一种组合物和抗过敏化妆品的制作方法

本发明属于化妆品领域，具体涉及一种组合物和抗过敏化妆品。
背景技术：
：近年来，随着生活水平的提高，人们对皮肤的健康和护理越来越重视，对化妆品的要求也越来越高，尤其是过敏性皮肤。当过敏性皮肤接触到不良反应的化妆品、化学制剂或污染的空气时，容易出现皮肤红肿、发扬、脱皮等症状，严重的还会诱发过敏性皮炎。据不完全统计，目前过敏性皮肤人群占总人群的比例有逐年增高的趋势。因此，研发一种抗过敏效果良好的化妆品是本领域技术人员的研究热点。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了一种具有良好抗过敏效果的组合物和抗过敏化妆品。具体技术方案如下：本发明提供了一种组合物，包括白芷提取物、脂肪间充质干细胞的破壁产物和所述脂肪间充质干细胞的细胞培养液。脂肪间充质干细胞(adscs)作为间充质干细胞中的中药成员，来源丰富，易于获取，可以调节机体的免疫系统，增强机体的抗过敏能力。adscs在体外培养过程中分泌大量血管生长因子vegf、plgf、bfgf、血管生成素、gm2csf、mcp21和sdf21α，可起到修复皮肤损伤，调节肌体细胞线粒体功能，提高皮肤抗氧化能力、防辐射能力、抗过敏能力，内外整体年轻化等作用。优选的，所述白芷提取物20～50重量份，所述脂肪间充质干细胞的破壁产物50～100重量份，所述脂肪间充质干细胞的细胞培养液500～800ml。优选的，所述脂肪间充质干细胞为第二代至第五代的脂肪间充质干细胞。优选的，所述细胞培养液的制备方法为：采用无酚红1640基础培养基培养所述脂肪间充质干细胞至15～36h，收集细胞上清液。更优选的，所述脂肪间充质干细胞的培养密度为1×106～5×106个/ml。优选的，所述脂肪间充质干细胞的破壁产物的制备方法为：采用超声对所述脂肪间充质干细胞进行细胞破壁处理，收集破壁产物；所述超声的时间为15～45min。本发明还提供了一种抗过敏化妆品，包括上述组合物；所述化妆品为冻干粉剂。综上所述，本发明所提供的组合物包括白芷提取物、脂肪间充质干细胞的破壁产物和所述脂肪间充质干细胞的细胞培养液，各组分协同作用，使得本发明组合物具有良好的抗过敏效果，可应用于制备一种抗过敏化妆品。本发明组合物中含有大量可有效改善过敏皮肤的活性物质，活性物质在储存过程中容易被氧化而变性或失活，因此本发明化妆品为冻干粉剂。冻干粉剂可有效的防止制品理化及生物特性的改变，对生物组织和细胞结构和特征的损伤较小，使其快速进入休眠状态，有效保护了许多热敏性药物生物制品有效成份的稳定性，使得本发明抗过敏化妆品不仅便于携带，还延长了保存期限。在使用时，将冻干粉剂和水按体积比2:1进行混合然后直接涂抹于皮肤即可。附图说明为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1为实施例1的脂肪间充质干细胞的流式鉴定结果，图1a为空白对照组的流式鉴定结果，图1b为样本组的流式鉴定结果；图2为实施例4的过敏测试结果。具体实施方式下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明对白芷提取物的来源没有特殊限制，采用本领域技术人员熟知的即可，如市售来源，或者由本领域技术人员采用常规的技术手段进行制备得到的白芷提取物。以下实施例中所采用的白芷提取物购买于西安艾诺医药科技有限公司。实施例11、脂肪间充质干细胞的提取1)将脂肪组织分装至多个50ml的离心管中，每管中加入等体积的0.5％ⅰ型胶原酶，封口,转移至37℃恒温空气摇床中，100rpm消化1h。2)每管加入4ml的fbs，混匀，终止消化后1500rpm离心5min。3)弃去上层液体，每管加入40mlpbs重悬，重悬细胞，再1500rpm/min离心5min，弃去上清，获得脂肪间充质干细胞。4)加入含15％fbs的dmem-f12培养基重悬细胞，再接种于培养皿中，轻轻前后摇动培养皿，使细胞悬液均匀分布于瓶底，其中接种密度为1×105个/ml。5)做好标记后转移到37℃、5％co2、饱和湿度为95％的培养箱中进行培养，24h后首次换液，弃去悬浮细胞。随后每3天换一次液。2、脂肪间充质干细胞的培养1)在倒置显微镜下观察脂肪干细胞，待细胞融合度达80％，弃去上层培养液，加入pbs溶液5ml，轻轻前后摇动培养瓶，弃去pbs溶液(该步骤重复2次)；然后，每平皿加入2ml的0.25％胰酶，移入培养箱内消化2min，消化后取出平皿放置于显微镜下观察细胞形态。2)待80％的脂肪干细胞皱缩变圆、漂浮脱落时，往平皿中加入5ml的15％fbs的dmem-f12培养基终止消化。吸取10ul细胞悬液进行细胞计数，计算出细胞总数。3)按5×104个/ml的细胞密度接种至10cm的培养皿，10ml细胞悬液/平皿。轻轻前后摇动平皿，使细胞悬液均匀分布于瓶底，然后置于培养箱中进行传代培养。收集p2～p3代脂肪间充质干细胞，待用。3、脂肪间充质干细胞的表面抗原检测取p3代脂肪间充质干细胞，吸去培养基后加入0.25％胰酶常规消化，制成1×105个/ml的细胞悬液；取抗人cd73、cd90、cd105、cd34、cd45及hla-dr的单克隆抗体各5μl，分别加入细胞悬液500μl，室温下避光孵育20min，同时设空白对照，1500r/min离心5min，弃上清，用含10％fbs的pbs洗涤2遍，用500μl的pbs重悬后上机检测。根据国际细胞治疗协会isct发布的间充质干细胞鉴定的最低标准，msc应符合cd73、cd90、cd105≥95.0％，cd34、cd45、hla-dr≤2.0％；从图1所示的流式鉴定结果可以知道，本实施例得到的脂肪间充质干细胞符合间充质干细胞的鉴定标准。实施例2脂肪间充质干细胞的细胞培养液的制备1)收集p2～p5代脂肪间充质干细胞1×108～5×108个，加入100ml的无酚红1640w重悬，置于培养箱中进行培养；2)待细胞生长至80％时，收集上清并加入新的无酚红1640基础培养基；之后每隔24h，重复2次上述操作，合并上清液，待用。实施例3抗过敏化妆品的制备1)取实施例1中收集的脂肪间充质干细胞，置于超声仪中超声30min进行细胞破壁处理，得到脂肪间充质干细胞的破壁产物。2)往实施例2中得到的细胞培养液中分别加入白芷提取物和步骤1)得到的脂肪间充质干细胞破壁产物，混匀，置于冻干机中进行冻干，得到如表1所示配比的3种抗过敏化妆品。在使用时，将该冻干粉剂和水按体积比2:1进行混合然后直接涂抹于皮肤即可。表1实施例4过敏测试选取化妆品敏感皮肤病患者120名，随机分成3组，分别标记为空白对照组、对照组和样品组，40人/组，男女各半。如表2所示，空白对照组的受试物选择为纯净水，对照组的受试物选择为市售薇诺娜舒敏保湿特护霜，样品组的受试物选择为化妆品c。注：2个月内使用过糖皮质激素、非甾体抗炎药及抗组胺药物者不纳入本研究，哺乳或妊娠期妇女、皮肤疾病、晒斑、瘢痕体质或过度纹身及遗传过敏体质者均不列入研究。表2取0.03ml受试物滴加在斑试器的滤纸片上并置于斑试器内，进行封闭性斑贴试验：将加有受试物的斑试器用无刺激胶带贴敷于受试者的上背部(介于肩胛骨和腰部之间)。48h后拿掉斑试胶带，为避免因斑试器压迫皮肤造成的反应，在去除斑试器、患者静坐至少30min后(待斑试器压痕消失)观察试验结果，进行第一次结果判断；去除斑试器后第24h后进行第二次观察试验结果；去除斑试器后第48h后进行第三次观察试验结果。参照《化妆品皮肤病诊断标准及处理原则》实施指南，受试部位反应程度判定标准如下：a.皮肤无反应(-)；b.皮肤呈淡红斑、无浸润(±)；c.皮肤呈红斑、浸润、丘疹(+)；d.皮肤呈红斑、水肿、丘疹、小水疱(++)；e.皮肤呈红斑、水肿上出现大水疱(+++)。表3abcde空白组1117192对照组282541样品组2114311结果如表3和图2所示，空白组的非过敏人数a+b为2人，过敏人数为c+d+e＝38人；对照组的非过敏人数a+b为10人，过敏人数为c+d+e＝30人；样本组的非过敏人数a+b为35人，过敏人数为c+d+e＝5人。结果显示样本组中的非过敏人数远多于空白对照组和对照组，过敏人数均少于前两者，说明本发明的抗过敏化妆品的抗过敏效果优良，并可缓解皮肤过敏患者的过敏症状，适用于大部分皮肤过敏患者，且引起的过敏程度较低。当前第1页12