可口革囊星虫在制备降血脂药物及保健产品中的应用的制作方法

【技术领域】

本发明涉及可口革囊星虫的应用领域，尤其涉及一种可口革囊星虫在制备降血脂药物与降血脂保健产品中的应用。

背景技术：

近年来，随着生活水平的提高和饮食结构的改变，高脂血症的发病率呈现上升趋势。研究表明，高脂血症是动脉粥样硬化的主要危险因素之一，由此引发高血压、冠心病、心肌梗塞、脑卒中等一系列危害人类健康的心脑血管疾病，已成为全球面临的严重公众健康问题。

现代医学研究认为，血脂异常主要表现为血浆或血清总胆固醇(tc)、总甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)水平升高和/或高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)水平降低。虽然目前有许多化学药物可降低血清胆固醇，但均具有不同程度的毒副作用，如可导致胃肠道反应、肝、肾损伤等。因此从自然界中寻找具有高效、低毒的天然活性物质用于相关疾病的预防和治疗已成为近年来医药界关注的热点。

可口革囊星虫(phascolosomaesculenta)俗称“泥蒜”、海蛆、沙虫、海丁、土笋，隶属于星虫动物门(sipunculoidea)星虫纲(sipuncula)革囊星虫属(phascolosoma)，该种为我国特有种，分布于我国东南沿海广西、广东、海南、福建和浙江等地的潮间带、高潮区的泥滩内，产量丰富。可口革囊星虫是高蛋白低脂肪的海洋生物。我国多种本草中记载了其食用和药用价值,是我国民间传统药食滋补佳品,有些地区用其代替中药冬虫夏草。有研究发现可口革囊星虫具有抗疲劳(中国专利cn102153666b)和抗败血症的作用(中国专利cn103483462b)。

本案申请人发现，可口革囊星虫具有明显的降血脂和保护肝脏的作用，且没有化学降血脂药物的毒副作用。

技术实现要素：

本发明公开一种原材料丰富、制作工艺简单、制作过程无化学试剂添加的可口革囊星虫粉在制备降血脂药物与降血脂保健产品中的应用，本发明没有化学降血脂药物具有的毒副作用问题，且原材料丰富、制作工艺简单、制作过程无化学试剂添加。

本发明的实现步骤为：

1、原料：选取天然优质的可口革囊星虫；

2、清洗：先用清水洗去泥沙，再用盐水多次清洗干净；

3、风干：白天于室外太阳晾晒及自然风干；

4、烘干：夜间置于干燥箱内28℃烘干，直至恒重；

5、研磨：经干粉研磨机间歇研磨；

6、分级筛选：依次过20目、40目、60目筛网，制得可口革囊星虫干粉；

制得的可口革囊星虫粉应用在降血脂药物与降血脂保健产品中。

本发明的有益效果：本发明采用的可口革囊星虫属于天然食物，且加工过程中无任何化学试剂添加，对服用者无毒副作用；本发明还具有原材料丰富、制作工艺简单的优点，有良好的工业应用前景。

【附图说明】

图1是本发明的工艺流程示意图；

图2是本发明应用过程中小鼠体重变化图；

图3小鼠肝脏变化图；

图4bca法测蛋白含量标准曲线

【具体实施方式】

下面结合具体实施例对本发明进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

实施例1：可口革囊星虫干粉的制备

(1)原料选取：本发明所用可口革囊星虫购于福建省晋江市安海镇，是天然的星虫；

(2)清洗：先用清水洗去泥沙，再用质量浓度为3％的盐水浸泡，并反复清洗干净，这一清洗过程具一定的消毒作用，且效果好，成本低；

(3)风干：白天于室外太阳晾晒及自然风干；

(4)烘干：夜间置于干燥箱内28℃烘干，直至恒重；

(5)研磨：经干粉研磨机间歇研磨多次，形成较粗的星虫粉末；

(6)分级筛选：依次过20目、40目、60目筛网，筛得的60目以上细小粉末即为可口革囊星虫干粉。

采取上述方法制作的星虫干粉，其特征在于过程无任何化学添加剂，无污染，纯天然、环保，供后期星虫应用使用。

实施例2：可口革囊星虫粉对血脂的影响

1、试验材料与方法

1.1实验材料：选用雄性昆明种小鼠，购于福州大学吴氏动物中心。

1.2高脂饲料配方(w/w)：78.8％基础饲料、1％胆固醇、10％蛋黄粉、10％猪油、0.2％胆盐。

1.3主要仪器和试剂

分析天平、烘箱、干粉研磨机、分光光度计、多功能酶标仪(tecan，infinitem2000)、台式离心机(xiangyi，h1650-w)；阳性对照品1为汤臣倍健大豆磷脂软胶囊(汤臣倍健股份有限公司，国食健字g20070415)；阳性对照品2为降脂片(太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，国药准字z50020125)；甘油三酯(tg)试剂盒、总胆固醇(tc)试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；二喹啉甲酸(bca)蛋白浓度测定试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；其余试剂均为化学分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司。

1.4实验方法：

(1)适应环境：全部动物以基础饲料饲养观察，饲养温度为25±2℃，适应环境7天；

(2)随机分组：随机分为七组，每组10只：第一组为正常组，第二组为阴性对照组，第三组为阳性对照组1(给予大豆磷脂软胶囊)，第四组为阳性对照组2(给予降脂片)，第五组为低剂量给药组，第六组为中剂量给药组，第七组为高剂量给药组；

(3)高脂饲料造模：除正常组给予基础饲料饲养外，其余6组动物改为高脂饲料饲养进行实验性高脂血症造模，喂饲30-35天，测定血清tc、tg水平以确定形成高脂血症；-

(4)给药处理：造模结束后，小鼠给药剂量按照成人用药剂量的9倍换算，阳性对照组1给予大豆卵磷脂0.03g/kg(体质量)，阳性对照组2给予降脂片0.0625g/kg(体质量)，低剂量给药组给予星虫干粉生理盐水悬液0.675g/kg(体质量)，中剂量组给予星虫干粉生理盐水悬液1.35g/kg(体质量)，高剂量组给予星虫干粉生理盐水悬液2.7g/kg(体质量)，阴性对照组给予相同体积生理盐水，连续灌胃25天；

(5)小鼠检测材料的取得及检测：

a、血清：实验性高脂血症小鼠给药25天后，禁食16h，摘眼球取血检测其血清指标，包括tg、tc、hdl-c、ldl-c，并计算动脉硬化指数ai(ai＝(tc-hdl-c)/hdl-c)。

b肝脏：小鼠摘眼球取血后，颈椎脱臼处死，摘取完整肝脏，用生理盐水漂洗干净后用滤纸吸干，称量其重量，计算肝系数(肝脏系数(％)＝肝脏重(g)/体重(g)×100)，取小鼠肝脏组织，按体积比1:9加入pbs缓冲液组织研磨离心后测定肝组织蛋白浓度、tg和tc含量。

(6)实验数据统计：测试结果采用spss进行统计分析，结果以平均值±标准差的形式表示，各组之间采用t检验进行组间比较。p<0.05(*)说明具有显著性差异，p<0.01(**)说明具有极显著性差异。

2、结果

2.1对小鼠体重的影响：

给药前后小鼠体重变化如图2所示，从图中可知随着饲养时间的增加，各组小鼠的体重均有所增加，增加趋势与正常组相似，各组小鼠的体重增长率没有显著性差异(p＞0.05)，且各组小鼠均生长良好，无不良反应。

2.2可口革囊星虫对高脂血症模型小鼠血脂水平的影响

表1小鼠血清中tg、tc、ldl-c、hdl-c及ai值(n＝10，)

(**p<0.01表示相对阴性对照组具有极显著性差异，*p<0.05表示相对阴性对照组具有显著性差异)

表1为可口革囊星虫对高脂血症模型小鼠血脂水平的影响：数据结果显示，与正常组相比，阴性对照组中小鼠血清中tg、tc、ldl-c含量都明显升高，hdl-c含量明显降低，说明高脂血症模型成功建立。与阴性对照组相比，星虫给药组的tg、tc和ldl-c含量均下降，hdl-c含量升高。其中，(1)阳性对照组1、2和低、中、高三个剂量星虫给药组的tg含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，且中、高剂量组的tg含量均低于阳性对照组1和2；(2)阳性对照组1、2和低、中、高三个剂量组的tc含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，但低、中剂量组间无显著性差异(p>0.05)；(3)阳性对照组1、中剂量星虫组和高剂量星虫组的ldl-c含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，阳性对照组2和低剂量星虫组的ldl-c含量均较阴性对照组具有显著性差异(p＜0.05)，且中、高剂量组均较阳性对照组2的效果好，但中、高剂量组间无显著性差异(p>0.05)；(4)阴性对照组的hdl-c含量最低，阳性对照组1、2和中剂量组的hdl-c含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，低、高剂量星虫组的hdl-c含量均较阴性对照组具有显著性差异(p＜0.05)。以上结果表明，给予不同剂量的星虫粉均能降低高脂血症小鼠血清的tg、tc和ldl-c含量，升高小鼠血清hdl-c含量，说明星虫粉对实验性高脂血症小鼠具有良好的辅助降血脂作用。

根据公式ai＝(tc-hdl-c)/hdl-c可计算得到动脉硬化指数ai。其中阳性对照组1、2和低、中、高剂量星虫组均可以显著降低ai指数，较阴性对照组具有显著性差异(p＜0.05)，但三个剂量组间无显著性差异(p>0.05)，提示星虫粉可能具有预防动脉粥样硬化的作用说明可口革囊星虫具有降低血脂的作用，可以降低由高血脂引发的动脉粥样硬化和冠状动脉心脏病的风险。

2.3对小鼠肝脏的影响

表2小鼠肝脏重量、体重及肝系数(n＝10，)

表2为可口革囊星虫对小鼠肝脏的影响：小鼠摘眼球取血后，颈椎脱臼处死，摘取完整肝脏，用预冷生理盐水漂洗干净表层血丝，去除多余组织后用滤纸吸干，称量其重量，根据公式(肝脏系数(％)＝肝脏重(g)/体重(g)×100)计算肝系数。与正常组相比，阴性对照组的肝系数有所增加，且为正常组的1.6倍，给药后肝系数有所降低，随着星虫给药剂量的增加肝系数下降。

给药前后肝脏外观如图3所示，从图中可以看出正常组小鼠肝脏颜色为深红色，表面光滑，质地较软，而阴性对照组小鼠肝脏肿胀，颜色较浅，表面有颗粒，有黄色脂滴渗出，质地较脆。给药后各组较阴性对照组肝脏颜色都有所加深，且表面无颗粒，较为光滑，并且阳性对照组1较阳性对照组2颜色深。低、中、高三个剂量星虫组的肝脏情况较阴性对照组均有所改善，说明星虫粉对实验性高脂血症小鼠的肝脏具有一定的保护作用。

小鼠肝组织tg、tc含量的检测：取适量肝组织按1:9质量体积比加入pbs缓冲液后经组织研磨机研磨，3500rpm离心10min，取上清液，通过bca法测定肝组织蛋白含量，通过不同浓度标准蛋白吸光值建立回归方程，其中0.1-0.5mg/ml蛋白浓度与562nm吸光值具有较好的线性关系，以吸光值为纵坐标，标准蛋白浓度为横坐标，作图(如图4所示)得到标准曲线，其回归方程为y＝0.58x+0.0769，r²＝0.9952。

表3小鼠肝脏tg、tc含量(n＝10，)

注：(**p<0.01表示相对阴性对照组具有极显著性差异，*p<0.05表示相对阴性对照组具有显著性差异)

表3为可口革囊星虫对小鼠肝脏中tg、tc含量的影响：与正常组相比，阴性对照组肝组织中的tg和tc含量明显增加，给药后均有所降低。其中，(1)阳性对照组2、中剂量星虫组、高剂量星虫组的tg含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，但三组之间无显著性差异(p>0.05)；(2)阳性对照组2、中剂量星虫组、高剂量星虫组的tc含量均较阴性对照组具有极显著性差异(p＜0.01)，但三组之间无显著性差异(p>0.05)。说明星虫粉对实验性高脂血症小鼠具有一定的降低肝组织tg和tc含量的作用。

上述结果可以看出：与给予生理盐水的阴性对照组相比，给予可口革囊星虫粉低、中、高三个剂量均能够降低实验性高脂血症小鼠血清总胆固醇(tc)、甘油三酯(tg)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)含量及升高血清高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)含量，降低动脉硬化指数(ai)，以及降低肝组织tg和tc含量，对肝脏具有一定的保护作用。

以上实施例说明可口革囊星虫粉对高脂血症小鼠具有良好的降血脂作用，且作用与已知临床使用的保健品大豆磷脂软胶囊和降脂片相一致，并且对肝脏具有一定的保护作用，对防治动脉粥样硬化及由其所致的动脉血栓、缺血性心脑血管疾病有积极的意义，可口革囊星虫粉可以应用在降血脂药物和保健产品中，具有广泛的应用前景。

虽然以上描述了本发明的具体实施方式，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，本发明所描述的具体实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。