一种具有抗抑郁功效的药物组合物及其制备方法与流程
本发明属于中药技术领域，更具体地，涉及一种具有抗抑郁功效的药物组合物及其制备方法。
背景技术：
抑郁症属于情感性精神障碍的范畴，是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合症，主要表现有情绪低落、言语减少、精神运动迟缓、常自责自罪、企图自杀等。随着多种应激因素的加剧，抑郁症已成为现代社会的常见病、高发病，其发病率正在快速攀升，严重影响患者及家人的生活质量，甚至危及患者的生命安全。目前，常规抗抑郁药以下几类：
1、单胺氧化酶抑制剂(maois)和可逆性选择性单胺氧化酶抑制药(rima)：单胺氧化酶抑制剂异丙烟肼是第一个用于治疗抑郁症的药物，其主要机理是通过抑制mao活性，减少中枢神经系统内单胺类神经递质的氧化降解，提高神经元突触间隙递质浓度，从而产生抗抑郁作用。此后相继有很多类似的化合物用于临床治疗，主要有苯乙肼、异丙肼等。经长期临床观察，这类药物易于引起肝脏损害、高血压危象、急性黄色肝萎缩等严重的不良反应，是心血管病人和老年患者的禁药，所以国内逐渐停用。
2、三环类抗抑郁药(tcas)：自20世纪50年代末至今，tcas抗抑郁作用经受了考验，即使与新型抗抑郁药相比，它的疗效也是值得肯定的。但由于tcas对神经递质的选择性差，所以不良反应多，使得tcas的使用受到了一些限制。经典的tcas有丙咪嗪、氯丙咪嗪、阿米替林、多虑平等，其作用是通过抑制5-ht和ne再摄取来实现的，尤其是抑制ne的再摄取。其中丙咪嗪有较强的振奋作用，可用于迟滞的抑郁症；阿米替林和多虑平具有镇静和抗焦虑作用，用于激越和焦虑状的抑郁症；氯丙咪嗪用于具有强迫症的抑郁症。
3、四环类抗抑郁药(hcas)：该类药多为ne再摄取抑制药，抗抑郁作用与三环类相当，但有起效快、耐受性好，抗胆碱作用弱、心脏毒性小、还有抗焦虑作用等特点，适用于老年人和心血管患者。目前，投入临床应用的有马普替林、米安色林，瑞波西丁。
4、选择性5-ht再摄取抑制药(ssris)：ssris是目前新药开发中最多的一类，对5-ht再摄取有高选择性抑制作用，几乎不影响其他神经受体，作用位点相对“单一”，不良反应少，目前已成为全球广为应用的抗抑郁一线药物。ssris的缺点是起效慢，用药后4～6周才产生明显效果。目前常用的药物有氟西汀、舍曲林、帕罗西汀、西酞普兰和氟伏沙明。
5、选择性5-ht及ne再摄取抑制剂(snri)：文拉法辛是一类新的苯乙胺衍生物，主要药理机制为通过抑制突触前膜对5-ht及ne的再摄取的双重作用，增强中枢5-ht及ne神经递质的功能，发挥抗抑郁作用。研究显示文拉法辛治疗的第2周起效，而ssris起效时间为3～4周，提示其抗抑郁起效快。
6、肾上腺素能和特异性5-ht能抗抑郁药(nassa)：米氮平主要作用机制为增强ne能，5-ht能的神经功能及特异性阻滞5-ht2及5-ht3受体，拮抗中枢肾上腺素能神经突触前α2自身受体及异质受体，增加5-ht及ne水平。另外其对组胺h1受体也有一定程度的拮抗作用，增强镇静作用，故有利于改善抑郁症患者的睡眠障碍。推荐的起始剂量为15mg·d-1，1次睡前服用，有效剂量为15～45mg·d-1。对于肝病，肾病和老年患者应减少用量。
7、抗抑郁天然药物：天然植物药中具有抗抑郁活性的为数不少。路优泰(neuroston)，贯叶连翘的提取物，是国际上第一个用于抗抑郁的天然植物药，对轻、中度抑郁症有显著效果，并可改善失眠和焦虑，不良反应轻，患者能耐受。其浸膏制剂已在德国上市，在德国抗轻、中度抑郁症药物市场约占50％。另外柴胡，石莒蒲，银杏叶，刺五加通过强迫游泳模型或绝望动物抑郁模型也证明有明显抗抑郁作用。
现代化学药物抗抑郁药物费用昂贵，且毒副作用很大，因此从中药、天然药物中寻找毒性低、疗效高的抗抑郁药物，尤其是复方抗抑郁药物是十分必要的。对于新型抗抑郁药的研究，目前主要希望在以下方面有所创新：(1)疗效方面：疗效更高，作用谱更广，包括能快速缓解自杀企图，对焦虑症状与焦虑谱系障碍有效，对难治性抑郁及精神病性抑郁有效，改善睡眠障碍。起效时间提前，达到快速起效。(2)不良反应方面：减少抗胆碱作用、心脏毒性、性功能障碍、癫痫发作、过量中毒、5-ht综合征、诱发躁狂和快速循环、突然停药的“撤药综合征”。(3)药物相互作用方面：减少药物相互作用，注意疗效与不良反应的叠加和抵消作用。(4)增加在特殊人群中应用的安全性，如老年、儿童、躯体疾病患者等。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种具有抗抑郁功效的药物组合物。
本发明的另一目的是提供该具有抗抑郁功效的药物组合物的制备方法。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种具有抗抑郁功效的药物组合物，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1～3重量份、白头翁1～3重量份、金莲花1～3重量份。
所述的具有抗抑郁功效的药物组合物，优选由以下重量份的药味原料制成：月见草1重量份、白头翁1重量份、金莲花1重量份。
所述的具有抗抑郁功效的药物组合物与药学上可接受的辅料制成药物制剂，优选为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂。
一种具有抗抑郁功效的药物组合物的制备方法，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1～3重量份、白头翁1～3重量份、金莲花1～3重量份，该制备方法的步骤如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为25～35mpa，萃取温度30～45℃，co2流量20～35l·h-1，萃取时间1～2h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度30～37℃，超声波频率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入浓度为90％～100％的乙醇作为提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：3～5，上样体积：5～7bv，水洗7～9bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂10～12bv洗脱，流速为2～4bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
所述的具有抗抑郁功效的药物组合物的制备方法，优选该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1重量份、白头翁1重量份、金莲花1重量份，其制备方法的步骤优选如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
一种具有抗抑郁功效的药物组合物的质量检测方法，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1～3重量份、白头翁1～3重量份、金莲花1～3重量份，其制备方法的步骤如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为25～35mpa，萃取温度30～45℃，co2流量20～35l·h-1，萃取时间1～2h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用5～10倍量60％～70％的乙醇回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用5～10倍量水回流提取1～3次，每次0.5～2h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度30～37℃，超声波频率40～60khz，按1g:16ml～25ml的料液比，加入浓度为90％～100％的乙醇作为提取液，每次提取31～40min，提取1～3次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：3～5，上样体积：5～7bv，水洗7～9bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂10～12bv洗脱，流速为2～4bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得；
采用高效液相色谱法对药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯进行含量测定，测定步骤如下：
(1)色谱条件
①长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件：色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液，比例为10～30：90～70；流速：0.5～2.0ml·min-1；柱温：30～40℃；elsd参数：漂移管温度：120～140℃，载气流速：3.5～4.0ml·min-1；
②豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件：色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：270～290nm；流速：0.5～2.0ml·min-1；柱温：25～35℃；
(2)对照品溶液的制备
①对照品溶液ⅰ的制备：取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加60％～80％甲醇溶液制成长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷溶液，即得对照品溶液ⅰ；
②对照品溶液ⅱ的制备：取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加90～100％甲醇制成含豆蔻酸、藜芦酸甲酯的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ；
(3)供试品溶液的制备
①供试品溶液ⅰ的制备：取本品3.0～5.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％～80％甲醇溶液，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为300～400w，超声频率为50～70khz，时间为15～25min，放冷，再称定重量，用60％～80％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取1～4次，每次20～40ml，合并乙酸乙酯提取液，用0.5～2％盐酸水溶液充分洗涤1～4次，每次20～40ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加60％～80％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至量瓶中，加60％～80％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ；
②供试品溶液ⅱ的制备：取本品3.0～5.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入90～100％甲醇，密塞，称定重量，加热回流0.5～2h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇洗脱1～3次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ；
(4)测定：分别精密称取对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ、对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ各5～20μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。
所述的具有抗抑郁功效的药物组合物的质量检测方法，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1重量份、白头翁1重量份、金莲花1重量份，制备方法的步骤如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得；
采用高效液相色谱法对药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯进行含量测定，优选的测定步骤如下：
(1)色谱条件
①长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件：色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液，比例为22：78；流速：0.5ml·min-1；柱温：35℃；elsd参数：漂移管温度：130℃，载气流速：3.8ml·min-1；
②豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件：色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：286nm；流速：0.5ml·min-1；柱温：30℃；
(2)对照品溶液的制备
①对照品溶液ⅰ的制备：取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml含长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得对照品溶液ⅰ；
②对照品溶液ⅱ的制备：取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜芦酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ；
(3)供试品溶液的制备
①供试品溶液ⅰ的制备：取本品4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为350w，超声频率为60khz，时间为20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％盐酸水溶液充分洗涤3次，每次30ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加70％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ；
②供试品溶液ⅱ的制备：取本品4.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇100ml洗脱2次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ；
(4)测定：分别精密称取对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ、对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。
一种药物组合物在制备治疗抑郁症药物中的应用，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1重量份、白头翁1重量份、金莲花1重量份；其制备方法的步骤如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得；
采用高效液相色谱法对药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯进行含量测定，测定步骤如下：
(1)色谱条件
①长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件：色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液，比例为22：78；流速：0.5ml·min-1；柱温：35℃；elsd参数：漂移管温度：130℃，载气流速：3.8ml·min-1；
②豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件：色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：286nm；流速：0.5ml·min-1；柱温：30℃；
(2)对照品溶液的制备
①对照品溶液ⅰ的制备：取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml含长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得对照品溶液ⅰ；
②对照品溶液ⅱ的制备：取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜芦酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ；
(3)供试品溶液的制备
①供试品溶液ⅰ的制备：取本品4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为350w，超声频率为60khz，时间为20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％盐酸水溶液充分洗涤3次，每次30ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加70％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ；
②供试品溶液ⅱ的制备：取本品4.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇100ml洗脱2次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ；
(4)测定：分别精密称取对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ、对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。
一种药物组合物在制备治疗精神分裂症药物中的应用，该药物组合物由以下重量份的药味原料制成：月见草1重量份、白头翁1重量份、金莲花1重量份；其制备方法的步骤如下：
(1)取月见草与金莲花混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得；
采用高效液相色谱法对药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯进行含量测定，测定步骤如下：
(1)色谱条件
①长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件：色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液，比例为22：78；流速：0.5ml·min-1；柱温：35℃；elsd参数：漂移管温度：130℃，载气流速：3.8ml·min-1；
②豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件：色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：286nm；流速：0.5ml·min-1；柱温：30℃；
(2)对照品溶液的制备
①对照品溶液ⅰ的制备：取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml含长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得对照品溶液ⅰ；
②对照品溶液ⅱ的制备：取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜芦酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ；
(3)供试品溶液的制备
①供试品溶液ⅰ的制备：取本品4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为350w，超声频率为60khz，时间为20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％盐酸水溶液充分洗涤3次，每次30ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加70％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ；
②供试品溶液ⅱ的制备：取本品4.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇100ml洗脱2次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ；
(4)测定：分别精密称取对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ、对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。
本发明所用原料：
白头翁：毛莨科植物白头翁属植物白头翁(pulsatillachinensis(bunge)regel)的干燥根，又名老翁花，白头草等，广泛分布于我国东北、华北、西北和华东等地，另外在朝鲜和俄罗斯西伯利亚也被广泛应用。始载于《神农本草经》，为常用中药，性寒、味苦，具有清热解毒、凉血止痢、燥湿杀虫的功效。白头翁的主要成分三萜皂苷具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、抗病原虫、提高机体免疫力、抑制巨噬细胞分泌l-6、抗癌、抗炎、止泻、镇静、镇痛、杀精、保肝、抑制肠运动、抗内毒素血症等作用，白头翁对消化系统、泌尿系统、心血管系统及造血系统等多种疾病均有治疗作用。
月见草：柳叶菜科植物onagraceae月见草属草本植物(oenotherabiennisl.)，又叫待霄草、山芝麻、野芝麻。性温、味甘，可治疗多种疾病，调节血液中类脂物质，对高胆固醇、高血脂引起的冠状动脉梗塞、粥样硬化及脑血栓等症有显著疗效。月见草富含γ-亚麻酸，具有很强的生物活性，月见草油具有明显的抗炎、抗氧化、抗血栓、降血糖、降血脂、减肥等作用，对糖尿病、高血脂症、动脉粥样硬化、冠心病等具有显著疗效。月见草中含有可以转化为类似荷尔蒙的物质，调节激素平衡，消除紧张焦虑、易怒失眠、情绪低落、头昏目眩，乳房肿痛、下腹痛、粉刺暗疮等症。有效改善经前、经期综合症及更年期综合症。延缓性机能减退，调节血脂。维持和控制细胞的生长和再生，保证其活力、防止皱纹的产生。
金莲花：本发明选用的短瓣金莲花trolliusledebourireichb.为毛莨科金莲花属trolliusl.植物的干燥花，属野生的多年生草本植物，主要分布于黑龙江及内蒙古东北部等地区。主要含有黄酮类、挥发油、生物碱、鞣质、黄色素及有机酸等化学成分，具有抗菌、抗病毒、抗氧化及抗癌等活性，其中黄酮及有机酸为主要有效成分。
以下实验或试验用于说明本发明的技术内容与技术效果，但并不限制本发明权利要求的保护范围。
实验一：对治疗抑郁症的处方与活性的药效学药物筛选实验研究
1材料
1.1药物
1.1.1受试药物a：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：取干燥的月见草300g、白头翁300g、金莲花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，干燥，即得；加水稀释成浓度为含生药量0.5g·ml-1的药液，4℃冷藏保存。
1.1.2受试药物b：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：取干燥的月见草300g、白头翁300g、金莲花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，干燥，即得；加水稀释成浓度为含生药量0.5g·ml-1的药液，4℃冷藏保存。
1.1.3受试药物c：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得；加水稀释成浓度为含生药量0.5g·ml-1的药液，4℃冷藏保存。
1.1.4受试药物d：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(2)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅱ；
(3)将步骤(1)所得的浸膏ⅰ、步骤(2)所得的浸膏ⅱ混合均匀，干燥，粉碎，即得；加水稀释成浓度为含生药量0.5g·ml-1的药液，4℃冷藏保存。
1.1.5受试药物e：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量无水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅱ；
(4)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(3)所得的浸膏ⅱ混合均匀，干燥，粉碎，即得；加水稀释成浓度为含生药量0.5g·ml-1的药液，4℃冷藏保存。
1.1.6阳性对照药：盐酸氟西汀胶囊，上海中西制药有限公司生产，批准文号：国药准字h19980114，批号：2015082302。
1.2动物
icr雄性小鼠，体重18～22g，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供，合格证号为p00102013。实验前适应性喂养1周，温度为(23±3)℃，12h光照，湿度40％，自由进食，单笼饲养，排除饮食及环境等所有可能对实验动物产生的影响。
1.3仪器
medlab生物信号采集系统，由上海康为医疗科技发展有限公司制造；jz100型100g张力换能器，由上海康为医疗科技发展有限公司制造；sonydsc2p8数码摄像机，由上海索广电子有限公司生产；mc-145电子体温计，由欧姆龙大连有限公司制造。
2方法
2.1小鼠悬尾实验
正常小鼠随机区组法分为7组，即空白对照组、阳性药盐酸氟西汀组：灌胃给药剂量为3.0mg·kg-1，受试药物a组：灌胃给药剂量为50mg·kg-1，受试药物b组：灌胃给药剂量为50mg·kg-1，受试药物c组：灌胃给药剂量为50mg·kg-1，受试药物d组：灌胃给药剂量为50mg·kg-1，受试药物e组：灌胃给药剂量为50mg·kg-1。
各组均按0.25ml·(10g)-1体重灌胃给药。每日1次，连续给药10d，空白对照组灌胃给予纯净水。于末次给药后1h进行实验。将小鼠尾端(在距尾尖2cm处)用胶布固定在100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约15cm，换能器连接到medlab生物信号采集系统，适应2min后，记录4min之内的不动时间(s)。
2.2小鼠强迫游泳实验
动物分组及给药方式、剂量、时间同2.1，于末次给药后1h进行实验。将小鼠单个放入高25cm，直径20cm，水深15cm，水温(22±3)℃的水缸中，观察8min，适应3min，记录后5min内累计不动时间(s)。
2.3小鼠利血平拮抗实验
体温下降的观测正常小鼠随机区组法分为8组，即空白对照组、模型组、盐酸氟西汀组、受试药物a组、受试药物b组、受试药物c组、受试药物d组、受试药物e组，给药方式、剂量、时间同2.1。组均按0.25ml·(10g)-1体重灌胃给药。每日1次，连续给药7d，空白对照组灌胃给予纯净水。于末次给药后1h，按1.2mg·kg-1剂量腹腔注射利血平，2h后测小鼠肛温(将电子体温计探头插入小鼠肛门内约1.5cm处)。
2.4统计学处理
实验结果均采用均数±标准差
3结果
3.1对小鼠悬尾不动时间的影响
实验结果表明，盐酸氟西汀组、受试药物c组能明显缩短小鼠悬尾不动时间，与空白组比较差异显著(p<0.05)。见表1。
表1对小鼠悬尾不动时间的影响(
注：与空白组比较*p<0.05。
3.2对小鼠强迫游泳不动时间的影响
实验结果表明，盐酸氟西汀组、受试药物c组能明显缩短小鼠强迫游泳不动时间，与空白组比较差异显著(p<0.05)。见表2。
表2对小鼠强迫游泳不动时间的影响(
注：与空白组比较*p<0.05。
3.3对利血平所致小鼠体温下降的影响
实验结果表明，盐酸氟西汀组、受试药物c组能显著对抗利血平所致小鼠体温下降，与模型组比较差异显著(p<0.05)。见表3。
表3对利血平所致小鼠体温下降的影响(
注：与空白组比较*p<0.05。
4讨论
实验结果表明，受试药物c可显著缩短小鼠悬尾试验和小鼠强迫游泳试验的不动时间，显示其具有抗抑郁作用。受试药物c具有明显的抗抑郁作用，而受试药物a、受试药物b、受试药物d和受试药物e的疗效则不明显，说明在特定剂量的药物组合物在特定的制备方法下制成的药物产生了协同增效作用，具有预料不到的有益效果。
实验二：hplc法测定本发明药物中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯的含量
现有研究表明，白头翁中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、月见草中的豆蔻酸、金莲花中的藜芦酸甲酯是抗抑郁的有效活性成分，所以本发明采用hplc法测定本发明药物中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯这3中有效活性成分的含量。
1实验仪器与试药
1.1实验仪器
lc-2010a型高效液相色谱仪，由日本岛津公司制造；十万分之一电子分析天平，由上海丙林电子科技有限公司制造，kq-500b型超声仪，由北京天秤物华医疗仪器有限责任公司制造。
1.2试药
长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品，由北京谱析科技有限公司生产，批号：130226-201505；豆蔻酸对照品，由江苏永健医药科技有限公司生产，批号：140625-201503；藜芦酸甲酯对照品，由武汉斯坦德化工科技有限公司生产，批号：110823-201511；中性氧化铝，由深圳市恒丰万达化工有限公司生产，批号：20150623-8。
乙腈、磷酸为色谱纯，甲醇、正丁醇、氨水为分析纯，娃哈哈纯净水。
本发明药物：在本发明中成为本品，处方及制备方法如下：
处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；
制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
2方法与结果
2.1色谱条件
2.1.1长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件
色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液(22：78)；流速：0.5ml·min-1；柱温：35℃；elsd参数：漂移管温度：130℃，载气流速：3.8ml·min-1。
2.1.2豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件
色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：286nm；流速：0.5ml·min-1；柱温：30℃。
2.2溶液的制备
2.2.1对照品溶液的制备
取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml含长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得对照品溶液ⅰ。
取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜芦酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ。
2.2.2供试品溶液的制备
取本品4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为350w，超声频率为60khz，时间为20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％盐酸水溶液充分洗涤3次，每次30ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加70％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ。
取本品4.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇100ml洗脱2次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ。
2.2.3阴性样品溶液的制备
取处方中除去白头翁的其他药味，按处方比例制成缺白头翁阴性对照样品，照“2.2.2”项下供试品溶液ⅰ的制备方法制得阴性对照溶液，即得阴性样品溶液ⅰ。
取处方中除去月见草与金莲花的其他药味，按处方比例制成缺月见草与金莲花阴性对照样品，照“2.2.2”项下供试品溶液ⅱ的制备方法制得阴性对照溶液，即得阴性样品溶液ⅱ。
2.3系统专属性试验
分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ及阴性样品溶液ⅰ各10μl，按“2.1.1”项下色谱条件进行测定。结果显示，供试品中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷保留时间与对照品一致；而阴性对照溶液ⅰ色谱中在相同保留时间处无相应色谱峰，表明处方中其他药味对测定结果无干扰，该方法对本发明药物中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷的测定具有专属性。
再分别精密吸取“2.2”项下对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ及阴性样品溶液ⅱ各10μl，按“2.1.2”项下色谱条件进行测定。结果显示，供试品中豆蔻酸与藜芦酸甲酯谱峰能达到分离且保留时间与相应对照品一致；而阴性对照溶液色谱中在相同保留时间处无相应色谱峰，表明处方中其他药味对测定结果无干扰，该方法对本发明药物中豆蔻酸、藜芦酸甲酯的测定具有专属性。见附图1至附图6。
2.4方法学考察
2.4.1线性关系考察
分别精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液ⅰ、ⅱ各1、2、5、10、15、20μl，注入液相色谱仪，分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定。分别以长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品进样量对数(lgx)为横坐标x，以峰面积对数(lgy)为纵坐标y，以豆蔻酸、藜芦酸甲酯对照品的进样量x(μg)为横坐标，对应峰面积积分值y为纵坐标进行线性回归，计算得长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜芦酸甲酯的回归方程分别为：
长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷回归方程：y＝3.4587x+6.4941(r＝0.9997)
豆蔻酸回归方程：y＝5.2486x+7.2385(r＝0.9998)
藜芦酸甲酯回归方程：y＝4.3653x+4.2365(r＝0.9999)
试验结果表明，长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜芦酸甲酯分别在0.4550～10.350μg、0.0500～1.110μg、0.0550～1.020μg范围内线性良好。
2.4.2精密度试验
精密吸取“2.2.1”项下对照品溶液ⅰ、ⅱ，分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定，重复测定6次，进样量10μl，测定峰面积积分值。试验结果长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜芦酸甲酯峰面积的rsd值分别为0.79％、0.86％、0.77％，结果显示仪器精密度良好。
2.4.3稳定性试验
取本品适量(批号：20160621-2)，照“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制成供试品溶液ⅰ、ⅱ，在0、5、10、15、20h分别精密吸取10μl，再分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定峰面积，计算长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜芦酸甲酯峰面积的rsd值分别为0.86％、0.78％、0.82％。表明供试品溶液ⅰ、ⅱ在20h内稳定性良好，能够满足测定需要。
2.4.4重复性试验
取本品适量(批号：20160621-2)，照“2.2.2”项下供试品溶液ⅰ、ⅱ的制备方法分别制成供试品溶液，平行制备6份。分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定，进样量10μl。试验结果为制剂中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸和藜芦酸甲酯的平均质量分数分别为0.7532mg·g-1、0.4213mg·g-1、0.4452mg·g-1，rsd分别为1.34％、0.97％、1.26％，表明含量测定方法的重复性良好。
2.4.5加样回收试验
精密称取已测知含量的本品0.45g(批号：20160621-2)，分别精密加入长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品溶液、豆蔻酸对照品溶液和藜芦酸甲酯对照品溶液各25ml，照“2.2.2”项下供试品溶液ⅰ、ⅱ的制备方法分别平行制备6份。分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定，进样量10μl，并计算加样回收率，结果见表4。
表43种成分加样回收率试验(n＝6)
2.5样品含量测定
取3批本发明药物样品(批号20160621-2、20160625-1、20160630-1)，按“2.2.2”项下方法制备供试样品溶液ⅰ、ⅱ，分别按“2.1.1”“2.1.2”项下色谱条件测定，每批样品测定3份，结果见表5。
表53种成分的样品含量测定(mg·g-1，n＝3)
3结论
本实验测定了制剂中的3种有效成分，确保了制剂疗效，实验方法简便可行，灵敏度高，重现性好，可用于本发明药物的检测。
实验三：不同药物中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯的含量测定
1待测样品
1.1.1待测药物a：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：取干燥的月见草300g、白头翁300g、金莲花300g，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，干燥，即得。
1.1.2待测药物b：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：取干燥的月见草300g、白头翁300g、金莲花300g，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，干燥，即得。
1.1.3待测药物c：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
1.1.4待测药物d：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(2)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅱ；
(3)将步骤(1)所得的浸膏ⅰ、步骤(2)所得的浸膏ⅱ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
1.1.5待测药物e：处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量无水乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅱ；
(4)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(3)所得的浸膏ⅱ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
2测定方法
采用本发明实验二提供的高效液相色谱法测定各个药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯的含量。
3测定结果
测定结果见表6。
表6待测药物含量测定结果(单位：mg·g-1)
4讨论
从上表中可以看出，待测药物c中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯的含量明显高于其他待测药物，这可能也是待测药物c在治疗抑郁症方面的效果优于其他待测药物的原因。
附图说明：
图1为对照品溶液ⅰ的hplc色谱图，图中1号峰为长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱峰；
图2为供试品溶液ⅰ的hplc色谱图，图中1号峰为长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱峰；
图3为白头翁阴性对照品的hplc色谱图
图4为对照品溶液ⅱ的hplc色谱图，图中2号峰为豆蔻酸色谱峰，3号峰为藜芦酸甲酯色谱峰；
图5为供试品溶液ⅱ的hplc色谱图，图中2号峰为豆蔻酸色谱峰，3号峰为藜芦酸甲酯色谱峰；
图6为月见草与金莲花阴性对照品的hplc色谱图
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进行进一步说明：
实施例1：
处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；
制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，即得。
采用高效液相色谱法对药物中的长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷、豆蔻酸、藜芦酸甲酯进行含量测定，测定步骤如下：
(1)色谱条件
①长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷色谱条件：色谱柱shimadzuc18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-0.05mol·l-1磷酸二氢钠溶液，比例为22：78；流速：0.5ml·min-1；柱温：35℃；elsd参数：漂移管温度：130℃，载气流速：3.8ml·min-1；
②豆蔻酸、藜芦酸甲酯色谱条件：色谱柱kromasil100ac18，规格为：5μm，250mm×4.6mm；流动相：乙腈-2％冰醋酸溶液，梯度洗脱，洗脱顺序为：从0min至20min，乙腈保持在10％，2％冰醋酸溶液保持在90％；从21min至50min，乙腈从10％线性增加至25％，2％冰醋酸溶液从90％线性下降至75％；从51min至60min，乙腈从25％线性增加至35％，2％冰醋酸溶液从75％线性下降至65％；从61min至70min，乙腈从35％线性增加至55％，2％冰醋酸溶液从65％线性下降至45％；检测波长：286nm；流速：0.5ml·min-1；柱温：30℃；
(2)对照品溶液的制备
①对照品溶液ⅰ的制备：取长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷对照品适量，精密称定，加70％甲醇溶液制成每1ml含长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷0.500mg的溶液，即得对照品溶液ⅰ；
②对照品溶液ⅱ的制备：取豆蔻酸对照品、藜芦酸甲酯对照品适量，精密称定，加95％甲醇制成每1ml含豆蔻酸0.200mg，藜芦酸甲酯0.200mg的混合溶液，即得对照品溶液ⅱ；
(3)供试品溶液的制备
①供试品溶液ⅰ的制备：取本品4.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇溶液100ml，密塞，称定重量，超声处理，超声功率为350w，超声频率为60khz，时间为20min，放冷，再称定重量，用70％甲醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用乙酸乙酯提取3次，每次30ml，合并乙酸乙酯提取液，用1％盐酸水溶液充分洗涤3次，每次30ml，弃去盐酸水溶液，乙酸乙酯提取液水浴蒸干，残渣加70％甲醇溶液溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加70％甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅰ；
②供试品溶液ⅱ的制备：取本品4.0g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入95％甲醇100ml，密塞，称定重量，加热回流1h，放冷，滤过，滤液加在聚酰胺色谱柱上，用无水甲醇100ml洗脱2次，收集洗脱液，合并，蒸干，残渣用无水甲醇溶解，滤过，滤液转移至10ml量瓶中，加无水甲醇溶液至刻度，摇匀，即得供试品溶液ⅱ；
(4)测定：分别精密称取对照品溶液ⅰ、供试品溶液ⅰ、对照品溶液ⅱ、供试品溶液ⅱ各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定；
(5)测定结果：本品中长春藤皂苷元3-o-α-l-吡喃阿拉伯糖苷含量为0.742mg·g-1、豆蔻酸含量为0.411mg·g-1、藜芦酸甲酯含量为0.420mg·g-1。
实施例2：
处方：月见草300g、白头翁300g、金莲花300g；
制备方法：(1)取干燥的月见草300g与金莲花300g混合后，粉碎成粗粉，co2超临界萃取，co2超临界萃取条件为：萃取压力为30mpa，萃取温度35℃，co2流量30l·h-1，萃取时间1.5h；得到月见草与金莲花萃取物，用β-环糊精包合，得到β-环糊精包合物；月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣保留，备用；
(2)取步骤(1)所得的月见草与金莲花co2超临界萃取后的药渣，用8倍量65％的乙醇回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到浸膏ⅰ，备用；
(3)取白头翁300g，粉碎成粗粉，用8倍量水回流提取2次，每次1h，提取液合并，过滤，滤液浓缩，得到白头翁水提浸膏，备用；白头翁水提取后的药渣保留，备用；
(4)取步骤(3)所得的白头翁水提取后的药渣，进行超声波辅助提取，提取温度34℃，超声波频率50khz，按1g：20ml的料液比，加入浓度为95％的乙醇作为提取液，每次提取35min，提取2次，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇，得到浸膏ⅱ，备用；
(5)取步骤(3)所得的白头翁水提浸膏，进行柱层析分离；选用d101b型大孔吸附树脂进行柱层析分离，树脂柱径高比为1：4，上样体积：6bv，水洗8bv除杂，以丙酮:0.4mol/l乙酸溶液＝2:1的洗脱剂11bv洗脱，流速为3bv/h，收集洗脱液，洗脱液浓缩，得到浸膏ⅲ；
(6)将步骤(1)所得的β-环糊精包合物、步骤(2)所得的浸膏ⅰ、步骤(4)所得的浸膏ⅱ、步骤(5)所得的浸膏ⅲ混合均匀，干燥，粉碎，加入淀粉、糊精，混匀，压片，制成片剂900片。
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