本发明涉及保健食品领域，尤其涉及一种对酒精性肝损伤具有辅助保护作用的保健食品。
背景技术：
我们知道，肝脏是人体主要的解毒器官，酒精属于微毒类饮品，进入人体的酒精被吸收后，约90％必须在肝脏经肝细胞浆中的乙醇脱氢酶和过氧化氢酶的化学作用，氧化解毒为乙醛，乙醛再经过醛脱氢酶，三羧酸循环的进一步的氧化，才成为二氧化碳和水，因此，一次饮入过量酒精或酒类饮料或长期过度饮酒，就会损伤、破坏肝细胞，最后因肝细胞反复发生脂肪变性，坏死和再生，而导致肝纤维化和肝硬化等酒精中毒性肝病的发生。可见，对有饮酒习惯的人来说，保护肝脏、防治肝病有极为重要的意义。
目前，我国保健食品市场对于酒精肝损伤的护肝保肝产品需求量很大，尽管市场该类产品的研发很多，但大多数产品的功效不显著，本发明的特征为以枳椇子、银耳、葛根、甘草、五味子、猴头菇、壳寡糖为主要组分，经过科学合理的提取加工过程，得到的产品对酒精性肝损伤具有明显的辅助保护作用。
银耳(Tremella fuciformis Berk)，又名白木耳、雪耳，属担子菌亚门，层菌纲，有隔担子菌亚纲，银耳目，银耳科，银耳属。性平，味甘、淡、无毒。银耳其名始见于陶弘景(公元452～546)所著《名医别录》。从我国汉代的《神农本草经》，到明代杰出的医学家李时珍的《本草纲目》，以及近代《中国药学大辞典》对银耳药用的功效都作过记载。清末叶小峰著《本草再新》一书称银耳能“润肺滋阴”。《本草问答》中又说银耳“能治口干肺疹，痰郁咳逆”。《增订伪药条辨》谓银耳能治“肺热肺燥，便血，去面上黑斑”。唐慎生著《抗癌纵横谈一探索与希望》讲银耳主治肺热咳嗽，胃炎，大便下血，痢疾，面部面斑，癌症肿瘤等病症。银耳是一种药用价值极高的食用菌，具有强精、补肾、润肠、益胃、补气、和血、强心、壮身、补脑、提神、美容、嫩肤、延年益寿之功效。是一种高级滋养补品。
银耳中主要含多糖类成分，现代医学研究表明，银耳多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗氧化衰老、降血糖血脂、抗凝血血栓、抗溃疡、促进蛋白质合成、抗病毒、促进神经细胞生长及改善记忆力等多方面的活性。近年来研究发现，银耳多糖口服或腹腔注射给药能明显对抗由四氯化碳所致的谷丙转氨酶活性的升高，缓解四氯化碳引起的肝细胞损伤。银耳多糖皮下注射小鼠，发现肝细胞粗面内质网、糖元有明显增加，而基质却相应降低。这说明银耳多糖有促进肝脏细胞蛋白质合成，增加机体能量供给和储备的功效。银耳抱子多糖还可治疗慢性活动性肝炎和慢性迁延性肝炎，使乙型肝炎表面抗原(HbsAg)转阴，缓解乙肝症状。
猴头菇(Hericium erinaceus)隶属于担子菌门、猴头菇科，为著名的药食兼用菌。子实体和发酵菌丝体均可入药，性平味甘，具有助消化、利五脏的功能，营养丰富，素有“山珍猴头，海味燕窝”之说。其药效成分主要有多糖、低聚糖、猴头菇素(erinacine)和猴头菇酮(hericenone)等，具有保肝养胃、增强免疫力、降血糖、保护神经、抗癌和抗氧化等功效。
现代研究发现，猴头菇中多糖为主要成分，猴头菇提取物在胃黏膜保护方面作用尤为突出：①对急、慢性溃疡形成均有明显的抑制作用，对胃酸分泌也有一定的抑制作用；②可促进防御因子NOS、NO和EGF、EGFR的内源性释放，从而提高黏膜再生修复能力，增强胃黏膜防御机制，有利于溃疡的愈合；③抗氧化力强，增强胃黏膜上皮细胞抗H+的机能，改善胃黏膜营养状态，对受损胃黏膜有修复和营养作用；④对胃肠蠕动及排便运动有正向调节作用，促进胃肠排空，显著改善消化功能；⑤可显著的促进胸腺细胞和脾脏淋巴细胞的增殖，提高自然杀伤细胞的能力从而提高机体对抗胃炎的免疫力；⑥治疗胃病同时具有止痛、镇痛作用。
枳椇子(Semen Hoveniae)是鼠李科(Rhamnaceae)枳椇属(Hovenia)植物枳椇(Hovenis acerba Lindl.)、北枳椇(Hovenia dulcis Thunb)和毛果枳椇(Hovenia trichocarpa Chun et Tsiang)的成熟种子或具有花序轴的果实，又名拐枣、木蜜、树蜜、鸡距子、天藤鸡爪子、棘拘、鸡爪梨等。枳椇子性甘、味平、无毒，能养阴、生津、润燥、止渴、凉血，具有清热利尿、解酒毒之功效，主治醉酒、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症。有研究表明，枳椇子有显著的解酒、保肝、抗肝纤维化及抗衰老、抗疲劳等作用。枳椇子具有解酒作用的记载始见于唐代的《新修本草》，称其“味甘、平，无毒。以木为屋，屋中酒则味薄”。《千金翼方》中也有记载，认为“枳椇以为木屋，屋中酒则味薄”，《证治准绳》中记载“解酒毒无如枳椇子之妙”。《证类本草》、《方考》、《滇南本草》、《本草从新》、《本草述钩元》、《得配本草》、《本草分经》和《本草便读》中都有关于枳椇子具有解酒作用的记载。
Hase等发现，枳椇子水提取液可显著降低大鼠血中的乙醇浓度，加速乙醇代谢。嵇扬等报道，枳椇子水提取液可显著缩短小鼠翻正反射恢复时间。
Yoshikawa等对枳椇子果实和种子的甲醇溶解部位做了研究，发现此部位能显著缩短由乙醇诱导的肌肉松弛时间。
朱肖鸿等报道，枳椇子对SD大鼠酒精性脂肪肝具有预防作用，可明显降低乙醇引起的血清ALT、AST升高，在组织学上可明显改善肝细胞的脂肪变性。Hase等报道了北枳椇的果实对四氯化碳或氨基半乳糖等引起的小鼠肝损伤有保护作用，其中所含二氧杨梅素的活性高于现在欧洲国家治肝病常用药益肝灵。嵇扬等发现枳椇子水提液能提高肝细胞存活和增殖率。施震等用CCl4制备大鼠肝纤维化模型，结果显示枳椇子提取物可明显减少肝纤维化大鼠肝内胶原、HA、TGFβ1的含量，降低转化生长因子含量，并抑制脂细胞转化为成纤维细胞，具有抗早期肝纤维化作用。张洪等用CCl4建立大鼠肝纤维化模型，发现枳椇子能促进肝纤维化过程中I、III型胶原的降解，其机理可能与抑制肝星状细胞活化有关。张洪等连续给予大鼠枳椇子醋乙酸乙酯提取物10天后发现，枳椇子醋酸乙酯提取物可抑制苯胺经化酶活性，增加氨基比林N-脱甲基酶活性(增长率，在mRNA水平上，明显增加CYP1A1、CYP2C11和CYP3A1基因表达水平。
有研究表明，枳椇子提取物解酒和清除羟自由基的活性集中在乙酸乙酯部位，枳椇子乙酸乙酯提取物能够提高小鼠机体糖原储备和耐缺氧的能力。郑鹏鹏等报道了拐枣不同提取物的体外抗氧化作用，发现拐枣的乙酸乙酯萃取物的抗氧化能力最强，其多酚含量为202.8mg/g，且其抗氧化活性与多酚含量有关。
葛根(Radix Puerariae)为豆科(Leguminosae)葛属(Pueraria)植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)或甘葛藤(习称粉葛)(Pueraria thomsonii Benth.)的干燥根，又名葛藤、葛麻叶、甜葛藤、粉葛藤等，在我国资源十分丰富。其性凉，味甘、辛，归脾胃经，具有解肌退热、生津透疹、升阳止泻等功效，主要用于治疗表证发热，项背强痛；热病口渴，消渴证，麻疹不透；热污热痢，脾虚泄泻等症。葛根始载于秦汉时期《神农本草经》，记载：葛根“主消渴，身大热，呕吐，诸痹，起阴气，解诸毒。”《本草纲目拾遗》、《本草衍义》、《医学启源》、《珍珠囊补遗药性赋》、《药品化义》、《得配本草》等中都有关于葛根具有解酒毒作用的记载。
现代研究表明，葛根提取物有一定的解酒作用，能提高小鼠对酒精的耐受阈值和醉酒潜伏期，加速酒精代谢、降低其肝毒性。研究表明，其主要活性成分为葛根总黄酮和葛根素。葛根素不仅可发挥解酒作用，还能对抗乙醇中毒诱发的各种并发症。
葛根能通过清除氧自由基和抗脂质过氧化而使酒精导致的血清黏度异常变化恢复到正常状态。葛根异黄酮化合物可显著抑制氧化损伤引起的红细胞溶血、微粒体活性氧类造成的过氧化反应的发生发展，并提高体内SOD活性强度。葛根中的葛根素、大豆苷元及大豆苷均可抑制嗜酒大鼠的酒精消耗。
五味子为木兰科(Magnoliacence)植物五味子(Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.)或华中五味子(Schisandra sphenanthera Rehd.Et Wils.)的干燥成熟果实。其味酸，甘，性温，无毒，具有敛肺生津，补肾养心，收敛固涩等功效，用于久嗽虚喘，津亏口渴，自汗盗汗，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻久痢，失眠健忘，心悸怔忡等症。五味子药用历史悠久，始载于《神农本草经》，被列为上品。《本草纲目》云：“五味今有南北之分，南产者色红，北产者色黑，入滋补药必用此产者乃良。”《别录》、《本草经集注》、《新修本草》、《本草图经》等均有五味子滋补保健作用的记载。
五味子的醇提物以及五味子甲素、乙素、丙素、醇甲、醇乙、酯甲和酯乙均有不同程度的降低因化学物质引起的血清转氨酶升高，并具有诱导肝脏药物代谢酶的作用。高晔等研究表明五味子对BCG+LPS诱发的肝损伤有显著的防治作用，从免疫机制的角度证明了五味子的保肝降酶作用。李竞等研究表明五味子水煎剂可显著提高脑、肝及血液中SOD活性，对肝细胞膜的完整性具有保护作用。曲玲等采用四氯化碳和高胆固醇喂养制造大鼠肝损伤模型，结果表明绯红南五味子能降低肝组织脂质过氧化，提高氧自由基清除能力，对肝损伤具有一定的保护作用。Chiu等研究表明，预处理五味子乙素可提高肝组织线粒体谷胱甘肽抗氧化作用，同时诱导热休克蛋白25/70的生成，对CCL4引起的肝中毒具有保护作用。Ip等研究表明五味子乙素与丙素对肝的保护作用与增加肝线粒体谷胱甘肽和谷胱甘肽还原酶的活性有关。五味子中的多种成分，如五味子甲、乙、丙素、醇乙及五味子酚等均能显著提高肝微粒体肝脏P450、NADPH细胞色素C还原酶和氨基比林脱甲基酶的活性，增强肝脏的解毒功能。
壳寡糖(Chitosan oligosaccharide，COS)是指2-20个单糖单位组成的低分子量水溶性氨基葡萄糖聚糖类，它是由甲壳素或壳聚糖经酶降解或化学降解制成的水溶性低分子量的聚糖。将由甲壳素制得的低聚糖称为甲壳质低聚糖，由壳聚糖制得的低聚糖称为壳低聚糖。甲壳素(Chitin)是由乙酰氨基葡萄糖经β-1,4-糖苷键连接而成的聚合物，其脱乙酰基后的产物为壳聚糖(Chitosan)，学名为β-1,4-聚-D-氨基葡萄糖，分子式(C6H11NO4)n。壳聚糖广泛分布于自然界甲壳纲动物(虾、蟹、昆虫)的甲壳、真菌和某些植物的细胞壁中，是一种天然有机高分子多糖，在自然界，生物合成量仅次于纤维素。与壳聚糖相比，壳寡糖具有良好的水溶性，所以很容易被吸收利用，同时还具有调节机体免疫功能、强化肝脾功能和抗肿瘤等作用。
壳寡糖有利于脂质代谢而保护肝脏不发生脂肪肝。壳寡糖与干扰素并用，可促进肝炎病毒抗体的产生，有利于防治肝炎。壳寡糖有强化醛脱氢酶活性的作用，从而将嗜酒者肝内的乙醇氧化成毒性较强的乙醛，后者再氧化成CO2与H2O，缓解乙醇对肝脏的损伤，起到护肝作用。
壳寡糖可以调节消化道微生物区系。从目前已报道的双歧杆菌促生长因子(bifidufactor，BF)研究结果分析，壳寡糖是BF的一种重要种类，它能调节动物肠道内微生物的代谢活动，改善肠道微生物区系分布，促进双歧杆菌生长繁殖，从而提高机体免疫力，抑制肠道有害菌生长，产生B族维生素，分解致癌物质，促进肠蠕动，增进蛋白质吸收。任林等发现壳寡糖可使小鼠盲肠内容物内双歧杆菌、乳酸杆菌增加，大肠杆菌和肠球菌减少。实验证明，壳寡糖应用于乳制品，可使双歧杆菌增生120倍。
甘草来源于豆科(Leguminosae)植物甘草(又名乌拉尔甘草G.uralensis Fisch.)、胀果甘草(G.inflate Bat.)或光果甘草(G.glabra L.)的干燥根及根茎。中医认为甘草性平，味甘，具有补脾益气，清热解毒，润肺止咳，缓急止痛，调和诸药的功效；中医临床主要用于脾胃虚弱、倦怠乏力、心悸气短、咳嗽痰多、脘腹及四肢挛急疼痛、痈肿疮毒，还可缓解药物的毒性、烈性。
有研究表明，甘草浸膏口服，对四氯化碳所致大鼠肝损伤有明显保护作用，可使肝脏的变性和坏死显著减轻。肝细胞内的糖原及核糖核酸恢复，血清谷丙转氨酶活力显著下降，甘草甜素、甘草次酸可使结扎总胆管的家兔、大鼠血胆红素降低，尿胆红素排泄增加，此作用比葡萄糖醛酸内酯及蛋氨酸强。甘草酸制剂强力宁(potenlin)对慢性活动性肝炎GPT增高者效果显著。
赵世元等研究表明，甘草总黄酮可降低荷瘤小鼠脾细胞，升高胸腺指数，即甘草总黄酮有改善荷瘤小鼠免疫功能的作用。
综上所述，银耳、猴头菇、枳椇子、葛根、五味子、壳寡糖、甘草联合应用，以不同的药效物质从不同的作用靶点和途径对于酒精性肝损伤具有明显的辅助保护作用，可有效的预防和保护酒精性肝损伤。在本发明之前，未前相同或者类似的组成用于辅助保护酒精性肝损伤的报道，市场上也也未见相同或类似的产品。
技术实现要素：
本发明的目的之一是提供一种与现有的保肝解酒的产品具有本质区别的产品，本产品采用古代中医理论组方而成，同时也恰好符合现在药理学研究的结论。
本产品以银耳、猴头菇、枳椇子、葛根、五味子、壳寡糖、甘草为主要原料制成的保健食品，具有解酒护肝、保护胃黏膜、增强免疫力等功效。本发明组方中的君药银耳，具有润肺滋阴，平肝益胃之功效；臣药猴头菇，具有保肝养胃，降火滋阴的作用；佐以枳椇子、葛根、五味子、壳寡糖4味，可共奏清热解毒，平肝泻火，养阴生津，滋肝补肾之功效；以甘草为使，补脾益气，调和诸药，共同达到平肝解毒，保肝解酒的目的。
现代医学证明，适量饮酒可以舒筋活血，有利于身体健康，但长期过量饮酒会对肝、胃、脾等内脏器官造成损伤，严重时甚至导致精神障碍、胃溃疡、脂肪肝、酒精性肝炎以及肝硬化等。本发明组方中的银耳、猴头菇、壳寡糖的多糖类成分具有提高肝脏解毒能力，保护肝脏，增强机体抗免疫能力，防治胃粘膜损伤。枳椇子、葛根中的黄酮类成分不仅可发挥解酒作用，还能对抗乙醇中毒诱发的各种并发症。五味子的醇提物有降低因化学物质引起的血清转氨酶升高，并具有诱导肝脏药物代谢酶的作用。甘草总黄酮有改善荷瘤小鼠免疫功能的作用。
在选取本发明保健食品的各原料进行组合搭配时，经过反复试验，选用了银耳、猴头菇、枳椇子、葛根、五味子、壳寡糖、甘草等七种卫生部规定的既是食品又是药品和可用于保健食品的原料，充分发挥了它们各自的功效，并经合理搭配所能产生的协调效果。与目前已有的护肝解酒类保健食品相比，具有活性更确切，化学组成具有明显的特色，这也是本发明的对于现有技术的突出贡献。
本发明的目的之二是提供一种能够将方中用于保肝解酒的有效成分最大限度地提取出来的制备方法，通过大量实验得到的制备方法不仅达到了上述目的，而且该方法可以产业化大量制备，提取所用到的溶剂为水，成本低，同时为保证组分中枳椇子，葛根，五味子，甘草的有效解酒护肝成分的富集，仅采用少量的有机溶剂进行醇沉，最大限度地减少了有机溶剂乙醇的用量，更为环保。综上,本发明的制备方法低成本、高环保，与现有技术相比具有实质的突出特点和显著的技术进步。
本发明保健食品的各组分的质量配比为银耳5-10份，猴头菇5-10份，枳椇子4-8份，葛根5-8份，五味子1-3份，壳寡糖1-3份；甘草1-5份；所护保健食品的剂型为口服液。优选的最佳质量配比为银耳8份，猴头菇8份，枳椇子6份，葛根6份，五味子2份，壳寡糖2份，甘草3份；所述保健食品的剂型为口服液。
本发明的组合物的制备方法如下：
(1)将银耳、猴头菇加20倍量的水煎煮2次，每次2小时，滤液浓缩至每毫升含0.15克原料，得水提物，备用；
(2)将枳椇子、葛根、五味子、甘草，加8倍量的水煎煮2次，每次2小时，滤液浓缩至每毫升含0.3克原料，加乙醇至醇浓度达50％，静置，离心，上清液回收乙醇至每ml含0.3g原料，得醇沉提取物，备用；
(3)将水提物和醇沉提取物两部分液体混合，加入壳寡糖，搅拌溶解，3000rps/5min离心，离心液加蒸馏水至200毫升，即得。
由本发明的七味原料制得的的保健食品具有酒精性肝损伤的辅助保护作用，是通过以下的药效学实验得到证实的。
1材料和方法
1.1样品及供试液制备：本实验所用的样品为具体实施方式中实施例1的口服液，人体推荐用量为每人(成人)每日2次，每次100ml，用前将200ml浓缩至20ml。阳性对照：纽斯葆牌葛维片(广州健之嘉健康食品有限公司，批号：61402，规格：0.6g/片×6片)。
1.2实验动物：成年小鼠(18-22克)。
1.3剂量选择与受试物给予方式：根据样品的人体推荐量，设13ml/kg、26ml/kg、39ml/kg(分别相当于推荐量的5、10、15倍)，另设一个酒精肝损伤模型组(模型对照组)和一个阴性对照组。每组12只动物，以经口方式给予受试溶液；阳性对照组灌胃浓度为78mg/ml，0.4ml/20g；空白对照组和模型对照组给予蒸馏水。每日称重调整受试样品剂量。连续给药30d，给予受试样品结束时将模型对照组及样品高、中、低3个剂量组一次灌胃给予50％乙醇12mL/kgBW，空白对照组给蒸馏水，禁食16h放血处死。取肝脏进行指标检测。
1.4主要仪器与试剂
仪器：半自动生化分析仪、冷冻切片机、754-紫外可见光度计、电子分析天平、显微镜、离心机、组织匀浆器、漩涡混匀器、水浴锅及微量加样器等。
试剂：无水乙醇、还原型GSH、磺基水杨酸、5,5’-二硫硝基甲酸、Na2HPO4、NaH2PO4、KH2PO4、EDTA-Na2、NaN3等；MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所生产，批号：20030116)，TG试剂盒(中生北控科技股份有限公司，批号：081171)。
在模型成立的条件下，受试样品组各项指标与肝损伤模型对照组比较，MDA含量下降、GSH含量升高、TG含量降低，且与模型对照组差异有显著性，可判定其结果阴性。
1.5试验数据处理：用方差分析进行统计处理。、
1.6结果判定：满足以下任一条件，可判定受试样品具有对酒精肝损伤有辅助作用。
1.6.1肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标阳性。
1.6.2肝脏MDA、还原型GSH和TG三项检测指标中任两项指标阳性和病理组织学检查结果阳性。
2.试验结果
表1样品对酒精肝损伤小鼠MDA、GSH和TG含量影响(n＝12)
注:与模型组比较1)P<0.05，2)P<0.01；与空白对照组比较3)P<0.05，4)P<0.01
2.1样品对MDA含量的影响的结果
从表1可以看出，模型组MDA含量明显高于空白对照组(P<0.05)，说明肝损伤模型成立。阳性对照组和样品高中低三个剂量组的MDA含量明显下降，与模型组和空白对照组比较，均有显著性差异。表明该样品对酒精肝损伤的小鼠肝组织中的过氧化脂质含量具有显著的降低作用。
2.2样品对GSH含量影响的结果
结果表明,模型组肝匀浆中GSH明显下降，与空白组比较具有显著性差异，表明肝损伤模型成立。阳性对照组和样品高中低三个剂量组肝匀浆中GSH均有上升，但只有高剂量组与模型组比较具有显著性(P<0.05)。表明该样品具有提高酒精肝损伤的小鼠肝组织个GSH含量的作用。
2.3样品对TG含量影响的结果
结果表明，肝损伤模型对照组小鼠的肝组织TG含量明显高于阴性对照，两者具有显著性差异，说明肝损伤模型成立。阳性对照组和样品各剂量组小鼠的肝组织TG含量均低于肝损伤模型组，说明该样品具有降低酒精肝损伤的小鼠肝组织TG含量的作用。
3.小结
分别以相当于人体推荐用量5、10、15倍的剂量给小鼠连续灌胃30天，能降低酒精肝损伤模型小鼠的肝组织中的甘油三酯(TG)含量，提高其肝组织中还原型谷胱甘肽(GSH)含量，减轻其肝组织的脂肪变性程度。由此可见，该保健食品具有对酒精肝损伤有辅助保护功能。
本发明通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体实施方案如下。
具体实施方式
实施例1
一种对酒精性肝损伤具有辅助保护作用的保健食品，所述各成分的质量配比为：银耳8份，猴头菇8份，枳椇子6份，葛根6份，五味子2份，壳寡糖2份,甘草3份；所述保健食品的剂型为口服液。本口服液的服用方法为：每日2次，每次20ml。本口服液的制备方法为：
(1)将银耳、猴头菇加20倍量的水煎煮2次，每次2小时，滤液浓缩至每毫升含0.15克原料，得水提物，备用；
(2)将枳椇子、葛根、五味子、甘草，加8倍量的水煎煮2次，每次2小时，滤液浓缩至每毫升含0.3克原料，加乙醇至醇浓度达50％，静置，离心，上清液回收乙醇至每ml含0.3g原料，得醇沉提取物，备用；
(3)将水提物和醇沉提取物两部分液体混合，加入壳寡糖，搅拌溶解，3000rps/5min离心，离心液加蒸馏水至200毫升，即得。
实施例2
一种对酒精肝损伤具有辅助保护作用的保健食品。所述各成分的质量配比为：银耳5份，猴头菇5份，枳椇子4份，葛根5份，五味子1份，壳寡糖3份，甘草1份；所述保健食品的剂型为口服液。本保健食品的服用方法为：每日2次，每次20ml。本口服液的制备方法同实施例1。
实施例3
一种对酒精肝损伤具有辅助保护作用的保健食品，所述各成分的质量配比为：银耳10份，猴头菇10份，枳椇子8份，葛根8份，五味子3份，壳寡糖3份，甘草5份；所述保健食品的剂型为口服液。本发明的服用方法为：每日2次，每次20ml。本口服液的制备方法同实施例1。