用于处理面部表面或身体表面的敷膜的制作方法

发明背景术语“敷膜”最初是指用水浸湿的床单包裹在人体周围的程序。在身体逐渐温暖床单的同时，本应该躁动的人被周围织物的温暖和茧状包裹物所抚慰。如今，这个术语具有更宽泛的含义，在美容行业指的是浸渍有皮肤处理组合物的各种尺寸和形状的织物，用于临时施加至皮肤以提供直接的益处。有趣的是，原始敷膜的舒适方面仍然存在，因为如今的产品通常在白天的清净和悠闲的时间期间或在夜晚使用。在大多数情况下，如今的敷膜用于面部处理。将它们施加至面部并在可能为1至30分钟的短时间段后移除。随后可以清洗面部，或在适当情况下将残留在皮肤上的任何处理组合物按摩到皮肤中。这些敷膜在亚洲消费者中特别受欢迎，有时含有浓度比通常用作日常美容一部分的霜剂和乳剂中所存在的浓度更高的活性成分。但是，如今大多数敷膜以“厨房水槽（kitchensink）”途径配制，并含有号称具有种种益处的许多不同活性成分。存在对于理解处理益处与处理益处的时机选择之间的差异以最大限度地提高功效的失误。例如，已知的是，在天然皮肤细胞中，不同基因的表达在24小时周期内是可变的。这也被称为昼夜节律。皮肤护理产品有时含有据称刺激或抑制某些基因的表达以最终改善不合意的皮肤状况（如老化、色素沉着过度、保湿等等）的活性成分。但是，在最大化任何处理组合物或其中的活性成分的有效性方面重要的是时机选择。特别地，在优化处理表面以接收处理组合物时向处理表面施加处理组合物确保该处理本身是尽可能最有效的。因此，本发明的目的是提供因存在敷膜成分而具有优化功效的敷膜和含有至少一种刺激皮肤细胞中特定基因（所述基因通常在未经处理的天然皮肤细胞中可变地表达）的表达的活性物质和任选至少一种提供益处的第二皮肤处理活性成分的处理组合物；并且其中在处理组合物中刺激特定基因表达的成分在大部分天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将敷膜施加至处理表面（例如皮肤），从而优化成分的处理益处。定义除非另行说明，本文中所述的所有百分比均为重量百分比。“BMAL”是指芳香烃受体核转运蛋白-样蛋白1，其通过ARNTL或BMAL基因编码并影响昼夜节律。“CLOCK”是指存在于皮肤细胞中的昼夜节律运动输出周期故障（CircadianLocomotorOutputCyclesKaput）基因，其编码影响昼夜节律的蛋白（CLK），通常受光和黑暗的影响。“CRY”是指隐花色素基因（cryptochromecircadiangene），其编码影响昼夜节律的蛋白，类型1和2均如此。“PER”是指编码人体中周期节律蛋白同源蛋白的周期（Period）基因（1、2或3）。Per1对于保持昼夜节律尤其重要并且在24小时周期内起伏变化。细胞的Per1基因表达在夜晚最为活跃，在白天时段衰退，并在夜间再次增加。“敷膜”是指可以修改其尺寸和形状以贴合面部表面或身体表面并设计成施用一段短暂的时间以便在施加该敷膜的区域中向角蛋白表面（如皮肤）提供某些美容或治疗改善的材料薄片。“面膜”是指可以修改其尺寸和形状以便放置在面部上并可以包含眼睛、鼻子或嘴部的挖去部分的敷膜。“益处”是指产品按指示使用时经设计以提供的益处。产品制造商宣传的益处（或断言）通常提示消费者开始购买该产品。益处通常属于诸如抗老化处理（处理细纹和皱纹）、抗老化光学（模糊皮肤瑕疵的外观）、保湿（润湿干燥的皮肤）、抗炎（治疗受刺激或发炎的皮肤以减轻发红、疼痛或发热）、SPF（阻断UVA和/或UVB射线）、抗痤疮（治疗痤疮损伤、过度皮肤油腻）、皮肤增白（增白皮肤或改善色素沉着斑点）等等的类别。附图概述图1描绘了本发明的一个实施方案，其中该敷膜为层压件形式，用粘合剂将吸收层与不可渗透层粘合。图2描绘了一种类型的设备，该设备可用于制造层压件并用粘合剂将不可渗透层与吸收层粘合。图3描绘了分为两片的面部处理面膜形式的一类敷膜——一片经设计用于处理面部上半部分，第二片用于施加至面部的下半部分。图4描绘了将敷膜包含在其中的各种类型的包装件和袋，并描绘了将敷膜施加至皮肤的最佳时间的使用说明。图5描绘了测试未处理和暴露于臭氧的细胞以确定24小时周期内的PER1活性的结果。图6描绘了测试时间同步化的未处理细胞、用三肽-32（Tripeptide-32）（PER1基因激活剂）处理的细胞、用臭氧处理的细胞和用臭氧与三肽-32处理的细胞的结果。图7描绘了渗透研究的结果，其显示，与仅含吸收层但不含不可渗透层的相同面膜相比，当该处理组合物浸渍到本发明的层压面膜中时，该处理组合物显示出明显改善（高达25%）的向皮肤中的渗透。发明概述本发明涉及包含浸渍有处理组合物的吸收层的敷膜，所述处理组合物含有至少一种当局部施加至皮肤时刺激在天然未处理皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因的成分并且任选结合至少一种有益剂；该敷膜包含在具有使用说明的包装件内以便在24小时时间周期内的选择时间段处将该敷膜局部施加至皮肤，此时被该成分刺激的相同基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达。本发明还涉及制造敷膜的方法，其包括以下步骤：（a）识别在天然未处理皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因，（b）形成由吸收层和任选与吸收层粘合的不可渗透层组成的敷膜，（c）用处理组合物浸渍该吸收层，所述处理组合物含有至少一种当局部施加至皮肤时刺激上述（a）中的基因的成分；（d）将该敷膜包装在含有使用说明的包装件中，以便在上述（a）中的基因在大部分天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜施加至皮肤。本发明还涉及用敷膜处理皮肤的方法，其包括以下步骤：（a）形成由吸收层和任选与其粘合的不可渗透层组成的敷膜，（b）用处理组合物浸渍该吸收层，所述处理组合物含有至少一种当局部施加至其上时刺激在天然皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因的成分，（c）在上述（b）中的相同基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜局部施加至皮肤。发明详述将在本文中详细描述本发明的各种组分和实施方案。敷膜本发明涉及包含吸收层和任选与吸收层粘合的不可渗透层的敷膜，其中该吸收层浸渍有处理组合物，所述处理组合物含有至少一种具有刺激天然皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因的活性的成分。这种成分还可以是皮肤处理活性物质，或者可以合意地将至少一种附加的皮肤处理活性物质并入该组合物中。敷膜包含在具有使用说明的包装件内以便在由该成分刺激的相同基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜局部施加至皮肤。A.不可渗透层本发明的敷膜为层压件形式，并任选含有至少一个不可渗透层。术语“不可渗透”是指该层通常是不透水汽的，以便可以显著减少或完全抑制活性制剂从面膜吸收层的蒸发。该层压件中使用的不可渗透层可以由金属箔、能够以薄膜形式存在的合成聚合物材料或天然聚合物材料制成。特别优选的是金属箔。金属箔合适的金属箔可以是含有铝、二氧化硅、铁、铜、锰、镁或锌的金属合金。优选的是来自含有0.1至1.0%的二氧化硅与铁的组合、0.01至0.12%的铜、0.001至0.06%的锰、0.001至0.06%的镁、0.001至0.06%的锌和大于大约98%的铝的金属合金、优选来自大约98至100%铝的铝箔。优选的铝箔为固体形式，银色，熔点大于650℃，比重为2.5至3.0，优选为大约2.7。最优选的是厚度为2至15微米、优选大约5至10微米、更特别为大约7微米的铝箔。最优选的是由ToyoKK,OsakaJapan制造的铝箔合金。合成聚合物片材适于制备层压件的不可渗透层的实例还包括聚偏二氯乙烯、聚乙烯、或能够形成厚度为2至20微米的薄片形式的膜的烯属不饱和单体的其它均聚物或共聚物。适于层压件的此类不可渗透层的实例包括聚偏二氯乙烯或聚乙烯，其种类通常以如加拿大专利号385753中所述的商标“SaranWrap”提及。优选的合成聚合物不可渗透层具有类似于包括2.5至3.0、优选大约2.7的比重（密度）的金属箔的那些的功能特性。不可渗透层提供阻挡层，该阻挡层有助于活性成分渗透到皮肤中、减少水和流体从面膜中蒸发、并通常改善了处理的有效性。B.吸收层用于制造面膜的吸收层优选由非织造织物制成。非织造织物是指既非针织也非机织的那些。它们通常通过机械、热或化学缠结纤维或长丝来形成。适于吸收层的非织造织物具有各种优选的功能性质。首先，最合适的非织造织物应具有良好的水或液体吸收性质。也就是说，该织物应当能够吸收和保留液体。合适的非织造织物可以通过根据Larose方法测量吸水能力来识别。在这种情况下，合适的非织造织物的实例可以具有每1克5秒后大约0.03至2.5毫升/克的吸水性读数。更优选的是吸水能力为0.30至2.5毫升/克。如果吸水能力过低（低于0.03毫升/克），则该非织造织物可能无法吸收足够的处理组合物以处理所需角蛋白表面积。例如，在面膜应用中，期望该吸收层含有大约15至50毫升、更优选20-40毫升。最优选的是在表面积为55至80平方英寸的面膜中具有大约24-25毫升的填充量。在一个优选实施方案中，非织造织物具有0.1至1.0毫米、优选0.2至0.8毫米、更优选0.5至0.7毫米的厚度。合适的非织造织物还必须具有足以使该织物能够容易地悬垂到处理表面上并且即使在略微移动的情况下也能留在处理皮肤表面上的适当位置处的柔性。这种性质通常通过测量抗弯曲性，优选通过悬臂刚度法（IST90.1-86或ASTMD1388）来量化。在一个实施方案中，非织造织物可以具有1.0至2.0mm.m2/g的抗弯曲性。可用于本发明的合适的非织造织物的另一性质通过抗悬垂性（draperesistance）来量化。合适的非织造织物包括具有1至70%、优选大约25-70%或50-68%的悬垂系数的那些。悬垂系数越高，该织物越不易悬垂。在制备用于处理身体表面的敷膜时，悬垂性是重要的考虑因素。该敷膜必须能够悬垂在处理表面上。在另一实施方案中，非织造织物的KES抗弯刚度B值为0.20gf/cm2/cm或更低，并提供柔软和易于弯曲的织物。此外，非织造织物的一个优选实施方案可以通过其摩擦系数来表征，这是由此可以量化光滑感觉的一个量度。用于计算摩擦系数的公式是：μ=F/N其中F是在水平表面上移动物体所需的力，N是垂直于该表面的负荷。优选通过摩擦测试仪来测量摩擦。在一个优选实施方案中，非织造织物的摩擦系数小于0.45MIU。测量值大于0.45MIU的织物可能倾向于提供坚硬的触感。可用于制备吸收材料的非织造织物的纤维的实例包括纤维素、人造丝、羊毛、丝、乙酸纤维素、合成纤维或半合成纤维。纤维还可以是天然纤维与合成纤维的复合材料。纤维素纤维可以是天然或合成的。当纤维素纤维是亲水性的时，改善了非织造织物的吸水性和保水性。天然纤维素纤维的实例包括木浆、来自非木材来源的纸浆、棉花、棉绒等等。纸浆纤维可以来自硬木浆或软木浆和来自竹子、秸秆、树皮、大麻、黄麻等等。软木浆是特别合适的，因为其具有较长的纤维长度，其在用于制造非织造织物的粘合过程中保持完整性，而具有较短纤维长度的硬木浆并非最佳。特别合意的是其中纸浆占非织造织物组合物的5至90%、优选20-80%、更优选40-70%的非织造织物。可能合意的是在非织造织物组合物中包含人造丝纤维。由再生纤维素纤维制成的人造丝将提高非织造织物中的强度和吸水性。人造丝纤维的量可以为全部非织造织物组合物的10-90%、优选20-80%、更优选25-75%。结合人造丝与纤维素纤维提供了具有良好的感觉、吸水性和强度的非织造织物。可能同样合意的是在非织造织物中包含合成纤维。此类合成纤维的实例包括聚酰胺、聚丙烯腈、聚烯烃、聚酯或聚乙烯醇如聚对苯二甲酸乙二醇酯（PET）、聚对苯二甲酸丁二醇酯（PTT）、聚丙烯等等的均聚物和共聚物。如果需要的话，非织造织物可以含有1-75%、优选5至50%、更优选大约5至30%的此类合成纤维。如果合成纤维的量过大，例如大于60-70%，则非织造织物的吸水性降低，并且当将非织造织物放置在处理表面上时，处理组合物不能容易地转移到该处理表面上。如果合成纤维具有一定的亲油性，则可以最大程度地增加浸渍到吸收层中的处理组合物的转移。这使得润湿组合物可以更容易地从吸收层渗出进入皮肤中。在一个优选实施方案中，该合成纤维是PET。特别优选的是其中该吸收层是含有大约25-75%纸浆（棉）、10-50%人造丝和2-15%聚酯，更优选大约55+/-5%纸浆、35+/-5%人造丝和10%+/-5%聚酯的非织造织物。这种非织造织物的一个实例可以购自SanshoShigyoCo.Ltd。在其它优选实施方案中，该织物具有上述功能参数中的一个或多个，特别是吸水性、悬垂系数、KES抗弯刚度和摩擦系数。C.粘合剂如果需要的话，吸收层与不可渗透层的层压用粘合剂来完成。该粘合剂必须将两个层以永久的方式固定在一起、与不可渗透层和吸收层以及处理组合物相容、并在施加压力和热的情况下可操作以使层融合在一起。用于实行粘合的热必须低到足以有效地层压两个层，而不会高到足以造成吸收层的燃烧、崩解、熔化或其它破坏。在一个实施方案中，粘合剂具有200至300℃的熔点，并可以操作以在比其熔融温度低大约1至35%的温度下有效地使吸收层与不可渗透层融合。最优选的是来自烯属不饱和单体重复单元如丙烯酸、甲基丙烯酸或它们的简单C1-20烷基或芳族酯；或乙烯、丙烯、丁烯重复单元的聚合物。特别优选的是聚乙烯，特别是由TosohCorporation以商品名Petrothene出售的低密度聚乙烯，其具有221至248℃的熔点，并且为乳白色丸粒的固体形式，比重为915至935kg/m3。最优选的是其中该粘合剂具有200至300℃的熔点，并在大约300至400℃的温度下将不可渗透层与吸收层粘合。D.吸收层与不可渗透层的粘合在敷膜为层压件形式的情况下，吸收层与不可渗透层必须粘合在一起以形成其中吸收层粘附到不可渗透层上的层压件。粘合最好通过以下方法来实现：在非织造织物与金属箔的两个独立的卷轴之间放置具有粘合材料的挤出机并以足够量的压力和热在两个层之间挤出该粘合材料以使所述层层压在一起，随后将该层压件卷绕到独立的收集辊上。在图1中描绘了通过用粘合剂4将吸收层2与不可渗透层3粘合形成的层压件1。图2中最好地描绘了适于进行层压的设备。将粘合材料17进料到挤出机6的入口5中。非织造织物7在一个卷轴8上，金属箔形式的不可渗透层9置于第二卷轴10上。当该设备被接合时，非织造织物7经引导卷轴11和12进料，所述引导卷轴11和12旋转并使该非织造织物膜层跨越两个旋转的卷轴11和12进料到更大的旋转卷轴13上，所述旋转卷轴13邻接另一更大的旋转卷轴14，以使当卷轴13在顺时针方向上旋转时，卷轴14在逆时针方向上旋转，并且吸收层7和金属箔层9在卷轴13和14之间进料，粘合材料17在两个层之间伴随着压力和热进料以使箔层9和非织造织物7粘合在一起。第二卷轴10类似地旋转以便将金属箔层9进料到卷轴13和14中。金属箔层9由第二卷轴10进料至更大的卷轴14，并在粘合材料17在两个层之间进料时施加压力和热以便将它们粘合在一起形成层压件1。当粘合层从卷轴13和14处送出时形成的层压件沿较小的卷轴15进料并储存在接收卷轴18上，以便随后切割成所需尺寸和形状。该处理组合物（在下文中更充分描述）可以在将层压件切割成对于处理表面所需的形状之前或之后浸渍到吸收层中。更具体而言，优选的是上述层的粘合发生时的温度为300至400℃、优选325至360℃、最优选330至335℃。粘合的最佳压力为2.5至4.0帕斯卡、更优选2.75至3.25帕斯卡、最优选大约2.8至3.2帕斯卡，或特别是3.0帕斯卡。由非织造织物层、粘合剂层和不可渗透层形成的层压件优选具有0.2至1.5mm、优选大约0.2至1.0mm、最优选0.3至0.8mm的厚度。该厚度提供了具有最佳强度和弹性的敷膜。E.将处理组合物浸渍到吸收层中处理组合物（更具体地描述在本文中）优选在层压过程之后并在将层压辊切割至对于处理表面所期望的所需形状和尺寸之前或在切割定制形状之后浸渍到该吸收层中。最优选的是，在层压件已经切割成所需尺寸和形状之后将处理组合物浸渍到吸收层中。在本发明的一个实施方案中，处理组合物可以包含在单独的容器中，并由消费者施加到面膜上。在这种情况下，面膜与装有处理组合物的容器以消费者购买的套装形式出售。在临使用前，消费者将处理组合物施加到面膜的吸收层上以便处理皮肤。F.面膜形状随后根据待处理的表面将层压件切割成所需形状。例如，面部处理敷膜可以以适于施加至面部的多种构造来切割。这些形状包括覆盖整个面部表面的一片式面膜，或可以放置在所需的策略性区域如眼睛下方、嘴部周围或皮肤干燥区域中的各种较小的片。最优选的是如图3中所描绘的两截式面膜，其中顶部部分覆盖前额和鼻子之间的区域，底部部分覆盖鼻子下方周围至脸颊或颈部。图3的两片式面膜具有两个眼部狭缝19，所述眼部狭缝19足够大以使得面膜20的上部部分贴合在面部的顶部上，但是不会遮挡眼睛。鼻子21任一侧上的狭缝使得该面膜部分能够处理鼻子的鼻梁区域。用于处理面部下半部分的面膜部分22具有正好大到足以包围嘴唇的开口部分23。各种狭缝24、25、26和27优选嵌在下部面膜22中以允许更容易地悬垂在下巴周围。敷膜容器和使用说明经切割以贴合所需角蛋白表面的敷膜包含在包装件内，该包装件优选是如图4中所描绘的密封袋或封套28。一种类型的包装件描绘在图4中。用于容纳敷膜的封套可以具有确保面膜可以保持未折叠的尺寸和形状。可替代地，可能更合意的是将敷膜折叠成一半或四分之一并储存在尺寸较小的封套28中。使用说明可以直接放置在封套29上，或者可替代地在一个或多个封套28放置在其中的二级包装件30上。二级包装件可以是用于容纳一个或多个包含在储存封套28中的单个敷膜的盒子30。使用说明指导使用者在由处理组合物中的成分激活的相同基因在天然皮肤细胞中最大程度地表达时施用该敷膜。处理组合物本发明的敷膜中使用的处理组合物优选为液体形式。其可以是乳液（水包油或油包水）或呈溶液或分散体形式。特别优选的形式被称为精华液，其通常是水、润湿剂和其它成分的混合物并含有极少油相至不含油相。适于浸渍到敷膜中的处理组合物可以具有在25℃下2至1000、优选大约2至200、更优选大约5-50cps的粘度，以及1.000至1.010、更优选大约1.000至1.008、最优选大约1.005的比重。将该处理组合物保持在所述粘度和比重范围内确保其将适当地浸渍吸收层并且呈充分地液态以渗透该层，但不会过于粘稠以至于难以渗透该层。如果处理组合物为乳液形式，则该组合物可以含有大约1-99%、优选大约5-90%、更优选大约10-85%的水和大约1-99%、优选大约5-90%、更优选大约5-75%的油。如果为含水悬浮液或分散体的形式，则该组合物通常可以含有大约1-99.9%、优选大约5-95%、更优选大约10-90%的水，剩余成分是活性成分或其它配方成分。特别合适的是含有至少一种在刺激天然皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因方面具有活性的活性成分和任选至少一种提供益处的皮肤处理活性物质的处理组合物。该组合物可以含有有助于提供稳定和商业上可接受的配方的其它成分。刺激在24小时周期内可变地表达的基因的活性成分可以通过同步化经处理的细胞以使得它们的生物（昼夜节律）途径全部同步运行来起作用，特别是当持之以恒地施用该敷膜时。可替代地，这种活性成分还可以通过补充天然皮肤生物蛋白的耗竭状态（在一天结束时常常出现的症状）来起作用，所述天然皮肤生物蛋白刺激可变表达基因。具有刺激可变表达基因的活性的成分将最大程度地提高一种或多种有益活性物质的有效性，由此优化它们在处理表面上的效果。A.刺激可变表达基因的活性物质皮肤细胞中的可变表达基因的实例包括周期同源基因（PER1、2和3）、昼夜节律运动输出周期故障（CLOCK）、隐花色素基因（ChryptochromeCircadianClock）1或1（CRY1、2）以及脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白（BrainandMuscleArylhydrocarbonReceptorNuclearTranslocator）（BMAL）等等。这些基因通常被称为昼夜节律基因，因为它们在24小时周期内在皮肤细胞中可变地表达，峰值表达通常发生在傍晚至夜晚的时段中。刺激这些基因在皮肤细胞（例如角质形成细胞、成纤维细胞、脂肪细胞等等）中的表达的活性成分可以刺激PER、CLOCK、CRY或BMAL基因中的一种或多种，并且包括但是不限于本文中所述的这些。刺激可变表达基因的表达的成分可以以0.00001至8%、优选大约0.0005至5%、更优选大约0.001至3%的量存在于该处理组合物中。松果菊–菊苣酸松果菊（Echinacea）提取物，或由其衍生的活性组分，菊苣酸尤其已经显示为PER和PER1的合适的激活剂。菊苣酸组分可以是合成的或天然来源的。合成菊苣酸可以购自许多商业制造商，包括SigmaAldrich。菊苣酸还可以从已知含有菊苣酸的植物来源中提取，所述植物来源例如松果菊属、菊苣属（Cichorium）、蒲公英属（Taraxacum）、罗勒属（Ocimum）、蜜蜂花属（Melissa），或来自藻类或海草。更具体而言，植物提取物如紫松果菊（Echinaceapurpurea）、菊苣（Cichoriumintybus）、西洋蒲公英（Taraxacumofficinale）、罗勒（Ocimumbasilicum）或香蜂花（Melissaofficinalis）是优异的来源。术语“菊苣酸”在本文中使用时还包括其可操作用于增加皮肤细胞中的PER1基因表达的任何异构体。最优选的是由Symrise以商品名Symfinity™1298出售的来自紫松果菊的植物提取物，其在提取过程中经标准化以含有大约3重量%的菊苣酸的总提取组合物。来自不同来源的松果菊提取物的菊苣酸含量不等，因此将在诱导PER1基因表达方面产生不同的结果。例如，我们已经观察到通常在松果菊提取物中存在的另一种组分，特别是咖啡酰酒石酸，不会增加皮肤细胞中的PER1基因表达。此外，松果菊的各物种在酚酸和菊苣酸含量方面不同。紫松果菊根部的乙醇提取物将提供比狭叶松果菊（Echineaceaangustifolia）或苍白松果菊（Echinaceapallida）的乙醇提取物更多的菊苣酸。任何提取物中活性成分的含量还非常依赖于提取方法。例如，已知在许多情况下提取过程中的酶促褐变将降低所得提取物的酚酸含量。具有最佳菊苣酸含量的松果菊提取物优选在乙醇中提取。交替提取可以是仅有水、混合的水和醇、或单独的醇，醇选自甲醇、乙醇和具有类似的低级碳链长度的那些，如丙醇、异丙醇等等。肽多种肽是合适的CLOCK或PER1基因激活剂。此类肽的一个实例公开在美国专利申请号2014/0045766中，其经此引用以其全文并入本文。此类肽具有以下通式：其中(AA)n-X1–S–T–P–X2–(AA)p是(SEQIDNo.1)，且：X1代表苏氨酸、丝氨酸，或等于零，X2代表异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甘氨酸，或等于零，AA代表任何氨基酸或其衍生物，n和p是0至4的整数，R1代表N端氨基酸的伯胺官能，其是游离的或被保护性基团取代，所述保护性基团可以选自乙酰基、苯甲酰基、甲苯磺酰基或苄氧基羰基，R2代表C端氨基酸的羧基官能的羟基基团，被保护性基团取代，所述保护性基团可以选自C1至C20烷基链或NH2、NHY或NYY基团，其中Y代表C1至C4烷基链，其中通式（I）的序列包含大约3至13个氨基酸残基，所述通式（I）的序列中可能用其它化学上等效的氨基酸取代氨基酸X1和X2；其中该氨基酸是：丙氨酸（A）精氨酸（R）天冬酰胺（N）天冬氨酸（D）半胱氨酸（C）谷氨酸（E）谷氨酰胺（Q）甘氨酸（G）组氨酸（H）异亮氨酸（I）亮氨酸（L）赖氨酸（K）甲硫氨酸（M）苯丙氨酸（F）脯氨酸（P）丝氨酸（S）苏氨酸（T）色氨酸（W）酪氨酸（Y）缬氨酸（V）。更优选的是如下的上式的肽：更优选的是S-T-P-NH2肽、SEQIDNo.1或其混合物。最优选的是由ISP-Vincience以商标Chronolux®制造的肽，其具有INCI名称三肽-32。另一种合适的肽如美国专利申请号2011/0269694（其经此引用以其全文并入本文）中所公开并具有下式：其中：X1是半胱氨酸、甲硫氨酸或等于零，X2是丝氨酸、苏氨酸或等于零，X3是丙氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸、缬氨酸或等于零。X4是天冬酰胺、谷氨酰胺或等于零。R1是N端氨基酸的伯胺官能，其是游离的或被保护性基团取代，所述保护性基团可以选自乙酰基、苯甲酰基、甲苯磺酰基或苄氧基羰基，R2是C端氨基酸的羧基官能的羟基基团，其是游离的或被保护性基团取代，所述保护性基团可以选自C1-20烷基链或NH2、NHY或NYY基团，其中Y是C1-4烷基链，所述通式（I）的序列由4至8个氨基酸残基形成，所述通式（I）的序列中可能用其它化学上等效的氨基酸取代氨基酸X2至X4。更优选的是其中选择取代基以提供下式的肽：这种肽可以以商标Chronogen®购自ISP-Vinscience，其具有INCI名称四肽-26。同样适于作为PER、CLOCK、BMAL或CRY中的一种或多种的激活剂的是作为细胞自噬过程的激活剂的成分。通常，细胞自噬过程包括四个一般步骤。步骤1是启动空泡形成；步骤2是形成初始的空泡或自噬体，其隔离待降解的细胞质材料。步骤3是自噬体成熟为降解性空泡。步骤4是隔离的材料的实际降解。具有自噬激活活性的成分可以通过它们刺激或抑制各种细胞代谢途径的能力来识别。例如，刺激MAP-LC3、ATG5-12、蛋白p53、AMPK或DRAM基因的表达的成分是合适的自噬激活剂。抑制mTOR基因的表达的成分也是合适的自噬激活剂。基因MAP-LC3编码微管相关蛋白1轻链3——一种启动自噬体形成的蛋白质。ATG5-12也刺激自噬体的形成。mTOR（也称为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白）也被称为雷帕霉素机制性靶标或FK506结合蛋白12-雷帕霉素相关蛋白1（FRAP1）。FRAP1由FRAP基因编码。抑制mTOR的表达、参与自噬体生成的任何成分将具有自噬激活性质。同样适于作为自噬激活剂的是在角质形成细胞中刺激蛋白p53、AMPK和/或DRAM（损伤修复自噬调节蛋白）的表达的成分。蛋白p53（也称为肿瘤抑制蛋白）由p53基因编码。AMPK是指AMP激活蛋白激酶，DRAM是指损伤相关的自噬调节剂。这两种已知在角质形成细胞中刺激自噬激活。因此，对基因具有上述作用的任何成分可以是合适的自噬激活剂和PER、BMAL、CLOCK或CRY的激活剂。在自噬过程中，细胞碎片如氧化蛋白和过氧化脂质被降解。此类细胞碎片常常影响正常的代谢功能。筛选成分以便通过刺激或抑制上述细胞（优选角质形成细胞）、基因和/或蛋白的能力来确定功效可以根据美国专利公开号2011/0243983（其经此引用以其全文并入本文）中所述的方法或本领域中已知的其它方法来进行。例如，识别可以作为自噬激活剂的成分的一种通用方法是通过首先诱导在培养的细胞（如角质形成细胞）中的营养应激。例如，该细胞首先在含有生长因子的完全培养基中培养大约24小时。随后移除该培养基并代之以非营养培养基，例如不含生长因子的培养基。细胞在营养应激状态下培养大约30分钟至大约25小时。随后，移除非营养培养基并代之以完全培养基以促进细胞恢复。其后，通过测量这些细胞中MAP-LC3；ATGS-12；磷酸化mTOR；磷酸化p53；DRAM；或磷酸化AMPK中的一种或多种的表达来评价细胞的自噬活性。此类表达的测量可以通过免疫荧光测量来进行。此外，该表达可以通过与表达的基因相关的磷酸化蛋白的蛋白免疫印迹（WesternBlot）分析来确定。已知对上述基因施加刺激性或抑制性作用（这转而又刺激了自噬并激活PER、CLOCK、CRY或BMAL中的一种或多种）的成分的实例是酵母提取物，所述酵母提取物包括但不限于来自诸如Lithothamnium、Melilot、Citrus、Candida、Lens、Urtica、Carambola、Momordica、Yarrowia、Plumbago等等的属的那些。进一步的具体实例包括嗜钙石枝藻（Lithothamniumncalcareum）、草木犀（Melilotusofficinalis）、柠檬（Citruslimonum）、水解假丝酵母（Candidasaitoana）、Lensculinaria、异株荨麻（Urticadioica）、杨桃（Averrhoacarambola）、苦瓜（Momordicacharantia）、解脂耶氏酵母（Yarrowialipolytica）、白花丹（Plumbagozeylanica）等等。刺激上述基因中的一种或多种的另一成分是通过来自褐藻（如掌状海带（Laminariadigitata））的膜多糖的受控酶促解聚获得的特定寡糖。更具体而言，该寡糖由尿刊酸（urocanoicacid），特别是甘露糖醛酸和古罗糖醛酸形成。最优选的是具有INCI名称“Hydrolyzedalign”并具有CAS号73049-73-7的活性物质。刺激可变表达基因的成分（其中和其本身）也可以是皮肤处理活性物质。可替代地，刺激可变表达基因的成分可能仅具有该功效，如果这样的话，期望添加一种或多种附加的皮肤处理活性物质。这将确保在可变表达基因在大部分天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时刺激该基因提供处理益处。特别地，处理益处可以在该皮肤细胞同步化作用的情况下最大化。在细胞同步化之前，细胞生物途径可能不会以精确同步的方式运行。但是，即使在这种情况下，也可以说正常的昼夜节律将使大多数细胞在相同的总体时间框架内代谢运行。其它皮肤活性物质该处理组合物优选含有一种或多种附加的皮肤处理活性物质。皮肤处理活性物质可以是提供益处的任何物质，如皮肤增白剂（经由酪氨酸酶抑制或其它途径）、保湿剂、抗痤疮剂、抗炎剂、抗红斑痤疮剂、细胞DNA修复活性物质、蛋白质修复活性物质、抗皱纹剂、皮肤紧致剂、模糊剂（blurringagent）、吸油活性物质、润湿剂、胶原或弹性蛋白刺激活性物质、或直接或间接有助于提供益处的特定成分。此类活性物质可以以大约0.00001至10%、优选0.00005至5%、更优选大约0.0001至2%的量存在。合适的有益活性物质包括但不限于本文中述的那些。优选的是与刺激可变表达基因的成分结合时表现出优化的功效的有益活性物质。DNA修复酶该组合物可以含有一种或多种DNA修复酶。建议范围为大约0.00001至大约35%、优选大约0.00005至大约30%、更优选大约0.0001至大约25%的一种或多种DNA修复酶。如美国专利号5,077,211；5,190,762；5,272,079；和5,296,231（其全部均经此引用以其全文并入本文）中公开的DNA修复酶适用于本发明的组合物和方法。此类DNA修复酶的一个实例可以以商品名Roxisomes®购自AGI/Dermatics，并具有INCI名称拟南芥（ArabidopsisThaliana）提取物。其可能单独存在或与卵磷脂和水混合存在。该DNA修复酶已知有效修复8-氧代-鸟嘌呤碱基损伤。可以使用的另一类型的DNA修复酶是已知有效修复06-甲基鸟嘌呤碱基损伤的那种。其由AGI/Dermatics以商品名Adasomes®出售，并具有INCI名称乳酸杆菌发酵产物（Lactobacillusferment），其可以单独添加到本发明的组合物中，或与卵磷脂和水混合添加到本发明的组合物中。可以使用的另一类型的DNA修复酶是已知有效修复T-T二聚体的那种。该酶存在于生物或植物材料的混合物中。此类成分的实例由AGI/Dermatics以商品名Ultrasomes®或Photosomes®出售。Ultrasomes®包含微球菌溶胞产物（Micrococcuslysate）（各种微球菌种的受控溶胞的最终产物）、卵磷脂和水的混合物。Photosomes®包含浮游生物提取物（其是包括下列生物体中的一种或多种的海洋生物质的提取物：海洋浮游生物、绿色微藻、硅藻、蓝绿色海藻和固氮海藻）、水和卵磷脂的混合物。其它合适的DNA修复酶包括核酸内切酶V，其可以由噬菌体T4的denV基因产生。同样合适的是T4核酸内切酶；O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶；光裂合酶，如尿嘧啶-和次黄嘌呤-DNA糖基化酶；脱嘧啶/脱嘌呤核酸内切酶；DNA核酸外切酶、受损碱基糖基化酶（例如3-甲基腺嘌呤-DNA糖基化酶）；单独或复合的校正内切酶（correndonucleases）（例如大肠杆菌uvrA/uvrB/uvrC核酸内切酶复合物）；APEX核酸酶，其是通常被称为“APE”的多功能DNA修复酶；二氢叶酸还原酶；末端转移酶；拓扑异构酶；O6苄基鸟嘌呤；DNA糖基化酶。其它类型的合适的DNA修复酶可以通过所促进的修复类型来分类，并包括BER（碱基切除修复）或BER因子酶，如尿嘧啶-DNA糖基化酶（UNG）；单链选择性单功能尿嘧啶DNA糖基化酶（SMUG1）；3,N(4)-乙烯基胞嘧啶糖基化酶（MBD4）；胸腺嘧啶DNA-糖基化酶（TDG）；A/G-特异性腺嘌呤DNA糖基化酶（MUTYH）；8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶（OGG1）；核酸内切酶III样蛋白1（NTHL1）；3-甲基腺嘌呤DNA糖苷酶（MPG）；DNA糖基化酶/AP裂解酶（NEIL1或2）；AP核酸内切酶（APEX1和2）、DNA连接酶（LIG3）、连接酶辅助因子（XRCC1）；DNA5'-激酶/3'-磷酸酶（PNKP）；ADP-核糖转移酶（PARP1或2）。另一类别的DNA修复酶包括据信直接逆转损伤的那些酶，如O6-MeG烷基转移酶（MGMT）；1-meA双加氧酶（ALKBH2或ALKBH3）。可作用于修复DNA/蛋白质交联的另一类酶包括Tyr-DNA磷酸二酯酶（TDP1）。同样合适的是MMR（错配切除修复）DNA修复酶，如MutS蛋白同系物（MSH2）；错配修复蛋白（MSH3）；mutS同系物4（MSH4）；MutS同系物5（MSH5）；或G/T错配结合蛋白（MSH6）；DNA错配修复蛋白（PMS1、PMS2、MLH1、MLH3）；减数分裂后增加的2-样蛋白（PMS2L3）；或减数分裂后增加的2-样4假基因（PMS2L4）。同样合适的DNA修复酶是被称为核苷酸切除修复（NER）酶的那些，并包括以下那些，如着色性干皮病C组-基因补体蛋白（XPC）；RAD23（酿酒酵母）同系物（RAD23B）；钙牵蛋白同种型（CETN2）；RFA蛋白1、2或3（RPA1、2或3）；3'至5'DNA解螺旋酶（ERCC3）；5'至3'DNA解螺旋酶（ERCC2）；基本转录因子（GTF2H1、GTF2H2、GTF2H3、GTF2H4、GTF2H5）；CDK激活激酶（CDK7、CCNH）；细胞周期蛋白G1-相互作用蛋白（MNAT1）；DNA切除修复蛋白ERCC-5l；切除修复交叉互补1（ERCC1）；DNA连接酶1（LIG1）；ATP-依赖性解螺旋酶（ERCC6）；等等。同样合适的可以是促进同源重组的类别中的DNA修复酶，并包括但不限于DNA修复蛋白RAD51同系物（RAD51、RAD51L1、RAD51B等等）；DNA修复蛋白XRCC2；DNA修复蛋白XRCC3；DNA修复蛋白RAD52；ATPase（RAD50）；3'核酸外切酶（MRE11A）；等等。DNA聚合酶形式的DNA修复酶也是合适的，并包括DNA聚合酶β亚基（POLB）；DNA聚合酶γ（POLG）；DNA聚合酶亚基δ（POLD1）；DNA聚合酶II亚基A（POLE）；DNA聚合酶δ辅助蛋白（PCNA）；DNA聚合酶ζ（POLZ）；MAD2同系物（REV7）；DNA聚合酶η（POLH）；DNA聚合酶κ（POLK）；等等。通常被称为“编辑和加工核酸酶（editingandprocessingnucleases）”的各种类型的DNA修复酶包括3'-核酸酶；3'-核酸外切酶；5'-核酸外切酶；核酸内切酶；等等。DNA修复酶的其它实例包括DNA解螺旋酶，包括例如ATPDNA解螺旋酶等等。DNA修复酶可以作为植物提取物、细菌溶胞产物、生物材料等等的组分存在。例如，植物提取物可能含有DNA修复酶。本发明的组合物可以含有一种或多种DNA修复酶。蛋白酶体激活剂该处理组合物可以以大约0.0001至65%、优选大约0.0005至50%、更优选大约0.001至40%的量含有一种或多种蛋白酶体激活剂。合适的蛋白酶体激活剂是在角蛋白表面的细胞中刺激蛋白酶体活性的任何化合物、分子或活性成分。蛋白酶体是降解受损蛋白的细胞内蛋白质复合物。作为蛋白酶体激活剂的成分将刺激细胞中的蛋白酶体活性，其中这样的活性可能因年龄、细胞损伤（如暴露于紫外线引起的细胞损伤）而降低。合适的蛋白酶体激活剂的实例包括但不限于藻胶、藻酸盐、水解藻胶、糖蜜提取物、栓菌属（Trametes）提取物（包括来自云芝（Trametesversicolor）的提取物）、单独或与阿拉伯胶树（Acaciasenegal）提取物组合的油橄榄（Olive）果实提取物、橙桑黄酮/奥沙京、浮游生物提取物、精氨酸阿魏酸盐、包含浮游生物提取物/丁二醇/精氨酸阿魏酸盐/水的组合物、酵母提取物、浮游生物提取物和称为UB5的肽（五-泛素（penta-ubiquitin））。益生菌微生物该处理组合物可以含有一种或多种益生菌微生物或其溶胞产物或滤液。益生菌微生物提取物可以获自任何益生菌或酵母的发酵，包括来自乳杆菌目（Lactobacillales）或双歧杆菌目（Bifidobacteriales）、或酵母属（Saccharomyces）的那些。更优选的细菌来自双歧杆菌目和乳杆菌目。合适的来自乳杆菌目的细菌包括来自乏养菌属（Abiotrophia）、气球菌属（Aerococcus）、肉食杆菌属（Camobacterium）、肠球菌属（Enterococcus）、乳杆菌属（Lactobacillus）、乳球菌属（Lactococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、酒球菌属（Oenococcus）、片球菌属（Pediococcus）、芽孢乳杆菌属（Sporolactobacillus）、四联球菌属（Teragenococcus）等等的产乳酸细菌。特别合意的是来自乳杆菌属的细菌，其中存在相当大量的物种。最优选的是植物乳杆菌（LactobacillusPlantarum）或干酪乳杆菌（Lactobacilluscasei）或鼠李糖乳杆菌P（rhamnosus.P）。来自双歧杆菌目的合适的益生菌包括来自双歧杆菌属（Bifidobacterium）的那些。特别优选的是来自长双歧杆菌（Bifidobacteriumlongum）的那些，尽管其它物种也是合适的。特别优选的是来自长双歧杆菌的灭活细菌溶胞产物，其可以为发酵产物的形式。此类成分具有INCI名称Bifida溶胞产物、Bifida发酵溶胞产物、Bifida发酵滤液。双歧杆菌还可以是与其它植物提取物或成分的混合物的形式，或可以为发酵产物的形式。合适的益生菌酵母包括来自酵母属的那些，包括诸如酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）、布拉氏酵母菌（Saccharomycesboulardii）、Saccharomycesbulderi等等的物种。在本发明的一个实施方案中，双歧杆菌如美国专利号6,790,434中所述，其经此引用以其全文并入本文。在本发明的另一实施方案中，用于彩妆组合物的益生菌微生物提取物如美国专利号7,510,734中所述那样获得，其经此引用以其全文并入本文，并具有CTFA名称乳杆菌属发酵产物（Lactobacillusferment），其被定义为获自乳杆菌属的发酵的提取物。市售来源包括由ActiveConceptsLLC以商品名ACProbiotic1出售的那些，或由韩国的NaturalF&PCo.,Ltd出售的卷曲乳杆菌（Lactobacilluscrispatus）KLB46。同样合适的是各种衍生物，包括具有CTFA名称乳杆菌属发酵产物滤液的衍生物，其是来自乳杆菌属发酵产物的提取物的滤液，其可以作为水杨酸和滤液的混合物以商品名ACBSalicylicAcidBioferment购自ActiveConceptsLLC。同样合适的是具有CTFA名称乳杆菌属发酵产物溶胞产物的衍生物，其是来自乳杆菌属的发酵的提取物的溶胞产物，或具有CTFA名称乳杆菌属发酵产物溶胞产物滤液的衍生物，其中将来自乳杆菌属的发酵的提取物的溶胞产物过滤。同样合适的是来自酵母如酵母属的提取物，其单独地或与各种植物材料（例如苹果、人参、大蒜等等）组合地发酵。此类成分具有CTFA名称酵母属发酵产物、酵母属发酵产物溶胞产物、酵母属发酵产物溶胞产物滤液、酵母属/葡萄发酵产物、酵母属/糖海带（LamanariaSaccharina）发酵产物等等；以及获自酵母属结合金属如铜、钙、镁、镁、电气石等等的发酵的提取物。益生菌微生物或其发酵产物或溶胞产物的合适范围可以为大约0.0001至35%、优选大约0.001至20%、更优选大约0.01至10%。其它成分在该处理组合物中可以存在其它成分以提供稳定的、化妆品可接受的组合物。此类成分包括表面活性剂、增稠剂、防腐剂、润湿剂、植物提取物、其它肽或蛋白质等等。更具体而言，合适的表面活性剂特别包括非离子型有机或有机硅基表面活性剂，优选具有5至13的HLB的那些。更具体而言，其中烷氧基含有1至26个碳原子的烷氧基化醇，优选脂肪烷氧基化醇，选自月桂醇、硬脂醇、山萮醇或鲸蜡硬脂醇。实例包括月桂醇聚醚、油醇聚醚、葡糖醇聚醚或其甲基或乙基衍生物。更具体的实例包括PEG-75、甲基葡糖醇聚醚-20、双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷、甘油聚醚-26、PEG-8甘油异硬脂酸酯、油醇聚醚-3磷酸酯、月桂醇聚醚-3及其混合物。如果存在的话，该表面活性剂的范围可以为0.01至10%。合适的增稠剂包括水性或非水性增稠剂，如卡波姆、C10-30烷基丙烯酸酯交联聚合物、聚丙烯酸钠、聚丙烯酸酯交联聚合物-6、聚丙烯酸酯交联聚合物-7等等。如果存在的话，此类增稠剂的范围可以为0.1至10%。合适的润湿剂包括亚烷基二醇，如丁二醇、戊二醇、丙二醇、乙基己基甘油、甘油及其混合物。如果存在的话，此类润湿剂的范围可以为0.1至5%。该组合物还可以含有一种或多种植物成分，如茯苓菌核（Poriococossclerotium）提取物、水飞蓟（Silybummarianum）、白花春黄菊（Anthemisnobilis）、厚朴（Magnoliaofficianalis）树皮提取物、山竹（Garciniamangostana）提取物、奥氏海藻（Cladosiphonokamaranus）提取物、白桦（Betulaalba）提取物、卤虫提取物及其混合物。此类提取物可以以0.001至5%、优选大约0.01至3%、更优选大约0.01至1%的量存在。合适的处理组合物可以含有：50-95%的水，0.001-5%的植物提取物，0.01-5%的可变基因刺激活性物质，0.01-5%的皮肤处理活性物质，0.01-5%的植物提取物，0.01-5%的润湿剂；和0.01-5%的增稠剂。另一种合适的处理组合物可以含有：50-95%的水，0.01-5%的可变基因刺激活性物质，其也是皮肤处理活性物质，0.01-5%的DNA修复酶；和0.01-5%的来自双歧杆菌属的灭活细菌溶胞产物。方法在本发明的方法中，将敷膜施加至所需角蛋白表面1至60分钟的时间段。但是，该敷膜的一个特别的益处在于其在10分钟或更短的时间内提供有效的皮肤处理。大多数标准敷膜产品需要20-30分钟。24-25毫升的填充量对处理具有20-40平方英寸的标准面部是最佳的。在移除面膜后残留在面部上的处理组合物可以按摩到皮肤中作为处理乳剂或霜剂，并且无需向皮肤施加额外的保湿剂。尤其在夜间休息期间，皮肤屏障自然地变得更可渗透，由此允许优化的皮肤处理。在一个优选实施方案中，使用说明指导消费者在1200至2400小时、更优选1600-2400小时、最优选1800至2400小时期间施用该面膜。本发明还包括制造敷膜的方法，所述方法包括以下步骤：（a）识别在天然未处理皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因，（b）形成由吸收层和任选与吸收层粘合的不可渗透层组成的敷膜，（c）用处理组合物浸渍该吸收层，所述处理组合物含有至少一种当局部施加至皮肤时刺激上述（a）中的基因的成分；（d）将该敷膜包装在含有使用说明的包装件中，以便在上述（a）中的基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜施加至皮肤。在步骤（a）中，在天然未处理皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因可以通过实施例1中所述的方法或类似的方法来识别。一旦确定了在（a）中识别的基因，则可以筛选成分以确定它们对各种类型的细胞（如皮肤细胞）中的基因表达的作用。选择在刺激上述（a）中识别的相同基因方面显示出活性的成分。随后使该成分形成为处理组合物并如本文中进一步描述的那样浸渍到吸收层中。通过将织物切割成所需形状并将其包装到包装件中来制备敷膜，所述包装件含有使用说明以便在（a）中识别的基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜施加至皮肤。本发明还涉及用敷膜处理皮肤的方法，所述方法包括以下步骤：（a）形成由吸收层和任选与其粘合的不可渗透层组成的敷膜；（b）用处理组合物浸渍所述吸收层，所述处理组合物含有至少一种当局部施加至其上时刺激在天然皮肤细胞中在24小时周期内可变地表达的基因的成分，（c）在上述（b）中相同的基因在天然未处理皮肤细胞中最大程度地表达时将该敷膜局部施加至皮肤。本发明的方法如本文中所述。将结合仅为举例说明的目的而述及的下列实施例来进一步描述本发明。实施例1采用报告基因检测法在对照细胞和暴露于臭氧的细胞中测试在正常人表皮角质形成细胞（NHEK）供体中的Per1基因表达。NHEK以3×104的浓度在黑色壁的96孔微量滴定板中在EpiLife培养基中接种3小时。细胞随后在无补充培养基中用含有在per1启动子元件上游连接的作为报告基因的荧光素酶的质粒转染。此外，通过添加Plus和Lipfectamine试剂（Invitrogen,Carlsbad,CA）来促进转染。在无补充培养基中的转染再进行额外的四个小时。这使得细胞“饿死”，由此又导致它们在其昼夜节律方面同步化。在转染后，加入纯净且含有臭氧的全培养基并温育16小时。随后加入荧光素酶试剂Glo-Bright（PromegaCorporation,Madison,Wisconsin）并在Lmax光度计（MolecularDevices,Sunnyvale,CA）中测量发光。结果列示在图5中，并表明未经处理的细胞在24小时周期内显示出可变的Per1活性，最大活性发生在时间0（夜间），并在12小时之后（白天）缓慢降低至其最低水平，随后在24小时处再次升高。臭氧处理过的细胞在0、6和12小时处显示per1活性降低，针对抗臭氧毒性效应的细胞稳定化通过24小时稳定。该结果表明，未经处理的细胞的正常昼夜节律随NHEK中per1基因表达而变化。再次进行测试，此外，测试具有per1基因活性的肽。结果列示在图6中。在0时间处，同步化的未经处理的细胞、用三肽-32处理的细胞、用臭氧处理的细胞和用臭氧与三肽-32处理的细胞清楚地显示三肽-32是per1基因激活剂，并在未处理细胞中增加了per1基因表达，并且这种效应改善了在用臭氧处理的细胞中存在的不利影响。在6和12小时处，当与未经处理的细胞和仅用臭氧处理过的细胞进行比较时，使用和不使用臭氧的三肽-32处理过的细胞显示出改善的per1基因表达。在24小时处，用臭氧和三肽-32处理过的细胞显示出最高的per1基因表达水平，未经处理的细胞、三肽-32处理过的细胞和臭氧处理过的细胞均显示出较低的和大致等同的PER1的表达。在两次测试中，在测试开始（0小时）时处理NHEK，以使它们均在其昼夜节律方面同步化，并在相同的时间表达per1。在24小时周期内，per1基因表达水平在12小时（这对应于中午）处降低至其最低点。per1活性随后在24小时处提高。但是，由于在时间0处同步化的细胞并未全部串联保持其同步性，而是在其昼夜节律途径中开始偏离，per1基因表达的增加小于在0小时处的增加。该结果显示了细胞在24小时周期内的自然昼夜节律，并且per1的表达在24小时周期内一致的时间处增加；通常在晚上。实施例2如下制备处理组合物：成分重量%水QS100甲基葡糖醇聚醚-204.40PEG-754.00双-PEG-18甲基醚二甲基硅烷2.00丁二醇1.40丙二醇1.10甘油聚醚-261.00PEG-8甘油异硬脂酸酯0.80甘氨酸0.50角鲨烷0.50藻类提取物0.49油醇聚醚-3磷酸酯0.45防腐剂0.25生育酚醋酸酯0.40咖啡因0.20卡波姆0.14糊精0.10透明质酸钠0.07茯苓菌核提取物0.1黄原胶0.05水解大米提取物0.03紫松果菊（紫锥菊）提取物0.03月桂醇聚醚-30.03水飞蓟（圣母蓟）提取物0.02白花春黄菊（洋甘菊）提取物0.01羟乙基纤维素0.01厚朴树皮提取物0.01山竹果皮提取物0.01酵母提取物0.06乙酰基二肽-1鲸蜡酯0.005奥氏海藻提取物0.005甘油0.005卤虫提取物0.001白桦（桦木）提取物0.001水解藻胶0.0003乳酸杆菌发酵产物0.0003卵磷脂0.0003乙基己基甘油0.0002咖啡籽提取物0.0001通过组合成分并充分混合来制备该组合物。实施例3将由45-65%（55%）的纸浆、25-45%（35%）的人造丝和5-15%（10%）的聚酯组成的非织造织物（Non-wovenFabricKP9650,SanshoShigyoCo.Ltd,TosaCity,Kochi,Japan）切割成图3中描绘的具有眼睛、鼻子和嘴部的孔洞的面膜的图案。通过制备由铝和铝合金（大约99.30%或更多的铝、各0.7%或更少的硅和铁、0.1%或更少的铜、0.05%或更少的锰、0.05%或更少的镁，以及0.05%或更少的锌）组成的铝箔（ToyoAluminumKK,OsakaJapan）与相同的非织造织物的层压件来制备第二面膜。将非织造织物装载到一个卷轴上。将铝箔装载到第二卷轴上。含有低密度聚乙烯（Petrothene,TosohCorporation,TokyoJapan）的挤出机在两层膜之间挤出该树脂，所述两层膜如图2中所绘制的那样在压合辊与冷却辊之间压制。从该层压膜中切割与图2中相同的设计的第二敷膜。将实施例2的组合物浸渍到两个面膜的非织造织物层中。随后测试所述面膜在皮肤模型上渗透皮肤的功效。荧光素皮肤模型测试使用荧光板读数器在特定时间点处（在t=0、15、30、45、60、90、120、150、180分钟处）测量荧光素穿过EFT-400皮肤模型进入培养基中的迁移并比较结果。归因于面膜的更具渗透性的效果表明更多荧光素迁移到培养基中。材料：•EFT-400LivingSkinEquivalents：Mattek；EFT-400；Lot#17586；KitE.（“LSE”）•EFT400Media：Mattek；EFT-400-asy；Lot#092914GSA.•荧光素：供应商：SigmaCat#F6377-100GLot#061M0048V•DPBS（Dulbecco'sPhosphateBufferedSaline，Dulbecco磷酸盐缓冲盐水）：供应商：CorningCellgroCat#21-0341-CVLot#21031456.•所提供的面膜：具有仅来自含有55+/-5%纸浆、35+/-5%人造丝和10%+/-5%聚酯的非织造织物的吸收层的面膜。织物购自SanshoShigyoCo.Ltd.具有与上述相同的吸收层并另外具有厚度为大约7微米的金属铝箔的不可渗透层的面膜，购自ToyoKK,OsakaJapan。两个层如本文中所述用低密度聚乙烯粘合在一起。•皮肤活检打孔器8毫米（以8毫米圆形切出面膜碎片以适应EFT-400的内孔）。受试样品：n=2•空白-未施加任何物质到LSE上（活性皮肤替代物（livingskinequivalent））•仅局部施加至LSE的25微升DPBS•局部施加至LSE的25微升在DPBS中稀释的100ppm荧光素•仅具有吸收层的面膜层叠在LSE（25微升100ppm荧光素置于其上）之上•吸收层与不可渗透层的层压件的面膜层叠在LSE（25微升100ppm荧光素置于其上）之上。程序装配并供入2.5毫升培养基（EFT-400），在标准条件（5%CO2/37℃/100%湿度）下温育整夜。根据MatTek'sEpiDermFullThickness400(EFT-400)UseProtocol维护LSE。1．吸出现有培养基，并用每孔2.5毫升培养基更新LSE2．使用8毫米活检打孔器从如上所述的所提供的样品中整齐地切出小圆圈3．在指定孔上方在LSE的顶部上移取25微升DPBS4．在LSE的顶部上仅移取25微升DPBS中的荧光素（100ppm）5．将冲切的吸收层唯一圆圈放置到LSE孔中，并将25微升DPBS中100ppm的荧光素移取到面膜的织物上；同样仅含DPBS的孔作为对照6．拾起吸收层与不可渗透层的冲切层压件。在将圆圈保持在孔上的同时，用25微升在DPBS中的100ppm荧光素使该吸收层饱和。随后迅速将浸泡好的冲切面膜片圆盘以浸泡面朝下的方式施加到EFT孔中。7．在如下所示的不同时间点处从LSE的底部孔中取出上清液，并在最终读数（t=3小时）后经由板读数器使用荧光分析来读取。i.所用设置为：BottomReadEx:494em:521Cutoff515在以下时间点处收集250微升上清液，并储存在0.5微升微型离心管中（4℃下避光储存）用于在3小时后以下时间点（以分钟计）的荧光板读数：0、15、30、45、60、90、120、150和180。采用在EFT-400-ASY培养基中稀释的100ppm荧光素的系列稀释并根据下面的模板将100微升各稀释液移取到96孔板的孔中来创建标准曲线。准备两块板：一块用于标准曲线测量，一块用于测试样品。制备标准曲线样品（n=2）：使用八个1.5微升Eppendorf管创建系列稀释组：•在管#1中移取1,000微升在MediaEFT-400培养基中的100ppm荧光素•在管2-8中仅加入500微升的EFT-400-ASYMedia•从管#1开始，从管1向管2中转移500微升的100ppm荧光素，并上下吸移以充分混合，从而在管#2中产生50ppm的最终浓度•随后，在充分混合后，从管#2中移取500微升并递送到管#3中，上下吸移以充分混合。在管#3中产生25ppm的最终浓度•继续对剩余管进行该连续转移，各系列稀释将后继管中的浓度降低一半•从各管中移取每孔100微升溶液至96孔板的相应孔中创建在各时间点处含有各样品的第二板，并在标准曲线后立即读取100微升n=1。小时-样品A=孔中没有样品B=孔中没有样品C=仅有25微升DPBSD=孔中仅有25微升DPBSE=孔中25微升DPBS中的100ppm荧光素F=孔中25微升DPBS中的100ppm荧光素G=孔中仅有在吸收层上的25微升100ppm荧光素H=孔中仅有在吸收层上的25微升100ppm荧光素I=孔中在全面膜上25微升100ppm荧光素J=孔中在全面膜上25微升100ppm荧光素。计算结果并在图7中以图式方式显示。与仅由非织造织物层吸收层组成的面膜相比，由与吸收层粘合的金属箔层的层压件组成的面膜显示出始终改善的皮肤渗透。皮肤渗透是指组合物中存在的成分实际上被吸收到皮肤中。尽管不可渗透层在使用期间可能会或可能不会使处理组合物从皮肤上较少地蒸发，但这并不一定与渗透相关。例如，该处理组合物可以简单地在表层上保留在皮肤表面上。虽然已经结合优选实施方案描述了本发明，但是并非意在将本发明的范围限制为所阐述的特定形式，相反，其意在覆盖此类替代、修改和等同物，如同可以包括在由所附权利要求限定的本发明的精神和范围内那样。当前第1页1 2 3