本发明涉及中药领域，具体涉及一种治疗风湿着痹症的中药组合物。
背景技术：
风湿痹病是一组气血痹阻不通，筋脉关节失于濡养所致的疾病，发病多较隐蔽而缓慢，病程较长，较难治疗，中医认为风湿痹症分为行痹、痛痹、着痹、热痹。在众多治疗风湿痹症的药物，西药虽能解一时疼痛但无法根治，而众多中药却未因不同病因而辩证施药，本发明基于以上几点对发明中各药味中主要治病成份进行分析及定位，有效的提高了对活性组分的利用，明确针对了风湿着痹的病症，为患者提供了更加有效、安全的药物制剂。
现有专利CN101108243A一种治疗风湿痹症中药制剂的制备方法及相应制剂专利CN101108243A制剂，制备方法粗犷，治疗范围广，主治病症众多。本发明虽然在原料药材上同为穿山龙、鸡血藤、干姜，但本发明是以明确的活性组分提取物入药，针对了风湿着痹的肌肤麻木，肢体关节重着等特性，对药材中各类活性组分精准的提取，分离纯化，并进行组分配伍与比例调节，使本发明药效物质基础清楚，与专利CN101108243A及相应制剂专利CN101108243A制剂有显著的区别。本发明针对临床适应症明确，针对风湿着痹进行药效学评价，并与专利CN101108243A及相应制剂专利CN101108243A制剂进行了对比，结果本发明制剂疗效更为显著。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种治疗风湿着痹症的中药组合物的原料配比。
本发明的另一目的在于提供一种治疗风湿着痹症的中药组合物的制备方法。
本发明提供一种治疗风湿着痹症的中药组合物中活性组分由以下重量份数的原料组成：穿山龙提取物7～10份、鸡血藤提取物6～8份、干姜提取物2～5份。
为提升本发明的治疗效果
本发明中穿山龙提取物包含甾体皂甙类化合物。所述穿山龙提取物中甾体皂甙类化合物主要包括薯蓣皂苷、纤细皂苷及水溶性皂苷。所述穿山龙提取物中穿山龙甾体皂甙类化合物的重量百分含量大于70％。
本发明鸡血藤提取物包含黄酮类化合物。所述鸡血藤提取物中黄酮类化合物的重量百分含量大于60％。
本发明中干姜提取物包含姜辣素类化合物。所述干姜提取物中姜辣素类化合物的重量百分含量大于60％。
本发明中药组合物的制备方法包括下列步骤：
(1)穿山龙提取物
取穿山龙药材，切制成1～2cm的长段，加入50～70％乙醇回流提取2～3次，每次90～120分钟、溶剂量分别为药材的8～12倍。合并煎液，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的AB-8型大孔吸附树脂柱，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(2)鸡血藤提取物
取鸡血藤药材，切制成2～3mm薄片，加水煎煮2～3次，每次90～120分钟，加水量分别为药材的8～10倍。合并煎液，浓缩至相对密度为1.12～1.20的稠膏备用。再加入95％乙醇使含醇量达60％，静置12小时，过滤，取续滤液，回收乙醇，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的聚酰胺吸附树脂，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(3)干姜提取物
取干姜药材，切制成1～2cm薄片，加入70～90％乙醇回流提取1～2次，每次90～120分钟、溶剂量分别为药材6～8倍、合并煎液，合并煎液，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的处理过的D101大孔吸附树脂，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(4)取步骤(1)所得穿山龙提取物7～10重量份、步骤(2)所得鸡血藤提取物6～8重量份、步骤3所得干姜提取物2～5重量份混合，以药学上可接受的赋形剂制成制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、滴丸、软胶囊剂、分散片、口腔崩解片、缓释片、控释片、口服液，得治疗风湿着痹症的中药组合物。
本发明提供的一种治疗风湿着痹症的中药组合物及其制备方法的有益效果是：
1、本发明以有效组分提取物形式入药，活性部位较为完整，有效组分配伍及组分比例调节明确，物质基础清楚。
2、本发明针对风湿痹症中的着痹，进行了相应的药效学评价，作用机理清楚，疗效显著提高。
药效实验
本发明针对风湿着痹的临床适应症进行了药效学研究，并与制剂专利CN101108243A制剂及市售品风湿寒痛片对比疗效，研究如下：
1.本发明制剂对II型胶原诱导性关节炎CIA大鼠原代滑膜细胞的影响
用完全弗氏佐剂(CFA)与4mg/ml的胶原乳液制成终浓度为2mg/ml胶原乳剂致敏，致敏后7天按照同样的方法加强免疫。取造模成功大鼠滑膜组织在PBS中漂洗，用0.2％的II型胶原酶37℃消化4h，离心去上清后细胞沉淀放入在37℃、5％CO2培养箱中培养，取4代滑膜细胞制成细胞悬液，加至96孔培养板中，1×104个/孔，每孔100μL，置于37℃、5％CO2培养箱中培养。细胞分组加药处理，每组设8个复孔，细胞分为本制剂终浓度分别为600、300mg/mL，原专利CN101108243A制剂终浓度为600mg/ml阳性对照MTX的浓度为1mg/L。给药24小时后每孔加MTT 10μL，37℃孵育4h，弃去上清，于570nm波长下测定各孔吸光度(A值)。
1.2 C1A滑膜细胞培养上清液IL～lβ、IL～6、TNF～α含量的测定
滑膜细胞与样品共孵育方法同1.3，给药24小时后收集细胞上清，参照ELISA试剂盒说明书测定各组滑膜细胞外液中IL～lβ、IL～6、TNF～α的水平。
2.本发明制剂对大鼠II型胶原诱导性关节炎模型(CIA)的影响
2.1模型建立：同1
2.2分组与给药
将Wistar雄性大鼠105只随机分为7组，即正常组、模型组、风湿寒痛片组(0.9g/ml)、原专利CN101108243A制剂组(0.8g/ml)、本发明制剂高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4g/ml)，每组15只。初次免疫后第1日开始分组给药，每日1次。正常组、模型组给予等体积溶媒，各组连续给药35天。
2.3观察指标
2.3.1对CIA大鼠踢关节病理形态学的影响
取材实验大鼠处死后,取下整个右后足爪固定于4％的多聚甲酸内，病理检查。
2.3.2 CIA大鼠血清IL～β、IL～6、IL～8和TNF～a的含量的测定
腹主动脉取血，静置，2500rpm/min离心20min，分离血清，取上清测定。采用ELISA法测定CIA大鼠血清IL～1β、IL～6、IL～8和TNF～a的含量。
2.3.3 CIA大鼠滑膜组织中IL～β、IL～6、IL～8和TNF～a的含量的测定
称量滑膜组织块约100mg，加入10倍体积的生理盐水，充分研磨，于高速离心机中4℃，10000×g离心15分钟，取上清。采用ELISA法测定CIA大鼠滑膜组织中IL～1β、IL～6、IL～8和TNF～a的含量。
3.本发明制剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响
昆明小鼠60只，雌雄各半，体重20±2g，随机分为6组：模型对照组、阳性对照组(风湿寒痛片1.9g/ml)、原专利CN101108243A制剂组(1.8g/ml)和本发明制剂高、中、低剂量组(3.0、1.8、0.6g/ml)，每组10只。连续ig给药7天，每天一次，模型对照组给予同体积溶媒。末次给药30min后，尾静脉注入1％伊文斯兰0.1mL/10g，并立即腹腔注射醋酸溶液0.1mL/10g致炎，30min处死小鼠，用5mL生理盐水冲洗腹腔，并将冲洗液置酶标仪于610nm比色，测定吸光度(OD)值。
抑制率＝(给药组OD～模型对照组OD)/模型对照组OD×100％
4.本发明制剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
SD大鼠70只，体重200土20g，雄性，随机分为7组，即分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组(风湿寒痛片0.9g/ml)、原专利CN101108243A制剂组(0.8g/ml)和本发明制剂高、中、低剂量组(1.6、0.8、0.4g/ml)，每组10只。连续ig给药7天。空白对照组、模型对照组给予同体积溶媒。末次给药后1h测定足趾厚度，然后将1％角叉菜胶生理盐水0.1mL注入大鼠左后肢足趾皮下致炎，于给药后1h、2h、4h、6h测定鼠足趾肿胀度。
5.本发明制剂对小鼠疼痛反应潜伏期的影响
ICR小鼠，雌雄各半，体重18g～22g。将60只小鼠随机分为6组，分别为空白对照组、阳性对照组(给予阿司匹林400mg·kg～1)，原专利CN101108243A制剂组(1.8g/kg)和本发明制剂高、中、低剂量组(3.0、1.8、0.6g/kg)，每组各10只。连续ig给药，给药体积为10ml/kg，给药7天，末次给药后1h、2h、3h观察甩尾时间。
实验结果
1.本发明制剂对II型胶原诱导性关节炎CIA大鼠原代滑膜细胞的影响
1.1对CIA大鼠原代滑膜细胞增殖能力
给药组大鼠滑膜细胞A值均小于对照组，其中本发明制剂(600mg/mL)组和阳性对照组大鼠滑膜细胞A值显著降低于对照组(P<0.05或P<0.01)，原专利CN101108243A制剂(600mg/ml)组与本发明制剂(300mg/ml)组大鼠滑膜细胞A值大小相近，表明本发明制剂在体外可抑制CIA大鼠滑膜细胞增殖，且作用效果好于原专利CN101108243A制剂。详见表1～1
表1～1各组大鼠滑膜细胞的增殖情况
与空白对照组相比:##P<0.01，与模型组比较：*P<0.05。
1.2对CIA大鼠滑膜细胞培养上清液TNF～α、IL～lβ、IL～10含量的影响
与对照组比较，给药组TNF～α、IL～1β水平均降低，IL～10水平升高，其中本发明制剂(600mg/mL)组及MTX组TNF～α、IL～lβ水平显著降低而IL～10水平升高(P<0.05或P<0.01)，原专利CN101108243A制剂(600mg/m)l组和本发明制剂(300mg/ml)组对大鼠滑膜细胞外液TNF～α、IL～lβ、IL～10水平调节作用相当。本发明制剂能通过抑制滑膜细胞分泌致炎因子或促进抗炎因子的分泌，从而阻止或缓解关节炎症的发生和发展，且作用效果好于原专利CN101108243A制剂。详见表1～2。
表1～2各组大鼠滑膜细胞外液TNF～α、IL～lβ、IL～10变化情况
与空白对照组相比:##P<0.01，与模型组比较：*P<0.05。
2.1对CIA模型大鼠踢关节组织病理学的影响
大鼠躁关节病理片HE染色图显示：空白组的大鼠躁关节软骨光滑无破坏，滑膜组织结构完整，细胞排列整齐，没有炎性细胞浸润及血管增生现象；而模型组的大鼠软骨组织结构破坏，滑膜细胞明显增生，排列不整齐、紊乱，有大量炎性细胞浸润，同时有滑膜血管翳形成，甚至有些切片可看到滑膜向软骨表而侵烛性生长；风湿寒痛片组的大鼠软骨组织破坏程度较少，滑膜细胞排列较紊乱，可见滑膜组织增生，但炎性细胞浸润较少；原专利CN101108243A制剂滑膜组织轻度增生，滑膜细胞排列紊乱，有血管翳形成；本发明制剂低剂量组滑膜组织表面增厚，可见炎性细胞浸润，滑膜细胞排列紊乱，有血管翳形成及少数软骨破坏；本发明制剂高剂量组软骨表面光滑，无软骨破坏，滑膜轻度增生，细胞形态规则，炎性细胞浸润较少，无血管翳形成。
2.2 C1A大鼠血清及滑膜组织中IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α的含量的测定
由表2～1，2～2可知，模型组大鼠血清、滑膜组织中IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α与正常组比较明显增高(P<0.01)，说明模型组大鼠炎性反应明显。本发明制剂高、中(1.6g/kg、0.8g/kg)、风湿寒痛片组可降低C1A大鼠血清、滑膜组织IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α的含量，比较有差异显著性(P<0.05)，原专利CN101108243A制剂(1.6g/kg)也能降低C1A大鼠血清、滑膜组织中IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α含量，但是与同剂量本发明制剂先比作用不明显。本发明制剂高、中剂量组在IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α方面，比较有差异性。血清和滑膜组织屮细胞因子检测相一致，结果说明本发明制剂有降低促炎细胞因子效果，从而减轻CIA大鼠炎症反应，使关节损伤逐渐减轻，优于原专利CN101108243A制剂的抗炎效果。
表2～1各组大鼠血清中IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α含量比较(n＝15)
注:与正常组比较#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
表2～2各组大鼠滑膜组织中IL～lβ、IL～6、IL～8和TNF～α含量比较(n＝15)
注:与正常组比较#P<0.05，##P<0.01；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01
3.本发明制剂对醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加的影响
小鼠腹腔注射醋酸溶液后，OD值明显升高，表明腹腔毛细血管通透性明显增加；与模型对照组比较，各给药组OD值均减小，其中风湿寒痛片、本发明制剂高(3.0g/kg)、中剂量(1.8g/kg)组能明显抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加，提示本发明制剂对醋酸所致的急性炎性渗出有较强抑制作用，其中尤以高剂量的作用最为明显，原专利CN101108243A制剂(1.8g/kg)抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性效果与本发明制剂低剂量组相近。结果见表3～1，从表中可见，本发明制剂可降低小鼠毛细血管通透性，并呈一定的量效关系，效果优于原专利CN101108243A制剂。
表3～1本发明制剂对小鼠毛细血管通透性的影响(n＝10)
注:与空白组比较##P<0.01，与模型组比较*P<0.05。
4.本发明制剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响
大鼠左后足注射1％的角叉菜胶后，足爪出现明显的肿胀。结果见表4～1，空白组与模型组比较，1h、2h、3h、4h、6h，大鼠足趾肿胀度均有明显差异(P<0.001)；本发明制剂高、中剂量(1.6、0.8g/kg)与模型组比较，在致炎后1h、2h、3h、4h、6h大鼠足趾肿胀度有显著差异(P<0.05、P<0.01、P<0.001)；本发明制剂低剂量(0.4g/kg)与模型组比较，在致炎后1h、2h、4h、6h大鼠足趾肿胀度有差异(P<0.05)，在致炎后2h、4h、6h大鼠足趾肿胀度有极显著差异(P<0.01、P<0.001)；原专利CN101108243A制剂(0.8g/kg)与模型组比较，在致炎后1h、2h、4h大鼠足趾肿胀度有差异(P<0.05)，在致炎后6h足趾肿胀度有明显差异(P<0.01)，但是对大鼠足趾肿胀程度的抑制效果低于同剂量的本发明制剂，且在炎症反应最明显的3h的时候，对足趾肿胀度与模型组比较，没有明显差异。详见下表。
表4～1本发明制剂对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响(n＝10)
注:与正常组比较###P<0.001；与模型组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001
5.本发明制剂对小鼠疼痛反应潜伏期的影响。
本发明制剂高(3.0g/kg)、中剂量(1.8g/kg)与空白组比较，在末次给药后1h、2h、3h延长小鼠甩尾时间(P<0.001、P<0.01)且效果显著，低剂量(0.6g/kg)与空白组比较，在末次给药后1h、2h、3h明显延长小鼠甩尾时间(P<0.01、P<0.05)。原专利CN101108243A制剂(1.8g/kg)与空白组比较，在末次给药后1h、3h延长小鼠甩尾时间(P<0.05)。本发明制剂能非常明显延长小鼠甩尾时间，明显优于原专利CN101108243A制剂。详见下表5～1。
表5～1本发明制剂样品对小鼠甩尾疼痛反应潜伏期的影响(n＝10)
注:与空白组比较*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
风湿着痹通病因病机以肝肾亏虚、气血不足为本，局部气滞血瘀、经络痹阻为标，因此活血化瘀，改善组织微循环状态就成为该症主要环节。研究证实各种原因长时期关节制动后，能引起关节周围软组织的挛缩、滑膜增生等病理变化.因此而造成关节动力学的改变。在异常应力状态下，滑液粘蛋白解聚和透明质酸成分减少、削减了它的润滑性，加重了软骨表面的机械磨损。这种制动后的关节炎动物模型的病理变化酷似临床所见的骨关节炎，细胞因子中IL～β、IL～6、IL～8、TNF～α是参与关节炎发病进程中的重要介质，是炎症反应的重要调节剂，是调节炎症的始动因素。白介素系列炎性因子对关节软骨细胞代谢的干扰作用主要表现为抑制透明软骨特征性Ⅱ、IX型胶原蛋白的合成，促进Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的合成，而使软骨细胞变性，抑制软骨细胞增殖和合成蛋白多糖。TNF可协同白介素的作用，TNF～α可以自分泌或旁分泌的方式激活单核巨噬细胞，使其释放大量的炎性介子，激发炎症的连锁反应；同时损伤血管内皮，增加通透性，促进凝血，促进血管内皮细胞黏附白细胞。实验研究也发现II型胶原诱导性关节炎破坏可用IL～β、IL～6、IL～8、TNF～α的选择性抗体及抗受抗体，细胞因子受体拮抗蛋白，可溶性或转移性细胞因子受体的分子所修复，说明细胞因子与软骨破坏密切相关。本实验造模组关节液中IL～β、IL～6、IL～8、TNF～α始终保持高含量，说明白介素及肿瘤坏死因子是骨性关节炎中起主要调控作用的一种炎性介质，对II型胶原诱导性关节炎的发生具有促动作用，调节机体局部微循环，同时对其引起的继发病理过程也有很大影响。角叉菜胶所致大鼠原发性足跖肿胀实验中，说明了本发明的组合物对关节炎大鼠的急性炎症有显著减缓炎症程度的作用。延长小鼠甩尾时间，缓解机体的疼痛反应。且各项药效学指标疗效上均优于专利CN101108243A制剂及阿司匹林对照组。
本发明的组合物具有显著治疗风湿着痹痛的效果。
具体实施方式
实施例一
(1)穿山龙药材，取穿山龙药材，切制成1～2cm的长段，加入50～70％乙醇回流提取2～3次，每次90～120分钟、溶剂量分别为药材的8～12倍。合并煎液，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的AB-8型大孔吸附树脂柱，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(2)取鸡血藤药材，切制成2～3mm薄片，加水煎煮2～3次，每次90～120分钟，加水量分别为药材的8～10倍。合并煎液，浓缩至相对密度为1.12～1.20的稠膏备用。再加入95％乙醇使含醇量达60％，静置12小时，过滤，取续滤液，回收乙醇，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的聚酰胺吸附树脂，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(3)取干姜药材，切制成1～2cm薄片，加入70～90％乙醇回流提取1～2次，每次90～120分钟、溶剂量分别为药材6～8倍、合并煎液，合并煎液，浓缩至0.5g生药每毫升的提取液，通过处理后的处理过的D101大孔吸附树脂，用3～5倍柱体积的水洗脱，弃去洗脱液，再用4～6倍柱体积的60％以上乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎成细粉备用。
(4)取步骤(1)所得穿山龙提取物7重量份、步骤(2)所得鸡血藤提取物7重量份、步骤3所得干姜提取物5重量份加淀粉混合，混匀，制粒，干燥，得得治疗风湿着痹症的中药组合物颗粒剂。
实施例二
(1)以实施例一的制备方法制备取穿山龙提取物、鸡血藤提取物、干姜提取物，
(2)取穿山龙提取物8重量份、鸡血藤提取物6重量份、干姜提取物4重量份加淀粉混合，混匀，制粒，干燥，装胶囊，得治疗风湿着痹症的中药组合物胶囊剂。
实施例三
(1)以实施例一的制备方法制备取穿山龙提取物、鸡血藤提取物、干姜提取物，
(2)取穿山龙提取物10重量份、鸡血藤提取物8重量份、干姜提取物2重量份混合，粉碎成细粉，细度80～120目，加淀粉混合压片，得治疗风湿着痹症的中药组合物片剂。