一种明胶壳聚糖复合止血粉的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于医用材料制备技术领域，具体涉及一种明胶壳聚糖复合止血粉。
【背景技术】
[0002]出血是创伤患者死亡的重要原因之一。在出现突发事故或进行外科手术时，降低出血时间，减少出血量，防止伤口与外界接触造成感染，有利于后续治疗和患者伤口愈合。
[0003]传统的止血方法主要是将止血材料(如绷带、止血带、海绵、棉纱等)贴附于创面，利用机械外力挤压创面或利用材料吸水性阻止创面继续流血，但上述材料在面对复杂的创面部位及形状时，或者大面积弥漫性出血时，效果欠佳。粉末状止血产品不受创面大小和部位的影响，使用方便快捷，有其独到的优点。因此开发新型粉末状止血产品为止血类产品的一个新的热点。除此之外，目前常用的局部止血材料主要有多孔海绵类材料(胶原海绵)、粉末类材料(沸石、马铃薯淀粉)、纤维类材料、止血纱布类等。这些止血材料各有一定的不足之处:传统的明胶胶原材料来自于牛皮、猪皮等陆生动物皮，容易出现排异性和过敏反应；沸石和淀粉材料主要通过吸收血液中的水分起到止血效果，但容易导致伤口炎症反应；氧化再生纤维素结构松散，对伤口粘附性差，止血效果不佳。因此针对传统止血材料的局限性，开发新型高效止血剂就显得十分必要。
【发明内容】
[0004]本发明的目的是在于针对上述现有技术的不足，提供一种明胶壳聚糖复合止血粉，所提供的止血粉能够快速止血，具有较好的粘附性和生物相容性，并且具有抗菌和消炎的效果。
[0005]本发明的明胶壳聚糖复合止血粉，是将鱼皮明胶溶液和壳聚糖溶液混合后，在低温下搅拌，再冷冻干燥，超微粉碎后消毒灭菌制备的。
[0006]其中使用的鱼皮明胶的制备方法如下:
[0007]将鱼皮浸泡在碱性溶液中，然后用清水洗至中性，再将鱼皮浸泡在酸性溶液中，浸泡结束后用清水洗至中性，在45?70°C在水中进行提取4?Sh ;提取液过滤后通过截留分子量为700KDa、孔径大小为0.45um的微孔滤膜，再通过超滤技术分离得到分子量不小于700KDa的鱼皮明胶；
[0008]所述的鱼皮优选为鳕鱼皮；
[0009]所述的碱性溶液优选为0.05M的NaOH溶液；
[0010]所述的酸性溶液优选为0.1M的硫酸溶液；
[0011]本发明所使用的壳聚糖溶液，是将壳聚糖溶解在酸溶液中制备的；
[0012]本发明的明胶壳聚糖复合止血粉，其一种具体制备方法如下:
[0013]将脱乙酰度不小于50%的壳聚糖溶解在0.05?0.2M的醋酸溶液中，配置成I?2%的壳聚糖溶液，然后将明胶溶液与壳聚糖溶液混合，得到鱼皮明胶与壳聚糖质量比为5:1?4的混合溶液；将混合溶液在4°C温度下搅拌8?10h，冷冻干燥、超微粉碎使颗粒粒径平均分布在3-4 μ m左右，用剂量为25KGy6°Co消毒灭菌，得到明胶壳聚糖复合止血粉剂。
[0014]本发明将制备的鱼皮明胶中加入壳聚糖，可以发挥材料之间的协同效应，提高了复合材料的吸水性和粘附性，使得复合材料的止血性能得到了提高，同时还具备了壳聚糖抗菌、抑菌的性能。复合材料的力学性能、止血性能和愈合伤口的能力都得到了提高，成为了一种综合性能优良的止血剂。
【具体实施方式】
[0015]为了使本技术领域的人员更好地理解本发明技术方案，下面就具体的实施方式做进一步的说明。
[0016]实施例1
[0017]—种明胶壳聚糖复合止血粉的制备方法，包括以下步骤:
[0018]步骤一:鳕鱼皮明胶的提取
[0019]新鲜鳕鱼皮储存在-20 0C的冰箱中。将鳕鱼皮从冰箱中取出，室温下解冻，去除鱼皮上粘连的鱼肉，用清水冲洗干净。将鱼皮剪成2cmX 2cm的小块，用浓度为的0.05M的NaOH溶液浸泡鱼皮45min，料液比1:30(w/v)使其充分溶胀，将鱼皮用清水冲洗至中性，再用浓度为0.1M的硫酸溶液浸泡30min，料液比为(1: 30)，将鱼皮冲洗至中性。鱼皮加3倍体积的水，在65°C下用水浴摇床提取5h，用两层娟纱过滤，滤液离心，取上清液即为鳕鱼皮明胶提取液。
[0020]步骤二:尚分子量鳕鱼皮明胶的制备
[0021]将鳕鱼皮明胶提取液抽滤，滤液通过0.45um的微孔滤膜进一步去除杂质，用截留分子量为700KDa的超滤膜在4°C下进行超滤，氮气加压0.2MPa，冷冻干燥后得到分子量高于700KDa的高分子量鳕鱼皮明胶。
[0022]步骤三:明胶壳聚糖复合止血粉的制备及理化性质研究
[0023]将高分子量的鳕鱼皮明胶样品用65°C热水溶解，配置成2%的明胶溶液，将脱乙酰度65%的壳聚糖溶解在0.2M的醋酸溶液中，配置成1.2%的壳聚糖溶液，将明胶溶液和壳聚糖溶液按照1:1混合，得到明胶:壳聚糖为10:6的混合溶液。将混合液放在4°C下搅拌8h，冷冻干燥得到海绵状复合物。将复合物用超微粉碎机粉碎，得到粉末用剂量为25KGy60Co消毒灭菌，成型包装，得到明胶壳聚糖复合止血粉，混合止血粉剂的粒径平均分布在3.97 μ m左右，体外实验测定其吸水倍率为0.926，体外溶血率为3.01 %，低于5%，符合国家生物材料评价规定的溶血率安全范围。体外促凝实验的平均凝血时间为46.16s,与自然止血组平均止血时间103.17s相比缩短了 57.01s，说明其具有促凝作用。
[0024]步骤四:高分子量明胶壳聚糖复合止血粉的动物实验研究
[0025]选取体重200g左右的健康雄性wistar大鼠做断尾止血实验，用体积分数为75%的酒精消毒尾部，并用刀片在鼠尾端约2cm处割断，在伤口处撒上30mg的高分子量明胶壳聚糖复合止血粉，每隔15s观察一次，以断尾不再渗血为止血完毕，高分子量明胶壳聚糖复合止血粉的止血时间为3.77min，与自然止血组的止血时间6min、云南白药组的止血时间
4.87min相比，止血时间缩短，止血效果较好；选取体重200g左右的健康雄性wistar大鼠做股动脉止血实验，小心沿股内侧切一 3cm切口，暴露大鼠股动脉，小心将股动脉横向剪开约直径1/3的切口。立即用脱脂棉擦去喷出的血液，将200mg的高分子量明胶壳聚糖复合止血粉撒在切口上，用无菌纱布覆盖，每隔15s揭开纱布观察一次，直到伤口不再出血为止，高分子量明胶壳聚糖复合止血粉的止血时间为1.88min，与自然止血组的时间5.21min、云南白药组的止血时间2.5min相比较，止血时间缩短，止血效果较好；选取体重200g左右的健康雄性wistar大鼠做肝创面止血实验，于大鼠的腹中线作一长约3cm纵行切口，暴露大鼠的肝脏，用无菌纱布将肝脏中叶隔离，用刀片在肝脏中叶纵向切开一长1cm，深0.5cm的切口，用脱脂棉立即擦去血液，分别将200mg高分子量明胶壳聚糖复合止血粉撒在创面上，覆盖无菌纱布，每隔15s观察创面出血的情况，直到伤口不再出血为止，记录止血时间为1.55min，与自然止血组的止血时间3.24min、云南白药组的止血时间1.85min相比较，止血时间缩短，止血效果较好。
[0026]实施例2
[0027]—种明胶壳聚糖复合止血粉的制备方法，包括以下步骤:
[0028]步骤一:鳕鱼皮明胶的提取
[0029]新鲜鳕鱼皮储存在-20 0C的冰箱中。将鳕鱼皮从冰箱中取出，室温下解冻，去除鱼皮上粘连的鱼肉，用清水冲洗干净。将鱼皮剪成2cmX 2cm的小块，用浓度为的0.05M的NaOH溶液浸泡鱼皮45min，料液比1:30(w/v)使其充分溶胀，将鱼皮用清水冲洗至中性，再用浓度为0.1M的硫酸溶液浸泡30min，料液比为(1: 30)，将鱼皮冲洗至中性。鱼皮加3倍体积的水，在55°C下用水浴摇床提取6h，用两层娟纱过滤，滤液离心，取上清液即为鳕鱼皮明胶提取液。
[0030]步骤二:尚分子量鳕鱼皮明胶的制备
[0031]将鳕鱼皮明胶提取液抽滤，滤液通过0.45um的微孔滤膜进一步去除杂质，用截留分子量为700KDa的超滤膜在4°C下进行超滤，氮气加压0.2MPa，冷冻干燥后得到分子量高于700KDa的高分子量鳕鱼皮明胶。
[0032]步骤三:明胶壳聚糖复合止血粉的制备及理化性质研究
[0033]将高分子量的鳕鱼皮明胶样品用55°C热水溶解，配置成2%的明胶溶液，将脱乙酰度55%的壳聚糖溶解在0.1M的醋酸溶液中，配置成I %的壳聚糖溶液，将明胶溶液和壳聚糖溶液按照1:1混合，得到明胶:壳聚糖为10:5的混合溶液。将混合液放在4°C下搅拌8h