞活力的影响

hepg2细胞在60；75或90μm的枸橼酸喷托维林处理或生理盐水处理48h后，采用mtt法测定细胞存活率。3次独立实验后得到的数据进行分析，与对照组比较，*p＜0.05、**p＜0.01。

图2枸橼酸喷托维林对hepg2细胞形态的影响

枸橼酸喷托维林处理48h后，hepg2细胞的形态(×200)。c：生理盐水处理为对照组；p：枸橼酸喷托维林处理为实验组。枸橼酸喷托维林的浓度为75μm。c图和p图右下角为局部放大图。

图3枸橼酸喷托维林对hepg2细胞释放ldh的影响

hepg2细胞经过浓度为75μm的枸橼酸喷托维林处理48h，或者经过生理盐水处理作为对照组。ldh值是3次实验的平均结果。

图4枸橼酸喷托维林对hepg2细胞凋亡的影响

(a)凋亡细胞的形态(×200)。c图和p图右下角为局部放大图。(b)细胞凋亡率。细胞经过75μm的枸橼酸喷托维林或生理盐水处理48h，然后和对照组同时用hoechst33258染色。经过3次独立实验后，数据以均数±标准差表示。与对照组比较，*p＜0.05。

具体实施方式

对临床肝癌患者进行常规抗肿瘤药物治疗的同时，服用枸橼酸喷托维林，可以在一定程度上抑制肿瘤的进展，缓解患者的病情。临床肝癌患者进行常规抗肿瘤药物治疗的同时，服用枸橼酸喷托维林所允许的最高剂量，可以在一定程度上抑制肿瘤的进展，缓解患者的病情。

技术特征：

技术总结
枸橼酸喷托维林抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用技术领域：本发明涉及一种非临床抗肿瘤药物枸橼酸喷托维林，被发现具有抗肿瘤作用，主要是能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖。要解决的技术问题：利用肝癌HepG2细胞筛选一些非临床抗肿瘤药物，发现具有抗肿瘤作用的非临床抗肿瘤药物枸橼酸喷托维林。解决该问题的技术方案的要点：应用浓度为75μM的枸橼酸喷托维林处理肝癌HepG2细胞48h，通过显微镜观察细胞形态和数量变化。再进行细胞生存率，LDH活性检测和细胞凋亡检测。主要用途：枸橼酸喷托维林能够显著抑制肝癌HepG2细胞的增殖，可能用于肝癌患者的临床治疗。

技术研发人员：邵金辉
受保护的技术使用者：湖北文理学院
技术研发日：2016.04.01
技术公布日：2017.10.24