专利名称：杀体内寄生虫组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及吡喹酮和依西太尔用于增强在杀体内寄生虫(endoparasiticidal)组合物中环缩肽类(depsipeptides)的杀体内寄生虫的活性之用途。
吡喹酮，即2-(环己基羰基)-1，2，3，6，7，11b-六氢-4H-吡嗪并[2，1-a]异喹啉-4-酮及其抗体内寄生虫活性被公开在英国专利1441554中。
依西太尔，即2-(环己基羰基)-2，3，6，7，8，12b-六氢吡嗪并[2，1-a][2]-苯并氮杂-4(1H)-酮及其抗体内寄生虫活性被公开在EP-OS[欧洲公开说明书]134984，EP-OS[欧洲公开说明书]185012中。
环缩肽PF1022及其抗体内寄生虫活性被公开在EP-OS[欧洲公开说明书]382173中。
其他环缩肽类及其杀体内寄生虫活性是未先公开的专利申请(德国专利申请P4317432.9；P4317457.4P4317458.2)的研究主题。
本发明涉及吡喹酮和依西太尔用于增强由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类的杀体内寄生虫活性地用途。
本发明进一步涉及含有吡喹酮和依西太尔以及由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类的杀体内寄生虫组合物。
本发明进一步涉及吡喹酮和依西太尔以及由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类用于制备杀体内寄生虫组合物的用途。
优选的环缩肽类是具有18至24个环原子的环缩肽类。
具有18个环原子的缩肽类包括通式(I)化合物及其旋光异构体和外消旋体，
其中
R1、R3和R5彼此独立地代表氢、具有最多至8个碳原子的直链或支链烷基、羟基烷基、链烷酰氧基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、巯基烷基、烷硫基烷基、烷基亚硫酰基烷基、烷基磺酰基烷基、羧基烷基、烷氧羰基烷基、芳基烷氧羰基烷基、氨基甲酰基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、可被一个或两个苄氧羰基或被一个、两个、三个或四个烷基任意取代的胍基烷基、烷氧羰基氨基烷基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基烷基、链烯基、环烷基、环烷基烷基和任意取代的芳烷基，可以提及的取代基是卤素、羟基、烷基和烷氧基；
R2、R4和R6彼此独立地代表氢、具有最多至8个碳原子的直链或支链烷基、羟基烷基、巯基烷基、链烷酰氧基烷基、烷氧基烷基、芳氧基烷基、烷硫基烷基、烷基亚硫酰基烷基、烷基磺酰基烷基、羧基烷基、烷氧羰基烷基、芳基烷氧羰基烷基、氨基甲酰基烷基、氨基烷基、烷基氨基烷基、二烷基氨基烷基、烷氧羰基氨基烷基、链烯基、环烷基、环烷基烷基、任意取代的芳基或芳烷基，可以提及的取代基是卤素、羟基、烷基和烷氧基。
优选的式(I)化合物是下式化合物及其旋光异构体和外消旋体，
其中
R1、R3和R5彼此独立地代表直链或支链的C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、异辛基、仲辛基，羟基-C1-C6烷基，特别是羟甲基、1-羟基乙基、C1-C4链烷酰氧基-C1-C6烷基，特别是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特别是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特别是苄氧基甲基、1-苄氧基乙基，巯基-C1-C6烷基，特别是巯基甲基，C1-C4烷硫基-C1-C6烷基，特别是甲硫基乙基，C1-C4烷基亚硫酰基-C1-C6烷基，特别是甲基亚硫酰基乙基，C1-C4烷基磺酰基-C1-C5烷基，特别是甲磺酰基乙基，羧基-C1-C6烷基，特别是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是苄氧羰基甲基，氨基甲酰基-C1-C6烷基，特别是氨基甲酰基甲基、氨基甲酰基乙基，氨基C1-C6烷基，特别是氨基丙基、氨基丁基，C1-C4烷氨基-C1-C6烷基，特别是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特别是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，胍基-C1-C6烷基，特别是胍基丙基，C1-C4烷氧羰基氨基-C1-C6烷基，特别是叔丁氧羰基氨基丙基、叔丁氧羰基氨基丁基，9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基-C1-C6烷基，特别是9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基丙基、9-芴基甲氧羰基(Fmoc)氨基丁基，C2-C8链烯基，特别是乙烯基、烯丙基、丁烯基，C3-C7环烷基，特别是环戊基、环己基、环庚基，C3-C7环烷基-C1-C4烷基，特别是环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基，可以被选自卤素(特别是氟、氯、溴或碘)、羟基、C1-C4烷氧基(特别是甲氧基或乙氧基)或C1-C4烷基(特别是甲基)的基团任意取代的苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基，
R2、R4和R6彼此独立地代表直链或支链C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、异辛基、仲辛基，羟基-C1-C6烷基，特别是羟甲基、1-羟基乙基、C1-C4链烷酰氧基-C1-C6烷基，特别是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特别是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特别是苄氧基甲基、1-苄氧基乙基，巯基-C1-C6烷基，特别是巯基甲基，C1-C4烷硫基-C1-C6烷基，特别是甲硫基乙基，C1-C4烷基亚硫酰基-C1-C6烷基，特别是甲基亚硫酰基乙基，C1-C4烷基磺酰基-C1-C6烷基，特别是甲磺酰基乙基，羧基-C1-C6烷基，特别是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是苄氧羰基甲基，氨基甲酰基-C1-C6烷基，特别是氨基甲酰基甲基、氨基甲酰基乙基，氨基-C1-C6烷基，特别是氨基丙基、氨基丁基，C1-C4-烷氨基-C1-C6烷基，特别是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特别是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，C2-C8链烯基，特别是乙烯基、烯丙基、丁烯基，C3-C7环烷基，特别是环戊基、环己基、环庚基，C3-C7环烷基-C1-C4烷基，特别是环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基，可被选自卤素(特别是氟、氯、溴或碘)、羟基、C1-C4烷氧基(特别是甲氧基或乙氧基)或C1-C4烷基(特别是甲基)的基团任意取代的苯基，苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基。
特别优选的式(I)化合物是下列式(I)化合物及其旋光异构体和外消旋体，其中
R1、R3和R5彼此独立地是直链或支链的C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、辛基、异辛基、仲辛基，羟基-C1-C6烷基，特别是羟甲基、1-羟基乙基、C1-C4链烷酰氧基-C1-C6烷基，特别是乙酰氧基甲基、1-乙酰氧基乙基，C1-C4烷氧基-C1-C6烷基，特别是甲氧基甲基、1-甲氧基乙基，芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特别是苄氧基甲基、1-苄氧基乙基，C1-C4-烷氧羰基氨基-C1-C6烷基，特别是叔丁氧羰基氨基丙基，叔丁氧羰基氨基丁基，C2-C8链烯基，特别是乙烯基、烯丙基，C3-C7环烷基，特别是环戊基、环己基、环庚基，C3-C7-环烷基-C1-C4烷基，特别是环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基，可被一个或多个相同或不同的上述基团任意取代的苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基；
R2、R4和R6彼此独立地是直链或支链C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、叔庚基、辛基、异辛基、仲辛基，羟基-C1-C6烷基，特别是羟甲基、芳基-C1-C4-烷氧基-C1-C6烷基，特别是苄氧基甲基、1-苄氧基乙基，羧基-C1-C6烷基，特别是羧甲基、羧乙基，C1-C4烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是甲氧羰基甲基、乙氧羰基乙基，C1-C4芳基烷氧羰基-C1-C6烷基，特别是苄氧羰基甲基，C1-C4烷基氨基-C1-C6烷基，特别是甲氨基丙基、甲氨基丁基，C1-C4二烷基氨基-C1-C6烷基，特别是二甲基氨基丙基、二甲基氨基丁基，C2-C8链烯基，特别是乙烯基、烯丙基、丁烯基、C3-C7环烷基，特别是环戊基、环己基、环庚基，C3-C7环烷基-C1-C4烷基，特别是环戊基甲基、环己基甲基、环庚基甲基，可被一个或多个相同或不同的上述基团任意取代的苯基、苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基。
非常优选的式(I)化合物是下列式(I)化合物及其旋光异构体和外消旋体，其中
R1、R3和R5彼此独立地是直链或支链的C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、辛基、异辛基、仲辛基，C2-C8链烯基，特别是烯丙基，C3-C7环烷基-C1-C4烷基，特别是环己基甲基，苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基，
R2、R4和R6彼此独立地是直链或支链的C1-C8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、戊基、异戊基、仲戊基、己基、异己基、仲己基、庚基、异庚基、仲庚基、辛基、异辛基、仲辛基，C2-C8链烯基，特别是乙烯基、烯丙基，C3-C7环烷基-C1-C4烷基，特别是环己基甲基，可被一个或多个相同或不同的上述基团任意取代的苯基-C1-C4烷基，特别是苯甲基。
在本发明意义上可以使用以旋光立体异构形式或以外消旋混合物形式存在的通式(I)的所有化合物。然而，本发明优选使用旋光立体异构形式的通式(I)化合物。
可以个别例举下列通式(I)化合物，其中基团R1至R6具有下面给出的定义
Me＝甲基Phe＝苯基。
可提到的另一缩肽是化合物PF1022，它被公开在EP-OS[欧洲公开说明书]382173中并具有下式
可提到的其它缩肽类是PCT申请WO93/19053中公开的化合物。
可特别提到的PCT申请WO93/19053的化合物是下式化合物
其中，Z代表N-吗啉基、硝基、氨基、-或二甲氨基。
另外可提到的化合物是下式化合物
其中，R1、R2、R3和R4彼此独立地代表氢、C1-C10烷基或芳基，特别是苯基，每个基团被羟基、C1-C10烷氢基或卤素任意取代。
某些通式(I)化合物是已知的或者可以通过文献中所述的方法制得(通过分离，参见例如R.Zocher等人，J.Antibiotics 45(1992)pp.1273-1277[恩镰孢菌素A、B和C]；Hiroshi Tomoda等人，J.Antibiotics 45(1992)pp.1207-1215[恩镰孢菌素A、A1、B、B1、D、E和F]；通过合成，参见例如P.Quitt等人，Helv.Chimica Acta 46(1963)pp.1715-1720；P.Quitt等人，Helv.Chimica Acta 47(1964)pp.166-173[恩镰孢菌素A]；Pl.A.Plattner等人，Helv.Chimica Acta 46(1963)pp.927-935[恩镰孢菌素B]；Yu.A.Ovchinnikov等人，Tetrahedron Lett.2(1971)pp.159-162；R.W.Roeske等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.57(1974)pp.554-561[白僵菌素]；Yu.A.Ovchinnikov等人，Zh.Obshch.Khim.42(10)(1972)pp.2320-2334；参见C.A.78.5877K)。
式(I)化合物可以通过U.Schmidt等人用于大环肽生物碱的方法合成(参见例如U.Schmidt等人，Synthesis(1991)pp.294-300[didemnin A、B和C]；Angew.Chem.96(1984)pp.723-724[dolastatin 3]；Angew.Chem.102(1990)pp.562-563[fenestin A]；Angew.Chem.97(1985)pp.606-607[ulicyclamid]；J.Org.Chem.47(1982)pp.3261-3264)。
式(I)化合物的制备可如下进行
a)在氢化催化剂存在下，在碱性反应助剂及稀释剂的存在下，使通式(II-a)的羧基活化的开链六缩肽类进行环化反应，
(II-a)
其中
A代表氨基保护基团，相对于活性酯保护基例如苄基或苄氧羰基而言它可被选择性除去，和
R1、R2、R3、R4、R5、和R6具有上述意义，或
b)在偶合剂的存在下，在碱性反应助剂及稀释剂的存在下，使通式(II-b)的开链六缩肽类进行环化反应，
其中
A、R1、R2、R3、R4、R5、和R6具有上述意义。
在用于制备新的环六缩肽类(恩镰孢菌素)(I)的方法a)中，如果将N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸五氟苯基酯用作式(II)化合物，则可以通过下列方程式表示该方法
H2，10％ Pd-C，4-吡咯烷子基(pyrrolidino)吡啶(催化剂)二噁烷，
乙醇，95℃
式(II)提供了作为进行方法a之起始物质所需的开链六缩肽类的羧基活化衍生物的一般性定义。在此式中，A和R1至R6优选代表关于本发明式(I)化合物的描述中作为优选取代基已被提到的那些基团。
用作起始原料的式(II-a)的羧基活化的五氟苯基酯类可以通过文献已知的方法制得(参见L.Kisfaludy等人，J.Org.Chem.35(1970)，p.3563；L.Kisfaludy等人，J.Org.Chem.44(1979)，pp.654-655)。其制备进一步描述如下。
可以逐一例举下列通式(IIa)化合物，其中基团A和R1至R6具有下面给出的定义
(IIa)Bn-CH2-苯基Z-CO-O-CH2-苯基；Me＝甲基；Phe＝苯基。
式(II)化合物的环化反应优选在适当的氢化催化剂和碱性反应助剂存在下使用稀释剂来进行。
适用于进行方法a的催化剂是所有常规氢化催化剂。优选使用贵金属催化剂，例如铂、氧化铂、钯或钌，如果需要将其载于适宜的载体上，例如碳或二氧化硅上。
可以使用的碱性反应助剂是所有适宜的酸结合剂，如胺，特别是叔胺，和碱金属化合物及碱土金属化合物。
可提及的实例有锂、钠、钾、镁、钙和钡的氢氧化物、氧化物及碳酸盐。此外还有其他碱性化合物，如三乙胺、三甲胺、三苄胺、三异丙胺、三丁胺、三苄胺、三环己胺、三戊胺、三己胺、N，N-二甲基苯胺、N，N-二甲基甲苯胺、N，N-二甲基对氨基吡啶、N-甲基吡咯烷、N-甲基哌啶、N-甲基咪唑、N-甲基吡咯、N-甲基吗啉、N-甲基六亚甲基亚胺、吡啶、4-吡咯烷子基(pyrrolidino)吡啶、4-二甲氨基吡啶、喹啉、α-甲基吡啶、β-甲基吡啶、异喹啉、嘧啶、吖啶、N，N，N′，N′-四亚甲基二胺、N，N，N′，N′-四亚乙基二胺、喹喔啉、N-丙基二异丙胺、N-乙基二异丙胺、N，N′-二甲基环己胺、2，6-二甲基吡啶、2，4-二甲基吡啶、三亚乙基二胺、二氮杂双环辛胺(DABCO)、二氮杂双环壬烯(DBN)或二氮杂双环十一碳烯(DBU)。
优选使用杂芳香物质，例如，吡啶、N-甲基咪唑或4-吡咯烷子基吡啶。
用于进行方法a的适宜的稀释剂是所有惰性有机溶剂。
可提及的实例的卤代烃类，特别是氯代烃类，如四氯乙烯、四氯乙烷、二氯丙烷、二氯甲烷、二氯丁烷、氯仿、四氯化碳、三氯乙烷、三氯乙烯、五氯乙烷、二氟苯、1，2-二氯乙烷、氯苯、二氯苯、氯代甲苯、三氯苯；醇类，如甲醇、乙醇、异丙醇和丁醇；醚类，如乙基丙基醚、甲基叔丁基醚、正丁基醚、二正丁基醚、二异丁基醚、二异戊基醚、二异丙基醚、苯甲醚、苯乙醚、环己基甲基醚、乙醚、乙二醇二甲醚、四氢呋喃、二噁烷和二氯二乙基醚；硝基烃类，如硝基甲烷、硝基乙烷、硝基苯、氯代硝基苯和邻硝基甲苯；腈类，如乙腈、丁腈、异丁腈、苄腈和间氯苄腈；脂族、环脂族或芳香烃类，如庚烷、己烷、壬烷、甲基·异丙基苯、沸点在70℃至190℃的汽油馏分、环己烷、甲基环己烷、石油醚、轻石油、辛烷、苯、甲苯和二甲苯；酯类，如乙酸乙酯和乙酸异丁基酯；酰胺类，例如甲酰胺、N-甲基甲酰胺、N，N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮；酮类，如丙酮和甲基乙基酮。上述溶剂和稀释剂的混合物也是适用的。
优选的物质是醚类，如二噁烷，和醇与醚的混合物。
方法a是通过在氢气存在下并在碱性反应助剂和适当的氢化催化剂存在下，将式(IIa)化合物在稀释剂中在高度稀释条件下加热来进行的。
反应时间是约4至20小时。反应在+20℃至+200℃，优选在+70℃至+155℃的温度下进行。该方法优选在惰性气体气氛下，并在当将所述混合物加热至所需的反应温度时在反应条件下所确立的压力下进行。
为了进行本发明方法a，将式(IIa)的N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸五氟苯基酯的二噁烷溶液经2至10小时滴加到95℃快速搅拌的等摩尔量的适当的氢化催化剂，例如钯/炭的过量二噁烷的悬浮液中，同时连续通过氢气。作为催化剂，所述溶液通常含有0.5至2.5摩尔，优选1.0至2.0摩尔4-吡咯烷子基吡啶和0.5至10％，优选2至5％的醇(按溶剂计)。
除了式(IIa)的N-苄氧羰基取代的五氟苯基酯类外，还可以使用式(IIa)的N-苄基-和N-叔丁氧羰基取代的五氟苯基酯类，可以按U.Schmidt所述方法(参见例如U.Schmidt等人，Synthesis(1991)pp.294-300[didemnin A、B和C])在两相体系中使后者环化。
当反应完全时，使反应混合物冷却，将全部反应物料真空浓缩并用有机溶剂萃取，萃取液按本身已知的方法处理。所得产物可按常规方式通过重结晶、真空蒸馏或柱色谱法纯化。
在制备新的环六缩肽类(恩镰孢菌素)的方法b中，如果将N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸用作式(IIb)化合物，则该方法可以由下列方程式表示
式(II)提供了作为进行方法b的起始物质所需的开链六缩肽类的一般性定义，在此式中，R1至R6优选代表关于本发明式(I)化合物的描述中作为优选取代基已经提到的那些基团。
用作起始原料的式(II)六缩肽类可以通过下面进一步所述方法制得。
可以逐一例举下列通式(IIb)化合物，其中基团R1至R6具有下面给出的定义
Me＝甲基；Phe＝苯基
可用于进行方法b的偶合剂是适于产生酰胺键的所有试剂(参见例如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie[Methodsin Organic Chemistry]，Vol 15/2；Bodanszky等人，PeptideSynthesis 2nd ed，(Wiley & Sons，New York 1976)或Gross，Meienhofer，The PeptidesAnalysis Synthesis，biology(Academic Press，New York 1979)。优选使用下列方法活性酯方法，用五氯苯酚(Pcp)和五氟苯酚(PfP)，N-羟基琥珀酰亚胺、N-羟基-5-降冰片烯-2，3-二羧酰胺(HONB)、1-羟基苯并三唑(HOBt)或3-羟基-4-氧代-3，4-二氢-1，2，3-苯并三嗪作为醇组分，与碳化二亚胺类如二环己基碳化二亚胺(DCC)通过DCC加成法偶合，或用N-丙烷膦酸酐(PPA)和混合酐法，使用新戊酰氯、氯甲酸乙酯(EEDQ)和氯甲酸异丁酯(IIDQ)，或与磷鎓试剂偶合，如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)，或与膦酸酯试剂偶合，如氰基膦酸二乙酯(DEPC)和二苯基磷酰基叠氮(DPPA)，或与脲阳离子试剂偶合，如四氟硼酸2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲阳离子(TBTU)。
优选与磷鎓试剂如双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(phosphinic chloride)(BOP-Cl)，六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)的偶合，和与膦酸酯试剂如氰基膦酸二乙酯(DEPC)或二苯基磷酰基叠氮(DPPA)的偶合。
可用于进行方法b的碱性反应助剂是在方法a中提到的叔胺，特别是三烷基胺，如三乙胺、N，N-二异丙基乙胺或N-甲基吗啉。
用于进行方法b的稀释剂是方法a中提到的卤代烃类，特别是氯代烃类。
方法b的进行是在一种上述偶合剂存在下并在碱性反应助剂存在下，在高度稀释条件下将式(II)化合物在稀释剂中混合，并搅拌混合物。反应时间是4至72小时。反应在-5℃至+100℃，优选-5℃至+50℃，特别优选在0℃至室温下进行。该方法是在大气压下进行的。
为进行本发明方法b，通常每摩尔式(II)N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸使用1.0至3.0摩尔，优选1.0至1.5摩尔的偶合剂。
当反应完全时，洗涤反应溶液直至呈弱碱性，分出有机相，干燥并真空浓缩。所得产物可按常规方法通过重结晶、真空蒸馏或柱色谱法纯化。
用作起始化合物的开链缩肽类可以通过自身已知的方法制备，例如H.-G.Lerchen和H.Kunz所述方法(Tetrahedron Lett.26(43)(1985)pp.5257-5260；28(17)(1987)PP.1873-1876)。使用由B.F.Gisin所述的酯化方法(Helv.Chim.Acta 56(1973)p.1476)。
具有24个环原子的环缩肽类包括通式(Ia)化合物及其旋光异构体和外消旋体
其中
R1a、R2a、R11a和R12a彼此独立地代表C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、芳烷基和芳基，
R3a、R5a、R7a和R9a彼此独立地代表氢或直链或支链C1-8烷基，该烷基可被羟基、C1-4烷氧基、羧基
，羧酰胺基
、咪唑基、吲哚基、胍基、-SH或C1-4烷硫基任意取代，并且还代表芳基或芳烷基，每个基团可以被卤素、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代；
R4a、R6a、R8a和R10a彼此独立地代表氢、直链C1-5烷基、C2-6链烯基、C3-7环烷基，每个基团可被羟基、C1-4烷氧基、羧基、羧酰胺基、咪唑基、吲哚基、胍基、SH或C1-4烷硫基任意取代，并且还代表芳基或芳烷基，每个基团可以被卤素、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代。
所使用的优选的式(Ia)化合物是下列式(Ia)化合物，其中
R1a、R2a、R11a、和R12a彼此独立地代表甲基、乙基、丙基、异丙基、正-、仲-、叔丁基或苯基，所述基团可被卤素C1-4烷基、OH或C1-4烷氧基任意取代，或代表苄基或苯乙基，每个基团可以被对于苯基所给出的基团任意取代；和
R3a至R10a具有上述定义。
特别优选的式(Ia)化合物是下列式(Ia)化合物，其中
R1a、R2a、R11a和R12a彼此独立地代表甲基、乙基、丙基、异丙基或正-、仲-或叔丁基；
R3a、R5a、R7a和R9a代表氢、直链或支链C1-8烷基，特别是甲基、乙基、丙基、异丙基和正-、仲-或叔丁基，每个基团可以被C1-4烷氧基，特别是甲氧基、乙氧基、咪唑基、吲哚基或C1-4烷硫基，特别是甲硫基和乙硫基任意取代，此外还代表苯基、苄基或苯乙基，每个基团可以被卤素特别是氯任意取代；和
R4a、R6a、R8a和R10a彼此独立地代表氢、甲基、乙基、正丙基、正丁基、乙烯基或环己基，每个基团可以被甲氧基、乙氧基、咪唑基、吲哚基、甲硫基或乙硫基任意取代，还代表异丙基和仲丁基，此外还代表苯基、苄基或苯乙基，每个基团可被卤素任意取代。
式(Ia)化合物的制备可以通过在稀释剂和偶合剂存在下，使式(IIc)的开链八缩肽类进行环化反应
其中，R1a至R12a具有上述定义。
适宜的偶合剂是适于形成酰胺键的所有化合物(参见，例如Houben-Weyl，Methoden der Organischen Chemie[Methods inOrganic Chemistry]，Vol.15/2；Bodanszky等人，PeptideSynthesis 2nd Ed.(Wiley/Sons，New York 1976)。
优选适宜的是下列试剂和方法活性酯法，用五氟苯酚(Pfp)、N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑、与碳化二亚胺类如二环己基碳化二亚胺或N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺(Ebc)偶合，及混合酐法，或与磷鎓试剂偶合，如六氟磷酸苯并三唑-1-基氧基三(二甲氨基鏻)(BOP)、双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)，或与膦酸酯试剂偶合，如氰基膦酸二乙酯(DEPC)和二苯基磷酰基叠氮(DPPA)。
特别优选在1-羟基苯并三唑(HOBt)存在下与双(2-氧代-3-噁唑烷基)次膦酰氯(BOP-Cl)和N′-(3-二甲氨基丙基)-N-乙基碳化二亚胺(EDC)的偶合。
反应在0-150℃、优选在20至100℃，特别优选在室温的温度下进行。
适宜的稀释剂是所有惰性有机溶剂。它们包括特别是脂族和芳族烃类，任意卤代的烃类，如戊烷、己烷、庚烷、环己烷、石油醚、汽油、轻石油、苯、甲苯、二氯甲烷、氯化乙烯、氯仿、四氯化碳、氯苯和邻二氯苯，此外还包括醚类，如乙醚、二丁醚、乙二醇二甲醚和二甘醇二甲醚、四氢呋喃和二噁烷，还包括酮类，如丙酮、甲基乙基酮、甲基异丙基酮和甲基异丁基酮，酯类，如乙酸甲酯和乙酸乙酯，腈类，如乙腈和丙腈、苄腈和戊二腈，此外还包括酰胺类，如二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺和N-甲基吡咯烷酮，以及二甲亚砜、四氢噻吩砜和六甲基磷酰三胺。
式(IIc)化合物与偶合剂彼此之间的用量比为1∶1至1∶1.5。优选接近等摩尔比。
当反应完全时，将稀释剂蒸掉，按常规方法如色谱法纯化式(Ia)化合物。
式(IIc)开链八缩肽类(其中各基团具有上述定义)
(IIc)是通过使式(IIIa)化合物在稀释剂和催化剂存在下进行氢解反应来制得的，
(IIIa)其中A代表苄基，
B代表OH，和
R1a至R12a具有上述定义。
式(IIIa)化合物(其中各基团具有上述定义)
(IIIa)是通过使式(IVa)化合物进行水解反应制得的，
(IVa)其中各基团具有上述定义。
式(IVa)化合物及其立体异构体是通过使式(Va)的四缩肽类和式(VIa)的四缩肽类在稀释剂和偶合剂存在下，进行缩合反应制得的，
其中A代表苄基，
Z代表OH，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定义，
其中D代表氢，
B代表叔丁氧基，和
R6a、R7a、R8a、R9a、R11a和R12a具有上述定义。
式(Va)四缩肽类是通过在稀释剂和质子酸存在下将式(VIIa)四缩肽类水解来制得的，
其中A代表苄基，
B代表叔丁氧基，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定义。
式(VIa)四缩肽类
其中D代表氢，和
B代表叔丁氧基，其余的基团具有上述定义，是通过在稀释剂和催化剂存在下，使式(VIIa)四缩肽类经过氢解反应制得的，
其中A代表苄基，
B代表叔丁氧基，和
R1a、R2a、R3a、R4a、R5a和R10a具有上述定义。
式(VIIa)四缩肽类是通过使式(VIIIa)二缩肽类和式(IXa)二缩肽类，在稀释剂中在偶合剂存在下经过缩合反应制得的，
其中A代表苄基，
Z代表OH，和
R1a、R3a和R10a具有上述定义，
其中D代表氢，
B代表叔丁氧基，和
R2a、R4a和R5a具有上述定义。
尽管对温血物种具有低毒性，本发明的组合物适于杀灭存在于人和动物中的病原性体内寄生虫，所述动物有畜牧生产中饲养的动物和喂养的牲畜、喂养动物、动物园动物、实验室动物、试验动物和供玩赏的动物。在这方面，本发明组合物具有抗有害动物发育的所有阶段或各个阶段的活性，并且具有抗抵抗性和正常敏感性物种的活性。通过杀灭病原性体内寄生虫，可以减少疾病、死亡及减少处理操作(例如，在肉、奶、羊毛、皮革、蛋类、蜂蜜等的生产中)，从而通过使用所述活性化合物能够更经济和简便地饲养动物。病原性体内寄生虫包括绦虫、吸虫、线虫和棘头虫(Acantocephala)，特别是
选自假叶目，例如二叶槽虫属、Spirometra spp.、裂头绦虫属、舌属、Bothridium spp.、Diphlogonoporus spp.。
选自圆叶目，例如中殖孔绦虫属、裸头绦虫属、Paranoplocephalaspp.、蒙尼(绦虫)属、繸体绦虫属、繸体(绦虫)属、Avitellina spp.，Stilesia spp.、鸣绦虫属、Andyra spp.、伯特绦虫属、带绦虫属、棘球绦虫属、泡尾绦虫属、斧钩绦虫属、瑞立绦虫属、膜壳绦虫属、Echinolepis spp.、Echinocotyle spp.；两睾绦虫属、复孔绦虫属、Joyeuxiella spp.、双孔绦虫属。
选自单殖亚纲，例如，三代虫属、指环虫属、多盘吸虫属。
选自复殖亚纲，例如复口吸虫属、Posthodiplostomum spp.、血吸虫属、毛睾吸虫属、鸟毕吸虫属、澳裂体吸虫属、巨裂体吸虫属、彩蚴吸虫属、短咽吸虫属、棘口吸虫属、棘缘吸虫属、棘隙吸虫属、低颈吸虫属、片吸虫属、拟片形吸虫属、姜片虫属、环肠吸虫属、盲腔属、同口属、杯殖吸虫属、殖盘吸虫属、Gigantocotyle spp.、菲吸虫属、Gastrothylacus spp.、背孔吸虫属、Catatropis spp.、斜睾吸虫属、前殖吸虫属、双腔吸虫属、阔口吸虫属、隐孔吸虫属、并殖吸虫属、饼吸虫属、鲑隐孔吸虫属、后睾吸虫属、支睾吸虫属、次睾吸虫属、异形吸虫属、后殖吸虫属。
选自嘴刺目，例如鞭虫属、毛细线虫属、Trichomosoides spp.、旋毛线虫属。
选自小杆亚纲目，例如Micronema spp、粪类圆线虫属。
选自圆线虫科目，例如，圆线虫属、三齿线虫属、Oesophagodontusspp.、毛线线虫属、似六齿线虫属、Cylindropharynx spp.、杯线虫属、Cyclococercus spp.、 Cylicostephanus spp.、结节线虫属、Chabertiaspp.、肾线虫属、钩口线虫属、钩虫属、仰口线虫属。
球头线虫属、比翼线虫属、Cyathostoma spp.、后圆线虫属、网尾线虫属、米勒线虫属、原圆肺虫属、新圆线虫属、Cystocaulusspp.、肺圆线虫属、Spicocaulus spp.、Elaphostrongylus spp.、Parelaphostrongylus spp.、环体线虫属、副环体线虫属、Angiostrongylusspp.、Aelurostrongylus spp.、丝虫属、副丝虫属、毛圆线虫属、血矛线虫属、Ostertagia spp.、马歇尔线虫属、古柏线虫属、细颈线虫属、下圆线虫属、Obeliscoides spp.、裂口线虫属、Ollulanus spp.。
选自尖尾科目，例如尖尾线虫属、蛲虫属、栓尾线虫属、管状线虫属、Aspiculuris spp.、异刺线虫属。
选自鸡蛔虫属目，例如蛔虫属、弓蛔线虫属、弓蛔虫属、副蛔虫属、无饰线虫属、蛔属。
选自旋尾目，例如颚口线虫属、泡翼属、吸吮线虫属、筒线虫属、丽线虫属、副丽线虫属、德斯线虫属、龙线属。
选自丝虫科目，例如，冠丝虫属、副丝虫属、腹腔线虫属、非洲丝虫的一个属、恶丝虫属、光丝虫属、布鲁线虫属、吴策线虫属、盘尾属。
选自大棘吻科目，例如Filicollis spp.、念珠棘虫属、巨吻棘虫属、Prosthenorchis spp.。
生产性家畜和饲养动物包括哺乳动物，例如牛、马、羊、猪、山羊、骆驼、水牛、驴、兔子、黇鹿、驯鹿、带有毛皮的动物，例如水貂、栗鼠、浣熊；鸟类，例如鸡、鹅、火鸡、鸭、鸵鸟；淡水和咸水鱼类，例如鳟鱼、鲤鱼、鳗鲡；爬行动物类；昆虫类，例如蜜蜂和蚕。
实验室动物和试验动物包括小鼠、大鼠、豚鼠、金仓鼠、狗和猫。
供玩赏的动物包括狗和猫。
所述活性化合物可被预防性以及治疗性给药。
所述活性化合物的施用可以直接地或以适当的制剂形式，经肠、肠胃外、经皮、经鼻、通过环境处理、或藉助于含活性化合物的成型制品如条、板、带、柱(collars)、耳戳、翅膀带(limb bands)、标示器材等。
所述活性化合物可经肠例如口服给药，其剂型有粉剂、片剂、胶囊剂、糊剂、饮剂、粒剂，或可以口服给药的溶液、悬浮液及乳液，或boli，加药的饲料或饮水。施行经皮给药，例如以浸渍、喷雾或浇注及点撒(spotting-on)的形式。施行肠胃外给药，例如以注射(肌内、皮下、静脉内、腹膜内注射)形式或通过移入物进行。
适当的制剂是
溶液，如注射液、口服溶液、稀释后用于口服给药的浓缩液、用于皮肤上或体腔内的溶液、浇注及点撒制剂、凝胶；
口服或经皮给药及注射用的乳液和悬浮液；半固体制剂；
活性化合物加在乳油基中或加在水包油或油包水乳液基中的制剂
固体制剂，如粉剂、预混物(premixes)或浓缩物、粒剂、小丸剂、片剂、boli、胶囊剂；
气雾剂和吸入剂，含活性化合物的成型制品。
注射液被静脉内、肌内和皮下给药。
注射液的制备是将活性化合物溶于适当的溶剂中，如果需要加入添加剂，如加溶剂、酸、碱、缓冲盐、抗氧化剂和防腐剂。将溶液无菌过滤并抽出。
作为溶剂可提及下列物质生理学上可接受的溶剂，如水、醇类如乙醇、丁醇、苄醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇、N-甲基吡咯烷酮，及它们的混合物。
如果需要，也可以将活性化合物溶于适于注射用的生理学上可接受的植物油或合成油中。
作为加溶剂可提及下列物质增强活性化合物在主要溶剂中溶解的溶剂，或防止其沉淀的溶剂。实例有聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯化的蓖麻油、聚氧乙烯化的脱水山梨糖醇酯。
防腐剂有苄醇、三氯丁醇、对羟基苯甲酸酯类、正丁醇。
口服溶液直接给药。浓缩物是事先稀释到给药浓度后再口服给药的。口服溶液和浓缩物按上面对注射溶液所述方法制备，即能够在无菌条件下操作给药。
用在皮肤上的溶液被滴加施用、刷上、擦入、喷洒上或喷雾上。这些溶液按上述注射溶液的方法制备。
在制备过程中最好加入增稠剂。增稠剂有无机增稠剂，如膨润土、胶体二氧化硅、单硬脂酸铝；有机增稠剂，如纤维素衍生物、聚乙烯醇类及其共聚物、丙烯酸酯类和甲基丙烯酸酯。
将凝胶施于或刷在皮肤上，或引入体腔内。凝胶的制备是将按对注射溶液所述方法制备的溶液用一定量的增稠剂处理，以形成具有类似乳油稠度的澄清物质。所用增稠剂是上述增稠剂。
浇注及点撒制剂被浇注或喷洒在皮肤的限定区域上，活性化合物渗透入皮肤并系统地起作用。
浇注和点撒制剂的制备是将活性化合物溶于、悬浮于或乳化于为皮肤所耐受的适当溶剂或溶剂混合物中。如果需要，加入其他辅助剂，如着色剂、吸收促进剂、抗氧化剂、光稳定剂和粘合剂。
可被提到的溶剂有水、链烷醇类、乙二醇类、聚乙二醇类、聚丙二醇类、甘油、芳醇类如苄醇、苯乙醇、苯氧基乙醇；酯类，如乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯甲酸苄基酯；醚类如亚烷基二醇烷基醚类，如二丙二醇单甲醚、二甘醇单丁醚；酮类，如丙酮、甲基乙基酮；芳香和/或脂族烃类，植物油或合成油，DMF，二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷酮，2，2-二甲基-4-氧基亚甲基-1，3-二氧戊环。
着色剂是允许用在动物体上并可以溶解或悬浮的所有着色剂。
吸收促进剂的实例是DMSO，成膜油剂如十四烷酸异丙酯，壬酸二丙二醇酯，硅油类，脂肪酸酯类，三酸甘油酯类，脂肪醇类。
抗氧化剂是亚硫酸盐或偏亚硫酸氢盐，如偏亚硫酸氢钾，抗坏血酸，丁基羟基甲苯，丁基羟基苯甲醚，生育酚。
光稳定剂的实例是苯基苯并咪唑磺酸(novantisolic acid)。
粘合剂的实例是纤维素衍生物、淀粉衍生物、聚丙烯酸酯类，天然聚合物，如藻酸盐类，明胶。
乳液可以通过口服、经皮或以注射液形式给药。
乳液可为油包水型或水包油型。
乳液的制备是将活性化合物溶于疏水或亲水相中，并藉助于适当的乳化剂用另一相的溶剂将此相均化，如果需要还可藉助于其他辅助剂，如着色剂、吸收促进剂、防腐剂、抗氧化剂、光稳定剂、增加粘度的物质。
作为疏水相(油)可提及下列物质石蜡油，硅油，天然植物油，如芝麻籽油、杏仁油、蓖麻油，合成的三酸甘油酯类，如辛酸/癸酸二酸甘油酯，与链长C8-12的植物脂肪酸或与其他特异选择的天然脂肪酸的三酸甘油酯混合物，还可含有羟基的饱和或不饱和脂肪酸的部分甘油酯混合物，及C8/C10脂肪酸的单酸甘油酯和二酸甘油酯；
脂肪酸酯类，如硬脂酸乙酯，己二酸二正丁酯，月桂酸己酯，壬酸二丙二醇酯，中等链长的支链脂肪酸与链长C16-C18的饱和脂肪醇的酯，肉豆蔻酸异丙酯，棕榈酸异丙酯，链长C12-C18的饱和脂肪醇的辛/癸酸酯，硬脂酸异丙酯，油酸油醇酯，油酸癸酯、油酸乙酯，乳酸乙酯，蜡状脂肪酸酯，如合成的鸭的尾脂腺脂肪，邻苯二甲酸二丁酯，己二酸二异丙酯，与后者有关的酯混合物，等等；
脂肪醇类，如异十三烷基醇，2-辛基十二烷醇，十六烷基十八烷醇，油醇；
脂肪酸类，如油酸及其混合物。
作为亲水相可提及下列物质水、醇类，如丙二醇、甘油、山梨糖醇及其混合物。
作为乳化剂可提及下列物质非离子表面活性剂，例如聚氧乙烯化蓖麻油、聚氧乙烯化脱水山梨糖醇一油酸酯，脱水山梨糖醇一硬脂酸酯，硬脂酸单甘油酯，聚氧乙基(polyoxyethyl)硬脂酸酯，烷基苯酚聚乙二醇醚类；
两性表面活性剂，如N-十二烷基-β-亚氨基二丙酸二钠或卵磷脂；
阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠，脂肪醇醚硫酸盐，单/二烷基聚乙二醇醚正磷酸酯的单乙醇胺盐；
阳离子表面活性剂，如氯化十六烷基三甲基铵。
作为其他辅助剂可提及下列物质增加粘度的物质和使乳液稳定的物质，如羧甲基纤维素、甲基纤维素和其他纤维素和淀粉衍生物，聚丙烯酸酯类，藻酸盐，明胶，阿拉伯树胶，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙烯醇，甲基乙烯基醚和马来酸酐的共聚物，聚乙二醇类，蜡，胶体二氧化硅，或上述物质的混合物。
悬浮液可以通过口服、经皮或以注射液形式给药。其制备是通过将活性物质悬浮在赋形剂液体中，如果需要可加入其他辅助剂，如湿润剂、着色剂、吸收促进剂、防腐剂、抗氧化剂、光稳定剂。
可提及的赋形剂液体是所有均一溶剂和溶剂混合物。
可提及的湿润剂(分散剂)是上述表面活性剂。
可提及的其他辅助剂是上述辅助剂。
半固体制剂可以通过口服或经皮给药。它们只是通过其较高的粘度区别于上述悬浮液和乳液。
为了制备固体制剂，将活性化合物与适当的赋形剂混合，如果需要，可以加入辅助剂，并将混合物按需要配制。
可以提到的赋形剂是所有生理学上可接受的固体惰性物质。就其本身而言适当的是无机和有机物质。无机物质的实例是氯化钠，碳酸盐如碳酸钙、碳酸氢钙，氧化铝，二氧化硅，粘土，沉淀或胶体二氧化硅，及磷酸盐。
有机物质的实例是糖类，纤维素，食物和动物饲料，如奶粉、动物尸肉类、谷粉类、粗谷粉类及淀粉类。
辅助剂是如上所述的防腐剂、抗氧化剂和着色剂。
其他适宜的辅助剂是润滑剂和滑移剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸，滑石，膨润土；崩解剂如淀粉或交联的聚乙烯吡咯烷酮；粘合剂如淀粉、明胶或线性聚乙烯吡咯烷酮，此外还有干燥的粘合剂如微晶纤维素。
在这些制剂中，活性化合物还可以与增效剂或与起着抗病原性体内寄生虫作用的其他活性化合物的混合物形式存在。这种活性化合物的实例是L-2，3，5，6-四氢-6-苯基咪唑并噻唑，苯并咪唑氨基甲酸酯类，噻嘧啶(pyrantel)。
随时可用的制剂含有浓度为10ppm至20％(重量)，优选0.1-10％(重量)的活性化合物。
给药之前需要稀释的制剂含有浓度为0.5-90％(重量)，优选5-50％(重量)的活性化合物。
通常，已证实较好的给药量是每千克体重每天约10至约100mg本发明活性化合物的混合物，以便达到有效的效果。优选每千克体重10至50mg活性化合物混合物。
通常，组合物中吡喹酮或依西太尔与缩肽的重量比为1∶1至10，优选1∶1至2，非常特别优选1∶1。实施例A体内线虫试验
狗的犬钩口线虫
用犬钩口线虫属的钩虫使小猎兔幼犬(Beagle puppies)实验性感染。为了使狗感染，将犬钩口线虫以250 L3幼虫形式口服施用。
在潜伏期过后(或者如果检测出抗幼虫活性则在潜伏期过程中)，将活性化合物以纯活性化合物的明胶胶囊形式口服给药。
活性通过两种方法评估。
1.对处理前和处理后对由粪便排泄出的虫卵进行计数。
2.用下式计算临界试验中的活性百分比
在下表中，示出了剂量(mg/kg)，在此剂量下用两种评估方法均达到100％的活性
表AMeLeuN-甲基-L-亮氨酸D-LacD-乳酸；D-PhLacD-β-苯基乳酸；D-P-MorPhLacD-β-对吗啉代-苯基乳酸实施例B体内线虫试验
猫的喇叭形钩口线虫(Ancylostoma tubaeforme)
用喇叭形钩口线虫属的钩虫的L3幼虫使小猫实验性感染。为了此感染，口服施用250个幼虫，或用约500个幼虫进行皮肤施用。
潜伏期过后(或者如果检测出抗幼虫活性则在潜伏期过程中)，将活性化合物以纯活性化合物的明胶胶囊形式口服给药。
活性用两种方法评估。
1.对处理前和处理后对由粪便排泄出的虫卵进行计数。
2.用下式计算临界试验中的活性百分比
在下表B中示出了剂量(mg/kg)，在此剂量下用两种评估方法均达到100％的活性
表BMeLeuN-甲基-L-亮氨酸D-LacD-乳酸；D-PhLacD-β-苯基乳酸；D-p-MorPhLacD-β-对吗啉代-苯基乳酸
具有18个环原子的环缩肽类的制备实施例实施例1环(-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-)
将0.99g(1.08mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-O-Pfp的50ml无水二噁烷溶液于6小时内在内温为95℃下均匀注射到迅速搅拌着的含有12ml乙醇和160mg(1.08mmol)4-吡咯烷子基吡啶的1.5g10％钯/炭的550ml无水二噁烷悬浮液中。在此过程中，将氢气通过反应溶液。然后继续在95℃下再搅拌4小时，并在室温下搅拌12小时。过滤混合物，并真空浓缩全部反应混合物。将无色油状残余物溶于氯仿中，用5％浓度的柠橡酸洗涤两次，用NaHCO3溶液洗涤两次并用水洗涤两次。用硫酸钠干燥有机相，然后真空蒸除溶剂。剩余的粗产物可通过硅胶柱(硅胶60-Merck，粒度0.04-0.063mm)进行色谱法预纯化，用甲苯∶乙酸乙酯(4∶1)作为洗脱剂(纯度84％)。接着进行制备性HPLC纯化。得到710mg(理论值的36.8％)环(-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-)。m.p.210-212℃1H-NMR(400MHz，CDCl3，δ)0.87(t，9H，-CH2-CH3；J＝7.3Hz)；0.98；1.44(2d，18H，-CH-CH3；J＝6.5Hz)；1.35-1.41(br.m，3H，-CH-CH3)；2.02-2.04(br.m，6H，-CH2-CH3)；3.03(s，9H，-N-CH3)；4.45(m，3H，N-CH-CO)；5.57-5.62(m，3H，O-CH-CO)ppm13C-NMR(100MHz，CDCl3，δ)10.9；16.0；16.6(-CH3)；24.8(-CH2-)；33.3(-CH-)； 33.9(-N-CH3)；61.9(-N-CH-)；66.4(-O-CH-)；169.3(-CO-N-)；169.9(-CO-O-)ppmFAB-MS m/z(％)5 98(M++H，12)；597(37)；541(42)；524(14)；182(100)
用类似制备LDLDLD立体异构体形式的方法，可制备下表1中所列的式(I)化合物。表1通式(I)化合物的实施例
a)13C-NMR(100MHz，CDCl3δ)[in ppm]，FAB-MS或EI-MS m/z(％)
式(II)起始物质实施例(II-1)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸叔丁酯
将4.7g(36.3mmol)N，N-二异丙基乙胺(“Hünig碱”)和4.6g(18.1mmol)双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯(BOP-Cl)在0℃下加到5.8g(16.5mmol)Z-L-MeIle-D-Lac-OH和7.8g(16.5mmol)H-(-L-MEIle-D-Lac-)2-O-tBu的150ml二氯甲烷溶液中，并将混合物搅拌4小时。用水摇动反应溶液两次，分离出有机相，用硫酸钠干燥，然后真空浓缩。剩余的粗产物通过硅胶柱(硅胶60-Merck，粒度0.04-0.063mm)进行色谱法纯化，用甲苯∶乙酸乙酯(5∶1)作为洗脱剂。得到10.3g(理论值的77.4％)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸叔丁酯。FAB-MS m/z(％)805(M+，3)；749(M+－H2C＝CMe2，10)；732(9)；793(10)；91(100)实施例(II-2)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸
将干燥的氯化氢气体通入冷却至0℃的9.2g(11.2mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-O-tBu的150ml无水二氯甲烷溶液中达20分钟。接着将混合物在室温下搅拌大约16小时，并真空浓缩全部反应混合物。得到7.1g(理论值的82.9％)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸，它无需进一步纯化则可进行进一步的反应。MS m/z(％)749(M+，10)；721(1)；693(2)；533(0.5)；91(100)实施例(II-3)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸五氟苯基酯
将5.0g(6.67mmol)Z-(L-MeIle-D-Lac)3-OH和1.23g(6.67mmol)五氟苯酚一起溶于125ml无水乙酸乙酯中(惰性气氛)。在0℃下向其中加入1.38g(6.67mmol)二环己基碳二亚胺(DCC)，在此温度下再继续搅拌4小时。滤除沉淀出的二环己基脲后，将滤液真空蒸发至干，残余物通过预先干燥的硅胶柱(硅胶60-Merck，粒度0.04-0.063mm)进行色谱法纯化，用甲苯∶乙酸乙酯(10∶1)作为洗脱剂。得到3.3g(理论值的54％)N-苄氧羰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸五氟苯基酯，为无色油状物。FAB-MS m/z(％)915(M+，2)；914(M+-H，4)；859(9)；814(I)；780(5)；91(100)实施例(II-4)N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸
将1.0g(1.33mmol)Z-(-L-MeIle-D-Lac-)3-OH在20ml乙醇中在0.15g Pd(OH)2/炭[Pd含量20％]存在下氢化，直至氢气的吸收停止(大约2小时)。滤除催化剂后，真空浓缩全部反应溶液。得到0.81g(理论值的100％)N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酰基-N-甲基-L-异亮氨酰基-D-乳酸，它无需进一步纯化则可进行环化反应。EI-MS m/z(％)615(M+，3)；600(1)；558(7)；472(8)；386(14)；100(100)
用类似制备LDLDLD立体异构体的方法，可制备下表2中所列的通式(II)化合物。表2式II化合物的实施例
表2续表2续a)FAB-MS或EI-MS m/z(％)
具有24个环原子的环缩肽类化合物的制备实施例1.式(Ia)化合物的制备
在0℃下，将BOP-Cl(0.124mmol)加到式IIc化合物(0.104mmol)和Hünig碱(02258mml))的二氯甲烷(100m))溶液中，在室温下继续搅拌混合物24小时。此后，加入相同量的BOP-Cl和碱，再将混合物搅拌24小时。用饱和碳酸氢钠溶液洗涤溶液两次，用硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过柱色谱法纯化，用环己烷∶乙酸乙酯2∶1作为洗脱剂。
得到式(Ia)化合物，其中各取代基具有下列含义(表3)表3Me＝甲基Et＝乙基Bu＝丁基Bn＝苄基Pr＝丙基
式(IIc)化合物的制备实施例
将式(IIIa)的开链八缩肽(1.222mmol)的乙醇(50ml)溶液在Pd(OH)2/C(20％200mg)存在下氢化，直至氢气的吸收停止(大约2小时)。滤除催化剂后，得到纯的式IIc化合物，它无需进一步纯化则可进行进一步的反应。
按照此方法，得到式(IIc)化合物，其中各取代基具有列于表4中的定义。表4Me=甲基Et＝乙基s-Bu＝仲丁基Bn=苄基
式(IIIa)化合物的制备
在0℃下，将HCl气体通入式(IVa)的叔丁基酯(1.609mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中达1.5小时。接着将混合物加热至室温，继续搅拌12小时。在旋转蒸发器上蒸发溶液，残余物在高真空下干燥。残余物无需进一步纯化即可进行反应。
类似地可得到式(IIIa)化合物，其中各取代基具有以下所给含义(表5)表5Me＝甲基Et＝乙基s-Bu＝仲丁基Bn＝苄基
式(IVa)化合物的制备
将乙基二异丙基胺(0.912mmol)和BOP-Cl(0.438mmol)的溶液在0℃下加到分别为2.52mmol的式(VIa)和(Va)的四缩肽类的二氯甲烷(15ml)溶液中。在0℃下继续搅拌1小时，在室温下搅拌1.5小时。用20ml二氯甲烷稀释混合物，用少量水洗涤两次，用Na2SO4干燥并浓缩。残余物通过硅胶纯化，用环己烷∶t-BuOMe＝2∶1作为洗脱剂。
式(Va)化合物的制备
在0℃下，将HCl气体通入式(VIIa)的四缩肽(2.848mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中达2小时。接着在室温下继续搅拌8小时。将混合物浓缩并在高真空下干燥。残余物无需进一步纯化则可进行反应。
式(VIa)化合物的制备
用Pd(OH)2/C(20％)(0.6g)处理式(VIIa)的四缩肽(9.53mmol)的乙醇(37ml)溶液，在室温和常压下将混合物氢化大约3小时。将反应混合物过滤并浓缩，残余物通过硅胶分离，用t-BuOMe/环己烷/乙醇＝1∶1∶0.5作为洗脱剂。
式(VIIa)化合物的制备
用二异丙基乙基胺(57.3mmol)和BOP-Cl(29.8mmol)处理冷却至0℃的二缩肽IXa(22.9mmol)和二缩肽VIIIa(27.5mmol)的二氯甲烷(80ml)溶液。并将混合物在0℃下搅拌1小时，在室温下搅拌1小时。滤除沉淀后，用二氯甲烷稀释溶液，用少量水洗涤三次，用硫酸钠干燥并浓缩。残余物通过硅胶分离，用环己烷/乙酸乙酯＝15∶1作为洗脱剂。
权利要求
1.吡喹酮和依西太尔用于增强由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类的杀体内寄生虫活性的用途。
2.含有吡喹酮和依西太尔以及由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类的杀体内寄生虫组合物。
3.吡喹酮和依西太尔以及由氨基酸和羟基羧酸作为环组成部分所组成的并具有6至30个环原子的环缩肽类用于制备杀体内寄生虫组合物的用途。
全文摘要
本发明涉及吡喹酮和依西太尔用于增强杀体内寄生虫组合物中环缩肽类的杀体内寄生虫活性的用途。
文档编号A61K31/41GK1121429SQ95101158
公开日1996年5月1日 申请日期1995年1月11日 优先权日1994年1月11日
发明者N·门克, A·哈德, P·耶斯克 申请人:拜尔公司