本发明涉及一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂及其制备方法。属兽药领域。
背景技术：
随着人们生活水平的提高，日益增长的精神需求引发了宠物热。宠物不仅给人类平淡的生活带来了诸多乐趣，也有不少人将宠物作为一种情感依托来排解孤独与苦闷、疏解心理压力。但是，宠物与外界环境的接触不免感染某些寄生虫，而人们在与宠物的共同生活中又难免与宠物近距离接触，增加了人畜共患寄生虫病的可能性。寄生虫可传播多种疾病，给宠物和人类的健康造成危害，严重时可致死亡。
吡虫啉（imidacloprid）是由德国拜耳和日本农药公司于1984年共同开发推向市场的新烟碱类杀虫剂，又称新型硝基亚甲基类杀虫剂，是该类杀虫剂中杀虫效果比较高的品种之一。吡虫啉是硝基亚甲基杂环结构和烟碱的组合，作用于烟碱型乙酰胆碱受体，破坏虫体中枢神经系统的正常传导，导致虫体的神经被破坏，最终使之死亡；目前较多应用于农药。吡虫啉对寄生虫也具有较强的神经毒性；但由于其较为独特的作用机制，吡虫啉对多数哺乳动物则呈现较低的毒性，对人和宠物具有较高的安全性。
本发明复方吡虫啉组合物处方中，包含了多拉菌素（doramectin）组方。多拉菌素为20世纪90年代研制开发的新一代大环内酯类抗寄生虫药，是以环已烷羧酸为前体，通过基因重组的阿维链霉菌新菌株发酵而成的一种阿维菌素类抗生素。多拉菌素的驱虫机制是通过加强γ-氨基丁酸的作用来实现，使得虫体神经难以将刺激传递给肌肉，使肌肉不能收缩，导致寄生虫麻痹而被驱除。被认为是目前阿维菌素族中最优秀的抗寄生虫药物之一，为内外兼杀剂，对多种寄生虫均有良好的驱杀效果。
专利cn103003758a公开了一种中西药复方透皮溶液及制备方法，该透皮溶液组成成分和各组成成分的重量比为：多拉菌素0.1-5%，桉叶油10-50%，氮酮2-3%，稳定剂0.1-2%，稀释溶剂40-85%，可用于治疗宠物皮癣。但其用药需每天早晚各1次，依从性较差。
专利cn101401782a公开了一种多拉菌素浇泼剂及其制备方法，该浇泼剂由多拉菌素、丙二醇、无水乙醇、氮酮、吐温-80和2,6-二叔丁基对甲酚组成，主要用于驱杀动物的体内线虫和体外寄生虫。其抗寄生虫机制单一，剂型也单一，应用范围较窄。
专利cn102552304a公开了一种治疗宠物螨虫感染的外用药剂，该药剂由多拉菌素0.005-0.01g，冰片1-5g，丙二醇20-50ml，无水乙醇40-70ml组成，主要用于对患有螨虫感染的动物进行治疗。但其用药需每天1次，较为费时费力，且剂型单一。
专利cn104546885a公开了一种治疗皮肤病的药物组合物及其制备方法，该组合物为多拉菌素1份，特比萘芬1-2份。
本发明复方吡虫啉组合物处方中，包含了拟除虫菊酯类杀虫剂组方。拟除虫菊酯类杀虫剂的作用机制在于扰乱目标虫体神经的正常生理，使之由兴奋、痉挛到麻痹而死亡。拟除虫菊酯对哺乳动物具有高效低毒、低残留的特点。其中，氰戊菊酯，化学名称α-氰基-3-苯氧基苄基(r,s)-2-(4-氯苯基)-3-甲基丁酸酯，是目前我国应用量最大的拟除虫菊酯类杀虫剂，其大鼠急性经皮ld50>5000mg/kg；浓度较高时，拟除虫菊酯对兔皮肤仅有轻微刺激，对眼仅有轻微刺激。因而，拟除虫菊酯类杀虫剂在低浓度应用时，是一种较为优良的、安全的动物抑虱防蚤驱蚊化合物，适用于宠物体。
专利cn1501773a公开了一种可应用于皮肤的、用于抑制动物体上寄生虫的液体制剂，其组成和组分重量百分比分别为：苄氯菊酯35-60%，吡虫啉或吡虫啉类似物2.5-12.5%，n-甲基吡咯烷酮27.5-62.5%，水0-5%，酚类抗氧化剂0-0.5%和有机酸0-0.5%，还含有助溶剂2.5-10%，用于抑制包括狗和猫在内的温血动物体上壁虱和/或跳蚤。但处方中的苄氯菊酯的含量很高，对眼睛的刺激作用较为明显。
本发明将上述三种不同作用机制的优秀抗寄生虫防蚊驱蚤药物组成复方，三者协同，使得本发明制剂具有更加广谱的驱虫杀虫作用，同时对体内、外寄生虫具有更加有效的驱杀作用。
综上所述，目前市场上，绝大部分宠物所用的抗寄生虫药为片剂和注射剂，宠物依从性均不佳；而外用制剂或剂型或应用或抗寄生虫机制较为单一，应用受到局限，加之给药次数较为频繁，依从性不佳。
透皮制剂作为一种较为新型的给药系统，可避免药物的肝首过效应，使有效成分具有较高的生物利用度；同时还能避免药物与胃肠道的相互作用，避免药物对宠物胃肠道的损伤；同时，其可在宠物体内达到相对平稳且可控的血药浓度，有效地降低了药物的毒副作用。同时作为一个溶液剂，在实际使用中，方便调整用量和给药部位，可实现局部重点给药。
目前，尚没有一种同时包括吡虫啉、多拉菌素和拟除虫菊酯类化合物，且给药方便、长时有效的宠物用广谱抗寄生虫透皮制剂。
至此，为了丰富宠物药市场、为宠物的临床用药提供新的选择，本发明开发并公开一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂及其制备方法。
技术实现要素：
基于上述情况，本发明的目的是提供一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂及其制备方法。
本发明所要解决的第一个技术问题是提供一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂的制备方法。
本发明所要解决的第三个技术问题是一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂在宠物抗寄生虫中的应用。
为解决上述第一个技术问题，本发明所提供的技术方案是。
本发明提供了一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂，其特征在于，包含吡虫啉、多拉菌素、拟除虫菊酯类化合物、溶剂、渗透促进剂、抗氧化剂和辅剂。
本发明提供了一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂，其特征在于，它是由下列组分组成，按重量份数计：吡虫啉500,000-5,000,000份，多拉菌素1,000-500,000份，拟除虫菊酯类化合物100-20,000份，溶剂2,000,000-8,000,000份，渗透促进剂100,000-2,000,000份，抗氧化剂1-10份，辅剂500,000-5,000,000份。
所述拟除虫菊酯类化合物的质量百分比不超过5%。
所述拟除虫菊酯类化合物选自氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯中的一种或几种组合。
所述溶剂选自苯甲醇、丙二醇、异丙醇、乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯中的一种或几种组合。
所述溶剂优选为苯甲醇。
所述渗透促进剂选自氮酮（简称为：azone）、二甲基亚砜（简称为：dmso）、二甲基甲酰胺（简称为：dmf）、二甲基乙酰胺（简称为：dmac）、癸基甲基亚砜（简称为：dcms）、α-硝基萘（简称为：简称为α-np）、1-甲基-α-吡咯酮（简称为：1-nmp）、1,5-二甲基-α-吡咯酮（简称为：1,5-nmp）、1-乙基-α-吡咯酮（简称为：1-nep）、5-羧基-α-吡咯酮（简称为：5-ncp）、1-十二烷基-α-吡咯酮（简称为：1-ndop）中的一种或几种组合。
所述抗氧化剂选自2,6-叔丁基对甲酚、丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、叔丁基对苯二酚、没食子酸丙酯中的一种或几种组合。
所述辅剂选自乙醇、乙二醇、丙二醇、丙三醇、聚乙二醇中的一种或几种组合。
为解决上述第二个技术问题，本发明所提供的技术方案是。
本发明提供了一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂的制备方法，具体包括如下步骤：取处方量的吡虫啉用适量溶剂溶解，制成溶液a；取处方量的多拉菌素用适量溶剂溶解，制成溶液b；取处方量的氰戊菊酯用适量溶剂溶解，制成溶液c；将溶液a、溶液b和溶液c混合，补足处方量的溶剂，加入处方量的渗透促进剂和抗氧化剂，用辅剂定容；将得到的溶液用微孔滤膜过滤，澄明度合格后灌装为一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂。
本发明体外透皮实验应用改进的franz扩散池进行猪皮透皮实验。结果显示，复方吡虫啉透皮浇泼剂（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）24h单位累计渗透量，吡虫啉为4473.32μg，多拉菌素为82.21μg，氰戊菊酯为10.33μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为29.82μg/(cm2h)，多拉菌素为0.548μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.768μg/(cm2h)。上述体外实验结果说明，应用本发明所制备的一种复方吡虫啉透皮浇泼剂具有良好的透皮吸收作用。吡虫啉动物组织的有效抗虫浓度为2.5μg/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药20μg，给药1ml（12.5mg），涂布1cm2，每小时透过的吡虫啉将超过20μg；而吡虫啉在犬、猫、鼠、兔、猪等动物体内的消除半衰期长于8.7d（8.7-30.6d）；因而药物进入体内的消除量相对透皮吸收可忽略不计，吡虫啉1h透过量即可达到抗虫的有效剂量。另外，按以上标准给药，药物完全透过皮肤需要超过20d，该制剂也具有较好的缓释效果。多拉菌素动物组织的有效抗虫浓度为1μg/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药8μg；给药1ml（0.25mg），涂布15cm2，每小时透过的多拉菌素将超过8μg，而多拉菌素在犬、猫、鼠、兔、猪等动物体内的消除半衰期长于3.3d（3.3-14.4d），因而药物进入体内的消除量相对透皮吸收可忽略不计，多拉菌素1h透过量即可达到抗虫的有效剂量。氰戊菊酯动物组织的有效作用浓度为9ng/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药72ng；给药1ml（50μg），涂布15cm2，每小时透过的氰戊菊酯将超过8μg，可达到抗虫的有效剂量。综上所述，该制剂皮肤给药可达到有效驱虫的血药浓度，可作为动物驱虫的透皮组合物制剂用于宠物抗寄生虫的治疗与预防。
体外透皮对比实验显示，溶剂为苯甲醇时，所制备的一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物具有更显著的透皮吸收。结果显示，复方吡虫啉透皮浇泼剂（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%；溶剂为苯甲醇，辅剂为乙醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为4473.32μg，多拉菌素为82.21μg，氰戊菊酯为10.33μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为29.82μg/(cm2h)，多拉菌素为0.548μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.768μg/(cm2h)。而复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂1（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%；溶剂为丙二醇，辅剂为乙醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为2332.13μg，多拉菌素为37.86μg，氰戊菊酯为4.38μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为15.55μg/(cm2h)，多拉菌素为0.252μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.326μg/(cm2h)。复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂2（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%；溶剂为异丙醇，辅剂为乙醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为2018.45μg，多拉菌素为27.73μg，氰戊菊酯为3.37μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为13.46μg/(cm2h)，多拉菌素为0.186μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.251μg/(cm2h)。复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂3（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%；溶剂为正丁醇，辅剂为乙醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为3301.45μg，多拉菌素为36.64μg，氰戊菊酯为6.01μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为22.01μg/(cm2h)，多拉菌素为0.244μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.447μg/(cm2h)。
可见，溶剂选用苯甲醇时，制备的复方吡虫啉透皮浇泼剂具有更好的透皮吸收。
为解决上述第三个技术问题，本发明对所述的一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂进行了犬的抗寄生虫实验。实验选用30只感染蠕虫的beagle犬，饲养于蚊虫跳蚤滋养的环境中，随机分为5组，第1、2、3、4组分别按体重用0.1、0.2、0.5、1ml/kg剂量的复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）进行耳根部皮肤涂擦给药，第5组为生理盐水涂擦对照组。实验结果表明，用药后3d，第1组和第2组中大部分感染蠕虫的beagle犬的寄生虫症状减轻，痂皮部分脱落；beagle犬同时出现被蚊虫跳蚤叮咬的现象，毛发中可见跳蚤活动；其中第2组情况略好于第1组；第3组和第4组的症状基本消失，寄生虫所引起的皮肤炎症减轻，痂皮几乎全部脱落，毛发中鲜见跳蚤活动，且鲜见动物体及周围蚊虫活动，动物情绪稳定，不再蹭栏。用药后7天，第1组仍有部分beagle犬有瘙痒症状，毛发中仍见跳蚤活动，镜检仍有少量活蠕虫和虫卵存在；第2组beagle犬的蹭栏现象基本消失，毛发中鲜见跳蚤活动，镜检不见活蠕虫但有虫卵存在；第3组和第4组症状完全消失，皮肤恢复光泽和弹性，毛发中鲜见跳蚤活动，镜检未检出蠕虫和虫卵；而第5组，生理盐水对照组中的beagle犬的症状并未改善，且有加重趋势。该复方吡虫啉透皮组合制剂各剂量的治愈率分别为50%、83%、100%、100%，因此，该透皮组合制剂涂擦给药时，对beagle犬的有效质量剂量为0.5ml/kg体重。
为解决上述第三个技术问题，本发明还对所述的复方吡虫啉透皮组合物制剂进行了仓鼠的抗寄生虫实验。实验选用40只感染蠕虫的金黄仓鼠，饲养于蚊虫跳蚤滋生的环境中，随机分为4组，第1、2、3组分别按体重用2、5、10ml/kg剂量的复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）进行全身浇泼给药，第4组为生理盐水浇泼给药对照组。实验结果表明，用药后2d，第1组中大部分感染蠕虫的仓鼠的寄生虫症状减轻，毛发中仍有明显的跳蚤活动，周边蚊虫飞舞，痂皮部分脱落，但有轻微打斗行为；第2组和第3组的症状基本消失，痂皮几乎全部脱落，毛发中鲜见跳蚤，动物体及周围鲜见蚊虫活动，且动物情绪稳定。用药后5天，第1组仍有部分仓鼠症状未完全消失，镜检仍有少量活蠕虫和虫卵存在；第2组和第3组症状完全消失，皮肤恢复光泽和弹性，镜检未检出蠕虫和虫卵；同时，第4组，生理盐水对照组中的仓鼠的症状并未改善，且有加重趋势。该复方吡虫啉透皮组合制剂各剂量的治愈率分别为70%、100%、100%，因此，该透皮组合制剂浇泼给药时，对金黄仓鼠的有效质量剂量为5ml/kg体重。
本发明制备的复方吡虫啉透皮组合制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）是可经过皮肤吸收进入动物体内达到驱杀动物体内外寄生虫的效果，药物经皮肤吸收入血的过程可持续较长时间，而不经过肝脏“首过效应”和胃肠道的破坏，提高了药物的生物利用度，同时降低了药物口服给药的副作用，并可有效地延长药物的吸收过程和作用时间，减少给药频率。
本发明制备的复方吡虫啉透皮组合制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%），与药物组合物中单一成分应用时相较，可显著提高药物的利用度；也可显著降低药物组合物中单一成分应用时的毒副作用。本发明所制备的药物组合物制剂可克服吡虫啉单独应用时动物给药部位（如beagle犬的耳根处）反应灵敏度的降低（麻木），可克服多拉菌素单独应用时透皮吸收效果的不理想，还可克服氰戊菊酯单独应用时由于剂量较高而引起的明显的眼部刺激作用。
本发明的优越性在于。
1.在兽药领域，首次提供了一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂。
2.在兽药领域，首次提供了一种宠物用广谱抗寄生虫的复方吡虫啉透皮组合物制剂的制备方法。
3.本发明首次将吡虫啉、多拉菌素和拟除虫菊酯类化合物组成复方，其抗寄生虫防蚊驱蚤机制不同，可实现一次给药多重防治的抗寄生虫防蚊驱蚤作用。
4.本发明首次将吡虫啉、多拉菌素和拟除虫菊酯类化合物组成复方，可显著降低各组合物中单组分应用的毒副作用。
5.目前诸多抗寄生虫溶液剂只考虑到药物的喷洒，而忽略了可采用一定的制剂手段使药物达到透皮吸收的目的，从而获得更深入的抗寄生虫效果。本发明通过对动物的局部给药，通过皮肤渗透吸收，对寄生虫有良好的治疗效果。
6.本发明通过选用适宜、适量的溶剂，解决了吡虫啉在溶液剂中溶解度较低的问题。
7.本发明通过选用适宜的辅剂，与溶剂共同克服了吡虫啉在溶液剂中溶解度较低的问题。
8.本发明通过加入适宜、适量的渗透促进剂，解决了吡虫啉、多拉菌素和拟除虫菊酯类化合物由于分子量大和熔点高而带来的透皮渗透性较低的问题，透皮实验结果显示该透皮组合制剂具有良好的透皮吸收性。
9.本发明通过制备为不同剂型，不拘泥于单一给药方式，可采用涂、擦、喷、滴、浇泼等多种给药形式。
具体实施方式
实施例1-12。
表1.实施例1-12处方。
制备方法包括以下步骤：取处方量的吡虫啉用适量的溶剂溶解，制成溶液a；取处方量的多拉菌素用适量的溶剂溶解，制成溶液b；取处方量的氰戊菊酯用适量的溶剂溶解，制成溶液c；将溶液a、溶液b和溶液c混合，补足处方量的溶剂，加入处方量的渗透促进剂和抗氧化剂，用辅剂定容；将得到的溶液用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤，澄明度合格后灌装。
实验例1。
实施例1的复方吡虫啉透皮组合制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）的体外透皮实验。
1.实验方法。
1.1.试药与仪器。
复方吡虫啉透皮组合制剂，为实施例1制备所得，含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%。
franz扩散池（四川大学）、bp211d电子天平（sartorius公司，德国）、ja3003电子天平（上海分析仪器厂）、df-101s集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市予华仪器有限责任公司）、hl-2型恒流蠕动泵（上海青浦沪西仪器厂）、qzx-c型空气浴振荡器（哈尔滨市东明医疗仪器厂）。
1.2.体外透皮实验方法。
1.2.1.离体皮肤的制备：取实验用乳猪（1月龄）脖背处取一定大小的皮肤一块（2.5cm×2.5cm），去除毛和皮下脂肪，用生理盐水清洗三次后即使用。
1.2.2.体外透皮实验：将离体皮肤固定与扩散室和接收室之间，角质层朝向扩散室，接收室及其系统内加入25ml接收液（含0.1%双乙酸钠的0.01mpbs溶液，ph6.5），开启恒流泵驱除气泡，使接收液与皮肤充分接触。系统温度为37±1℃，恒流泵流速为2ml/min，接收室置于磁力搅拌器，磁力搅拌器转速为150rpm。待系统稳定0.5h后，扩散室内加入复方吡虫啉透皮组合制剂5ml，实验开始后，于0.25、0.5、0.75、1、2、3、4、6、8、12、16、20、24h从接收液中取样0.5ml，再补入等量新鲜接收液。
1.3.药物测定方法。
1.3.1.吡虫啉的含量测定。
色谱条件：hpzorbaxxdbc18色谱柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为0.2%（v/v）乙酸水溶液-乙腈（80:20，v/v），柱温25℃，流速2ml/min，进样量5μl。紫外检测器波长设定为270nm。
标准溶液的制备：精密称取吡虫啉标准品10mg溶于100ml容量瓶，用乙腈定容，作为储备液（100μg/ml），密封保存于4℃。将储备液用乙腈稀释为系列浓度为0.1、0.2、0.5、1、2、5、10μg/ml的标准溶液。
标准曲线的建立：取上述标准溶液5μl进样，记录峰面积。以吡虫啉浓度为x，吡虫啉峰面积为y，绘制标准曲线；得到的线性回归方程为：y=400.34x+10.334,r2=0.9997。线性范围为0.1-10μg/ml。线性结果良好，符合含量测定要求。
1.3.2.多拉菌素的含量测定。
色谱条件：hpzorbaxxdbc18色谱柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为乙腈-甲醇-水（45:45:20，v/v/v），柱温25℃，流速2ml/min，进样量5μl。紫外检测器波长设定为246nm。
标准溶液的制备：精密称取多拉菌素标准品10mg溶于100ml容量瓶，用甲醇定容，作为储备液（100μg/ml），密封保存于4℃。将储备液用甲醇稀释为系列浓度为0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5μg/ml的标准溶液。
标准曲线的建立：取上述标准溶液5μl进样，记录峰面积。以多拉菌素浓度为x，多拉菌素峰面积为y，绘制标准曲线；得到的线性回归方程为：y=995.36x+33.479,r2=0.9996。线性范围为0.05-5μg/ml。线性结果良好，符合含量测定要求。
1.3.3.氰戊菊酯的含量测定。
色谱条件：hpzorbaxxdbc18色谱柱（5μm，4.6mm×150mm），流动相为甲醇-水（80:20，v/v），柱温25℃，流速2ml/min，进样量5μl。紫外检测器波长设定为220nm。
标准溶液的制备：精密称取氰戊菊酯标准品1mg溶于100ml容量瓶，用甲醇定容，作为储备液（10μg/ml），密封保存于4℃。将储备液用甲醇稀释为系列浓度为0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2μg/ml的标准溶液。
标准曲线的建立：取上述标准溶液5μl进样，记录峰面积。以氰戊菊酯浓度为x，氰戊菊酯峰面积为y，绘制标准曲线；得到的线性回归方程为：y=367.08x+66.883,r2=0.9997。线性范围为0.02-2μg/ml。线性结果良好，符合含量测定要求。
.4.数据处理。
由于每次取样后都要补液，对药物的通透产生了稀释作用，因而药物的积累通透量trcum（μg/ml）可由以下公式校正。
其中an为第n个样品通透量的测定值；vsn为第n个样品的采样体积；vr为接收池的体积。
透皮速率可由以下公式计算。
k=trcum/tn
其中trcum（μg/ml）为第n次取样的积累通透量，tn（h）为第n次取样时间。
2.结果与讨论。
结果显示，所采用的复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%）24h单位渗透量为吡虫啉为4473.32μg，多拉菌素为82.21μg，氰戊菊酯为10.33μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为29.82μg/(cm2h)，多拉菌素为0.548μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.768μg/(cm2h)，说明该透皮组合制剂具有良好的透皮吸收作用。吡虫啉动物组织的有效抗虫浓度为2.5μg/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药20μg，给药1ml（12.5mg），涂布1cm2，每小时透过的吡虫啉将超过20μg；而吡虫啉在犬、猫、鼠、兔、猪等动物体内的消除半衰期长于8.7d（8.7-30.6d）；因而药物进入体内的消除量相对透皮吸收可忽略不计，多拉菌素1h透过量即可达到抗虫的有效剂量。另外，按以上标准给药，药物完全透过皮肤需要超过20d，该制剂也具有较好的缓释效果。多拉菌素动物组织的有效抗虫浓度为1μg/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药8μg；给药1ml（0.25mg），涂布15cm2，每小时透过的多拉菌素将超过8μg，而多拉菌素在犬、猫、鼠、兔、猪等动物体内的消除半衰期长于3.3d（3.3-14.4d），因而药物进入体内的消除量相对透皮吸收可忽略不计，多拉菌素1h透过量即可达到抗虫的有效剂量。氰戊菊酯动物组织的有效作用浓度为9ng/kg，8kg体重动物平均组织共计需给药72ng；给药1ml（50μg），涂布15cm2，每小时透过的氰戊菊酯将超过8μg，可达到抗虫的有效剂量。综上所述，该制剂皮肤给药可达到有效驱虫的血药浓度，可作为动物驱虫的透皮组合物制剂用于宠物抗寄生虫的治疗与预防。
实验例2。
复方吡虫啉透皮组合制剂的透皮优越性比较。
1.实验方法。
1.1.试药与仪器。
复方吡虫啉透皮组合制剂1，为实施例1制备所得，含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%；溶剂为苯甲醇，辅剂为乙醇。复方吡虫啉透皮组合制剂对比制剂1、对比制剂2和对比制剂3，分别为对比例1、对比例2和对比例3制备所得，溶剂分别为丙二醇、异丙醇和正丁醇，辅剂为乙醇。
仪器同实施例13中1.1项。
1.2.体外透皮实验方法。
同实施例13中1.2项。
1.3.药物测定方法。
同实施例13中1.3项。
1.4.数据处理。
同实施例13中1.4项。
2.结果与讨论。
结果显示，复方吡虫啉透皮浇泼剂（溶剂为苯甲醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为4473.32μg，多拉菌素为82.21μg，氰戊菊酯为10.33μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为29.82μg/(cm2h)，多拉菌素为0.548μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.768μg/(cm2h)。而复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂1（溶剂为丙二醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为2332.13μg，多拉菌素为37.86μg，氰戊菊酯为4.38μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为15.55μg/(cm2h)，多拉菌素为0.252μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.326μg/(cm2h)。复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂2（溶剂为异丙醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为2018.45μg，多拉菌素为27.73μg，氰戊菊酯为3.37μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为13.46μg/(cm2h)，多拉菌素为0.186μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.251μg/(cm2h)。复方吡虫啉透皮浇泼剂对比制剂3（溶剂为正丁醇）24h单位累计渗透量，吡虫啉为3301.45μg，多拉菌素为36.64μg，氰戊菊酯为6.01μg；pbs接受液中的单位渗透速率常数（k），吡虫啉为22.01μg/(cm2h)，多拉菌素为0.244μg/(cm2h)，氰戊菊酯为0.447μg/(cm2h)。综上所述，溶剂选用苯甲醇时，制备的复方吡虫啉透皮浇泼剂具有更好的透皮吸收。
实验例3。
复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）的犬抗寄生虫实验。
1.实验方法。
1.1.药物。
复方吡虫啉透皮组合制剂，为实施例1制备所得，含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%。
1.2.实验动物。
选用30只感染蠕虫的beagle犬，雌雄各半，约1年龄，体重7-9kg，临床表现为瘙痒，饲养于跳蚤蚊虫滋生的环境中。感染蠕虫的beagle在饲养环境中在可接触的各种物体（如铁笼、饲槽、水壶固定装置等）及地面上不断蹭痒，用力摩擦。在感染蠕虫的beagle犬的头部、面颊、耳部、颈部、肩背部、腹部、躯干两侧剂四肢出现皮肤炎症，表现为被毛脱落、皮屑、皮肤潮红，甚至有炎性液体浸出、出血、节结痂；皮质增厚、粗糙变硬，甚至皲裂。镜检可见或蠕虫及虫卵。动物毛发中可见跳蚤活动，动物体蚊虫围绕。
1.3.感染蠕虫beagle犬的分组与治疗。
1.3.1.实验分组及给药：实验选用30只自然感染蠕虫的beagle犬，雌雄各半随机分为5组，第1、2、3、4组分别按体重用0.1、0.2、0.5、1ml/kg剂量的复方吡虫啉透皮组合制剂（含吡虫啉12.5%；多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）进行耳根部皮肤涂擦给药，第5组为生理盐水涂擦对照组。给药时，用10ml注射器吸取药液，制剂涂擦于beagle犬右耳耳根皮肤处，以药液不流失为准。分组情况参见表1。
表2.实验感染蠕虫beagle犬分组剂给药。
1.3.2.症状观察与判断：每天观察感染蠕虫的beagle犬的临床表现，查看瘙痒症状和皮肤病变是否好转和恢复；查看动物毛发中跳蚤的活动情况及蚊虫。7d后，刮取病变部位与健康皮肤交界处的皮肤组织，置培养皿内，采用加湿法检查蠕虫及虫卵情况。
2.结果与讨论。
每天定时观察和记录实验beagle犬的相关临床症状。用药后3d，第1组和第2组中大部分感染蠕虫的beagle犬的症状减轻，痂皮部分脱落，beagle犬同时出现被蚊虫跳蚤叮咬的现象，毛发中可见跳蚤活动；其中第2组情况略好于第1组；第3组和第4组的症状基本消失，寄生虫所引起的皮肤炎症减轻，痂皮几乎全部脱落，毛发中鲜见跳蚤活动，且鲜见动物体及周围蚊虫活动，动物情绪稳定，不再蹭栏。用药后7天，第1组仍有部分beagle犬有瘙痒症状，毛发中仍见跳蚤活动，镜检仍有少量活蠕虫和虫卵存在；第2组beagle犬的蹭栏现象消失，毛发中鲜见跳蚤活动，镜检不见活蠕虫但有虫卵存在；第3组和第4组症状完全消失，皮肤恢复光泽和弹性，毛发中鲜见跳蚤活动，镜检未检出蠕虫和虫卵；而第5组，生理盐水对照组中的beagle犬的症状并未改善，且有加重趋势。具体实验结果参见表2。
3.复方吡虫啉透皮组合物制剂对beagle犬蠕虫的临床疗效。
由表2可知，该复方吡虫啉透皮组合制剂各剂量的治愈率分别为50%、83%、100%、100%，因此，该透皮组合制剂对beagle犬的有效质量剂量为0.5ml/kg体重。
3.小结。
在实验过程中，给药各组未见明显的药物不良反应，饮食正常、排泄正常。从治愈率来看，给药剂量0.5ml/kg和1ml/kg组的治愈率均为100%，0.1ml/kg和0.2ml/kg剂量组中，个别beagle犬的驱虫效果不理想，原因可能在于剂量不足。
实验例4。
复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）的鼠抗寄生虫实验。
1.实验方法。
1.1.药物。
复方吡虫啉透皮组合制剂，为实施例1制备所得，含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%。
1.2.实验动物。
选用40只感染蠕虫的金黄仓鼠，雌雄各半，5-12月龄，体重220-300g，临床表现为瘙痒，饲养于跳蚤蚊虫滋生的环境中。感染蠕虫的仓鼠性情较为暴躁，在饲养环境中不断翻滚、用力摩擦。在感染蠕虫的仓鼠的头部、面颊、耳部、颈部、肩背部、腹部、躯干两侧剂四肢出现皮肤炎症，表现为被毛脱落、皮屑、皮肤潮红，甚至有炎性液体浸出、出血、节结痂；皮质增厚、粗糙变硬，甚至皲裂。镜检可见或蠕虫及虫卵。动物毛发中可见跳蚤活动，动物体蚊虫围绕。
1.3.感染蠕虫仓鼠的分组与治疗。
1.3.1.实验分组及给药：实验选用40只自然感染蠕虫的仓鼠，雌雄各半随机分为4组，第1、2、3组分别按体重用2、5、10ml/kg剂量的复方吡虫啉透皮组合制剂剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）进行全身浇泼给药，第4组为生理盐水浇泼对照组。给药时，用5ml注射器吸取药液，仓鼠置于瓷质托盘上，制剂全身浇泼于仓鼠身体。分组情况参见表3。
表4.实验感染蠕虫金黄仓鼠分组剂给药。
1.3.2.症状观察与判断：每天观察感染蠕虫的仓鼠的临床表现，查看瘙痒症状和皮肤病变是否好转和恢复；查看动物毛发中跳蚤的活动情况及蚊虫。。5d后，刮取病变部位与健康皮肤交界处的皮肤组织，置培养皿内，采用加湿法检查蠕虫及虫卵情况。
2.结果与讨论。
每天定时观察和记录实验仓鼠的相关临床症状。用药后2d，第1组中大部分感染蠕虫的仓鼠的症状减轻，毛发中仍明显的跳蚤活动，周边蚊虫飞舞，痂皮部分脱落，但有轻微打斗行为；第2组和第3组的症状基本消失，痂皮几乎全部脱落，毛发中鲜见跳蚤，动物体及周围鲜见蚊虫活动，且动物情绪稳定。用药后5天，第1组仍有部分仓鼠症状未完全消失，镜检仍有少量活蠕虫和虫卵存在；第2组和第3组症状完全消失，皮肤恢复光泽和弹性，镜检未检出蠕虫和虫卵；同时，第5组，生理盐水对照组中的仓鼠的症状并未改善，且有加重趋势。具体实验结果参见表4。
表5.复方吡虫啉透皮组合物制剂对金黄仓鼠蠕虫的临床疗效。
由表4可知，该复方吡虫啉透皮组合制剂各剂量的治愈率分别为70%、100%、100%，因此，该透皮组合制剂对仓鼠的有效质量剂量为5ml/kg体重。
3.小结。
在实验过程中，给药各组未见明显的药物不良反应，饮食正常、排泄正常。从治愈率来看，给药剂量5ml/kg和10ml/kg组的治愈率均为100%，2ml/kg剂量组对个别仓鼠的驱虫效果不理想，原因可能在于剂量不足。
实验例5。
复方吡虫啉透皮组合物制剂（含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%）的beagle犬给药部位灵敏度实验。
1.实验方法。
1.1.药物。
复方吡虫啉透皮组合制剂，为实施例1制备所得，含吡虫啉12.5%，多拉菌素0.25%，氰戊菊酯0.005%。吡虫啉单方溶液，不含多拉菌素和氰戊菊酯，其余均同实施例1所制得，含吡虫啉12.5%。
1.2.实验方法。
选用18只健康beagle犬，雌雄各半，约1年龄，体重8-9kg，随机分为两组。（a）组于耳根处按0.5ml/kg涂布生理盐水，（b）组于耳根处按0.5ml/kg涂布复方吡虫啉组合物制剂，（c）组于耳根处按0.5ml/kg涂布吡虫啉单方溶液；待溶液充分接触耳根皮肤2-3min后，用小棍刺激beagle犬耳根部皮肤，观察动物反应。
2.实验结果。
（a）组beagle犬耳根部受到小棍刺激后有较强的反应，表现为甩耳、头部的快速回转、张嘴犬吠并示威；（b）组beagle犬受到刺激后，皆表现出甩耳和回头，犬吠声势略弱；而（c）组beagle犬受到刺激后，几乎没有反应，偶有回头。
3.小结。
本部分实验结果表明，将吡虫啉与多拉菌素和氰戊菊酯组成药物组合物后，可克服吡虫啉单独应用时所引起的给药部位反应迟钝（麻木）的副作用。
本发明的上述实施例仅是为了较为清楚地说明本发明而作的举例，并非是对本发明实施方式的限定。对于相关领域的技术人员来说，在上述说明和举例的基础上还可以做出其他各种形式的调整和变动。本说明书无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的调整和变动仍处于本发明的保护范围之列。