一种荸荠皮抗癌提取物及其制备方法和应用与流程

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种荸荠皮抗癌提取物及其制备方法和应用。

背景技术：

荸荠(eleochairistoberosa)，又名马蹄(waterchestnut)，是莎草科荸荠属多年水生草本植物荸荠的地下球茎，我国长江流域以南各省均有栽培。马蹄不仅汁多味甜，营养丰富，而且有良好的药用价值，自古有“地下雪梨”和“江南人参”的美誉。祖国传统医学认为，马蹄性寒味甘，有清热、化痰、消积等功效，能治疗黄疽、热淋、痞积、目赤、咽喉肿痛等症，乃药中佳品。《中药大辞典》记载，马蹄的活性组分富集于马蹄的果皮与果肉之间的部位。

但是，迄今为止，从未报道过荸荠的抗癌作用相关研究。恶性肿瘤是严重威胁人类健康的常见病和多发病，据世界卫生组织报告，全球50多亿人口中，每年新诊断的肿瘤患者约为900万人，因肿瘤而死亡者达700万人，占总病死率的近20％。在肿瘤治疗中，传统的放，化疗在杀伤肿瘤细胞的同时，也造成机体骨髓抑制和免疫功能低下，毒副作用大。天然药物无论在减轻临床症状，提高生存质量，防止复发转移，延长生存期，还是在与放化疗配合增效减毒方面都有很好的效果。本申请研究团队在寻找中草药抗癌活性成分的过程中，发现荸荠皮提取物具有良好的抗肿瘤活性。这为后期这种植物提取物的抗癌或辅助治疗作用研究奠定了一定的基础。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种制备工艺简单的荸荠皮抗癌提取物的制备方法，所得的荸荠皮抗癌提取物抗癌活性好，为荸荠在抗癌药物研究中的应用奠定了一定的基础。

为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种荸荠皮抗癌提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将荸荠皮浸入乙醇溶液中，超声提取，过滤；

(2)将步骤(1)得到的提取液经过减压蒸馏，所得的浓缩物干燥后得到荸荠皮抗癌提取物。

优选地，所述步骤(1)还包括：将滤渣浸入乙醇溶液中，超声，过滤；重复滤渣浸没-超声-过滤过程多次，合并滤液得到提取液。

优选地，所述步骤(1)中，所述荸荠皮为干燥后的荸荠皮，所述乙醇溶液的质量浓度为95％，所述干燥后的荸荠皮与乙醇溶液的质量比为1∶5。

优选地，所述步骤(1)中，所述超声功率为100w，时间为1h。

优选地，所述步骤(2)中，所述减压蒸馏的真空度0.04～0.06mpa，温度为43℃～48℃。

优选地，所述步骤(2)中，减压蒸馏至无醇味，结束减压蒸馏，得到所述浓缩物。

优选地，滤渣浸没-超声-过滤过程的重复次数为3次。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种荸荠皮抗癌提取物，所述荸荠皮抗癌提取物由上述的制备方法所制得，所述荸荠皮抗癌提取物的主要活性成分为黄酮类化合物。

优选地，所述黄酮类化合物包括木犀草素、槲皮素和香叶木素。

作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的制备方法所制得的荸荠皮抗癌提取物在制备抗癌药物中的应用。

与现有技术相比，本发明的优点在于：

本发明荸荠皮抗癌提取物的制备工艺简单实用，制得的提取物抗癌活性好；实验结果显示：荸荠皮提取物对hela，a549，hct-116，colo205细胞具有一定的抑制作用，且对hela，hct-116，colo205细胞抑制的作用更明显，为后期这种植物提取物的抗癌或辅助治疗作用研究奠定了一定的基础。

附图说明

图1为不同浓度的荸荠皮抗癌提取物与阳性药物氟尿嘧啶对人恶性结肠癌细胞系hct-116，colo205细胞生长的抑制对照图；其中，(a)图为对hct-116细胞生长的抑制率，(b)图为对colo205细胞生长的抑制率。

图2为不同浓度的荸荠皮抗癌提取物与阳性药物氟尿嘧啶对人宫颈癌细胞系hela细胞生长的抑制对照图。

图3为不同浓度的荸荠皮抗癌提取物与阳性药物氟尿嘧啶对人非小细胞肺癌a549细胞生长的抑制对照图。

具体实施方式

以下结合具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。

实施例1：

一种本发明的荸荠皮抗癌提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将40g干燥后荸荠皮浸入200g质量百分比浓度95％的乙醇溶液中超声提取，超声时间1h，超声功率100w，过滤，滤渣中再添加200g乙醇溶液超声提取1h，重复提取3次后，合并滤液得到提取液；

(2)提取液在45℃、真空度0.05mpa条件下减压蒸馏浓缩至无醇味；所得的浓缩物干燥后得到荸荠皮抗癌提取物。

实施例2：

本发明的荸荠皮抗癌提取物对人恶性结肠癌细胞系hct-116和colon205增殖生长的影响

试验中用到的细胞株，试剂以及仪器来源为：

人恶性结肠癌细胞系hct-116，colon205，rpmi1640培养基(美国gibico公司)，胎牛血清(天津市灏阳生物制品科技有限公司)，胰蛋白酶(美国sigma公司)，dmso(分析纯，amresco)，青霉素(sigma)，链霉素(sigma)，mtt(amresco)，96孔板，co2培养箱(日本sanyo公司)，96孔板酶标仪bio-rad680(美国bio-rad公司)，生物操作台(吴江市绿岛净化设备厂)。

(1)肿瘤细胞培养方法

采用以下条件对人恶性结肠癌细胞系hct-116，colon205细胞进行培养：基础培养基为质量分数为89％的rpmi1640+10％fbs(胎牛血清)+1％双抗青链霉素，培养条件为37℃，5％co2浓度及饱和湿度；当细胞生长至对数期时，用胰蛋白酶消化细胞，洗涤吹散细胞，以每孔1×10⁴个细胞100μl接种于96孔板，以备mtt实验。

(2)细胞增殖实验(mtt法)

将处于对数生长期的人恶性结肠癌细胞系hct-116，colon205细胞，铺板于96孔板，每组设3个平行孔。其中三组分别加入100μl浓度为50μg/ml、100μg/ml和300μg/ml的荸荠皮抗癌提取物溶液作为实验组，荸荠皮抗癌提取物溶液中的荸荠皮抗癌提取物为实施例1制备的荸荠皮抗癌提取物。其中三组分别加入与实验组等体积的50μg/ml、100μg/ml和300μg/ml的阳性药物氟尿嘧啶(5-fu)溶液作为对照组。另设空白组。分别处理24h后，采用mtt法检测癌细胞增殖抑制率，增殖抑制率(％)＝(1-实验组od值/对照组od值)×100％；癌细胞增殖抑制率实验结果如图1所示，从图1中可以看出：低浓度荸荠提取物(50μg/ml)对细胞抑制增殖作用不明显，较高浓度(100μg/ml、300μg/ml)荸荠对hct-116及colo205细胞有明显的抑制增殖作用，且呈量效关系，特别对colo205细胞抑制率高于阳性药物氟尿嘧啶(5-fu)。

实施例3：

本发明的荸荠皮抗癌提取物对人宫颈癌细胞系hela细胞增殖生长的影响

本实施例的(1)肿瘤细胞培养方法和(2)细胞增殖实验与实施例2基本相同，其不同点仅在于：肿瘤细胞为人宫颈癌细胞系hela细胞。癌细胞增殖抑制率实验结果如图2所示。

结果表明低浓度荸荠提取物(50μg/ml)对细胞抑制增殖作用不明显，较高浓度(100μg/ml、300μg/ml)荸荠对hela细胞有明显的抑制增殖作用，且呈量效关系。

实施例4：

本发明的荸荠皮抗癌提取物对人非小细胞肺癌a549细胞增殖生长的影响

本实施例的(1)肿瘤细胞培养方法和(2)细胞增殖实验与实施例2基本相同，其不同点仅在于：肿瘤细胞为人非小细胞肺癌a549细胞。癌细胞增殖抑制率实验结果如图3所示。

结果表明荸荠提取物对人非小细胞肺癌a549细胞的增殖具有一定的抑制作用。

以上结果表明荸荠提取物具有较好的抗癌生物活性，可以利用于抗癌制剂。

最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。最后有必要在此说明的是：以上实施例只用于对本发明的技术方案作进一步详细地说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，本领域的技术人员根据本发明的上述内容作出的一些非本质的改进和调整均属于本发明的保护范围。