本申请是分案申请，其同发明名称的母案的中国申请号是201180023303.x，国际申请号是pct/ep2011/057388。
本发明涉及一种用于产生包含胰岛素和锌的药物制剂的方法、由该方法获得的药物制剂和该制剂用于治疗糖尿病的用途。
背景技术：
胰岛素是在胰腺的胰岛中产生的51个氨基酸肽激素。其作为单体起作用，主要功能是通过结合并激活跨膜受体来促进葡萄糖分子穿过脂肪和肌肉组织的细胞膜的运输。
通常在酸性条件下通过将胰岛素溶解在小体积的水中来制备胰岛素的制剂。然后向制剂中加入锌，中和并加入防腐剂，例如苯酚和间甲酚。
wo2005/012347公开了具有带负电侧链的胰岛素衍生物。
wo2007/074133公开了包含酰化胰岛素和每6分子的酰化胰岛素超过4个锌原子的可溶性药物制剂。
本发明克服现有技术的问题。
技术实现要素：
本发明涉及一种用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法，其中所述方法包括将胰岛素衍生物溶解在任选包含药学上可接受的赋形剂的水中以形成胰岛素衍生物溶液，调节溶液的ph至ph超过7.2，在持续搅拌的同时加入锌溶液，并调节ph至制剂的靶ph，且其中所述胰岛素衍生物包含具有侧链的胰岛素分子，所述侧链连接在母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，所述侧链具有通式：-w-x-y-z。
本发明另外涉及一种由该方法获得的产品和由该方法获得的产品的用途。
定义
本文使用的术语“药物制剂”意指，包含活性化合物或其盐连同药物赋形剂(例如缓冲剂、防腐剂和张度调节剂)的产品，通过将所述药物制剂给予人，所述药物制剂可用于治疗、预防疾病或病症或者降低疾病或病症的严重性。因此药物制剂在本领域中亦被称为药物组合物。
“制剂的靶ph”意指，终药物制剂中所需ph值。
本文使用的术语“药学上可接受的”意指，适用于正规药物应用，即在患者中不会引起不良事件等。
本文使用的术语“胰岛素衍生物”意指，化学修饰的母胰岛素或其类似物，其中修饰是以连接酰胺、碳水化合物、烷基、酰基、酯、peg化等的形式。一个实例是lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素。
本文使用的术语“人胰岛素”意指，结构和性质公知的人胰岛素激素。人胰岛素具有两条多肽链，命名为a链和b链。a链是21个氨基酸肽和b链是30个氨基酸肽，两条链通过二硫桥连接：第一个桥在a链位置7上的半胱氨酸与b链位置7上的半胱氨酸之间，和第二个桥在a链位置20上的半胱氨酸与b链位置19上的半胱氨酸之间。第三个桥存在于a链位置6与11上的半胱氨酸之间。
在人体中，该激素被合成为单链前体胰岛素原(前胰岛素原)，其由以下结构的24个氨基酸的前肽与其后的包含86个氨基酸的胰岛素原组成：前肽-b-argarg-c-lysarg-a，其中c是31个氨基酸的连接肽。arg-arg和lys-arg是用于从a链和b链切割连接肽的切割位点。
本文使用的术语“胰岛素肽”意指，具有胰岛素活性的人胰岛素或者其类似物或衍生物。
本文使用的术语“母胰岛素”旨在意指，对其氨基酸序列应用任何修饰之前的胰岛素。
本文使用的术语“胰岛素类似物”意指，其中胰岛素的一个或多个氨基酸残基已被其他氨基酸残基取代和/或其中一个或多个氨基酸残基已从胰岛素上缺失和/或其中一个或多个氨基酸残基已添加和/或插入到胰岛素中的修饰胰岛素。
在一个实施方案中，胰岛素类似物相对于母胰岛素包含少于8个修饰(取代、缺失、添加(包括插入)及其任何组合)，备选地相对于母胰岛素少于7个修饰，备选地相对于母胰岛素少于6个修饰，备选地相对于母胰岛素少于5个修饰，备选地相对于母胰岛素少于4个修饰，备选地相对于母胰岛素少于3个修饰，备选地相对于母胰岛素少于2个修饰。胰岛素类似物的一个实例是aspb28人胰岛素。
指示胰岛素分子中的修饰，说明链(a或b)、位置和取代天然氨基酸残基的氨基酸残基的单字母或三字母密码。
“desb30”或“b(1-29)”意指，缺失b30氨基酸的天然胰岛素b链或其类似物，和“a(1-21)”意指天然胰岛素a链。因此，例如a21gly、b28asp、desb30人胰岛素是以下的人胰岛素类似物，其中a链位置21上的氨基酸被甘氨酸取代、b链位置28上的氨基酸被天冬氨酸取代和b链位置30上的氨基酸缺失。
本文术语像“a1”、“a2”和“a3”等分别表示胰岛素a链位置1、2和3等上的氨基酸(从n末端计数)。类似地，术语像b1、b2和b3等分别表示胰岛素b链位置1、2和3等上的氨基酸(从n末端计数)。使用氨基酸的单字母密码，术语像a21a、a21g和a21q分别指定a21位置上的氨基酸是a、g和q。使用氨基酸的三字母密码，相应的表示分别是a21ala、a21gly和a21gln。
本文术语“a(0)”或“b(0)”分别表示a1或b1n端的氨基酸位置。术语a(-1)或b(-1)分别表示a(0)或b(0)n端的第一个氨基酸位置。因此a(-2)和b(-2)分别表示a(-1)和b(-1)n端的氨基酸位置，a(-3)和b(-3)分别表示a(-2)和b(-2)n端的氨基酸位置，诸如此类。
本文术语a(0)或b(0)分别表示a1或b1n端的氨基酸位置。术语a(-1)或b(-1)分别表示a(0)或b(0)n端的第一个氨基酸位置。因此a(-2)和b(-2)分别表示a(-1)和b(-1)n端的氨基酸位置，a(-3)和b(-3)分别表示a(-2)和b(-2)n端的氨基酸位置，诸如此类。术语a22或b31分别表示a21或b30c端的氨基酸位置。术语a23或b32分别表示a22或b31c端的第一个氨基酸位置。因此，a24和b33分别表示a23和b32c端的氨基酸位置，诸如此类。
本文使用的术语“不钝化”意指，当在一个制剂中配制时，速效胰岛素和酰化胰岛素都具有与以分开的制剂给予速效胰岛素和酰化胰岛素时的作用特征相同或实质上相同的作用特征。
本文术语“氨基酸残基”是羧基从形式上被移除羟基和/或氨基从形式上被移除氢原子的氨基酸。
hglu是高谷氨酸。
α-asp是l形式的-hnch(co-)ch2cooh。
β-asp是l形式的-hnch(cooh)ch2co-。
α-glu是l形式的-hnch(co-)ch2ch2cooh。
γ-glu是l形式的-hnch(cooh)ch2ch2co-。
α-hglu是l形式的-hnch(co-)ch2ch2ch2cooh。
δ-hglu是l形式的-hnch(cooh)ch2ch2ch2co-。
β-ala是-nh-ch2-ch2-cooh。
sar是肌氨酸(n-甲基甘氨酸)。
措辞“侧链中具有羧酸基的氨基酸残基”指像asp、glu和hglu等的氨基酸残基。氨基酸可为l或d构型。如果无具体说明，那么应理解成氨基酸残基为l构型。
本文使用的术语“治疗疾病”意指，管理和护理已发展疾病、病况或病症的患者。治疗的目的是为了与疾病、病况或病症战斗。治疗包括给予活性化合物以消除或控制疾病、病况或病症以及减轻与疾病、病况或病症相关的症状或并发症。
本文使用的术语“推注胰岛素(bolusinsulin)”、“用餐相关胰岛素(meal-relatedinsulin)”或“速效胰岛素”意指，立刻发生作用并适用于涵盖用餐期间和餐后胰岛素需求的胰岛素肽。
术语“糖尿病”包括1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病(妊娠期间)和其他引起高血糖症的病情。该术语用于其中胰腺产生不足量的胰岛素或其中身体的细胞未能对胰岛素合适反应从而防碍细胞吸收葡萄糖的代谢障碍。因此，葡萄糖在血液中积累。
1型糖尿病亦称为胰岛素依赖型糖尿病(iddm)和青少年型糖尿病，由b细胞破坏引起，通常导致绝对的胰岛素缺乏。
2型糖尿病亦被称为非胰岛素依赖型糖尿病(niddm)和成人型糖尿病，与占主导的胰岛素抵抗有关，并因此与相对的胰岛素缺乏和/或占主导的胰岛素分泌缺陷伴随胰岛素抵抗有关。
本文使用的术语“缓冲剂”指药物组合物中这样的化合物，其降低组合物的ph随着时间变化的趋势，否则，由于化学反应将发生ph随时间的变化。缓冲剂包括化学品，例如磷酸钠、tris、甘氨酰甘氨酸、乙酸钠和柠檬酸钠。
本文使用的术语“防腐剂”指，加入药物制剂中以防止或延缓微生物活性(生长和代谢)的化合物。药学上可接受的防腐剂的实例是苯酚、间甲酚以及苯酚和间甲酚的混合物。
使用的术语“等渗剂”指，用于调节药物制剂的渗透压使得渗透压变得与人血浆的渗透压更接近的药物制剂中的化合物。等渗剂包括氯化钠、甘油、甘露糖醇、丙二醇等。
本文使用的术语“稳定剂”指，加入包含肽的药物制剂中以便使肽稳定(即增加这种制剂的保质期和/或使用中的时间)的化学品。药物制剂中使用的稳定剂的实例是l-甘氨酸、l-组氨酸、精氨酸、聚乙二醇和羧基甲基纤维素。另外，苯酚、锌离子和氯化钠可作为稳定剂起作用。
本文使用的术语“表面活性剂”指，用于调节空气和疏水表面的界面，其调节方式使得移动或部分移动胰岛素、胰岛素类似物和胰岛素衍生物离开界面的药物制剂中的化合物。可使用多种常规的表面活性剂，例如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇以及聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯。一个实例是聚山梨醇酯20。
发明描述
本发明涉及一种用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法，其中所述方法包括将胰岛素衍生物溶解在任选包含药学上可接受的赋形剂的水中以形成胰岛素衍生物溶液，调节溶液的ph至ph超过7.2，在持续搅拌的同时加入锌溶液，并调节ph至制剂的靶ph，且其中所述胰岛素衍生物包含具有侧链的胰岛素分子，所述侧链连接在母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，所述侧链具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
在侧链上具有羧酸基的α-氨基酸残基，该残基利用其羧酸基之一与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基一起形成酰胺基；
由2、3或4个α-氨基酸残基经由酰胺羰基键连接在一起构成的链，该链经由酰胺键连接至母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，w的氨基酸残基选自：具有中性侧链的氨基酸残基和在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基，使得w具有至少一个在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基；或
x与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基之间的共价键；
x是：
-co-；
-ch(cooh)co-；
-co-n(ch2cooh)ch2co-；
-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
当w是氨基酸残基或氨基酸残基的链时，经由下划线的碳的键与w中的氨基形成酰胺键；或
当w是共价键时，经由下划线的羰基碳的键与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基形成酰胺键；
y是：
-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整数；
二价烃链，其包含1、2或3个-ch=ch-基和足以使该链中的碳原子的总数介于10-32的多个-ch2-基；和
z是：
-cooh；
-co-asp；
-co-glu；
-co-gly；
-co-sar；
-ch(cooh)2；
-n(ch2cooh)2；
-so3h；或
-po3h；
和包含其任何zn2+复合物，条件是当w是共价键且x是-co-时，那么z不为-cooh。
本发明人出乎意料地发现，通过提高包含胰岛素衍生物的溶液的ph至ph值超过7.2，当加入锌溶液时，将实质上无胰岛素衍生物的沉淀，意指无沉淀形成或者如果形成沉淀，那么它就立刻再次溶解。
溶液中胰岛素衍生物的沉淀可通过目测溶液来观察。如果胰岛素衍生物在溶液中沉淀，沉淀就使得溶液不清澈。当溶液是清澈和透明时，不存在或实质上不存在胰岛素衍生物的沉淀。
在本发明的一个方面，当胰岛素衍生物溶解在水中时，其中溶解有胰岛素衍生物的水包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。可向水中加入多种药学上可接受的赋形剂，例如苯酚、间甲酚、甘油、氯化钠和任选tris或磷酸盐缓冲液，以获得赋形剂的水性溶液，并将胰岛素衍生物溶解在该水性溶液中。
在本发明的一个方面，在调节溶液的ph至靶ph之前向胰岛素衍生物的水性溶液中加入一种或多种药学上可接受的赋形剂。在本发明的一个方面，在调节靶ph之后向制剂中加入药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，药学上可接受的赋形剂选自苯酚、间甲酚、甘油和氯化钠。
在本发明的一个方面，靶ph低于向其加入锌溶液的水性溶液的ph。在本发明的一个方面，当加入锌溶液时，调节该水性溶液的ph至超过7.4。在本发明的一个方面，当加入锌溶液时，调节该水性溶液的ph至超过7.6。在本发明的一个方面，当加入锌溶液时，调节该水性溶液的ph至超过7.8。在本发明的一个方面，当加入锌溶液时，调节该水性溶液的ph至超过8.0。
在本发明的一个方面，靶ph的范围是7.0-7.8。在一个方面，靶ph的范围是7.2-7.8。在一个方面，靶ph的范围是7.4-7.6。
在本发明的一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.4，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.0-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.6，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.0-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.8，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.0-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过8.0，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.0-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.2，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.2-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.4，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.2-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.6，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.2-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.8，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.2-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过8.0，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.2-7.8的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.2，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.4-7.6的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.4，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.4-7.6的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.6，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.4-7.6的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过7.8，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.4-7.6的靶ph。
在一个方面，调节该水性溶液的ph至超过8.0，加入胰岛素溶液，然后调节ph至范围是7.4-7.6的靶ph。
多种酸和碱可用于调节该水性溶液的ph或达到靶ph。合适酸的实例是盐酸、乙酸、硫酸和磷酸。合适碱的实例是氢氧化钠、tris、碳酸盐和磷酸盐。在一个实施方案中，tris、碳酸盐和磷酸盐亦作为缓冲剂起作用。
在本发明的一个方面，在超过1分钟期间向该水性溶液加入锌溶液。在本发明的一个方面，该期间是超过2分钟。在本发明的一个方面，该期间是超过3分钟。在本发明的一个方面，该期间是超过4分钟。在本发明的一个方面，该期间是超过5分钟。在本发明的一个方面，该期间是超过6分钟。在本发明的一个方面，该期间是超过7分钟。
在本发明的一个方面，锌溶液包含醋酸锌。在一个方面，锌溶液选自醋酸锌、氯化锌、硫酸锌和葡萄糖酸锌。在本发明的一个方面，锌溶液是醋酸锌。
在本发明的一个方面，锌溶液和可溶性胰岛素衍生物的比例是每6分子的胰岛素衍生物4.3个锌原子至每6分子的胰岛素衍生物12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物4.5-12个锌原子。
在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物4.7-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物4.9-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物5.1-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物5.3-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物5.5-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物5.7-12个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物5.9-11.5个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物6.1-11.0个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物6.3-10.5个锌原子。在本发明的一个方面，该比例是每6分子的胰岛素衍生物6.5-10.0个锌原子。
在本发明的一个方面，胰岛素衍生物是lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素。
在本发明的一个方面，向制剂中加入速效胰岛素。速效胰岛素可选自aspb28人胰岛素、lysb3glub29人胰岛素和/或lysb28prob29人胰岛素。在本发明的一个方面，速效胰岛素是aspb28人胰岛素(门冬胰岛素)。
本发明另外涉及由用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法所获得的产品。由本发明的方法获得的产品可包含速效胰岛素(例如门冬胰岛素)且不发生钝化。
在本发明的一个方面，提供由用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法所获得的产品用于治疗糖尿病的用途。
在本发明的再一方面，制剂另外包含药学上可接受的防腐剂，其可选自苯酚、邻甲酚、间甲酚、对甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苯甲醇、氯丁醇和硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、氯己啶(chlorohexidine)、去氢醋酸钠、氯甲酚、对羟基苯甲酸乙酯、苄索氯铵、氯苯甘醚(3-对氯苯氧丙烷-1,2-二醇)或其混合物。在本发明的再一方面，防腐剂以0.1mg/ml-20mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，防腐剂以0.1mg/ml-5mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，防腐剂以5mg/ml-10mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，防腐剂以10mg/ml-20mg/ml的浓度存在。这些具体防腐剂的每一个组成本发明的备选方面。在药物组合物中使用防腐剂是技术人员公知的。为了方便，参考remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第19版,1995。
在本发明的再一方面，制剂另外包含等渗剂，其可选自盐(例如氯化钠)、糖或糖醇、氨基酸(例如甘氨酸、l-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、糖醇(例如甘油(丙三醇)、1,2-丙二醇(丙二醇)、1,3-丙二醇、1,3-丁二醇)、聚乙二醇(例如peg400)或其混合物。可使用任何糖，例如单糖、二糖或多糖，或者水溶性葡聚糖，包括例如果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、支链淀粉、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉和羧甲基纤维素钠。在一个方面，糖添加剂是蔗糖。糖醇定义为具有至少一个-oh基的c4-c8烃并包括例如甘露糖醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、卫矛醇、木糖醇和阿拉伯糖醇。在一个方面，糖醇添加剂是甘露糖醇。上述糖或糖醇可单独或组合使用。使用量无固定限制，只要糖或糖醇在液体制备物中可溶并且不不利地影响使用本发明的方法所实现的稳定效果即可。在一个方面，糖或糖醇浓度是约1mg/ml-约150mg/ml。在本发明的再一方面，等渗剂以1mg/ml-50mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，等渗剂以1mg/ml-7mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，等渗剂以8mg/ml-24mg/ml的浓度存在。在本发明的再一方面，等渗剂以25mg/ml-50mg/ml的浓度存在。这些具体等渗剂的每一个组成本发明的备选方面。在药物组合物中使用等渗剂是技术人员公知的。为了方便，参考remington:thescienceandpracticeofpharmacy,第19版,1995。
典型的等渗剂是氯化钠、甘露糖醇、二甲基砜和甘油，典型的防腐剂是苯酚、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯和苯甲醇。
合适缓冲剂的实例是乙酸钠、甘氨酰甘氨酸、hepes(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)和磷酸钠。
本发明的制剂可用于治疗对胰岛素敏感的病情。因此，它们可用于治疗1型糖尿病、2型糖尿病和例如有时在严重损伤的人和经历过大手术的人中看到的高血糖症。任何患者的最优剂量水平将取决于多种因素，因素包括使用的具体胰岛素衍生物的功效、患者的年龄、体重、身体活动和饮食、与其他药物的可能组合和待治疗的病情的严重性。建议由本领域技术人员以对已知胰岛素制剂相似的方式来确定本发明的制剂对每个单独患者的每日剂量。
合宜时，本发明的胰岛素衍生物可与其他类型的胰岛素(例如更快速开始作用的胰岛素类似物)混合使用。这种胰岛素类似物的实例描述于例如具有以下公开号的欧洲专利申请中：ep214826(novonordiska/s)、ep375437(novonordiska/s)和ep383472(elililly&co.)。
通过下述实施例进一步阐明本发明，然而这不应视为限制保护的范围。
本发明将在下述段落中概述：
1.一种用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法，其中所述方法包括将胰岛素衍生物溶解在水中，调节溶液的ph至ph超过7.2，在持续搅拌的同时加入锌溶液，并调节ph至制剂的靶ph。
2.根据段落1的方法，其中所述水包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
3.根据段落1的方法，其中在调节靶ph后向制剂中加入一种或多种药学上可接受的赋形剂。
4.根据段落1-3的方法，其中所述药学上可接受的赋形剂选自苯酚、间甲酚、甘油和氯化钠。
5.根据段落1-4的方法，其中所述靶ph低于水的ph。
6.根据段落1-5的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.4。
7.根据段落1-6的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.6。
8.根据段落1-7的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.8。
9.根据段落1-8的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过8.0。
10.根据段落1-9的方法，其中在超过1分钟期间加入锌溶液。
11.根据段落1-10的方法，其中所述期间是超过2分钟、超过3分钟、超过4分钟、超过5分钟、超过6分钟或超过7分钟。
12.根据段落1-11的方法，其中所述靶ph范围是7.0-7.8。
13.根据段落1-12的方法，其中所述靶ph范围是7.2-7.8。
14.根据段落1-13的方法，其中所述靶ph范围是7.4-7.6。
15.根据段落1-14的方法，其中所述锌溶液包含醋酸锌。
16.根据段落1-15的方法，其中锌溶液与可溶性胰岛素衍生物的比例是每6分子的胰岛素衍生物4.3个锌原子至每6分子的胰岛素衍生物12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物4.5-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物4.7-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物4.9-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物5.1-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物5.3-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物5.5-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物5.7-12个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物5.9-11.5个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物6.1-11.0个锌原子、每6分子的胰岛素衍生物6.3-10.5个锌原子或每6分子的胰岛素衍生物6.5-10.0个锌原子。
17.根据段落1-16的方法，其中所述胰岛素衍生物包含具有侧链的胰岛素分子，所述侧链连接在人胰岛素或其类似物的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，所述侧链具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
•在侧链上具有羧酸基的α-氨基酸残基，该残基利用其羧酸基之一与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基一起形成酰胺基；
•由2、3或4个α-氨基酸残基经由酰胺羰基键连接在一起构成的链，该链经由酰胺键连接至母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，w的氨基酸残基选自：具有中性侧链的氨基酸残基和在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基，使得w具有至少一个在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基；或
•x与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基之间的共价键；
x是：
•-co-；
•-ch(cooh)co-；
•-co-n(ch2cooh)ch2co-；
•-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
•-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
•-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
a)当w是氨基酸残基或氨基酸残基的链时，经由下划线的碳的键与w中的氨基形成酰胺键；或
b)当w是共价键时，经由下划线的羰基碳的键与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基形成酰胺键；
y是：
•-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整数；
•二价烃链，其包含1、2或3个-ch=ch-基和足以使该链中的碳原子的总数介于10-32的多个-ch2-基；和
z是：
•-cooh；
•-co-asp；
•-co-glu；
•-co-gly；
•-co-sar；
•-ch(cooh)2；
•-n(ch2cooh)2；
•-so3h；或
•-po3h
和包含其任何zn2+复合物，条件是当w是共价键且x是-co-时，那么z不为-cooh。
18.根据段落17的方法，其中w选自α-asp、β-asp、α-glu、γ-glu、α-hglu和δ-hglu。
19.根据段落17的方法，其中w选自α-asp-gly、gly-α-asp、β-asp-gly、gly-β-asp、α-glu-gly、gly-α-glu、γ-glu-gly、gly-γ-glu、α-hglu-gly、gly-α-hglu、δ-hglu-gly和gly-δ-hglu、α-asp-α-asp、α-asp-α-glu、α-asp-α-hglu、α-asp-β-asp、α-asp-γ-glu、α-asp-δ-hglu、β-asp-α-asp、β-asp-α-glu、β-asp-α-hglu、β-asp-β-asp、β-asp-γ-glu、β-asp-δ-hglu、α-glu-α-asp、α-glu-α-glu、α-glu-α-hglu、α-glu-β-asp、α-glu-γ-glu、α-glu-δ-hglu、γ-glu-α-asp、γ-glu-α-glu、γ-glu-α-hglu、γ-glu-β-asp、γ-glu-γ-glu、γ-glu-δ-hglu、α-hglu-α-asp、α-hglu-α-glu、α-hglu-α-hglu、α-hglu-β-asp、α-hglu-γ-glu、α-hglu-δ-hglu、δ-hglu-α-asp、δ-hglu-α-glu、δ-hglu-α-hglu、δ-hglu-β-asp、δ-hglu-γ-glu和δ-hglu-δ-hglu。
20.根据段落17-19的方法，其中x是-co-或-ch(cooh)co-。
21.根据段落17-20的方法，其中y是-(ch2)m-，其中m是介于6-32、8-20、12-20或12-16的整数。
22.根据段落17-21的方法，其中z是-cooh。
23.根据段落17、18、20、21和22的方法，其中所述胰岛素衍生物是lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素。
24.根据段落1-23的方法，其中向制剂中加入速效胰岛素。
25.根据段落1-24的方法，其中所述速效胰岛素选自aspb28人胰岛素、lysb3glub29人胰岛素和/或lysb28prob29人胰岛素。
26.根据段落25的方法，其中所述速效胰岛素是aspb28人胰岛素。
27.一种产品，其由段落1-27的方法获得。
28.由段落1-27的方法获得的产品用于治疗糖尿病的用途。
在一个方面，本发明在下述段落中概述：
1)一种用于制备包含胰岛素衍生物的药物制剂的方法，其中所述方法包括将胰岛素衍生物溶解在水中，调节溶液的ph至ph超过7.2，在持续搅拌的同时加入锌溶液，并调节ph至制剂的靶ph。
2)根据段落1的方法，其中所述水包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。
3)根据段落1的方法，其中在调节靶ph后向制剂中加入一种或多种药学上可接受的赋形剂。
4)根据段落1-3的方法，其中所述药学上可接受的赋形剂选自苯酚、间甲酚、甘油和氯化钠。
5)根据段落1-4的方法，其中所述靶ph低于水的ph。
6)根据段落1-5的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.4。
7)根据段落1-6的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.6。
8)根据段落1-7的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过7.8。
9)根据段落1-8的方法，其中当加入锌溶液时，调节水性溶液的ph至超过8.0。
10)根据段落1-9的方法，其中在超过1分钟期间加入锌溶液。
11)根据段落1-10的方法，其中所述期间是超过2分钟、超过3分钟、超过4分钟、超过5分钟、超过6分钟或超过7分钟。
12)根据段落1-11的方法，其中所述靶ph范围是7.0-7.8。
13)根据段落1-12的方法，其中所述靶ph范围是7.2-7.8。
14)根据段落1-13的方法，其中所述靶ph范围是7.4-7.6。
15)根据段落1-14的方法，其中所述锌溶液包含醋酸锌。
16)根据段落1-15的方法，其中锌溶液与可溶性胰岛素衍生物的比例是每6分子的胰岛素衍生物4.3个锌原子至每6分子的胰岛素衍生物12个锌原子。
17)根据段落1-16的方法，其中所述胰岛素衍生物包含具有侧链的胰岛素分子，所述侧链连接在人胰岛素或其类似物的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，所述侧链具有通式：-w-x-y-z
其中w是：
•在侧链上具有羧酸基的α-氨基酸残基，该残基利用其羧酸基之一与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基一起形成酰胺基；
•由2、3或4个α-氨基酸残基经由酰胺羰基键连接在一起构成的链，该链经由酰胺键连接至母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基上，w的氨基酸残基选自：具有中性侧链的氨基酸残基和在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基，使得w具有至少一个在侧链上具有羧酸基的氨基酸残基；或
•x与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基之间的共价键；
x是：
•-co-；
•-ch(cooh)co-；
•-co-n(ch2cooh)ch2co-；
•-co-n(ch2cooh)ch2con(ch2cooh)ch2co-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2ch2con(ch2ch2cooh)ch2ch2co-；
•-co-nhch(cooh)(ch2)4nhco-；
•-co-n(ch2ch2cooh)ch2co-；或
•-co-n(ch2cooh)ch2ch2co-；
其
a)当w是氨基酸残基或氨基酸残基的链时，经由下划线的碳的键与w中的氨基形成酰胺键；或
b)当w是共价键时，经由下划线的羰基碳的键与母胰岛素的b链上所存在的lys残基的ε-氨基形成酰胺键；
y是：
•-(ch2)m-，其中m是介于6-32的整数；
•二价烃链，其包含1、2或3个-ch=ch-基和足以使该链中的碳原子的总数介于10-32的多个-ch2-基；和
z是：
•-cooh；
•-co-asp；
•-co-glu；
•-co-gly；
•-co-sar；
•-ch(cooh)2；
•-n(ch2cooh)2；
•-so3h；或
•-po3h
和包含其任何zn2+复合物，条件是当w是共价键且x是-co-时，那么z不为-cooh。
18)根据段落17的方法，其中所述胰岛素衍生物是lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素。
19)根据段落1-18的方法，其中向制剂中加入速效胰岛素。
20)根据段落1-19的方法，其中速效胰岛素选自aspb28人胰岛素、lysb3glub29人胰岛素和/或lysb28prob29人胰岛素。
21)一种产品，其由段落1-20的方法获得。
22)由段落1-20的方法获得的产品用于治疗糖尿病的用途。
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具体实施方式
实施例1
用于制备包含lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素，600nmol/ml(100u/ml)的制剂的方法：
将0.6mmollysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶解在300ml水中，并与500ml的包含16mmol苯酚、16mmol间甲酚和213mmol甘油的水性溶液混合。调节ph至7.40，在以中等速度搅拌的同时，通过使用蠕动泵来连续加入50ml0.01m醋酸锌。在大约30分钟内完成加入。加入醋酸锌后，加入注射用水至950ml，调节ph至7.60，并最终加水至终体积为1升。
实施例2
用于制备包含lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素，1200nmol/ml(200u/ml)的制剂的方法：
将1.2mmollysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶解在300ml水中，并与500ml的包含16mmol苯酚、16mmol间甲酚和213mmol甘油的水性溶液混合。调节ph至7.50，在以中等速度搅拌的同时，通过使用蠕动泵来连续加入110ml0.01m醋酸锌。在大约40分钟内完成加入。加入醋酸锌后，加入注射用水至950ml，调节ph至7.60，并最终加水至终体积为1升。
实施例3
用于制备包含lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素和门冬胰岛素600nmol/ml(u100/ml)的制剂的方法：
lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液：将0.42mmollysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶解在210ml水中，并与350ml的包含11.2mmol苯酚、11.2mmol间甲酚、7mmolnacl和144mmol甘油的水性溶液混合。调节ph至7.40，在以中等速度搅拌的同时，通过使用蠕动泵来连续加入32.9ml0.01m醋酸锌。在大约30分钟内完成加入。加入醋酸锌后，加入注射用水至630ml并调节ph至7.40。
门冬胰岛素溶液：将0.18mmol门冬胰岛素悬浮在15ml水中，并与包含9ml0.01m醋酸锌和4.8ml0.2n盐酸的溶液混合以获得清澈溶液。通过加入水来调节体积至35ml。然后加入180ml的包含4.8mmol苯酚、4.8mmol间甲酚、3mmolnacl和62mmol甘油的溶液。最后调节ph至7.40并通过加入水来调节体积至270ml。
ε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液与门冬胰岛素溶液的混合：将630ml的lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液与270ml的门冬胰岛素溶液混合。调节ph至7.40并通过加入水来最终调节体积至1升。
实施例4
用于制备包含lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素和门冬胰岛素1200nmol/ml(200u/ml)的制剂的方法：
lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液：将0.84mmollysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶解在210ml水中，并与350ml的包含11.2mmol苯酚、11.2mmol间甲酚、7mmolnacl和144mmol甘油的水性溶液混合。调节ph至7.40，在以中等速度搅拌的同时，通过使用蠕动泵来连续加入60.1ml0.01m醋酸锌。在大约30分钟内完成加入。加入醋酸锌后，加入注射用水至630ml并调节ph至7.40。
门冬胰岛素溶液：将0.36mmol门冬胰岛素悬浮在15ml水中，并与包含18ml0.01m醋酸锌和4.8ml0.2n盐酸的溶液混合以获得清澈溶液。通过加入水来调节体积至35ml。然后加入180ml的包含4.8mmol苯酚、4.8mmol间甲酚、3mmolnacl和62mmol甘油的溶液。最后调节ph至7.40并通过加入水来调节体积至270ml。
ε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液与门冬胰岛素溶液的混合：将630ml的lysb29nε-十六烷二酰基-γ-gludesb30人胰岛素溶液与270ml的门冬胰岛素溶液混合。调节ph至7.40并通过加入水来最终调节体积至1升。