本发明涉及止血材料技术领域，具体涉及一种壳聚糖止血愈创材料及其制备方法。
背景技术：
过度失血是战伤致死的主要原因，也是事故和手术治疗过程中致死的主要原因之一。理想的止血材料可有效降低人员伤亡。壳聚糖是研究者开发的一种新型止血材料，由于其对人体生物相容性好，可生物降解、能促进伤口愈合等而逐渐用于临床。但纯壳聚糖材料止血作用有限，对于出血量大的伤口，其黏附性较差和止血较慢。此外，仅仅依靠壳聚糖本身来达到止血以外的抗炎、抑菌、促进组织修复等辅助功能目的，其效果也非常有限。现有的止血材料多局限于单纯的止血，在促进愈合方面的研究还比较少。研制一种具有快速止血、促进愈合等功能的新型止血材料已成为止血材料发展的必然。
技术实现要素：
本发明目的是提供一种壳聚糖止血愈创材料及其制备方法，以解决现有技术的不足。
本发明采用以下技术方案：
一种壳聚糖止血愈创材料，包括至少两层结构，下层为壳聚糖快速止血层，上层为壳聚糖缓慢释放层；
壳聚糖快速止血层由如下步骤制备得到：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5-6w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1-2体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应3-6h，再加入80-100体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、3-5体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，预冷冻后，真空冷冻干燥，得到壳聚糖快速止血层；
壳聚糖缓慢释放层由如下步骤制备得到：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为100-200U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1-2:5-10:3-5混合均匀，交联反应3-6h，倒入模具中，预冷冻后，真空冷冻干燥，得到壳聚糖缓慢释放层。
进一步地，步骤a1和步骤b1中壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万。
进一步地，步骤a3中淀粉纳米微球包括马铃薯淀粉纳米微球、玉米淀粉纳米微球或木薯淀粉纳米微球。
进一步地，步骤a5和步骤b5中在-20--30℃下预冷冻24-48h，之后在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h。
上述壳聚糖止血愈创材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：壳聚糖快速止血层的制备：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5-6w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1-2体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应3-6h，再加入80-100体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、3-5体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，预冷冻后，真空冷冻干燥，得到壳聚糖快速止血层；
步骤b、壳聚糖缓慢释放层的制备：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为100-200U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1-2:5-10:3-5混合均匀，交联反应3-6h，倒入模具中，预冷冻后，真空冷冻干燥，得到壳聚糖缓慢释放层；
步骤c、将步骤a制备的壳聚糖快速止血层和步骤b制备的壳聚糖缓慢释放层叠合在一起，得到所述壳聚糖止血愈创材料。
进一步地，步骤a1和步骤b1中壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万。
进一步地，步骤a3中淀粉纳米微球包括马铃薯淀粉纳米微球、玉米淀粉纳米微球或木薯淀粉纳米微球。
进一步地，步骤a5和步骤b5中在-20--30℃下预冷冻24-48h，之后在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h。
本发明的有益效果：
1、本发明的壳聚糖止血愈创材料包括至少两层结构，下层为壳聚糖快速止血层，上层为壳聚糖缓慢释放层，同时具有快速止血和促进创面愈合作用。壳聚糖快速止血层中的淀粉纳米微球吸收血液中水份快且多，浓缩局部凝血成分，提高止血材料的密度，使其更容易下沉到达出血点，并形成对出血部位的重力压迫；同时壳聚糖与红细胞之间电荷相互作用，发生凝聚；多方面共同作用从而实现快速止血。壳聚糖缓慢释放层以氯化钙作为交联剂将壳聚糖缓慢释放层进行适度交联，既提高了壳聚糖缓慢释放层的力学强度，又可在患处稳定长效缓释Ca2+、凝血酶分子、纳米银，防止运动导致的二次出血和避免感染，从而促进创面愈合。
2、本发明的壳聚糖止血愈创材料中壳聚糖快速止血层由于淀粉纳米微球吸收血液中水份快且多，利于壳聚糖快速止血层形成凝胶，粘性大，自行粘帖在伤口处，产品局部贴敷性能好；壳聚糖缓慢释放层起到了维持材料的形状，保持材料的强度；从而可更好地发挥产品止血和愈创的功能。
3、本发明纳米银具有较强抑菌、杀菌作用及其广谱的抗菌活性，在壳聚糖快速止血层和壳聚糖缓慢释放层都布有纳米银，壳聚糖快速止血层的纳米银快速到达伤口，壳聚糖缓慢释放层的纳米银缓慢释放，保证了纳米银在快速止血和创面愈合阶段都能发挥作用。
4、本发明的壳聚糖止血愈创材料中壳聚糖缓慢释放层以壳聚糖为载体对凝血酶进行固定化，凝血酶稳定且均匀的分布在内部，增强了凝血酶的稳定性，保持了凝血酶在使用过程中的凝血活性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做更进一步地解释。下列实施例仅用于说明本发明，但并不用来限定本发明的实施范围。
一种壳聚糖止血愈创材料，包括至少两层结构，下层为壳聚糖快速止血层，上层为壳聚糖缓慢释放层；
壳聚糖快速止血层由如下步骤制备得到：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5-6w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；淀粉纳米微球包括马铃薯淀粉纳米微球、玉米淀粉纳米微球或木薯淀粉纳米微球；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1-2体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应3-6h，再加入80-100体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、3-5体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，在-20--30℃下预冷冻24-48h后，在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h，得到壳聚糖快速止血层；
壳聚糖缓慢释放层由如下步骤制备得到：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为100-200U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1-2:5-10:3-5混合均匀，交联反应3-6h，倒入模具中，在-20--30℃下预冷冻24-48h后，在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h，得到壳聚糖缓慢释放层。
上述壳聚糖止血愈创材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：壳聚糖快速止血层的制备：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5-6w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；淀粉纳米微球包括马铃薯淀粉纳米微球、玉米淀粉纳米微球或木薯淀粉纳米微球；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1-2体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应3-6h，再加入80-100体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、3-5体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，在-20--30℃下预冷冻24-48h后，在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h，得到壳聚糖快速止血层；
步骤b、壳聚糖缓慢释放层的制备：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1-2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1-2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75-95％、分子量10万-100万；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1-3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为100-200U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5-1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1-2:5-10:3-5混合均匀，交联反应3-6h，倒入模具中，在-20--30℃下预冷冻24-48h后，在-30--60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24-48h，得到壳聚糖缓慢释放层；
步骤c、将步骤a制备的壳聚糖快速止血层和步骤b制备的壳聚糖缓慢释放层叠合在一起，得到所述壳聚糖止血愈创材料。本发明制备的壳聚糖止血愈创材料同时具有快速止血和促进创面愈合作用。
医用的淀粉纳米微球均可用于本发明，以下实施例涉及的淀粉纳米微球采用如下方法制备得到：将马铃薯淀粉加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成45w/v％的马铃薯淀粉液；将海藻酸钠加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成5％的海藻酸钠溶液；在55℃、2000rpm搅拌条件下，按体积比1：2将马铃薯淀粉液缓慢加入到海藻酸钠溶液中，后加热至75℃，恒温搅拌25分钟，静置、冷却，弃上清，洗涤、干燥。
实施例1
一种壳聚糖止血愈创材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：壳聚糖快速止血层的制备：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1.5v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1.5w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度80％、分子量50万；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为2w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5.5w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.75w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1.5体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应5h，再加入90体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、4体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，在-25℃下预冷冻36h后，在-45℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥36h，得到壳聚糖快速止血层；
步骤b、壳聚糖缓慢释放层的制备：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1.5v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1.5w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度80％、分子量50万；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为2w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为150U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.75w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1.5:7.5:4混合均匀，交联反应5h，倒入模具中，在-25℃下预冷冻36h后，在-45℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥36h，得到壳聚糖缓慢释放层；
步骤c、将步骤a制备的壳聚糖快速止血层和步骤b制备的壳聚糖缓慢释放层叠合在一起，得到所述壳聚糖止血愈创材料。
实施例2
一种壳聚糖止血愈创材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：壳聚糖快速止血层的制备：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75％、分子量10万；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为5w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、1体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应3h，再加入80体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、3体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，在-20℃下预冷冻24h后，在-30℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24h，得到壳聚糖快速止血层；
步骤b、壳聚糖缓慢释放层的制备：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度95％、分子量100万；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为200U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:2:10:5混合均匀，交联反应6h，倒入模具中，在-30℃下预冷冻48h后，在-60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥48h，得到壳聚糖缓慢释放层；
步骤c、将步骤a制备的壳聚糖快速止血层和步骤b制备的壳聚糖缓慢释放层叠合在一起，得到所述壳聚糖止血愈创材料。
实施例3
一种壳聚糖止血愈创材料的制备方法，包括如下步骤：
步骤a：壳聚糖快速止血层的制备：
步骤a1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到2v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为2w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度95％、分子量100万；
步骤a2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为3w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤a3、淀粉纳米微球溶液配制：将淀粉纳米微球加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为6w/v％的淀粉纳米微球溶液，备用；
步骤a4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤a5、将100体积份步骤a1配制的壳聚糖乙酸溶液、2体积份步骤a2配制的氯化钙溶液混合均匀，交联反应6h，再加入100体积份步骤a3配制的淀粉纳米微球溶液、5体积份步骤a4配制的纳米银溶液混合均匀，倒入模具中，在-30℃下预冷冻48h后，在-60℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥48h，得到壳聚糖快速止血层；
步骤b、壳聚糖缓慢释放层的制备：
步骤b1、壳聚糖乙酸溶液配制：将壳聚糖加入到1v/v％乙酸溶液中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的壳聚糖乙酸溶液，备用；壳聚糖的脱乙酰度75％、分子量10万；
步骤b2、氯化钙溶液配制：将氯化钙加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为1w/v％的氯化钙溶液，备用；
步骤b3、凝血酶溶液配制：将凝血酶加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为100U/mL的凝血酶溶液，备用；
步骤b4、纳米银溶液配制：将纳米银加入到去离子水中，搅拌均匀，配制成浓度为0.5w/v％的纳米银溶液，备用；
步骤b5、将步骤b1配制的壳聚糖乙酸溶液、步骤b2配制的氯化钙溶液、步骤b3配制的凝血酶溶液、步骤b4配制的纳米银溶液按体积比100:1:5:3混合均匀，交联反应3h，倒入模具中，在-20℃下预冷冻24h后，在-30℃冷冻干燥机中真空冷冻干燥24h，得到壳聚糖缓慢释放层；
步骤c、将步骤a制备的壳聚糖快速止血层和步骤b制备的壳聚糖缓慢释放层叠合在一起，得到所述壳聚糖止血愈创材料。