本发明属于涉及异甘草素的应用技术领域，尤其涉及一种异甘草素作为制备改善或治疗抗运动性疲劳药物中的应用及药物组合物。
背景技术：
运动性疲劳是运动医学和运动生理学研究的永恒主题。关于运动性疲劳的形成机制，人们提出了各种假说，如能源物质耗竭学说、自由基伤害学说、神经递质学说、乳酸堆积学说及ca2+稳态异常学说等。
能源物质耗竭学说提出，能源物质包括各种糖原、atp、磷酸肌酸等，机体在短时间高强度运动时，会大量的动用糖原等能源物质分解，以提供能量，如果其中的一些含量下降，又得不到及时的补充，从而会引发运动性疲劳。
异甘草素，分子式:(e)-1-(2,4-二羟基苯基)-3-(4-羟基苯基)-2-丙烯-1-酮；4,2',4'-三羟基查耳酮。异甘草素的化学结构通式为：
甘草中的黄酮类成分可分为水溶性黄酮和脂溶性黄酮，具有抗炎、抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗溃疡、抗肿瘤、保护胃黏膜作用。近年来又发现甘草黄酮能够抑制癌细胞的增殖。
异甘草素具有消除自由基，抗氧化的药理活性，而异甘草素用于抗运动性疲劳的研究，尚未见报道。
技术实现要素：
本发明提出了异甘草素作为制备改善或治疗抗运动性疲劳药物中的应用。
本发明还提出一种基于该用途的药物组合物。
一种异甘草素作为制备改善或治疗抗运动性疲劳药物中的应用。
优选的，所述异甘草素的单次应用量5～20mg/kg。
优选的，所述异甘草素的单次应用量10mg/kg。
一种改善或治疗抗运动性疲劳的药物组合物，所述药物组合物是以异甘草素为主要活性成分，加入药学上可接受的辅料制备而成的制剂，所述辅料为药剂上任意可以接受的赋形剂，所述异甘草素和辅料的重量比为10:90～90:10。
例如，赋形剂可以为蔗糖、乳糖、葡萄糖的一种或几种任意组合而成的稳定剂。在具体实施例中，所述异甘草素和辅料的重量比可以为10:90、20:80、25:85、30:70、35:65、40:60、45:55、50:50、60:60、70:30、75:25、80:20、85:15、90:10。
上述异甘草素作为制备改善或治疗抗运动性疲劳药物中的应用及药物组合物是发明人在研究异甘草素的过程中，经过建立动物模型，检测试验小鼠样本中的肝糖原、血乳酸、尿素氮的变化水平，证实了异甘草素具有抗运动性疲劳的作用，并制备出了抗运动性疲劳药物组合物。
具体实施方式
本发明中，发明人经过建立动物模型，检测试验小鼠样本中的肝糖原、血乳酸、尿素氮的变化水平，证实了异甘草素具有抗运动性疲劳的作用，并制备出了抗运动性疲劳药物组合物。
实施例1：异甘草素对游泳训练小鼠抗运动性疲劳的研究
一、实验动物：
实验小鼠购自宁夏医科大学实验动物中心，雄性、四周龄、体重(22±2g)、spf级，动物生产许可证号:syxk(宁)。喂养条件包括标准饲料，自来水，室温保持在(24士2)℃，湿度50-60％，每日光照与黑暗时间各12h。实验准备前，将动物置于实验环境适应3天。
二、实验药品及仪器
药品：异甘草素(纯度98％，购自阿拉丁试剂公司)，三氯醋酸(ar，麦克林试剂公司)，葡萄糖(ar，阿拉丁试剂公司)，羧甲基纤维素钠(ar，麦克林试剂公司)，蒽酮(ar，阿拉丁试剂公司)；硫脲(ar，阿拉丁试剂公司)，氟化钠(ar，阿拉丁试剂公司)，钨酸钠(ar，麦克林试剂公司)，三氯醋酸(ar，麦克林试剂公司)，硫酸铜(ar，阿拉丁试剂公司)，对羟基联苯(ar，阿拉丁试剂公司)，乳酸钙(ar，阿拉丁试剂公司)，浓硫酸(宁夏美信生物试剂公司)，乙醇(宁夏美信生物试剂公司)，naoh(宁夏美信生物试剂公司)。
仪器：sps202f型分析天平(中州电子衡器有限公司)，model1510型超声波清洗器(沃珑仪器设备)，l-530型低温离心机(塞维亚科技发展公司)，uv-2901型紫外可见分光光度计(hitachi公司)，bs-220型迈瑞全自动生化分析仪(武汉盛世达设备)。
三、试验方法
1.试验用药配制
每隔三天按照试验小鼠的实际重量配制异甘草素溶液储存于4℃的冰箱中备用，所述异甘草素溶液配制的操作为：每1ml羧甲基纤维素钠中加入1mg异甘草素，用于c组实验小鼠灌胃使用。
2.实验分组
取实验小鼠60只、雄性、四周龄、体重(22±2g)、spf级、正常饲养以及每天适应性游泳20分钟，三天后，按体重随机分为三组：a(安静对照组)、b(耐力训练组，即耐力训练+0.5％羧甲基纤维素钠)、c(用药组，即耐力训练+异甘草素溶液组)，每组20只。
由于每日小鼠体重的变化，每组实验小鼠每日下午1：00给药，即对c组小鼠灌异甘草素溶液，灌药用量按照小鼠体重每千克灌10mg·kg-1,10mg·kg-1为小鼠每千克体重灌的异甘草素溶液中异甘草素的量为10mg；对a组和b组小鼠分别用等体积的0.5％羧甲基纤维素钠灌胃，连续6周，室温为25±2℃。每日更换清洁垫料，每日更换清洁饮水瓶.每天称小鼠体重一次并记录。
3.小鼠耐力训练
a组只灌胃不进行游泳训练；b组、c组小鼠在实验动物游泳池中分别进行每日递进式耐力训练，即游泳锻炼，水深为40～50cm，水温为25士2℃。每周进行5天训练，每天上午和下午各1次，上午9:00am开始训练，下午3：00pm开始训练，训练量如下表1：
表1耐力训练时间表
4.小鼠力竭游泳运动
按上述时刻表每天对各b,c组小鼠进行两次游泳训练，在训练第六周后进行力竭游泳运动并记录小鼠力竭游泳的时间，如下表2：
表2为试验小鼠力竭游泳时间
注：b组与a组比较p＜0.01；c与b组比较p＜0.01。
由表2中可得出，c组试验小鼠的力竭游泳时间比b组和a组都长，b组试验小鼠的力竭游泳时间比a组的长，可见，异甘草素溶液能够明显延长小鼠力竭游泳的时间，而游泳时间的长短可以直接反映小鼠疲劳的程度，因此，说明异甘草素能够改善耐力训练小鼠的疲劳症状，提高小鼠的运动能力，延缓运动性疲劳的发生，具有抗运动性疲劳的效果。
5.小鼠取样取材
宰杀小鼠前对使用器械进行消毒灭菌。
在力竭游泳训练之后的第二天，对a、b、c组试验小鼠进行分组，各分为不游泳的10只和游泳的10只；
对每组的不游泳的5只小鼠分别直接取眼球血，将眼球血预留80μl的全血，剩下的全血必须立即在3000rpm/min条件下，用低温离心机(4℃)，离心15min，小心吸取血清保存于-80℃的冰箱，之后将每组的不游泳的10只小鼠处死，即刻用75％酒精为小鼠皮肤消毒，取肝脏，用4℃的生理盐水清洗血液，用滤纸吸干生理盐水，再称重，将其迅速放于液氮中速冻；
对每组的游泳的10只小鼠进行游泳训练100min，然后分别取眼球血，将眼球血预留80μl的全血，剩下的全血必须立即在3000rpm/min条件下，用低温离心机(4℃)，离心15min，小心吸取血清保存于-80℃的冰箱，之后将每组的游泳的10只小鼠处死，即刻用75％酒精为小鼠皮肤消毒，取肝脏，用4℃的生理盐水清洗血液，用滤纸吸干生理盐水，再称重，将其迅速放于液氮中速冻；
6.检测指标
本实验主要检测异甘草素对耐力训练小鼠的抗运动性疲劳的有关指标。其中检测指标主要包括：肝糖原、血乳酸(bla)和尿素氮(bun)。
(1)酮一硫酸法测定小鼠肝糖原
试剂配制：
配制葡萄糖标准溶液：称取0.01g的葡萄糖，溶解于10ml蒸馏水中。
配制5％三氯醋酸(tca)：准确称取5.0g三氯醋酸，溶解于100ml蒸馏水中。
配制蒽酮试剂：先配制72％的浓硫酸溶液，72％的浓硫酸溶液配制时，先在烧杯中加入140ml蒸馏水，边搅边缓缓加入比重为1.84的浓硫酸360ml，等到h2so4的温度降到80-90℃时加入0.25g的蒽酮和5g的硫脲，摇匀，待冷却后储存于冰箱。
检测步骤：
对c组试验小鼠的肝糖原的提取计算：精确称取c组的不游泳的10只小鼠的肝脏组织各100mg，分别加入8mltca，然后匀浆1min，以3000转/min的速度离心15min，转移上清液至另一支试管内；取上清液1ml于10ml的离心管中，每管加入4ml95％乙醇，充分混匀，盖紧离心管，保持竖立，常温下过夜，以3000转/min的速度离心15min；小心弃去上清液，倒立离心管10min至管内无液滴存在；加入2ml蒸馏水，确保洗下管壁糖原，振荡离心管使糖原完全溶解；向各管加入10ml蒽酮试剂，充分混合，待温度降至凉水温度后，再浸于沸水中加热15min，转移到冷水浴冷却，在620nm波长下，测定吸光度，得到第一组吸光度值。
为了数据更加精确，做三组平行实验，即，第二组平行试验为：继续精确称取c组的不游泳的10只小鼠的剩余肝脏组织各100mg，重复上述步骤，测定吸光度，得到第二组吸光度值；第三组平行试验为：再次精确称取c组的不游泳的10只小鼠的剩余肝脏组织各100mg，重复上述步骤，测定吸光度，得到第三组吸光度值；
将上述三组平行试验的三组吸光度值代入肝糖原公式计算，再将c组的三组肝糖原数求均值得到肝糖原数。
作为对比试验方案，也可以分别配制空白管、标准管：
空白管：取2ml蒸馏水于干净的试管中。
标准管：取葡糖糖标准液0.5ml和蒸馏水1.5ml于标准管中，混匀。
然后在空白管和标准管中分别加入10ml蒽酮试剂，充分混合，待温度降至凉水温度后，再浸于沸水中加热15min，转移到冷水浴冷却，在620nm波长下，分别测定空白管吸光度和标准管吸光度。
同理，对a组、b组的试验小鼠的肝糖原的提取计算方法同于c组的方法，也对不游泳的10只小鼠的肝脏组织采用同于c组的方法提取计算肝糖原。如下表3。
肝糖原公式为：
每100克肝(肌)组织中糖原的毫克数＝du/ds×0.5×提取液体积/肝组织克数×100×0.9，式中，
ds：标准管吸光度；
du：样品管吸光度；
提取液体积为8ml；
肝组织克数为0.1g；
0.9为将葡萄糖换算成糖原的系数；
0.5为0.5ml葡萄糖标准液中葡萄糖的含量。
(2)用自配试剂方法测定小鼠血乳酸含量
试剂配制：
10％钨酸钠：称取10g钨酸钠溶解于100ml蒸馏水中。
1/3mol/l硫酸：量取浓硫酸0.8ml于50ml容量瓶，用蒸馏水定容。
1％naf溶液：准确称取1.125gnaf溶解于100ml蒸馏水中。
10％的三氯醋酸：准确量取三氯醋酸9.9ml，溶解于100ml蒸馏水中。
cuso4溶液：准确称取0.42gcuso4，溶于10ml蒸馏水中。
蛋白沉淀剂：将1/3mol/l的硫酸、10％的钨酸钠、蒸馏水按照体积比为1:1:1的比例混合。
蛋白沉淀剂-naf混合液：按体积分别取10ml1％naf和30ml蛋白沉淀剂混合。
1.5％对羟基联苯溶液：称取对羟基联苯1.5g溶解于100ml热的0.5％的naoh中。
乳酸标准储备液(1g/l)：称取0.171g乳酸钙，加入10％三氯醋酸中定容至100ml。
乳酸标准应用液(0.01g/l)：吸取1.0ml乳酸标准储备液，溶解于100ml容量瓶，用蒸馏水定容。
对c组试验小鼠的血乳酸的检测步骤：
吸取0.48ml1％naf溶液于5ml离心管中，加入c组游泳的小鼠的全血20μl。混匀后，加入1.5ml蛋白沉淀剂，用力振荡混匀，在3000转/min条件下，离心10min，取上清液，30℃水浴中加热30min，再置于沸水浴中90s，待冷却后，在560nm波长下，测定吸光度值，即c组的吸光度值a样品管，然后依据血乳酸含量计算公式计算得到c组血乳酸含量。
作为对比试验方案，也可以分别配制空白管、标准管，如下表4
表4血乳酸测定试验方案配制
将标准管至于30℃水浴中加热30min，再置于沸水浴中90s，待冷却后，在560nm波长下，测定吸光度值，即c组的吸光度值a标准管，用于计算每一组的血乳酸含量。
同理，对a、b组试验小鼠的血乳酸的检测步骤同于c组的检测步骤，测定a、b组吸光度值，即a组的a样品管、b组的a样品管，计算得到a、b组血乳酸含量。如下表3。
血乳酸含量计算公式为：
血乳酸(mg/l)＝a样品管/a标准管×100×10
(3)生化指标测定
本实验中，用全自动生化分析仪分别对a、b、c组中游泳的试验小鼠的血清进行分析测定，进而对各组试验小鼠的尿素氮(bun)的含量进行测定。如表3。
7.试验结果
表3肝糖原、尿素氮和血乳酸
注：c组与b组肝糖原比较p＜0.01；c组与b组尿素氮比较p＜0.05；c组与b组血乳酸比较p＜0.01。
由表3可知，c组的肝糖原含量高于b组的肝糖原含量，b组的肝糖原含量高于a组的肝糖原含量，可见，从能量代谢的角度表明异甘草素能提高运动耐力，有良好的抗运动疲劳效果。
c组的血乳酸含量低于b组的血乳酸含量，可见，从乳酸堆积学说角度来推断，异甘草素能抑制或降低血乳酸的产生，或能够分解血乳酸，进而提高运动耐力，有良好的抗运动疲劳效果。
c组的尿素氮含量低于b组的尿素氮含量，可见，从数据可推断，异甘草素能抑制或降低尿素氮的产生，或能够分解尿素氮，进而提高运动耐力，有良好的抗运动疲劳效果。
以上所揭露的仅为本发明较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程，并依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于发明所涵盖的范围。