一种黄毛草莓粗提物及其制备方法和应用与流程

本发明属于食品、药品用途技术领域，涉及黄毛草莓制备提取方法，制备得到的黄毛草莓粗提物可以降低血糖、提高肝脏抗氧化能力、保护胰脏、修复听力损伤。

背景技术：

黄毛草莓为蔷薇科草莓属植物，别名锈毛草莓、白草莓，生长在海拔700-3000m的山坡草地或沟边林下，资源丰富，分布于我国云南、广西、四川、贵州等地，有清热解毒、活血祛瘀的功效，具有较好的药用价值。糖尿病是一种由遗传或后天胰岛素分泌缺陷引起的以糖代谢紊乱及高血糖为特征的代谢性疾病。糖尿病患者伴随着血糖持续升高，体重急剧减轻，肝、肾、胰功能异常。另外，糖尿病患者紊乱的代谢往往会产生大量氧自由基，造成其它并发症的产生。目前尚未见有黄毛草莓具有降低血糖、提高肝脏抗氧化能力、保护胰脏、修复听力损伤的报道。

技术实现要素：

本发明首次提出一种黄毛草莓粗提物的提取方法，本发明的方法，操作简单，制备的黄毛草莓粗提物具有明显降低血糖、提高体重、改善糖尿病“三多”(多饮多食多尿)症状、提高肝脏抗氧化能力、保护胰脏的结构和功能的作用。

本发明提供的草莓粗提物的制备方法，步骤如下：

(1)将黄毛草莓整株干燥后切碎，使用乙醇浸提，得到草莓浸提物；

(2)步骤(1)中黄毛草莓浸提物蒸发后，过滤取上清，即得到所述黄毛草莓粗提物；

步骤(1)中，所述乙醇浓度为50％-95％(体积分数)；优选地，为75％。

步骤(1)中，所述浸提的温度为18-32℃；优选地，为25℃(室温)。

步骤(1)中，所述浸提的时间为2-4小时；优选地，为3小时。

步骤(1)中，所述黄毛草莓与乙醇的用量比为(4-20)g：(300-600)ml；优选地，为(6-20)g：(300-600)ml；进一步优选地，为6g：400ml。

步骤(1)中，所述黄毛草莓黄毛草莓包括植物的根、茎、叶或其混合物。

步骤(2)中，所述蒸发可采用旋转蒸发仪蒸发。

步骤(2)中，所述蒸发的温度为35℃-45℃；优选地，为40℃。

步骤(2)中，所述蒸发的时间为1-2小时；优选地，为1.5小时。

步骤(2)中，优选在真空条件下进行。

步骤(2)中，所述粗提物生药浓度可以为0.5g/ml；其中，所述生药浓度是指制备所得原液的浓度。

步骤(2)中，制备得到的黄毛草莓粗提物也可稀释后使用。

本发明提供了一种由上述方法制备得到的黄毛草莓粗提物。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备降血糖相关的食品/保健品和药物中的应用。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备改善糖尿病引起的消瘦的食品/保健品和药物中的应用。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备改善糖尿病“三多”症状的食品/保健品和药物中的应用。所述三多是指多饮、多食、多尿。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备提高肝脏抗氧化能力的食品/保健品和药物中的应用。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备保护糖尿病患者的胰腺结构功能正常的食品/保健品和药物中的应用。其中，所述黄毛草莓粗提物用于提高肝脏sod、cat活性，降低mda含量。

本发明还提供了将所述黄毛草莓粗提物和/或黄毛草莓粗提物用于制备改善糖尿病患者胰岛损伤的食品/保健品和药物中的应用。

本发明还提供了将所述的黄毛草莓粗提物在制备保护听力、修复听力损伤的食品/保健品和药物中的应用。

本发明的有益效果在于，本发明首次提出使用黄毛草莓粗提物用于糖尿病小鼠(如stz诱导的糖尿病小鼠)的降血糖，本发明的黄毛草莓粗提物的提取方法操作简单，制备得到的黄毛草莓粗提物对stz诱导的糖尿病小鼠血糖升高具有显著的降低作用，其浓度越高，降低作用越明显；本发明制备的黄毛草莓粗提物还能明显增加糖尿病小鼠的体重、降低多饮多食多尿症状，提高肝脏抗氧化水平，降低氧自由基对机体的损伤，具有保护胰腺，改善糖尿病患者胰岛损伤的作用；即，本发明黄毛草莓粗提物可用于改善由糖尿病引起的高血糖、体重减轻、“三多”症状，用于由糖尿病引起的肝脏抗氧化能力降低，肝功能异常、胰腺结构改变和功能异常等症状。本发明黄毛草莓粗提物可用于保护听力、修复听力损伤。

附图说明

图1为黄毛草莓粗提物对stz小鼠空腹血糖值的影响。

图2为黄毛草莓粗提物对stz小鼠体重、饮水、摄食量的影响；a为黄毛草莓粗提物对stz小鼠体重的影响；b为黄毛草莓粗提物对stz小鼠饮水量的影响；c为黄毛草莓粗提物对stz小鼠摄食量的影响。

图3为黄毛草莓粗提物对stz小鼠口服葡萄糖耐糖量的影响。

图4为黄毛草莓粗提物对stz小鼠胰脏结构的影响；a：空白对照组；b：模型组；c：二甲双胍组；d：高剂量组。

具体实施方式

结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。

实施例1黄毛草莓粗提物的制备

将6g黄毛草莓干燥的全株(包括根、茎、叶)切碎，75％乙醇400ml室温下浸提3小时后，全部转移至旋转蒸发仪中，真空下蒸煮1.5h，过滤取上清液，得到生药浓度为0.5g/ml的黄毛草莓酒精粗提物。

进一步稀释为0.2g/ml和0.4g/ml的黄毛草莓粗提物作为低剂量组和高剂量组用于后续试验。

实施例2stz诱导的糖尿病小鼠

120只小鼠适应性饲养一周后，随机选择10只作为空白对照组。剩余小鼠以stz诱导为i型糖尿病模型，按40mg·kg-1剂量腹腔注射0.4％stz-枸橼酸钠溶液，正常组腹腔注射等量柠檬酸钠缓冲液。建模1周，小鼠禁食6h，通过血糖仪测定空腹血糖值，弃去低于15mmol·l^-1或大于30mmol·l^-1的小鼠，选取高于15mmol·l^-1且低于30mmol·l^-1的小鼠作为stz诱导的糖尿病小鼠。

实施例3黄毛草莓粗提物对stz小鼠空腹血糖的影响

将实施例2建模成功且血糖值接近的小鼠平均分为模型组、低剂量组和高剂量组、二甲双胍组。各组均按10ml·kg^-1体积灌胃。

正常组(实施例2中经腹腔注射柠檬酸钠缓冲液处理的正常组)和模型组灌胃蒸馏水，1次/d，共4周。低剂量组和高剂量组分别灌胃0.2g·ml^-1和0.4g·ml^-1实施例1制备的黄毛草莓粗提物，1次/d，共4周。每周测定小鼠血糖，禁食6h后尾静脉采血，测定空腹血糖。二甲酸胍组是指灌胃0.15g·kg^-1阳性药物二甲双胍，作为阳性对照。

实验结果如图1所示，黄毛草莓粗提物能显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖值，且浓度越高效果越明显，结果表明黄毛草莓粗提物具有降低空腹血糖的作用。

实施例4黄毛草莓粗提物对糖尿病小鼠体重、摄食、饮水量的影响

a)根据实施例3的方法，每周测定糖尿病小鼠的体重。

b)根据实施例3的方法，每周测定糖尿病小鼠的饮水量。

c)根据实施例3的方法，每周测定糖尿病小鼠的摄食量。

实验结果如图2所示，黄毛草莓粗提物能有效改善糖尿病小鼠体重减轻的症状，明显改善其“三多”症状。结果说明黄毛草莓粗提物具有增高糖尿病小鼠的体重，改善其多饮多食的作用。

实施例5黄毛草莓粗提物对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐糖量的影响

按照实施例3的方法，灌胃4周1d后，进行口服葡萄糖耐量试验(ogtt)。小鼠禁食5h，然后正常饮食1h后，给予2g·kg^-1葡萄糖溶液灌胃，分别于葡萄糖处理后0，30，60，120min测定血糖值。

实验结果如图3所示，黄毛草莓粗提物能有效修复和改善糖尿病小鼠葡萄糖耐糖量，结果说明黄毛草莓粗提物具有明显的降血糖作用。

实施例6黄毛草莓粗提物对糖尿病小鼠胰脏病理结构的影响

根据实施例3的方法，灌胃4周后，小鼠眼球取血，处死后立即取出胰脏，固定于10％多聚甲醛中，使用石蜡切片，he染色，固定后使用光学显微镜对胰脏组织进行观察并拍照记录。

实验结果如图4所示，a：空白对照组；b：模型组；c：二甲双胍组；d：高剂量组。模型组胰脏萎缩，空泡化明显；灌胃黄毛草莓粗提物(图4d)后，小鼠胰岛已经较为完整，β细胞数量较多，且细胞界限清楚。实验结果说明，黄毛草莓粗提物对糖尿病小鼠胰脏结构具有保护作用。

实施例7黄毛草莓粗提物对糖尿病小鼠肝脏抗氧化水平的影响

根据实施例3的方法，灌胃4周后，小鼠眼球采血，处死后立即取出肝组织，制成肝匀浆。肝匀浆于冰浴中静置15min，2000rpm离心20min，测定肝脏中超氧化物歧化酶(sod)、过氧化氢酶(cat)活性及丙二醛(mda)含量，均按试剂盒说明书操作。

表1黄毛草莓粗提物对stz小鼠肝脏抗氧化能力的影响

注：与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01

二甲酸胍组是指使用阳性药物二甲双胍灌胃小鼠，作为阳性对照。

实验结果如表1所示，与正常组相比，模型组小鼠肝脏sod、cat活性显著降低，mda含量明显增加，这是由于糖尿病小鼠长期处于高血糖状态，体内氧化应激反应加剧，机体抗氧化体系失衡，导致sod、cat活性降低，mda含量累积。而灌胃黄毛草莓粗提物的低剂量组和高剂量组，小鼠肝脏sod、cat活性显著升高，mda含量明显减少。实验结果说明，黄毛草莓粗提物可明显提高糖尿病小鼠肝脏抗氧化水平，且浓度越高效果越明显。

实施例8听力损伤小鼠模型的构建

50只昆明小鼠适应性饲养一周后，随机选择10只作为正常组，其余小鼠暴露于4～45khz，110dbspl的白噪声中，每日暴露9h，共暴露10d，耳廓反射，即耳廓竖起以适应尖锐声音的现象消除后，将其随机分为模型组，盐酸氟桂利嗪组、低剂量组、高剂量组。

实施例9黄毛草莓粗提物对小鼠听觉能力的影响

各组小鼠均按10ml·kg^-1体积灌胃，正常组和模型组灌胃蒸馏水，盐酸氟桂利嗪组灌胃1.5x10^-3g·kg^-1，低剂量组和高剂量组灌胃0.4g·kg^-1和0.8g·kg^-1实施例1制备的黄毛草莓粗提物。1次/d，共4周。灌胃结束后，测各组小鼠耳蜗电图(ecochg)，听性脑干反应(abr)。

小鼠腹腔注射4mg/kg苯巴比妥钠液进行麻醉，采用yssd-1000多功能诱发电位仪，刺激声为短波，声压级90db，灵敏度6.2uv，带通频率100～1000hz，进行abr及ecochg实验。记录小鼠双耳各波潜伏期、波间期和复合动作电位(cap)振幅变化。

对cap振幅的影响结果如表2所示，与模型组相比，黄毛草莓乙醇粗提物组(低剂量组和高剂量组)cap振幅明显上升。结果说明黄毛草莓乙醇粗提物能显著恢复小鼠听力损伤，且浓度越高效果越明显。

对潜伏期和波间期的影响结果如表3所示，与模型组相比，黄毛草莓乙醇粗提物物组(低剂量组和高剂量组)i、iii波潜伏期和i-iv、i-v波间期均有显著恢复。

结果说明，实施例1制备的黄毛草莓乙醇粗提物能明显改善听觉中枢功能。结果表明黄毛草莓粗提物对噪声性听力损伤具有治疗作用。

表2黄毛草莓乙醇粗提物对cap振幅的影响

注：与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01

表3黄毛草莓乙醇粗提物对潜伏期和波间期的影响

注：与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01

本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。